tên đề tài.txt Khảo sát tần số gene IGFBP2 (insulin – like growth factor binding protein 2) đàn gà Tàu Vàng trung tâm giống vật nuôi (Giảng viên hướng dẫn: ThS Lê Thị Thu Hà) SV: Nguyễn Lê Giang Thanh MSSV:0851110229 Lớp:08DSH2 Page Khoa: Môi trường & CNSH PHIẾU GIAO ĐỀ TÀI ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP (Phiếu dán trang báo cáo ĐATN) 1.Họ tên sinh viên/ nhóm sinh viên giao đề tài (sĩ số nhóm 1): Họ tên sinh viên : NGUYỄN LÊ GIANG THANH MSSV : 0851110229 Lớp: 08DSH2 Ngành : Môi trường công nghệ sinh học Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Tên đề tài : Khảo sát tần số gene IGFBP2 (insulin – like growth factor binding protein 2) đàn gà Tàu Vàng trung tâm giống vật nuôi Các liệu ban đầu : - Tài liệu tổng quan - Các báo khoa học nước Các yêu cầu chủ yếu : - Thu mẫu máu từ đàn gà Tàu Vàng Trung Tâm Giống - Chiết tách DNA từ mẫu - Xác định gene IGFBP2 tần số alen phương pháp PCR – RFLP Kết tối thiểu phải có: - Tách chiết DNA mẫu máu - Sản phẩm PCR có kết tốt - Enzyme cắt giới hạn cho kết tốt xác định đa hình gene IGFBP2 mẫu CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc Lập – Tự Do – Hạnh Phúc LỜI CAM ĐOAN Tôi tên Nguyễn Lê Giang Thanh, sinh viên trường Đại Học Kỹ Thuật Cơng Nghệ Tp.Hồ Chí Minh, Khoa Mơi Trường Công Nghệ Sinh Học, lớp 08DSH2 Tôi xin cam đoan tất số liệu trích dẫn đồ án trung thực lấy từ trình nghiên cứu thực tế Phịng Thí Nghiệm Cơng Nghệ Sinh Học, Viện Khoa Học Kỹ Thuật Nông Nghiệp Miền Nam Tự thực tất nội dung đồ án mà khơng có chép đồ án khác hình thức Tơi hồn tồn chịu trách nhiệm trước hội đồng khoa Mơi Trường Công Nghệ Sinh Học, trước ban giám hiệu trường Đại Học Kỹ Thuật Cơng Nghệ Tp.Hồ Chí Minh lời cam đoan Tp.Hồ Chí Minh, ngày 16 tháng 07 năm 2012 Người viết Nguyễn Lê Giang Thanh LỜI CÁM ƠN Trước tiên xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến Ban giám hiệu trường đại học kỹ thuật công nghệ thành phố Hồ Chí Minh ban chủ nhiệm khoa Mơi trường Công nghệ sinh học tạo điều kiện tốt cho tơi học tập suốt q trình hoạt động trường Tơi xin cám ơn tồn thể thầy khoa Công nghệ sinh học, đặc biệt ThS Nguyễn Minh Nhựt truyền đạt kiến thức quý báu cho suốt bốn năm ngồi ghế nhà trường Tôi xin cám ơn Viện khoa học kỹ thuật nông nghiệp miền Nam tạo điều kiện thuận lợi cho thực tốt đồ án tốt nghiệp Viện Đặc biệt xin chân thành cám ơn ThS Lê Thị Thu Hà người trực tiếp hướng dẫn làm đồ án tốt nghiệp Trong suốt thời gian làm việc với cô, không ngừng tiếp thu thêm kiến thức bổ ích mà cịn học tập tinh thần làm việc, thái độ nghiên cứu khoa học nghiêm túc, hiệu quả, hành trang quan trọng giúp tơi thực tốt việc học tập công việc sau Tôi xin chân thành cám ơn anh Nguyễn Xuân Nam chị Nguyễn Thị Bích Hiền tồn thể anh chị kỹ thuật viên phịng cơng nghệ sinh học Viện tận tình giúp đỡ tơi thời gian thực đề tài Cuối cùng, xin gửi lời chân thành đến cha mẹ, người ln dìu dắt hỗ trợ tôi, người bạn giúp đỡ, sát cánh bên suốt bốn năm giảng đường đại học Sinh viên Nguyễn Lê Giang Thanh MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH SÁCH CÁC BẢNG v DANH SÁCH CÁC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ vi MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Tình hình nghiên cứu Mục đích nghiên cứu Nhiệm vụ nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Các kết đạt đề tài Kết cấu đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan tình hình chăn ni gà ngồi nước 1.1.1 Tình hình chăn ni tiêu thụ gà giới 1.1.2 Tình hình chăn ni tiêu thụ gà nước 1.2 Gà Tàu Vàng 1.3 Gene IGFBP2 nghiên cứu gene IGFBP2 10 1.3.1 Giới thiệu gene IGFBP2 10 1.3.2 Các nghiên cứu nước ảnh hưởng gene IGFBP2 11 1.3.2.1 Ảnh hưởng lên trọng lượng thể 11 1.3.2.2 Ảnh hưởng đến đặc điểm xương 13 1.3.2.3 Ảnh hưởng đến mỡ vùng bụng 13 1.4 Các phương pháp xác định gene 14 1.4.1 Phương pháp tách chiết DNA 14 1.4.2 Phương pháp định tính DNA điện di 15 1.4.3 Phương pháp PCR (polymerase chain reaction) 17 1.4.3.1 Giới thiệu chung 17 i 1.4.3.2 Nguyên tắc 18 1.4.3.3 Các bước chuẩn bị thực phản ứng PCR 19 1.4.3.4 Chu kỳ phản ứng PCR 22 1.4.3.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến phản ứng PCR 25 1.4.3.6 Ứng dụng kỹ thuật PCR 27 1.4.4 Kỹ thuật RFLP 27 1.4.4.1 Giới thiệu chung RFLP 27 1.4.4.2 Các enzyme cắt giới hạn ( restriction enzyme, RE) 28 CHƯƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 30 2.1.1 Địa điểm nghiên cứu 30 2.1.2 Thời gian nghiên cứu 30 2.2 Vật liệu nghiên cứu 30 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 30 2.2.3 Hóa chất 30 2.2.4 Dụng cụ thiết bị 33 2.3 Phương pháp nghiên cứu 33 2.3.1 Phương pháp thu thập bảo quản mẫu 33 2.3.2 Tiến hành tách chiết DNA từ mẫu máu gà lựa chọn 34 2.3.3 Định tính DNA phương pháp điện di 35 2.3.4 Tiến hành PCR – RFLP để xác định khảo sát tần số gene IGFBP2 36 2.3.4.1 Tiến hành PCR phát xuất gene IGFBP2 36 2.3.4.2 Thực RFLP với enzyme cắt giới hạn: 38 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 40 3.1 Kết đánh giá hiệu ly trích DNA 40 3.2 Xác định gene IGFBP2 khảo sát tần số alen phương pháp PCR – RFLP 41 3.2.1 Xác định gene IGFBP2 kỹ thuật PCR 41 3.3.2 Xác định alen/kiểu gene sau cắt với enzyme Eco72I 44 ii CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 48 4.1 Kết luận 48 4.2 Đề nghị 48 CHƯƠNG V: TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT IGFBP2: insulin – like growth factor binding protein QTL: quantitive trait locus NST: nhiễm sắc thể EDTA: ethylene diamine tetra acetate SDS: sodium dodecyl sulfate PCR: Polymerase Chain Reaction dNTP: deoxy nucleoside triphosphate dATP: Adenine dTTP: Thymine dCTP : Cytosine dGTP : Guanine MWM: molecular weight marker Tm: nhiệt độ nóng chảy RE: Restriction Enzyme RFLP: Restriction Fragment Length Polymorphism SNPs: single nucleotide polymorphism DNA: Deoxyribo Nucleic Acid µM: micro mol µl: micro lit iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Tương quan nồng độ gel kích thước DNA 15 Bảng 2.1: Thành phần Kit EZ – 10 Spin Geneomic DNA Minipreps 31 Bảng 2.2: Thành phần phản ứng PCR 36 Bảng 2.3: Trình tự mồi IGFBP2 – IGFBP2 – 37 Bảng 2.4: Chu kì nhiệt tiến hành PCR 37 Bảng 2.5: Thành phần cho phản ứng cắt với enzyme Eco72I 38 Bảng 3.1: Tỉ lệ ly trích DNA tổng số 41 Bảng 3.2: Kết PCR – RFLP 46 Bảng 3.3: Tần số xuất alen 46 v DANH SÁCH CÁC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ Hình 1.1 Một số giống gà địa phương nuôi Việt Nam Hình 1.2 Gà Tàu Vàng Hình 1.3 Trứng gà Tàu Vàng Hình 1.4 Quy trình chạy điện di định tính DNA 17 Hình 1.5 Nguyên lý phản ứng PCR 24 Hình 2.1 Bộ Kit EZ – 10 Spin Geneomic DNA Minipreps 31 Hình 2.2.GoTaq Green Master Mix 2X 32 Hình 2.3.Mẫu máu lấy từ trại giống chia phịng thí nghiệm 33 Hình 3.1.Kiểm tra DNA tổng số 40 Hình 3.2.Sản phẩm PCR chạy với cặp mồi IGFBP2 – 42 Hình 3.3.Sản phẩm PCR chạy với cặp mồi IGFBP2 – 43 Hình 3.4.Sản phẩm cắt với enzyme Eco72I ( từ mẫu 117) 44 Hình 3.5.Sản phẩm cắt với enzyme Eco72I (từ mẫu 1829) 45 Hình 3.8.Kết tỉ lệ kiểu gene 46 vi Tiến hành mix mẫu vào eppendorf, người thực đề tài tiến hành mẫu PCR với cặp mồi IGFBP2 – IFGBP2 – thành cơng Tiến hành mix hóa chất vào eppendorf theo thứ tự theo thành phần thể tích hóa chất bảng 2.5 Những mẫu mix đem spin để dung dịch xuống hồn tồn đáy eppendorf Sau dung dịch đem ủ 370C qua đêm Mẫu đem điện di với gel agarose 1,5%, dung dịch TBE 0,5X, 180V, 60 phút, gel ngâm dung dịch ethidium bromide 10 µg/ml 20 phút băng DNA quan sát tia UV 39 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết đánh giá hiệu ly trích DNA Kết DNA tổng số mẫu máu thu nhận từ trại giống, li trích theo protocol chuẩn Kit EZ – 10 Spin Column Geneomic DNA Minipreps Kết điện di định tính DNA gel agarose 1% trình bày hình 3.1 Hình 3.1 Kiểm tra DNA tổng số Dựa vào kết điện di hình 3.1, người thực đề tài nhận thấy việc sử dụng EZ – 10 Spin Column Geneomic DNA Minipreps Kit Handbook ly trích DNA tổng số từ mẫu ổn định với chất lượng tốt, không lẫn tạp chất, độ tinh cao, đạt yêu cầu để tiến hành phản ứng PCR Riêng giếng 34 ta thấy không xuất vạch chạy điện di khơng có DNA mẫu, thao tác ly trích làm DNA Những giếng 33, 35, 37, 40, 43 có vạch mờ số lượng DNA Trong đó, giếng 6, 8, 14, 15 có 40 vạch khơng thẳng DNA bị đứt gãy nhiều Một số lí xảy băng DNA khơng xuất hiện: q trình lấy mẫu máu bị đông phần nên không ly trích DNA, thao tác kỹ thuật ly trích DNA, hóa chất sử dụng đổ gel làm thủng giếng nên DNA thoát ngồi Tuy vậy, sản phẩm li trích tiến hành phản ứng PCR Kết ly trích DNA tồng số EZ – 10 Spin Column Geneomic DNA Minipreps Kit Handbook đạt tỉ lệ ly trích DNA tổng số cao Kết trình bày bảng 3.1 Bảng 3.1 Tỉ lệ ly trích DNA tổng số Kết (mẫu) Tỉ lệ (%) Mẫu có diện DNA 39 95,3 Mẫu khơng có diện DNA 4,7 Bảng 3.1 cho thấy tỉ lệ mẫu li trích DNA tổng số thành công cao, chiếm 95,3 %, tỉ lệ mẫu khơng có diện DNA chiếm tỉ lệ thấp 4,7 % Do đó, kết luận kết li trích DNA tốt 3.2 Xác định gene IGFBP2 khảo sát tần số alen phương pháp PCR – RFLP 3.2.1 Xác định gene IGFBP2 kỹ thuật PCR Tiến hành chạy PCR mẫu máu với cặp mồi IGFBP2 – 1, IGFBP2 – 3.2.1.1 Xác định gene IGFBP2 đoạn mồi IGFBP2 – Sản phẩm PCR chạy với mồi IGFBP2 – tiến hành mẫu giếng 1 12 (khơng có mẫu giếng 5) thu kết trình bày hình 3.2 41 Hình 3.2 Sản phẩm PCR chạy với cặp mồi IGFBP2 – Sản phẩm PCR chạy với mồi IGFBP2 – hình 3.2 cho kết điện di phân thành nhiều vạch Điều chứng tỏ cặp mồi IGFBP2 – bắt cặp không đặc hiệu, khuếch đại sản phẩm khơng mong muốn Do đó, khơng sử dụng cặp mồi để tiến hành chạy PCR cho phân tích 3.2.1.2 Xác định gene IGFBP2 đoạn mồi IGFBP2 – Sản phẩm chạy PCR với cặp mồi IGFBP2 – tiến hành 41 mẫu, trừ mẫu giếng số 34, cho kết trình bày hình 3.3 42 Hình 3.3 Sản phẩm PCR chạy với cặp mồi IGFBP2 – Sản phẩm PCR chạy với cặp mồi IGFBP2 – hình 3.3 cho vạch thẳng, đều, rõ ràng, kích thước Do kết luận sản phẩm PCR chạy với cặp mồi IGFBP2 – cho kết tốt, mồi bắt cặp đặc hiệu, khuếch đại đoạn gene kích thước 527 bp hình Tuy nhiên mẫu giếng 11, 15, 18, 19, 20, 21, 22, 23 cho vạch không thẳng không rõ ràng, q trình load mẫu điện di, sản phẩm load vào giếng không bị thất thoát vào bể điện di 43 3.3.2 Xác định alen/kiểu gene sau cắt với enzyme Eco72I Sản phẩm sau chạy PCR, cắt để xác định alen/kiểu gene enzyme Eco72I Kết trình bày hình 3.4 Hình 3.4 Sản phẩm cắt với enzyme Eco72I; AA tương ứng với vạch 527 bp; BB tương ứng với vạch 477 bp 50 bp;AB tương ứng với vạch 477 bp, 50 bp 527 bp Sản phẩm PCR cắt enzyme Eco72I từ hình 3.4 cắt cho vạch rõ, không thẳng bị smear nhiều, riêng mẫu giếng 15 ta thấy vạch mờ, kết thao tác thực trình load mẫu điện di 44 Hình 3.5 Sản phẩm cắt với enzyme Eco72I; AA tương ứng với vạch 527 bp; BB tương ứng với vạch 477 bp 50 bp; AB tương ứng với vạch 477 bp, 50 bp 527 bp Sản phẩm cắt enzyme Eco72I hình 3.5 cho vạch sáng, thẳng chứng tỏ enzyme cắt hoạt động tốt, cho vạch cách rõ ràng, thể tính đa hình gene Từ kết điện di sản phẩm PCR sau cắt enzyme Eco72I, người thực đề tài nhận thấy sản phẩm cắt enzyme Eco72I cho kết tốt Sản phẩm cắt thành kích thước khác gồm đoạn 50 bp, 477 bp, 527 bp thể kiểu gene khác mẫu Những mẫu chứa vạch 50 bp, 477 bp, 527 bp biểu kiểu gene AB Những mẫu chứa vạch 477 bp 50 bp biểu kiểu gene BB Những mẫu chứa vạch 527 bp biểu cho kiểu gene AA 45 Bảng 3.2 Kết PCR – RFLP Kiểu gene Kết Tỉ lệ (%) AA 14 35,9 AB 16 41 BB 23,1 ∑ = 39 Bảng 3.3 Tần số xuất alen Alen A B Tần số xuất 0,56 0,44 Hình 3.7 Kết tỉ lệ kiểu gene Hình 3.7 cho thấy tỉ lệ xuất kiểu gene AB chiếm tỉ lệ cao đạt 41 %, tỉ lệ xuất kiểu gene AA chiếm 35,9 %, tỉ lệ kiểu gene BB chiếm 23,1 % Từ hình 3.7 rút kết luận kiểu gene AB xuất nhiều nhất, tiếp AA, kiểu gene BB xuất Tần số xuất alen bảng 3.3 cho ta thấy tần số xuất alen A 0,56 cao so với alen B 0,44 46 Theo nghiên cứu Li cộng (2006), tỉ lệ kiểu gene AA AB chiếm 36,4 % kiểu gene BB chiếm 27,2 % Có thể thấy kết đề tài với kết nghiên cứu trước giống Tỉ lệ kiểu gene AB đề tài cao kết nghiên cứu trước Từ kết luận, tỉ lệ xuất kiểu gene AA AB cao, kiểu gene BB xuất Kết khảo sát tỉ lệ kiểu gene nghiên cứu Lie cộng (2005) kiểu gene AA AB chiếm 39,1 % kiểu gen BB chiếm 21,7 % Có thể thấy rằng, kết nghiên cứu Lie cộng (2005) tương tự kết đề tài với tỉ lệ kiểu gene AB AA cao, kiểu gene BB xuất Từ alen này, người ta tuyển chọn để lai giống Việc tuyển chọn phụ thuộc vào kiểu gene, đồng thời người ta tiến hành so sánh với kiểu hình để chọn kiểu gene cho suất phẩm chất thịt tốt 47 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận - Tách chiết mẫu với EZ – 10 Spin Geneomic DNA Minipreps kit cho kết tốt, tỉ lệ phát DNA tổng số chiếm 95,3 %, tỉ lệ mẫu khơng ly trích DNA ít, chiếm 4,7 % - Sản phẩm PCR với mồi IGFBP2 – cho kết không mong muốn, mồi bắt cặp khơng đặc hiệu, khơng sử dụng mồi IGFBP2 – để tiến hành phản ứng PCR – RFLP - Sản phẩm PCR với mồi IGFBP2 – cho kết đặc hiệu, đạt tỉ lệ 100% mẫu cho kết khuếch đại đoạn có kích thước 527 bp, đủ điều kiện tiến hành RFLP - Tần số xuất kiểu gene IGFBP2 cho kết tốt Tỉ lệ kiểu gene AA chiếm 35,5 %, tỉ lệ kiểu gene AB chiếm 41 %, tỉ lệ kiểu gene BB chiếm 23,1 % Tần số alen A chiếm 0,56 alen chiếm 0,44 4.2 Đề nghị - Tiếp tục tiến hành xác định kiểu gene IGFBP2 tần số alen nhiều mẫu máu thu thập - Dựa kết phân tích kiểu gene để đối chiếu với kiểu hình đàn gà Tàu Vàng giống, từ phân tích mối liên hệ kiểu gene kiểu hình 48 CHƯƠNG V: TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Bùi Chí Bửu Nguyễn Thị Lang (1999) Di Truyền Phân Tử Nhà xuất Nơng nghiêp, Tp Hồ Chí Minh Hồ Huỳnh Thùy Dương (2002) Sinh Học Phân Tử (Khái Niệm - Phương Pháp ứng Dụng) Tái lần 2, NXB Giáo Dục, Thành Phố Hồ Chí Minh Khuất Hữu Thanh (2003) Cơ Sở Di Truyền Phân Tử Và Kỹ Thuật Gene NXB Khoa Học Kỹ Thuật, Hà Nội 121 – 125 137 – 140 Nguyễn Văn Bắc, Võ Văn Sự, Hồng Văn Tiệu, Phạm Văn Thìn Hoàng Văn Hải, (2005) Kết bước đầu bảo tồn In-situ gà Tàu Vàng (http://www.vcn.vnn.vn) Nguyễn Văn Bắc, Lê Viết Ly, Đinh Công Tiến Nguyễn Ngọc Dương (2005) Khả sinh trưởng sinh sản gà Tàu Vàng Việt Nam Trần Thị Dân (2001) Lưu ý PCR Tài liệu giảng dạy, Đại học Nông Lâm Tp Hồ chí Minh Võ Văn Sự cộng (2004) Át lát giống vật nuôi Việt Nam Nhà xuất nông nghiệp Tài liệu Tiếng Anh Agarwal N, Hsieh CL, Sills D, Swaroop M, Desai B, Franke U Swaroop A (1991) Sequence analysis, expression and chromosomal localization of a gene, isolated from a subtracted human retina cDNA library that encodes an insulin-like growth factor binding protein (IGFBP – 2) Experimental Eye Research 52 549-561 Binkert C, Landwehr J, Mary JL, Schwanderer J Heinrich G (1989) Cloning, sequence analysis and expression of a cDNA encoding a novel insulin-like growth factor binding protein (IGFBP – 2) EMBO Journal 2497 – 2502 10 Baxter RC Martin JL (1989) Binding proteins for the insulin – like growth factors: Structure, regulation and function Progress in Growth Factor Research 49 – 68 49 11 Burch WM, Correa J, Shively JE8c Powell DR (1990) The 25 – kilodalton insulin – like growth factor (IGF) – binding protein inhibits both basal and IGF – I – mediated growth of chick embryo pelvic cartilage in vitro Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 11 173-180 12 Butterwith, S C., and C Goddard (1991) Regulation of DNA synthesis in chicken adipocyte precursor cells by insulin – like growth factors, platelet – derived growth factor and transforming growth factor – beta J Endocrinol 131 203 – 209 13 Cohen KL Nissley SP (1976) The serum half – life of somatomedin activity: Evidencefor growth hormone dependence Acta Endocrinologica 83 243 – 258 14 Deeb, N., and S J Lamont (2002) Genetic architecture of growth and body composition in unique chicken population J Hered 93 107–118 15 Delhanty PJD Han VKM (1993) The expression of insulin – like growth factor (IGF) – binding protein – and IGF – II genes in the tissues of the developing ovine fetus Endocrinology 132 41 – 52 16 DeKoning, D J., D Windsor, P M Hocking, D W Burt, A Law, C.S Haley, A Morris, J.Vincent, and H Griffin (2003) Quantitative trait locus detection in commercial broiler lines using candidate regions J Anim Sci 81 1158 – 1165 17 Drop, S L., A G Schuller, D J Lindenbergh-Kortleve, C Groffen, A Brinkman, and E C Zwarthoff (1992) Structural aspects of the IGFBP family Growth Regul 69 – 79 18 Eckstein, F., T Pavicic, S Nedbal, C Schmidt, U Wehr, W Rambeck, E Wolf, and A Hoeflich (2002) Insulin – like growth factor binding protein (IGFBP – 2) overexpression negatively regulates bone size and mass, but not density, in the absence and presence of growth hormone / IGF – I excess in transgeneic mice Anat Embryol (Berl.) 206: 139 – 148 19 Ehrenborg E, Vilhelmsdotter S, Bajalica S, Larsson C, Stern I, KochJ, Brondum-Nielsen K LuthmanH (1991) Structureand localization ofthe humaninsulin-like growth factor – binding protein gen Biochemical and Biophysical Research Communications 1250—1255 50 20 Elgin RG, Busby WH Clemmons DR (1987) An insulin-like growth factor (IGF) binding protein enhances the biologic response to IGF – I Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA 84 3254 – 3258 21 FAO (2004) Animal production and health manual 22 Fassill Bekele T (2010) Kathle Grima Abebe Production performance og Dual Purpose crossws of two indigeneous with two exotic chicken Breeds in sub – tropical enviroment International Journal of Poultry Science (7): 702 – 710 23 Hoeflich, A., M Wu, S Mohan, J Foll, R Wanke, T Froehlich, G.J Arnold, H Lahm, H J Kolb, and E Wolf (1999) Overexpression of insulin – like growth factor – binding protein – in transgeneic mice reduces postnatal BW gain Endocrinology 140: 5488 – 5496 24 Ikeobi, C O., J A Woolliams, D R Morrice, A Law, D Windsor, D W Burt, and P M Hocking (2002) Quantitative trait loci affecting fatness in the chicken Anim Geneet 33: 428 – 435 25 Julian, R J (1998) Rapid growth problems: Ascites and skeletal deformities in broilers Poult Sci 77: 1773 – 1780 26 Kampman, K A., T G Ramsay, and M E White (1993) Develop – mental changes in hepatic IGF – and IGFBP – mRNA levels in intrauterine growthretarded and control swine Comp Biochem Physiol B 104: 415 – 421 27 Kim, J G., and J Y Lee (1996) Serum insulin – like growth factor binding protein profiles in postmenopausal women: Their correlation with bone mineral density Am J Obstet Gynecol.174: 1511 – 1517 28 Lee, H G., Choi, Y.J., Lee, S R., Kuwayama, H., Hidari, H., Hidari, H., and You K.S, (2005) Effects of dietary protein and growth hormone – releasing peptide (GHRP – 2) on plasma IGF – and IGFBPs in Holstein steers Domest Anim Endocrinol 28: 134 – 146 29 Li, H., N Deeb, H Zhou, A D Mitchell, C M Ashwell, and S J.Lamont (2003) Chicken quantitative trait loci for growth and body composition associated with transforming growth factor – β genes Poult Sci 82: 347 – 356 51 30 Lie cộng (2005) Single nucleotide polymorphisms of the chicken insulin – like factor binding protein gene associated with chicken growth and carcass traits Poultry science 84: 1191 – 1198 30 Nie Q, Lei M, Ouyang J, Zeng H, Yang G, Zhang X., (2005) Indentification and characterization of single nucleotide polymorphisms in 12 chicken growthcorrelates genes by denaturing high performance liquid chromatography Genet Sel Evol 37(3): 339 – 60 31 Price, W A., A D Stiles, B M Moats – Staats, and A J D’Ercole (1992) Gene expression of insulin – like growth factors (IGFs), the type IGF receptor, and IGF – binding proteins in dexametha sone induced fetal growth retardation Endocrinology 130: 1424 – 1432 32 Promwatee N, Duangjinda M, (2010) Association of single nucleotide polymorphisms in GHSR, IGF – I, cGH and IGFBP2 gene with growth traits in Thai native chickens The 14th AAAP: pp 44 – 47 33 Richardson, R L., G J Hausman, and J T Wright (1998) Growth factor regulation of insulin – like growth factor (IGF) binding proteins (IGFBP) and preadipocyte differentiation in porcinestromal vascular cell cultures Growth Dev Aging 62: – 12 34 Rutanen EM, Pekonen F Makinen T (1988) Soluble 34K binding protein inhibits the binding of insulin – like growth factor I to its cell receptors in human secretory phase endometrium: Evidence for autocrine/paracriner egulation of growth factor action Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 66 173 – 179 35 Scanes, C G., S Harvey, J A Marsh, and D B King (1984) Hormones and growth in poultry Poult Sci 63: 2062 – 2074 36 Schoen TJ, Beebe DC, Clemmons DR, Chader GJ Waldbillig RJ (1992) Local synthesis and development al regulation ofavian vitreal insulin – like growth factor binding proteins: A model for independent regulation in extravascularand vascular compartments Endocrinology 131 2846 – 2854 52 37 Shimasaki S Ling N (1991) Identification and molecular characterization of insulin – like growth factor binding proteins (IGFBP – 1, 2, 3, 4, and -6) Progress in Growth Factor Research 243 – 246 38 Tapanainen, P J., P Bang, K Wilson, T G Unterman, H J Vreman, and R G Rosenfeld (1994) Maternal hypoxia as a model for intrauterine growth retardation: Effects on insulin – like growth factors and their binding proteins Pediatr Res 36: 152 – 158 39 Wattanachant S, Benjakul S, Ledward DA (2004) Composition, color and texture of Thai indigeneous and brolier chicken muscles Poult Sci 83(1): 123 – 53 ... growth factor binding protein 2) đàn gà Tàu Vàng trung tâm giống vật nuôi Nhiệm vụ nghiên cứu - Thu mẫu máu từ đàn gà Tàu Vàng trung tâm giống - Chiết tách DNA từ mẫu - Xác định gene IGFBP2 tần. .. 1.1 Một số giống gà địa phương nuôi Việt Nam A) Gà Ác; B) Gà Hồ;C) Gà Mía; D) Gà Ri;E) Gà Tam Hoàng; F) Gà Tàu Vàng; G) Gà Tre; H) Gà Đông Tảo (Nguồn: http://www.rovetco.com) 1.2 Gà Tàu Vàng Gà Tàu. .. nghệ sinh học Tên đề tài : Khảo sát tần số gene IGFBP2 (insulin – like growth factor binding protein 2) đàn gà Tàu Vàng trung tâm giống vật nuôi Các liệu ban đầu : - Tài liệu tổng quan - Các báo