BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ LOẠI CAO CHIẾT HOA SỨ TRẮNG (PLUMERIA RUBRA L ACUTIFOLIA) Ngành: Công nghệ Sinh học Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Giảng viên hướng dẫn : ThS Phạm Minh Nhựt Sinh viên thực MSSV: 1311100744 : Trần Phương Thùy Lớp: 13DSH04 TP Hồ Chí Minh, 2017 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đồ án nghiên cứu riêng thực sở lý thuyết, tiến hành nghiên cứu thực tiễn hướng dẫn ThS Phạm Minh Nhựt Các số liệu, kết nêu đồ án trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan TP.Hồ Chí Minh, ngày 27 tháng 07 năm 2017 Sinh viên TRẦN PHƯƠNG THÙY Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Trước hết, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám Hiệu Trường Đại học Cơng Nghệ Tp Hồ Chí Minh, q thầy giảng dạy Khoa Công nghệ sinh học Thực phẩm - Môi trường tất thầy cô truyền dạy kiến thức quý báu cho em suốt năm học vừa qua Qua em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy Phạm Minh Nhựt, người định hướng nghiên cứu, quan tâm, tận tình hướng dẫn giúp đỡ em suốt thời gian làm khố luận tốt nghiệp Bên cạnh em xin cảm ơn thầy Phòng Thí nghiệm Khoa Công nghệ sinh học - Thực phẩm - Môi trường anh chị, bạn bè nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để em hồn thành tốt đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình ln bên cạnh, động viên lúc khó khăn, nản lòng suốt thời gian học tập, nghiên cứu sống Tp Hồ Chí Minh, ngày 27 tháng 07 năm 2017 Sinh viên TRẦN PHƯƠNG THÙY Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT .vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH SÁCH CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Phạm vi nghiên cứu CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu Sứ trắng 1.1.1 Phân loại 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3 Phân bố 1.1.4 Công dụng Sứ Trắng 1.1.5 Thành phần hóa học Hoa Sứ trắng 1.1.6 Tình hình nghiên cứu Hoa Sứ Việt Nam giới 1.2 Đại cương số hợp chất hữu diện thực vật i Đồ án tốt nghiệp 1.2.1 Carbohydrate 1.2.2 Alkaloid 10 1.2.3 Flavonoid 11 1.2.4 Saponin 12 1.2.5 Tannin 13 1.2.6 Hợp chất glycoside 14 1.2.7 Hợp chất phenolic 15 1.3 Cơ chế kháng khuẩn hợp chất có nguồn gốc từ thực vật 16 1.3.1 Khái niệm 16 1.3.2 Cơ chế kháng khuẩn 17 1.4 Tổng quan vi khuẩn đường ruột 17 1.4.1 Định nghĩa 17 1.4.2 Đặc điểm hình thái 17 1.4.3 Tính chất nuôi cấy 17 1.4.4 Đặc điểm sinh hóa 18 1.4.5 Sức đề kháng 18 1.4.6 Độc tố 19 1.4.7 Cấu trúc kháng nguyên 19 1.4.8 Khả gây bệnh 20 CHƯƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 ii Đồ án tốt nghiệp 2.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 22 2.1.1 Địa điểm 22 2.1.2 Thời gian 22 2.2 Vật liệu 22 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 22 2.2.2 Địa điểm thu mẫu 22 2.2.3 Vật liệu nghiên cứu 22 2.2.4 Thiết bị dụng cụ 24 2.2.5 Hóa chất, dung mơi 24 2.3 Phương pháp nghiên cứu 25 2.3.1 Phương pháp xử lý nguyên liệu 25 2.3.2 Phương pháp tách chiết cao từ thực vật 25 2.3.3 Phương pháp bảo quản giữ giống vi sinh vật 26 2.3.4 Phương pháp tăng sinh vi sinh vật 27 2.3.5 Phương pháp pha loãng mẫu 27 2.3.6 Phương pháp xác định hoạt tính kháng khuẩn cao chiết 28 2.3.7 Phương pháp xác định thành phần hóa học có cao chiết 28 2.3.9 Phương pháp xử lý số liệu 31 2.4 Bố trí thí nghiệm 32 iii Đồ án tốt nghiệp 2.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng dung môi tách chiết đến hàm lượng thu hồi cao từ Hoa Sứ trắng 32 2.4.2 Thí nghiệm 2: Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết khác từ Hoa Sứ trắng 34 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Kết khảo sát ảnh hưởng dung môi tách chiết đến hàm lượng thu hồi cao từ Hoa Sứ trắng 38 3.2 Kết khảo sát ảnh hưởng dung môi tách chiết đến hoạt tính kháng khuẩn cao chiết từ Hoa Sứ trắng 39 3.2.1 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Escherichia coli 39 3.2.2 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Listeria spp 42 3.2.3 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm Salmonella spp 44 3.2.5 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Vibrio spp 48 3.2.6 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn lại 50 3.3 Kết định tính số thành phần hóa học cao chiết Hoa Sứ trắng từ dung môi ethanol 70% 57 iv Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 PHỤ LỤC Phụ lục A Kết đánh giá hàm lượng thu hồi cao chiết từ Hoa Sứ trắng với loại dung môi khác Phụ lục B Kết xử lý số liệu thống kê khảo sát hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết từ Hoa Sứ trắng 20 chủng vi khuẩn thử nghiệm Phụ lục C: Cách pha loại thuốc thử 38 Phụ lục D Kết hình ảnh định tính số thành phần hóa học cao chiết EtOH 70% từ Hoa Sứ trắng 40 v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TSB: Trypton Soya Broth TSA: Trypticase Soya Agar DMSO: Dimethyl Sulfoxide NA: Non activity DNA: Deoxyribonucleic acid RNA: Ribonucleic acid PrAEE: Cao chiết ethanol từ Hoa Sứ trắng vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Kết đường kính vòng ức chế (mm) cao chiết Hoa Sứ trắng từ loại dung môi khác 10 chủng vi khuẩn gây bệnh 54 Bảng 3.2 Kết đường kính vòng ức chế (mm) cao chiết Hoa Sứ trắng từ loại dung môi khác 10 chủng vi khuẩn gây bệnh 55 Bảng 3.3 Kết định tính thành phần hóa học cao chiết ethanol 70% từ mẫu Hoa Sứ trắng 58 vii Đồ án tốt nghiệp B.5.3 V.harveyi a) Nồng độ 200 mg/ml The ANOVA Procedure Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 763.6000000 Error 10 1.8333333 Corrected Total 14 765.4333333 190.9000000 1041.27 F Model 770.6666667 Error 10 1.6666667 Corrected Total 14 772.3333333 192.6666667 1156.00 F Model 415.7666667 103.9416667 Error 10 2.8333333 0.2833333 Corrected Total 14 418.6000000 30 366.85 F Model 524.5666667 131.1416667 Error 10 3.3333333 0.3333333 Corrected Total 14 527.9000000 393.42 F Model 425.0666667 Error 10 0.8333333 Corrected Total 14 425.9000000 106.2666667 1275.20 F Model 471.1666667 117.7916667 Error 10 4.1666667 0.4166667 Corrected Total 14 475.3333333 34 282.70 F Model 323.6666667 80.9166667 Error 10 3.6666667 0.3666667 Corrected Total 14 327.3333333 220.68 F Model 384.0000000 Error 10 0.5000000 Corrected Total 14 384.5000000 96.0000000 1920.00