BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY BÁN RẮN LÊN SỰ HÌNH THÀNH BÀO TỬ Metarhizium anisopliae Ngành : Công nghệ sinh học Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Người hướng dẫn : ThS NGUYỄN NHƯ NHỨT KS NGUYỄN QUỐC LINH Sinh viên thực : NGUYỄN DIỄM PHÚC MSSV: 1211100159 Lớp: 12DSH01 TP Hồ Chí Minh, 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn khoa học ThS Nguyễn Như Nhứt KS Nguyễn Quốc Linh Các nội dung nghiên cứu, kết đề tài trung thực chưa cơng bố hình thức trước Những số liệu bảng biểu phục vụ cho việc phân tích, nhận xét, đánh giá tác giả thu thập từ nguồn khác có ghi rõ phần tài liệu tham khảo Ngoài ra, đồ án sử dụng số nhận xét, đánh số liệu tác giả khác, quan tổ chức khác có trích dẫn thích nguồn gốc Nếu phát có gian lận Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm nội dung đồ án TP Hồ Chí Minh, ngày 18 tháng 08 năm 2016 Sinh viên thực tập NGUYỄN DIỄM PHÚC LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập trường Đại học Cơng Nghệ TP.HCM, quan tâm giúp đỡ tận tình quý thầy khơng quản cơng lao khó nhọc trang bị kiến thức cần thiết cho chúng em, tạo điều kiện cho chúng em có hội áp dụng kiến thức vào thực tiễn thơng qua đợt thực tập Tuy thời gian thực tập ngắn ngủi trang bị cho em nhiều kiến thức thực tiễn bổ ích cho cơng việc sau Em xin chân thành biết ơn: - Ban giám hiệu toàn thể giáo viên giảng dạy trường Đại học Cơng Nghệ TP HCM nói chung thầy khoa Cơng nghệ sinh học nói riêng cho em có hội thực tập - Đặc biệt em xin gửi lời cảm ơn đến ThS Nguyễn Như Nhứt, người tạo điều kiện, hướng dẫn giúp em hồn thành tốt đồ án - Em xin cảm ơn anh Nguyễn Quốc Linh hướng dẫn hỗ trợ em hoàn thành đồ án Em xin tri ân giúp đỡ tận tình của: - Các anh, chị phòng thí nghiệm Chi nhánh Cơng ty TNHH Gia Tường tỉnh Bình Dương tồn thể anh, chị phòng ban Cơng ty tạo điều kiện hướng dẫn giúp đỡ em suốt thời gian thực tập để hoàn thành luận văn Sinh viên thực tập NGUYỄN DIỄM PHÚC Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH v DANH MỤC BIỂU ĐỒ vi MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Tình hình nghiên cứu Mục đích nghiên cứu .4 Nhiệm vụ nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu .5 Các kết đạt đề tài Kết cấu ĐATN Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược Metarhizium anisopliae .6 1.1.1 Phân loại .6 1.1.2 Phân bố 1.1.3 Đặc điểm hình thái 1.1.4 Đặc điểm sinh học 1.1.5 Khả gây hại chế tác động nấm lên côn trùng .16 1.1.6 Ảnh hưởng Metarhizium anisopliae đến người môi trường 20 1.1.7 Phổ ký chủ nấm Metarhizium anisopliae 20 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Địa điểm thời gian tiến hành thí nghiệm 22 2.1.1 Địa điểm .22 2.1.2 Thời gian 22 i Đồ án tốt nghiệp 2.2 Vật liệu thí nghiệm .22 2.3 Máy móc, thiết bị .22 2.4 Môi trường nuôi cấy 22 2.5 Phương pháp .24 2.5.1 Phương pháp nghiên cứu .24 2.5.2 Bố trí thí nghiệm 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Khảo sát hoạt lực diệt sâu ăn tạp (Spodoptera litura) chủng nấm Metarhizium anisopliae điều kiện phòng thí nghiệm 31 3.2 Ảnh hưởng môi trường ni cấy bán rắn lên hình thành bào tử chủng nấm M4 33 3.3 Ảnh hưởng loại khống bổ sung vào mơi trường ni cấy bán rắn lên hình thành bào tử chủng nấm M4 35 3.4 Ảnh hưởng thời gian ni cấy lên hình thành bào tử chủng nấm M4 .37 3.5 Hoạt lực diệt sâu chủng nấm M4 tăng sinh điều kiện ni cấy thích hợp chọn chọn nồng độ thử nghiệm thích hợp .38 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 PHỤ LỤC ii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CAM : Complete Media CDA : Czapek – Dox M anisopliae : Metarhizium anisopliae M1 : chủng nấm M1 M2 : chủng nấm M2 M3 : chủng nấm M3 M4 : chủng nấm M4 NT : nghiệm thức NSGN : ngày sau gây nhiễm PGA : Potato Glucose Agar TNHH : trách nhiệm hữu hạn SDAY1 : Sabouraud dextrose Yeast SDAY3 : Sabouraud dextrose Yeast có thêm khoáng chất iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các chủng Metarhizium anisopliae dùng nghiên cứu 22 Bảng 2.2 Thành phần môi trường dùng thử nghiệm khảo sát môi trường nuôi cấy Metarhizium anisopliae 23 Bảng 2.3 Thành phần khoáng chất dùng thử nghiệm khảo sát môi trường nuôi cấy Metarhizium anisopliae 24 Bảng 3.1 Hoạt lực (%) diệt sâu ăn tạp (Spodoptera litura) chủng nấm M anisopliae điều kiện phòng thí nghiệm 31 Bảng 3.2 Mật độ bào tử chủng nấm M4 tạo thành môi trường nuôi cấy 34 Bảng 3.3 Mật độ bào tử chủng nấm M4 mơi trường khống khác nhau… 36 Bảng 3.4 Mật độ bào tử chủng nấm M4 tạo thành mốc thời gian nuôi cấy khác 37 Bảng 3.5 Hoạt lực diệt sâu ăn tạp chủng nấm M4 mốc thời gian với nồng độ 106, 107, 108 bào tử/ml 38 iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cơn trùng, sâu hại bị nấm Metarhizium anisopliae kí sinh Hình 1.2 Khuẩn lạc Metarhizium anisopliae Hình 1.3 Đặc điểm hình thái Metarhizium anisopliae Hình 1.4 Hai dạng bào tử nấm Metarhizium anisopliae Hình 1.5 Cơ chế xâm nhiễm nấm lên côn trùng bướm 17 Hình 1.6 Tiến trình lây nhiễm nấm lên côn trùng 18 Hình 3.1 Sâu ăn tạp sau gây nhiễm với chủng nấm M4 33 v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Hoạt lực diệt sâu ăn tạp (Spodoptera litura) chủng nấm M anisopliae NSGN 32 Biểu đồ 3.2 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy lên hình thành bào tử chủng nấm M4 34 Biểu đồ 3.3 Ảnh hưởng dung dịch khống lên hình thành bào tử chủng nấm M4 36 Biểu đồ 3.4 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy lên hình thành bào tử chủng nấm M4 37 vi Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài - Đặt vấn đề Hiện nay, việc nông dân sử dụng không hợp lý, lạm dụng thuốc bảo vệ thực vật sản xuất nông nghiệp gây hậu nghiêm trọng trực tiếp đến môi trường sức khỏe người Có thể kể đến như: gây nhiễm mơi trường, làm nguồn nước, đất đai bị nhiễm độc ảnh hưởng đến sức khỏe người trồng, nông sản bị nhiễm độc không tiêu thụ được, gây độc cho sinh vật có ích, tạo lồi sâu, bệnh, cỏ dại, chuột hại mang tính kháng thuốc cao Trong năm gần đây, có nhiều nghiên cứu ứng dụng Metarhizium anisopliae nước giới như: Philippin nghiên cứu sử dụng nấm M anisopliae để trừ rầy nâu hại lúa (Rombach A.C., cộng 1986), Úc nghiên cứu để phòng trừ bọ hại mía đạt hiệu 68% ( Milner, 1991), Nhật Bản sử dụng nấm xanh để phòng trừ dòi hại rễ củ cải đạt hiệu 70% sau 10 ngày (1988), Malaysia nghiên cứu để phòng trừ mối đất đạt hiệu 64,75% sau 14 ngày Ở nước, M anisopliae nghiên cứu phòng trừ mối (Nguyễn Dương Khuê, 2005), trừ sâu, rầy nâu hại công nghiệp, lâm nghiệp lúa (Phạm Thị Thùy cộng sự, 2000-2004; Nguyễn Thị Lộc cộng sự, 2002) áp dụng sản xuất hộ nơng dân quy mơ nhỏ, thời gian ni cấy dài, chất lượng chưa ổn định Vì vậy, đề tài “ Khảo sát ảnh hưởng điều kiện ni cấy bán rắn lên hình thành bào tử Metarhizium anisopliae” thực nhằm góp phần hồn thiện qui trình tạo chế phẩm sinh học phục vụ cho nông nghiệp - Ý nghĩa đề tài • Ý nghĩa khoa học Đánh giá tiềm ứng dụng chủng M anisopliae nghiên cứu ... trường nuôi cấy bán rắn lên hình thành bào tử chủng nấm M anisopliae - Khảo sát ảnh hưởng loại khoáng bổ sung vào môi trường nuôi cấy bán rắn lên hình thành bào tử chủng nấm M anisopliae - Khảo sát. .. ni cấy bán rắn lên hình thành bào tử chủng nấm M4 35 3.4 Ảnh hưởng thời gian ni cấy lên hình thành bào tử chủng nấm M4 .37 3.5 Hoạt lực diệt sâu chủng nấm M4 tăng sinh điều kiện. .. nấm M anisopliae NSGN 32 Biểu đồ 3.2 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy lên hình thành bào tử chủng nấm M4 34 Biểu đồ 3.3 Ảnh hưởng dung dịch khống lên hình thành bào tử chủng