BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ TP HCM ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP BƯỚC ĐẦU PHÂN LẬP TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN XỬ LÝ NITRATE TRONG NƯỚC THẢI Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : ThS.Phạm Minh Nhựt Sinh viên thực MSSV: 107111096 : Nguyễn Thanh Nam Lớp:07DSH4 TP Hồ Chí Minh, 2011 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Vấn đề ô nhiễm mơi trường vấn đề nóng mà xã hội quan tâm, không giới hạn phạm vi khu vực quốc gia mà vấn đề tồn cầu Nền cơng nghiệp đại mang lại nhiều lợi ích thiết thực khơng thể phủ nhận Thế đằng sau lợi ích người dần làm hủy hoại môi trường sống như:Vấn đề ấm lên tồn cầu, nhiễm nguồn nước, nhiễm khơng khí, nhiễm đất… hết vấn đề ô nhiễm nguồn nước kể nguồn nước ngầm có nguy đe dọa sống Trong nhiều tác nhân gây ô nhiễm nguồn nước nitrate tác nhân gây ô nhiễm phổ biến hoạt động công nghiệp lẫn nơng nghiệp Ơ nhiễm nitrate ảnh hưởng trực tiếp đến tồn sinh vật thủy sinh sức khỏe người Hiện có nhiều phương pháp để xử lý nitrate nước thải thẩm thấu ngược, phương pháp hóa học, phương pháp sinh học tất phương pháp phương pháp sinh học mang lại hiệu nhiều thông qua việc sữ dụng vi sinhh vật để xử lý chúng Tuy nhiên để nâng cao hiệu làm giảm lượng nitrate nước thải việc phân lập chọn lọc chủng vi sinh vật có khả khử nitrate mạnh nước điều cần thiết Các vi sinh vật khử nitrate phân bố nhiều đất, bùn nước, chúng bao gồm vi khuẩn, vi khuẩn cổ nấm Gần đây, khả khử nitrate có khoảng 150 loài thuộc 50 họ Trong số loài này, Pseodomonas, Neisseria, Bacillus vi khuẩn khử nitrate phồ biến q trình khử nitrate chúng SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt thực điều kiện kỵ khí bán kỵ khí Tuy nhiên, Alcaligenes faecalis Paracoccus denitrificans chứng minh có khả thực khử nitrate cách sử dụng đồng thời nitrate oxy chất nhận điện tử Vì vậy, việc tìm chủng có hoạt tính khử nitrate mạnh, thích ứng điều kiện xử lý khác nhằm xử lý thích hợp cho loại nước thải khác việc làm cần thiết Với ý nghĩa khoa học thực tiển nêu trên, thực đề tài “Bước đầu phân lập tuyển chọn số chủng vi khuẩn xử lý nitrate nước thải”, đề tài thực Phòng Thí Nghiệm Vi sinh Trường Đại Học Kỹ Thuật Cơng Nghệ TP.HCM 1.2 Mục đích Tuyển chọn số vi khuẩn có hoạt tính khử nitrate mạnh từ nước thải nhà máy giấy nhằm ứng dụng xử lý nitrate nước thải công nghiệp 1.3 Nội dung - Phân lập chủng vi khuẩn có khả xử lý nitrate -Thử nghiệm khả xử lý nitrate chủng phòng thí nghiệm 1.4 Phạm vi nghiên cứu Những nghiên cứu thời giai đoạn đầu sàng lọc tuyển chọn chủng có hoạt tính khử nitrate đánh giá hiệu làm giảm nitrate thực phạm vi phòng thí nghiệm SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt Chương TỔNG QUAN 2.1 Giới thiệu nước thải nitrate nước thải 2.1.1 Đôi nét nước thải Trên tồn cầu, nước tài ngun vơ phong phú nước hữu dụng với người nơi, chỗ, dạng đạt chất lượng theo yêu cầu Hơn 99% trữ lượng nước giới nằm dạng không hữu dụng đa số mục đích người độ mặn (nước biển), địa điểm, dạng (băng hà) 2.1.1.1 Phân bố dạng nước trái đất Bảng 2.1.Bảng phân bố dạng nước Trái đất Địa điểm Diện tích (km2) Tổng thể tích nước (km3) % Tổng lượng nước Các đại dương biển (nước mặn) 361.000.000 1.230.000.000 97.2000 Khí (hơi nước) 510.000.000 12.700 0,0010 - 1.200 0,0001 130.000.000 4.000.000 0,3100 855.000 123.000 0,0090 28.200.000 28.600.000 2.1500 Sông, rạch Nước ngầm (đến độ sâu 0,8 km) Hồ nước Tảng băng băng hà SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt Con người khai thác nguồn nước tự nhiên để cung cấp nước cho nhu cầu sinh hoạt sản xuất Sau sử dụng nước bị nhiễm bẩn chứa nhiều vi trùng chất thải khác Nếu không xử lý trước thải vào nguồn nước công cộng, chúng làm nhiễm mơi trường Vì vậy, nước thải trước thải vào sông, hồ nguồn nước) cần phải xử lý thích đáng Mức độ xử lý phụ thuộc vào nồng độ bẩn nước thải, khả pha loãng nước thải với nước nguồn yêu cầu mặt vệ sinh, khả "tự làm nguồn nước" Theo quy định bảo vệ môi trường Việt Nam, ô nhiễm nước việc đưa vào nguồn nước tác nhân lý, hóa, sinh học nhiệt không đặc trưng thành phần hàm lượng môi trường ban đầu đến mức có khả gây ảnh hưởng xấu đến phát triển bình thường loại sinh vật thay đổi tính chất lành mơi trường ban đầu Theo định nghĩa khác "Ô nhiễm nước mặt diễn đưa nhiều tạp chất, chất không mong đợi, tác nhân gây nguy hại vào nguồn nước, vượt khỏi khả tự làm nguồn nước này" SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt Bảng 2.2 Các đặc điểm lý học, hóa học sinh học nước thải nguồn sinh (Wastewater Engineering: treatment, reuse, disposal, 1991) Đặc điểm Nguồn Lý học Màu Nước thải sinh hoạt hay công nghiệp, thường phân hủy chất thải hữu Mùi Nước thải công nghiệp, phân hủy nước thải Chất rắn Nước cấp, nước thải sinh hoạt cơng nghiệp, xói mòn đất Nhiệt Nước thải sinh hoạt, cơng nghiệp Hóa học Carbohydrate Nước thải sinh hoạt, thương mại, công nghiệp Dầu, mỡ Nước thải sinh hoạt, thương mại, công nghiệp Thuốc trừ sâu Nước thải nông nghiệp Phenols Nước thải công nghiệp SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt Protein Nước thải sinh hoạt, thương mại, công nghiệp Chất hữu bay Nước thải sinh hoạt, thương mại, công nghiệp Các chất nguy Nước thải sinh hoạt, thương mại, công nghiệp hiểm Các chất khác Do phân hủy chất hữu nước thải tự nhiên Tính kiềm Chất thải sinh hoạt, nước cấp, nước ngầm Chlorides Nước cấp, nước ngầm Kim loại nặng Nước thải công nghiệp Nitrogen Nước thải sinh hoạt, công nghiệp pH Nước thải sinh hoạt, thương mại, công nghiệp Phosphorus Nước thải sinh hoạt, thương mại, công nghiệp, rửa trôi Sulfur Nước thải sinh hoạt, thương mại, công nghiệp, nước cấp SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt Hydrogen sulfide Sự phân hủy nước thải sinh hoạt Methane Sự phân hủy nước thải sinh hoạt Oxygen Nước cấp, trao đổi qua bề mặt tiếp xúc khơng khí nước Sinh học Động vật Các dòng chảy hở hệ thống xử lý Thực vật Các dòng chảy hở hệ thống xử lý Eubacteria Nước thải sinh hoạt, hệ thống xử lý Archaebacteria Nước thải sinh hoạt, hệ thống xử lý Virus Nước thải sinh hoạt, hệ thống xử lý SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt 2.1.1.3 Những chất gây ô nhiễm cần trọng nguyên nhân Bảng 2.3.Các chất ô nhiễm quan trọng cần trọng đến trình xử lý nước thải (Wastewater Engineering: Treatment, Diposal, Reuse, 1989) Chất gây ô nhiễm Nguyên nhân xem quan trọng Các chất rắn lơ Tạo nên bùn lắng mơi trường yếm khí nước thải lửng chưa xử lý thải vào môi trường Biểu thị đơn vị mg/L Các chất hữu có Bao gồm chủ yếu carbohydrate, protein chất béo thể phân hủy Thường đo tiêu BOD COD Nếu thải đường sinh học thẳng vào nguồn nước, trình phân hủy sinh học làm suy kiệt oxy hòa tan nguồn nước Các mầm bệnh Các bệnh truyền nhiễm lây nhiễm từ vi sinh vật gây bệnh nước thải Thông số quản lý MPN (Most Probable Number) Các dưỡng chất N P cần thiết cho phát triển sinh vật Khi thải vào nguồn nước làm gia tăng phát triển lồi khơng mong đợi Khi thải với số lượng lớn mặt đất gây nhiễm nước ngầm SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt Các chất ô nhiễm Các hợp chất hữu hay vơ có khả gây ung nguy hại thư, biến dị, thai dị dạng gây độc cấp tính Các chất hữu Khơng thể xử lý biện pháp thơng khó phân hủy thường Ví dụ nơng dược, phenols Kim loại nặng Có nước thải thương mại công nghiệp cần loại bỏ tái sử dụng nước thải Một số ion kim loại ức chế trình xử lý sinh học Chất vơ hòa tan Hạn chế việc sử dụng nước cho mục đích nơng nghiệp, cơng nghiệp Nhiệt Làm giảm khả bão hòa oxy nước thúc đẩy phát triển thủy sinh vật Ion hydrogen Có khả gây nguy hại cho thủy sinh vật SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt Từ chủng khuẩn lạc thu được, tăng sinh erlen (100ml) chứa 10ml môi trường Nutrient broth (khơng chứa nitrate) đậy nút gòn phủ bạc bên ngoài, ủ 24 với tốc độ lắc 150 vòng/phút nhiệt độ phòng Sau thời gian ủ tiến hành đo bước sóng 600nm để xác định mật độ vi khuẩn Erlen, pha loãng để đạt độ hấp thụ mật độ quang 1.0 Nếu mật độ chưa đạt ủ lâu Sử dụng 1ml dịch nuối cấy (OD =1.0 tương đương 109 cfu/ml ) cho vào chai chứa 100ml môi trường nitrate khử trùng, đậy nút cao su tạo điều kiện thiếu khí, bao giấy bạc bên ngồi,ủ nhiệt độ 370C điều kiện tĩnh ngày, mẫu đối chứng thực điều kiện không bổ sung vi khuẩn Ở thời điểm 24 giờ, tiến hành thu mẫu để phân tích hàm lượng nitrate lại mẫu Mỗi thời điểm phân tích lặp lại lần Phương pháp phân tích hàm lượng nitrate mơ tả mục 3.3.5 Mẫu đối mẫu thí nghiệm chứng Hình 3.1 Dịch sau tăng sinh ủ bình mơi trường dinh dưỡng Nitrate broth 44 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt 3.4.2.2 Đánh giá hiệu xử lý nitrate chủng vi khuẩn khảo sát cách bổ sung hạt gel anginate chứa vi khuẩn vào môi trường khảo sát Môi trường Nitrate broth (chứa KNO3 2g/l), nồng độ nitrate ban đầu 0,2478 mg/ml sử dụng xác định hiệu loại bỏ nitrate Giai đoạn tăng sinh tiến hành tương tự mô tả mục 3.4.2.1, sau giai đoạn tăng sinh dịch tăng sinh đạt mật độ quang OD =1.0 tương đương 109 cfu/ml Sử dụng 50ml dịch tăng sinh có mật độ tế bào hòa trộn với 50ml dung dịch gel anginate 2% , dùng xylanh vô trùng hút hỗn hợp này,tạo thành hat gel đường kính 5mm chứa tế bào vi khuẩn Cân 1g hạt chứa tế bào vi khuẩn chủng cốc vô trùng, cho vào chai chứa 100ml môi trường nitrate khử trùng, đậy nút cao su tạo điều kiện thiếu khí, bao giấy bạc bên ngoài, ủ nhiệt độ 370C điều kiện tĩnh ngày, mẫu đối chứng thực điều kiện không bổ sung vi khuẩn Ở thời điểm 24 giờ, tiến hành thu mẫu để phân tích hàm lượng nitrate lại mẫu Mỗi thời điểm phân tích lặp lại lần Phương pháp xác định hàm lượng nitrate mô tả mục 3.3.5 45 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết phân lập chủng vi khuẩn có khả xử lý nitrate 4.1.1 Về hình dáng khuẩn lạc Kết phân lập thu hai chủng khuẩn lạc phát triển môi trường phân lập chứa nguồn carbon (Potassium sodium tetrate tetrahydrate), nguồn nitơ cung cấp dạng KNO3 Hai khuẩn lạc có đặc điểm sau: + Khuẩn lạc thứ (N1): Khuẩn lạc tròn đều, lồi màu trắng sữa đồng nhất, trơn, nhày, có xu hướng mọc lan bề mơi trường Khơng nhận thấy có phát triển vi khuẩn phần sâu môi trường thạch + Khuẩn lạc thứ ( N2) : Khuẩn lạc tròn đều, lồi, màu cam đồng nhất, trơn, nhày, có xu hướng mọc lan bề mơi trường Khơng nhận thấy có phát triển vi khuẩn phần sâu mơi trường thạch Hình 4.1 Khuẩn lạc N1 môi trường phân lập sau 24 cấy 46 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt Hình 4.2 Khuẩn lạc N2 môi trường phân lập sau 24 cấy 4.1.2 Kết thử nghiệm sinh hóa 4.1.2.1 Định tính khả khử nitrate Kết định tính khả khử nitrate chủng vi khuẩn khảo sát cho thấy hai chủng N1 N2 cho kết dương tính với thử nghiệm nitrate môi trường Nitrate Broth sau bổ sung thuốc thử vào dịch nuôi cấy hai chủng mẫu đối chứng Màu hồng tạo đậm hai chủng N1 N2 chứng tỏ lượng nitrite tạo môi trường nhiều từ phản ứng khử nitrate sau 24 ni ủ Trong màu ống đối chứng không đổi màu N1 ĐC ĐC N2 Hình 4.3: Phản ứng khử nitrate hai chủng vi khuẩn N1và N2 47 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt 4.1.2.2 Kết số thử nghiệm sinh hóa khác Các thử nghiệm sinh hóa khác thực hiện, hình ảnh minh họa thể phần phụ lục I Các thử nghiệm sinh hóa khác biểu thị bảng 4.1 Bảng 4.1.Bảng tóm tắt thử nghiệm sinh hóa Thử nghiệm sinh hóa Chủng N1 Chủng N2 Gram - - Catalase + + Thủy phân tinh bột + + VP.test - - M.R test - - Sinh indol - - Glucose - + Lacrose - + Sinh H2S - - Citrate + + Tính di động - - Khử Nitrate + + Dựa vào kết bảng 4.1 nhận thấy đặc trưng hai chủng sau: 48 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt Chủng N1: Thuộc nhóm vi khuẩn Gram âm, khơng có khả đồng hóa nguồn carbon glucose lactose, citrate, có khả phân giải H2O2 chúng có enzyme ngoại bào catalase phân giải tinh bột (có hệ enzyme amylase), âm tính thử nghiệm indol MR-VP, khơng sinh khí H2S, khơng có khả di động Chủng N2 : Thuộc nhóm vi khuẩn gram âm, có khả đồng hóa glucose lactose, citrate, phân giải H2O2, phân giải tinh bột (có hệ enzyme amylase), âm tính thử nghiệm indol MR-VP, khơng sinh khí H2S, khơng có khả di động Hình 4.4.Hai chủng vi khuẩn N1( phải) N2 (trái) bắt màu hồng thuốc nhuộm kính hiển vi quang học , vật kính 100X So với kết Yu ctv (2009) kết thử nghiệm khơng có tương đồng số thử nghiệm sinh hóa thử nghiệm catalase, khả thủy phân tinh bột Điều chứng tỏ hai chủng vi khuẩn N1 N2 khơng thuộc nhóm Stenotrophomonas sp Oceanimonas sp Do đó, có khả hai chủng N1 N2 hai chủng phải cần phân tích trình tự gene để xác định xác lồi hai chủng N1 N2 49 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt 4.2 Kết đánh giá khả xử lý nitrate chủng phòng thí nghiệm 4.2.1 Kết xây dựng đường chuẩn nitrate Phương trình đường chuẩn độ hấp thụ mật độ quang theo nồng độ với dung dịch nitrate chuẩn (100µg/ml) Y= 14.171x + 0.2966 Trong đó: Y nồng độ µg/ml, x : mật độ quang R2=0.9901( hệ số tương quan) Hình 4.5: Phương trình đường chuẩn nitrate Hệ số tương quan R= 0,9901 thỏa điều kiện nguyên tắc xây dựng đường chuẩn (≥0,99) nitrate theo nồng độ, kết tính tốn thay vào phương trình 50 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt 4.2.2 Kết thí nghiệm xác định hiệu xử lý nitrate chủng thu bổ sung trực tiếp vào môi trường Sau thời gian nuôi ủ hai chủng vi khuẩn trên, tiến hành đo hàm lượng nitrate môi trường khảo sát thu kết thể Hình 4.6 Hình 4.6 Nồng độ nitrate lại sau ngày khảo sát chủng N1 N2 Dựa vào hình 4.6, chúng tơi nhận thấy nồng độ nitrate mơi trường có bổ sung vi khuẩn giảm dần theo thời gian phân tích so với đối chứng Điều chứng tỏ hai chủng vi khuẩn N1 N2 có khả xử lý nitrate mạnh 51 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt Ở ngày đầu tiên, hàm lượng nitrate giảm xuống mạnh hai chủng khảo sát Cụ thể hiệu loại bỏ nitrate chủng N1 59,37% chủng N2 52,12% So với thí nghiệm Yu ctv (2009) hiệu xử lý nitrate hai chủng ZZ15 YC13 tương ứng 72,5% 54,8% sau ngày khảo sát Sở dĩ khả khử nitrate hai chủng mạnh 24 chủng vi sinh vật cung cấp phase tăng trưởng đồng thời sử dụng với mật độ cao (> 109 cfu/ml) nên đưa vào mơi trường rút ngắn thời gian thích nghi Mặt khác, 24 đầu môi trường dinh dưỡng đầy đủ, hàm lượng cao nên vi khuẩn hoạt động mạnh nên hiệu khử nitrate mạnh Thời gian khảo sát tăng hiệu khử nitrate giảm, điều mật độ vi khuẩn môi trường tăng thành phần môi trường dinh dưỡng giảm hàm lượng nitrate giảm theo thời gian nên xảy trình cạnh tranh nguồn dinh dưỡng dẫn đến hiệu xử lý nitrate khơng cao Ở ngày thứ q trình khảo sát, nồng độ nitrate lại chủng N1 0,0192 mg/ml, chủng N2 0,0156 mg/ml Như hiệu loại bỏ nitrate sau ngày đạt 92,5% chủng N1 93,56% chủng N2 So sánh với kết Yu ctv (2009), hiệu xử lý nitrate chủng ZZ15 96,6% chủng YC13 95,3% sau ngày khảo sát hiệu xử lý nitrate hai chủng N1 N2 sau ngày cao không thua hai chủng ZZ15 YC13 52 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt 4.2.3 Kết đánh giá hiệu xử lý nitrate chủng vi khuẩn khảo sát cách bổ sung hạt gel anginate chứa vi khuẩn vào môi trường khảo sát Sau ngày nuôi ủ với hai chủng vi khuẩn N1 N2 mơi trường nói kết đo mật độ quang tính tốn theo phương pháp mơ tả mục 3.3.5 Kết đo đạt thể bảng phụ lục II Khả làm giảm lượng nitrate biểu thị hình 4.7 Hình 4.7 Nồng độ nitrate lại sau ngày ngày khảo sát theo phương pháp cố định Dựa vào hình 4.7, thấy sau ngày chủng N1 N2 có khử nitrate nhẹ từ nồng độ ban đầu 0,2478mg/ml xuống khoảng 0,2387 53 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt mg/ml chủng N1 0,235 mg/ml chủng N2, tương đương hiệu khử nitrate đạt 2,96% chủng N1 đạt 4,47% chủng N2 Ở ngày thứ chúng tơi thấy có giảm mạnh lượng nitrate chủng N1, nồng độ nitrate lại 39,88%, hiệu làm giảm lượng nitrate sau ngày đạt 61,12%, ngày lại có xu hướng giảm chậm dần Còn chủng N2 chúng tơi thấy có giảm đặn sau ngày hiệu làm giảm đạt 57,28% Nhận xét thấy với chủng N1 ngày làm giảm đến 61% lượng nitrate ban đầu, chủng N2 lại đến ngày làm giảm 57,28% Điều giải thích, ngày hai chủng khảo sát, tế bào vi khuẩn phần lớn hạt gel, phần tế bào vi khuẩn ngồi mơi trường, dần thích nghi tiêu thụ nguồn chất nên nồng độ nitrate có giảm chậm Ở ngày thứ hai chủng N1 có giảm nồng độ nitrate mạnh so với ngày lại, chủng N2 có giảm đặn chậm ngày đạt 57,28 % so với ngày chủng N1 đạt 60,12%.Với phương pháp cố định tế bào vi khuẩn hạt gel aginate chủng N1 tỏ ưu chủng N2 thời gian Tuy nhiên sau ngày ni ủ hàm lượng nitrate lại hai chủng thấp, cụ thể chủng N1 8,25% chủng N2 5,3% chủng N2 tỏ hiệu làm giảm thấp chủng N1 nồng độ nitrate Hiệu loại bỏ đạt 91,75% chủng N1 94,67% chủng N2 So với kết thu theo phương pháp bổ sung trực tiếp gần tương tương (chủng N1 92,50% chủng N2 93,56%) Có thể nói phương pháp cố định tế bào gel alginate tỏ nhiều ưu điểm vừa làm giảm lượng nitrate không thua phương pháp bổ sung 54 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt trực tiếp vừa thu hồi tế bào vi khuẩn, thuận lợi vấn đề bảo quản sản phẩm Tuy nhiên vấn đề phương pháp cố định vi khuẩn hiệu tiến hành xử lý điều kiện quy mô lớn cần phải nghiên cứu kỹ Tóm lại, việc tìm chủng vi khuẩn có hiệu xử lý nitrate mạnh giúp cho trình xử lý nitrate nước thải thuận lợi hơn, giúp giảm chi phí xử lý Tuy nhiên, để hai chủng vi khuẩn thực thể vai trò đòi hỏi phải có nghiên cứu sâu nhằm xác định xác lồi hiệu xử lý quy mơ pilot quy trình sản xuất chế phẩm để tạo chế phẩm thực có chất lượng, có khả cạnh tranh thị trường 55 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận - Đã phân lập hai chủng vi khuẩn N1 N2 có khả xử lý nitrate từ môi trường nước thải nhà máy giấy Sài Gòn - Hiệu làm giảm lượng nitrate bổ sung vi khuẩn trực tiếp đạt mức 92,5% chủng N1 93,56% cho chủng N2 sau ngày khảo sát - Kết xử lý nitrate theo phương pháp cố định tế bào gel alginate sau ngày thu hiệu loại bỏ nitrate chủng N1 đạt mức 91,78% chủng N2 94,70%, so với phương pháp bổ sung trực tiếp dịch vi khuẩn cho thấy kết tương đương thể nhiều ưu điểm phương pháp bổ sung trực tiếp 5.2 Kiến nghị - Tiếp tục thử nghiệm hiệu xử lý nitrate điều kiện nước thải với quy mơ phòng thí nghiệm quy mơ nhà máy - Hồn thiện quy trình nghiên cứu hạt alginate cố định vi khuẩn nhằm tạo hạt alginate bền có hiệu - Tiến hành định danh hai chủng vi khuẩn N1 N2 phương pháp sinh học phân tử PCR, giải trình tự - Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm xử lý nitrate từ hai chủng vi khuẩn N1 N2 56 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt [1].Bộ KHCN & MT, Tiêu chuẩn môi trường Việt Nam: TCVN 5945-1995 [2].Trần Linh Thước (2009) Phương pháp phân tích vi sinh vật nước ,thực phẩm mỹ phẩm Nhà xuất giáo dục,TP.HCM Tài liệu tiếng anh [1]Abir U Igamberdiev and Robert D Hill (2002) Nitrate, NO and haemoglobin in plant adaptation to hypoxia an alternative to classic fermentation pathways.Journal Of Experimental [2].Bo Bocher, Lori Ward, 1995 Tracing the Flow of Chemicals: How to Reduce Nitrate and Pesticide Leaching, Turf Science, p 64-67 [3] Gerald A., 1981, Removal of Nitrate from Contaminated Water Supplies for Public Use, Environmental Protection Agency, Cincinnati [4]Lu Yu (2009).Identification of novel denitrification bacteria Stenotrophomons sp.ZZ15 and Oceanimonas sp.YC13 and application for removal from industrial wastewater, v.20, p 391-400 [5].Neal,L (1995).Turfgrass Nitrogen Evaluated, Water Environment and Technology, p 57 Tài liệu internet Michael C Haveber (2004).Technology Nitrate, Arsenic and Perchlorate removal Presented by Layne Christensen company http://www.docstoc.com/docs/40419446/Water-Treatment-Technology-Nitrate 57 SVTH: Nguyễn Thanh Nam GVHD: ThS.Phạm Minh Nhựt 58 ... đích Tuyển chọn số vi khuẩn có hoạt tính khử nitrate mạnh từ nước thải nhà máy giấy nhằm ứng dụng xử lý nitrate nước thải công nghiệp 1.3 Nội dung - Phân lập chủng vi khuẩn có khả xử lý nitrate. .. lượng nitrate nước thải vi c phân lập chọn lọc chủng vi sinh vật có khả khử nitrate mạnh nước điều cần thiết Các vi sinh vật khử nitrate phân bố nhiều đất, bùn nước, chúng bao gồm vi khuẩn, vi khuẩn. .. thải khác vi c làm cần thiết Với ý nghĩa khoa học thực tiển nêu trên, thực đề tài Bước đầu phân lập tuyển chọn số chủng vi khuẩn xử lý nitrate nước thải , đề tài thực Phòng Thí Nghiệm Vi sinh