MỞ ĐẦU Việt Nam ta nước nhiệt đới, nóng, ẩm mưa nhiều, có nguồn dược liệu phong phú, đa dạng y học dân tộc phát triển lâu đời Từ xa xưa, ông cha ta biết cách sử dụng nhiều loại thảo dược việc dưỡng thương, trị bệnh bồi bổ thể Như vậy, thuốc dân gian đóng vai trò quan trọng đời sống ngày người Trong tiểu luận em sẻ trình bày hợp chất quan trọng nhiều loại thực vật mà sẻ ảnh hưởng đến sức khỏe ăn uống hay sử dụng cỏ Đó hợp chất Ankaloic thiên nhiên đặc biệt loại hai mầm ngón, cau lùn, thuốc phiện, cà độc dược, mã tiền… Có nhiều mơn khoa học nghiên cứu thuốc đời Việc nghiên cứu thuốc giúp cho hiểu rõ thành phần cấu trúc hóa học, hoạt tính sinh học, tác dụng dược lí thuốc Trên sở nghiên cứu tạo chất có hoạt tính sinh học cao mong muốn để làm thuốc chữa bệnh Nhưng điều đặc biệt quan trọng để chiết xuất hợp chất mà ta mong muốn, em sẻ trình bày số phương pháp để tách hợp chất ankaloic phục vụ cho điều trị số bệnh dùng công tác gây tê để phẫu thuật y khoa Trong trình hồn thành tiểu luận khơng thể tránh khỏi thiếu sót, mong nhận ý kiến đóng góp từ thầy cô bạn để tiểu luận hoàn chỉnh Xin chân thành cảm ơn! MỤC LỤC Contents TỔNG QUAN ANKALOIC 1.1 Khái niệm ankaloic: 1.2 Phân loại: 1.2.1 Nhóm quinolizidin: .4 1.2.2 Nhóm nicotinana .5 1.2.3 Nhóm tropan 1.2.4 Nhóm isoquinolin 1.2.5 Nhóm quinolin 1.2.6 Nhóm indol 1.3 Lý tính 1.4 Hóa tính : 1.5 Tác động sinh học .9 PHƯƠNG PHÁP CHIẾT XUẤT .12 2.1 Phương pháp chiết xuất ancaloit: 12 2.1.1 Để phân lập ancaloit phải qua quy trình sau: 12 2.1.1.1 Nghiền nhỏ nguyên liệu thành bột ngâm với dung dịch HCl 1% 12 2.1.1.2 Lọc lấy dung dịch muối, kiềm hóa để lấy ancaloit hồn tồn khỏi muối 12 2.1.1.3 Cất nước chiết dung môi hữu clorofom, benzen v.v 12 2.1.1.4 Chạy sắc ký sắc ký mỏng điều chế phân lập riêng ancaloit 12 2.1.1.5 Xác định cấu trúc ancaloit thử hoạt tính sinh học 12 2.1.2 Thuốc thử phát ancaloit 13 2.1.3.Các thuốc thử thông thường tạo kết tủa với ancaloit : .13 2.1.4.Các nhóm ancaloit bao gồm: .13 2.2.Thuộc tính hóa lý: 18 2.3 Sự tạo thành alkaloid cây: 18 2.4 Phân bố thiên nhiên: .19 QUI TRÌNH CHIẾT XUẤT CÁC CHẤT 20 3.1 Hợp chất Conessin Mức hoa trắng: 20 3.1.1 Hợp chất Conessin: 20 3.1.2 Phương pháp chiết xuất, phân lập, tinh chế Conessin từ dược liệu 21 3.1.3.1 Qui trình chiết xuất alcaloid tồn phần từ vỏ thân Mức hoa trắng: .21 3.1.3.2 Qui trình phân lập Ankaloic toàn phần từ vỏ hoa Mức trắng: 22 3.1.3.3 Qui trình tinh chế conessin từ alcoloid toàn phần … … … … … … … … … … … … … 3.2 Chiết xuất, phân lập tinh chế Nuciferin từ Sen .24 3.2.1 Qui trình chiết xuất alcaloid tồn phần từ Sen: 24 3.2.2 Xây dựng qui trình phân lập Nuciferin từ alcoloid toàn phần Sen: 25 3.2.3 Tinh chế Nuciferin 26 KẾT LUẬN 27 TÀI LỆU THAM KHẢO 28 PHỤ LỤC .29 TỔNG QUAN ANKALOIC 1.1 Khái niệm ankaloic: Polonopski định nghĩa: “Alkaloid hợp chất hữu có chứa nitơ, đa số có nhân dị vòng, có phản ứng kiềm, thường gặp thực vật đơi có động vật, thường có dược tính mạnh cho phản ứng hóa học với số thuốc thử chung alkaloid.” Tuy nhiên có số chất xếp vào nhóm alkaloid nitơ khơng có dị vòng mà mạch nhánh như: ephedrine Ma hoàng Ephedra sinica Staf., capsaisin Ớt Capsicum annuum L., hordenin mầm mạch nha Hordenum sativum Jess., colchicine hạt tỏi độc Colchicum autumnale L Một số alkaloid khơng có phản ứng với kiềm colchicine lấy từ hạt tỏi độc, ricinin lấy từ hạt thầu dầu Ricinus communis L., theobromin hạt cacao Theobroma cacao L có alkaloid phản ứng với acid yếu arecaidin guvacin hạt cau Areca catechu L Ankaloit có tính chất hoạt động sinh lý cao thể người động vật, hệ thần kinh.Với lượng nhỏ loại thuốc đặc hiệu, lượng tương đối lớn chất độc gây chết người.\ 1.2 Phân loại: Về cấu tạo, ankaloit có đến 250 dạng cấu trúc khác với gần 6000 chất tự nhiên (>5500).Vì vậy, người ta phân loại dựa vào cấu trúc ankaloit thành gần 20 nhóm, ngày nay, người ta đề nghị chia thành nhóm nhỏ Ankaloit thường có cấu tạo khác nhau, lại có chứa số dị vòng nitơ chia thành nhóm sau: 1.2.1 Nhóm quinolizidin: ví dụ: Spartein Cytisus scoparius 1.2.2 Nhóm nicotinana 1.2.3 Nhóm tropan 1.2.4 Nhóm isoquinolin 1.2.5 Nhóm quinolin 1.2.6 Nhóm indol 1.3 Lý tính Phần lớn alcaloid thiên nhiên cơng thức cấu tạo có oxy nghĩa cơng thức có C, H, N, O, alcaloid thường thể rắn nhiệt độ thường Ví dụ: Morphine Codein Strychnin Quinin Reserpin Những alcaloid thành phần cấu tạo khơng có oxy thường thể lỏng Nhưng có số trường hợp ngoại lệ Ví dụ: Coniin Nicotin Các alcaloid thể rắn thường kết tinh có điểm chảy rõ ràng, có số alcaloid khơng có điểm chảy bị phân hủy nhiệt độ trước chảy Những alcaloid thể lỏng bay thường vững bền, không bị phân hủy nhiệt độ sôi nên cất kéo nước để lấy khỏi dược liệu Mùi vị Đa số khơng mùi, có vị đắng số có vị cay capsaixin, piperin… Màu sắc Hầu hết alcaloid không màu, trừ số alcaloid có màu vàng berberin, palmatin, chelidonin Độ tan Alkaloid base không tan nước, dễ tan dung môi hữu methanol, ethanol, ether, chloroform, benzen… Muối alkaloid dễ tan nước, khơng tan dung mơi hữu phân cực Dựa vào độ tan khác alcaloid base muối alcaloid người ta sử dụng dung môi thích hợp để chiết xuất tinh chế alcaloid 1.4 Hóa tính : Một số alkaloid có tác dụng base mạnh có khả làm xanh giấy quỳ đỏ nicotin - Đa số alcaloid có tính base yếu - Một số tính base yếu cafein, piperin… - Vài trường hợp ngoại lệ colchicin, ricinin, theobromin khơng có phản ứng kiềm - Cá biệt có chất có phản ứng acid yếu arecaidin, guvacin Do có tính base yếu nên giải phóng alcaloid khỏi muối dung dịch kiềm trung bình mạnh NH4OH, NaOH… Các alcaloid cho phản ứng với số thuốc thử chung alcaloid 1.5 Tác động sinh học Công dụng alkaloid đa dạng phong phú, tùy theo loại alkaloid - Tác dụng lên hệ thần kinh - Kích thích thần kinh trung ương: strychnine, caffeine - Ức chế thần kinh trung ương: morphin Codein - Kích thích thần kinh giao cảm: ephedrine - Liệt giao cảm: yohimbin - Kích thích phó giao cảm: pilocarpin - Liệt phó giao cảm: atropine - Gây tê: cocaine - Tác dụng hạ huyết áp: reserpine, serpentin - Tác dụng chống ung thư: taxol, vinblastine, vincristine 10 2.1.4.Các nhóm ancaloit bao gồm: - Nhóm pyridin: piperin, coniin, trigonellin, arecaidin, guvacin, pilocarpin, cytisin, nicotin, spartein, pelletierin - Nhóm pyrrolidin: hygrin, cuscohygrin, nicotin - Nhóm tropan: atropin, cocain, ecgonin, scopolamin - Nhóm quinolin: quinin, quinidin, dihydroquinin, dihydroquinidin, strychnin, brucin, veratrin, cevadin 14 Quinolin - Nhóm isoquinolin: Các ancaloit gốc thuốc phiện morphin, codein, thebain, papaverin, narcotin, sanguinarin, narcein, hydrastin, berberin - Nhóm phenethylamin: mescalin, ephedrin, dopamin, amphetamin - Nhóm indol: Các tryptamin: DMT, N-metyltryptamin, psilocybin, serotonin Tryptamin Các ergolin: Các ancaloit từ cựa ngũ cốc/cỏ ergin, ergotamin, axít lysergic v.v 15 Ergolin Các beta-cacbolin: harmin, harmalin, yohimbin, reserpin, emetin Yohimbin Các ancaloit từ chi Ba gạc (Rauwolfia): reserpin - Nhóm purin: Các xanthin: caffein, theobromin, theophyllin - Nhóm terpenoit: Các ancaloit aconit: aconitin 16 Các steroit: solanin, samandari (các hợp chất amoni bậc bốn): muscarin, cholin, neurin Các ancaloit từ dừa cạn (chi Vinca) họ hàng nó: vinblastin, vincristin Chúng chất chống ung thư liên kết nhị trùng (dime) tubulin tự do, phá vỡ cân trùng hợp (polyme hóa) phản trùng hợp vi quản, tạo kìm hãm tế bào pha trình phân bào 17 2.2.Thuộc tính hóa lý: Phân tử lượng: khoảng 100-900 Các ancaloit không chứa nguyên tử ôxy cấu trúc thông thường chất lỏng điều kiện nhiệt độ phòng (ví dụ nicotin, spartein, coniin) Các ancaloit với ngun tử ơxy cấu trúc nói chung chất rắn kết tinh điều kiện nhiệt độ phòng (ví dụ: berberin) Hoạt hóa quang học Tính kiềm phụ thuộc vào khả sẵn có cặp điện tử đơn độc nguyên tử nitơ & kiểu khác (dị) vòng phần thay Khả tạo muối với axít vơ (ví dụ: với HCl, H 2SO4, HNO3) hay axít hữu (như muối tartrat, sulfamat, maleat) 2.3 Sự tạo thành alkaloid cây: Nhờ phương pháp đánh dấu đồng vị phóng xạ người ta chứng minh alkaloid tạo từ acid amin Người ta dùng acid amin có C 14 N15 đưa vào môi trường nuôi cấy tiêm vào thân Alcaloid sau chiết xuất phân lập có tính phóng xạ Làm phản ứng phân hủy để tìm nguyên tử phóng xạ thấy hầu hết ngun tử nitơ nguyên tử carbon acid amin nằm cấu trúc nhân alkaloid Nơi tạo alkaloid khơng phải ln ln nơi tích tụ alkaloid Nhiều alkaloid tạo rễ lại vận chuyển lên phần mặt đất cây, sau thực biến đổi thứ cấp chúng tích lũy lá, hạt thuốc phiện, caphe, chúng tạo rể lại chứa lá, quả, hoa… Vd: L-hyoscryamin Beladon tạo rễ, sau chuyển lên phần mặt đất Khi tuổi thân chứa nhiều alcaloid lá, tuổi thân hóa gỗ nhiều hơn, hàm lượng alcaloid giảm xuống, hàm lượng alcaloid phần đạt mức tối đa vào lúc hoa giảm chín 2.4 Phân bố thiên nhiên: Alkaloid có phổ biến thực vật, tập trung số họ: 18 - Apocynaceae (họ Trúc đào) có gần 800 alkaloid - Papaveraceae (họ Thuốc phiện) gần 400 alkaloid - Fabaceae (họ Đậu) 350 alkaloid - Solanaceae (họ Cà) gần 200 alkaloid Ở nấm có alkaloid nấm cựa khỏa mạch (Claviceps purpurea), nấm Amanita phalloides Ở động vật, tìm thấy alkaloid ngày tăng, alkaloid samandarin, samandaridin, samanin có tuyến da lồi kỳ nhơng Bufotenin, bufotenidin, dehydrobufotenin lấy từ nhựa cóc Trong cây, alkaloid thường tập trung số phận định Rất trường hợp có alkaloid mà thường có hỗn hợp nhiều alkaloid, alkaloid có hàm lượng cao gọi alkaloid Các alkaloid họ thực vật thường có cấu tạo gần Hàm lượng alkaloid thường thấp, Một số dược liệu chứa 1-3% alkaloid coi hàm lượng cao Hàm lượng alkaloid phụ thuộc vào nhiều yếu tố khí hậu, ánh sáng, chất đất, phân bón, giống cây, phận thu hái thời kỳ thu hái Vì dược liệu cần nghiên cứu cách trồng trọt, thu hái bảo quản để có hàm lượng hoạt chất cao Trong cây, alkaloid trạng thái tự (alkaloid base), mà thường dạng muối acid hữu citrat, tactrat, oxalat, acetat… Có số trường hợp alkaloid kết hợp với đường tạo dạng glycoalkaloid solasonin solamacgin Cà xẻ (Solanum laciniatum) 19 QUI TRÌNH CHIẾT XUẤT CÁC CHẤT 3.1 Hợp chất Conessin Mức hoa trắng: 3.1.1 Hợp chất Conessin: Conessin phân bố số loài thuộc chi Holarrhena, họ Trúc đào Trong nghiên cứu vỏ thân Mức hoa trắng (còn gọi Mộc hoa trắng, Sừng trâu, Thừng mực to ) lựa chọn để chiết xuất Conessin Mức hoa trắng phân bố rộng rãi Việt Nam, vỏ thân chứa nhiều alcaloid Conessin thành phần Thành phần hóa học vỏ thân cây, phương pháp chiết xuất, phân lập hợp chất từ vỏ thân phương pháp định tính, định lượng hợp chất Conessin dịch chiết dược liệu sắc kí tác giả nước nước ngồi nghiên cứu sơ Cơng thức cấu tạo Conessin Công thức phân tử: C24H40N2 Trọng lượng phân tử: 356,59 20 Danh pháp (IUPAC): (3β)-N,N- dimethylcon-5-enin-3-amine Tính chất lí – hóa: Conessin tinh thể hình lăng trụ (kết tinh aceton) điểm chảy 125oc [α]D = 1,9o (trong CHCl3) + 21o6 (trong C2H5OH), muối hydroclorid, hydrobromid oxalat Conessin tồn dạng tinh thể Độ tan nước Conessin base 1/5, độ tan ethanol 90o 1/11, tan ether 3.1.2 Phương pháp chiết xuất, phân lập, tinh chế Conessin từ dược liệu 3.1.2.1 Qui trình chiết xuất alcaloid toàn phần từ vỏ thân Mức hoa trắng: Cân khoảng 400 g bột dược liệu, làm ẩm 100 ml dung dịch HCl 10%, bổ sung 600 ml dung dịch HCl 10% đến ngập hết dược liệu ngâm 24 Rút dịch chiết lọc Tiếp tục chiết thêm bột dược liệu lần cách bổ sung 600 ml dung dịch HCl 10% đến ngập dược liệu, lần ngâm lạnh - Gạn để thu dịch chiết lọc Gộp dịch chiết acid thu được, kiềm hóa dịch chiết acid amoniac đặc đến pH = 10 Để lắng gạn bỏ phần dịch cách lọc qua giấy lọc Hút kiệt nước Có thể tiến hành li tâm gạn bỏ dịch nước trên, thu cắn Chiết alcaloid base cắn giấy lọc nhiều lần cloroform, lần 300 ml, thử thuốc thử Dragendorff không cho tủa vàng Gộp dịch chiết, cất thu hồi cloroform áp suất giảm Chuyển cắn thu cốc có mỏ, cách thủy tới cạn, sấy 60 oC giờ, thu 12,0 g alcaloid toàn phần Qui trình chiết xuất alcaloid tồn phần từ vỏ thân Mức hoa trắng thể tóm tắt sơ đồ Phụ lục 3.1.2.2 Qui trình phân lập Ankaloic toàn phần từ vỏ hoa Mức trắng: 12,0 g cắn alcaloid tồn phần hòa tan 300 ml ether dầu hỏa, rửa giấy lọc tủa 50 ml ether dầu hỏa Lắc lần dịch chiết ether dầu hỏa với dung dịch HCl 10%, lần 150 ml Gộp dịch chiết nước acid 21 kiềm hóa dịch chiết nước acid Na2CO3 đến pH = - 10 cách cho từ từ Na2CO3 vào dung dịch, đồng thời khuấy đến dung dịch khơng có bọt Chiết ether dầu hỏa lần, lần 300 ml Gộp dịch chiết ether dầu hỏa làm khan dịch chiết cách lọc dịch chiết ether dầu hỏa qua giấy lọc khô, cất thu hồi ether dầu hỏa, cắn thu hòa tan 50 ml dung dịch acid oxalic 17,5% ethanol Để yên nhiệt độ phòng để thu tinh thể Conessin hydrooxalat, lọc lấy tinh thể Hòa tan tinh thể thu 300 ml nước Kiềm hóa dung dịch đến pH = - 10 cách cho từ từ Na2CO3 đến hết bọt để tạo tủa Conessin base Chiết Conessin base lần ether dầu hỏa, lần 50 ml Gộp dịch chiết ether dầu hỏa làm khan dịch chiết cách lọc dịch chiết ether dầu hỏa qua giấy lọc khô, cất thu hồi ether dầu hỏa, thu sản phẩm PL1 Đem kết tinh sản phẩm PL1 aceton, để yên nhiệt độ phòng thu Conessin tương đối tinh khiết Lọc lấy tinh thể, sấy áp suất giảm 60 oC giờ, sử dụng chất hút ẩm phosphor pentoxyd (P2O5) thu 2,55 g sản phẩm PL2 Xác định hàm lượng Conessin HPTLC cho thấy sản phẩm phân lập đạt độ tinh khiết khoảng 82,50% Qui trình phân lập Conessin từ alcaloid tồn phần thể tóm tắt sơ đồ Phụ lục 3.1.2.3 Qui trình tinh chế conessin từ alcoloid toàn phần vỏ thân Mức hoa trắng: Bước 1: Tinh chế sắc kí cột 1.Chuẩn bị cột sắc kí: Dùng cột thủy tinh trung tính có đường kính cm, chiều dài 50 cm, lắp thẳng đứng giá, phía cột có van để điều chỉnh tốc độ dung mơi Khóa van, cho dung mơi rửa giải vào cột Lót lớp bơng mỏng phía đáy cột, van để chất nhồi sau nhồi vào cột không gây tắc cột Nhồi cột: Cân 50 g chất nhồi cột silica gel 60 (0,04 – 0,063 mm), hoạt hóa 100 oC giờ, sau ngâm toluen giờ, khuấy đổ từ từ lên cột Mở khóa cột để dung môi chảy từ từ, để hạt chất nhồi cột lắng xuống (có thể dùng đũa thủy tinh có bọc cao su gõ nhẹ vào cột, để tránh 22 cột bị khô) Ổn định khoảng Đến khoảng cách từ mặt lớp chất nhồi đến mặt dung mơi rửa giải khoảng cm đóng khóa cột Đưa mẫu lên cột: Hòa 2,55 g PL2 ml benzen, đổ từ từ vào cột để tránh xáo động lớp chất nhồi cột, dùng pipet tráng vòng quanh bên cột trước thêm dung môi rửa giải Dùng hỗn hợp dung môi sau để rửa giải: 100 ml hỗn hợp toluen : ethyl acetat (98 : 2) 150 ml hỗn hợp toluen : ethyl acetat (95: 5) 50 ml hỗn hợp toluen : ethyl acetat (93 : 7) Tốc độ rửa giải ml/phút (khoảng 40 giọt/phút) Bỏ khoảng 100 ml dịch rửa giải đầu tiên, lấy 180 ml dịch rửa giải (xác định có mặt hoạt chất TLC phân đoạn), cất thu hồi dung môi sản phẩm TC1 Bước 2: Kết tinh lại dung môi Kết tinh lần sản phẩm TC1 aceton, lọc lấy tinh thể, sấy áp suất giảm 60 o C giờ, sử dụng chất hút ẩm phosphor pentaoxyd (P2O5) thu g sản phẩm có hàm lượng Conessin khoảng 99% Sự có mặt Conessin sản phẩm khẳng định phổ khối lượng kết thu Hình sau Hình Kiểm tra khối lượng phân tử Conessin phổ khối (ESI-MS) Qui trình tinh chế Conessin thể tóm tắt sơ đồ Phụ lục 3.2 Chiết xuất, phân lập tinh chế Nuciferin từ Sen 23 3.2.1 Qui trình chiết xuất alcaloid tồn phần từ Sen: Cân khoảng 320 g bột dược liệu, làm ẩm NH4OH 10%, thêm 2,5 lít ethanol 96o chiết nóng cách đun hồi lưu cách thủy Gạn lọc lấy dịch lọc, rửa lại bã dược liệu ethanol Dịch chiết ethanol cất thu hồi ethanol áp suất giảm 60 oC Hòa tan cắn dung dịch HCl 5% (pH = 2) Tiến hành chiết (3 - lần) đồng lượng dịch chiết acid với ether dầu hỏa để loại tạp chất Kiềm hóa dịch chiết acid dung dịch amoniac đặc tới pH = 10 - 11 Chiết - lần đồng lượng cloroform (đến dịch chiết nước cho phản ứng âm tính với thuốc thử Dragendorff), thu dịch chiết cloroform Cất áp suất giảm để thu hồi dung mơi cloroform, hòa tan cặn thu 50 ml methanol chuyển cốc có mỏ, bay tới cạn, sấy 60 oC giờ, thu 2,85 g alcaloid tồn phần Qui trình chiết xuất alcaloid toàn phần từ Sen thể tóm tắt sơ đồ Phụ lục 3.2.2 Xây dựng qui trình phân lập Nuciferin từ alcoloid toàn phần Sen: Chuẩn bị cột sắc kí: Dùng cột thủy tinh trung tính có đường kính cm, chiều dài 50 cm, lắp thẳng đứng giá, phía cột có van để điều chỉnh tốc độ dung mơi Khóa van, cho dung mơi rửa giải vào cột Lót lớp bơng mỏng phía đáy cột, van để chất nhồi sau nhồi vào cột không gây tắc cột 24 Nhồi cột: Cân 50 g chất nhồi cột silica gel 60 (0,04 – 0,063 mm), cho vào cốc thủy tinh có chứa 300 ml cloroform, khuấy đổ từ từ lên cột Mở khóa cột cho dung mơi chảy từ từ để hạt chất nhồi cột lắng xuống (có thể dùng đũa thủy tinh có bọc cao su gõ nhẹ vào cột, để tăng nhanh trình lắng), q trình ln bổ sung dung mơi lên cột, tránh để cột bị khô Ổn định cột khoảng đến khoảng cách từ mặt lớp chất nhồi đến mặt dung môi rửa giải khoảng cm đóng khóa cột 2.Đưa mẫu lên cột: Hòa tan khoảng 2,85 g alcaloid toàn phần 10 ml cloroform, thêm g chất nhồi cột silica gel 60, trộn đều, cất thu hồi dung môi hỗn hợp bột tơi Chuyển nhẹ nhàng vào cột, tránh xáo động lớp chất nhồi cột, dùng pipet tráng vòng quanh bên cột trước thêm dung môi rửa giải 3.Dùng hỗn hợp dung môi n-Hexan : aceton : NH3 đặc (3 : : 0,1) để rửa giải Tốc độ rửa giải ml/phút (khoảng 40 giọt/phút) Bỏ khoảng 75 ml dịch rửa giải lấy 100 ml dịch rửa giải tiếp theo, cất thu hồi dung môi cặn, sấy áp suất giảm 60 oC giờ, sử dụng chất hút ẩm phosphor pentoxyd (P2O5) thu khoảng 2,1 g sản phẩm phân lập chứa hoạt chất Nuciferin khoảng 96,2% Qui trình phân lập Nuciferin từ alcaloid tồn phần thể tóm tắt sơ đồ Phụ lục 3.2.3 Tinh chế Nuciferin Tinh thể Nuciferin thu sau phân lập hòa tan lượng vừa đủ cloroform chấm lên mỏng silica gel tráng sẵn (Merck) khai triển hệ dung môi khác Hệ I: n-Hexan : aceton : NH4OH (3 : : 0,1) Hệ II: Cloroform : methanol (10 : 1) Hệ III: Cloroform : ethyl acetat (5 : 1) Phát vết thuốc thử Dragendorff Soi đèn tử ngoại bước sóng 254 nm Với hệ dung mơi có vết sắc kí đồ song song với chuẩn liên kết chứng tỏ Nuciferin tinh chế tinh khiết Vì vậy, để đơn giản qui trình tinh chế lựa chọn kết tinh lại nhiều lần 25 cloroform sau: Hòa tan 2,1 g sản phẩm phân lập 50 ml cloroform, để yên ngăn mát tủ lạnh (nhiệt độ - oC) để tăng khả kết tinh, lọc lấy tinh thể Kết tinh lại lần, sấy tủ sấy chân không với phosphor pentoxyd (P2O5) thu 2,0 g sản phẩm Nuciferin tinh thể đạt độ tinh khiết 98,23 – 99,08% Nuciferin sản phẩm khẳng định phổ khối lượng, kết trình bày Hình sau Hình Kiểm tra khối lượng phân tử Nuciferin phổ khối (ESI-MS) Qui trình tinh chế Nuciferin thể tóm tắt sơ đồ Phụ lục KẾT LUẬN Ankaloic hợp chất phổ biến tự nhiên, đặc biệt nhiều cỏ Việt Nam chúng ta, qua tìm hiểu em cung biết phần cách chiết xuất độc tính dể sử dụng vào mục đích cần dùng Trong q trình làm em khơng tránh khỏi nhiều thiếu sót mong 26 thầy bạn góp ý để em hồn thành tốt tiểu luận Em xin chân thành cảm ơn ! TÀI LỆU THAM KHẢO [1] Trần Tử An (2002), Phương pháp chiết ứng dụng kiểm nghiệm thuốc độc chất, Tài liệu giảng dạy sau đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội, 87-109 [2] Nguyễn Kim Cẩn, Đinh Thị Thuyết (2001), “Phương pháp khối lượng định lượng alcaloid toàn phần Sen thay đổi hàm lượng alcaloid theo tuổi thời vụ thu lá”, Tạp chí Dược liệu, 2+3 (6), 45-48 [3] Đỗ Tất Lợi (2001), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y học, Hà Nội, 182 - 184 27 28 ... KẾT LUẬN Ankaloic hợp chất phổ biến tự nhiên, đặc biệt nhiều cỏ Việt Nam chúng ta, qua tìm hiểu em cung biết phần cách chiết xuất độc tính dể sử dụng vào mục đích cần dùng Trong q trình làm em... trường hợp alkaloid kết hợp với đường tạo dạng glycoalkaloid solasonin solamacgin Cà xẻ (Solanum laciniatum) 19 QUI TRÌNH CHIẾT XUẤT CÁC CHẤT 3.1 Hợp chất Conessin Mức hoa trắng: 3.1.1 Hợp chất. .. thành alkaloid cây: 18 2.4 Phân bố thiên nhiên: .19 QUI TRÌNH CHIẾT XUẤT CÁC CHẤT 20 3.1 Hợp chất Conessin Mức hoa trắng: 20 3.1.1 Hợp chất Conessin: