BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG HOÀNG NGỌC CƢƠNG NGHIÊN CỨU THU NHẬN VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN ERWINIA SP GÂY BỆNH THỐI NHŨN TRÊN CÀ CHUA SAU THU HOẠCH CỦA CHITOSAN TỪ MAI MỰC ỐNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ KỸ THUẬT KHÁNH HÒA - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG HOÀNG NGỌC CƢƠNG NGHIÊN CỨU THU NHẬN VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN ERWINIA SP GÂY BỆNH THỐI NHŨN TRÊN CÀ CHUA SAU THU HOẠCH CỦA CHITOSAN TỪ MAI MỰC ỐNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ KỸ THUẬT NGÀNH ĐÀO TẠO : CÔNG NGHỆ CHẾ BIẾN THỦY SẢN MÃ SỐ : 62540105 NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS TRANG SĨ TRUNG PGS.TS NGUYỄN ANH TUẤN KHÁNH HỊA - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình tơi thực Các số liệu, kết luận án trung thực chƣa đƣợc công bố công trình khác Tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm lời cam đoan Tác giả luận án Hoàng Ngọc Cƣơng i LỜI CẢM ƠN Luận án hồn thành nhờ có nhà trƣờng, tổ chức có liên quan tạo điều kiện; thầy cơ, bạn bè, gia đình giúp đỡ hỗ trợ Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: PGS TS Trang Sĩ Trung PGS TS Nguyễn Anh Tuấn định hƣớng, dẫn động viên suốt trình học tập nghiên cứu luận án Ban giám hiệu Trƣờng Đại học Nha Trang, Phòng, Ban, Khoa, Viện liên quan cho phép tạo điều kiện thuận lợi trình thực luận án Ban giám hiệu Trƣờng Đại học Bình Dƣơng, Lãnh đạo Khoa Cơng nghệ Sinh học tạo điều kiện thuận lợi q trình thực luận án TS Nguyễn Văn Hòa, Ths Nguyễn Cơng Minh tận tình hƣớng dẫn, động viên khích lệ, dành nhiều thời gian trao đổi trình thực luận án TS Huỳnh Thanh Tùng, PGS.TS Ngô Đăng Nghĩa, TS Khổng Trung Thắng giúp đỡ, chia sẻ nhiều kinh nghiệm quí báu Các cán kỹ thuật Viện Công nghệ Sinh học Mơi trƣờng, Trung tâm Thí nghiệm Thực hành - Trƣờng Đại học Nha Trang giúp đỡ tạo điều kiện trình tiến hành nghiên cứu Cuối cùng, xin gửi lòng ân tình tới gia đình, ngƣời thân yêu nguồn động viên chia sẻ khó khăn để luận án đƣợc hồn thành Nha Trang, ngày tháng Tác giả luận án Hoàng Ngọc Cƣơng ii năm 2017 MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH ix TÓM TẮT NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN xii PHẦN MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 TIỀM NĂNG SỬ DỤNG PHẾ LIỆU MAI MỰC ỐNG LOLIGO SP ĐỂ THU NHẬN -CHITIN 1.1.1 Giới thiệu nguyên liệu mực ống Loligo sp phế liệu từ mực sau chế biến 1.1.2 Cấu trúc thành phần hóa học mai mực ống Loligo sp 1.2 TỔNG QUAN VỀ β-CHITIN VÀ CHITOSAN 15 1.2.1 Cấu trúc hóa học, nguồn gốc tự nhiên tính chất dạng chitin 15 1.2.2 Cấu trúc hóa học tính chất chitosan 19 1.2.3 Phƣơng pháp thu nhận chitin chitosan 22 1.2.4 Đặc tính sinh học kháng nấm, kháng khuẩn chitosan 34 1.3 GIỚI THIỆU VỀ BỆNH THỐI NHŨN TRÊN CÀ CHUA SAU THU HOẠCH 37 1.3.1 Giới thiệu chung nguồn nguyên liệu cà chua sau thu hoạch 37 1.3.2 Tổng quan bệnh thối nhũn (soft rot) gây hại cà chua sau thu hoạch 39 1.3.3 Giới thiệu chủng vi khuẩn Erwinia spp gây bệnh thối nhũn 40 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 43 2.1 VẬT LIỆU 43 2.1.1 Mai mực ống Loligo sp 43 2.1.2 Trái cà chua Lycopersicon esculetum 43 iii 2.1.3 Hóa chất dùng nghiên cứu 44 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 44 2.2.1 Sơ đồ nghiên cứu tổng quát 44 2.2.2 Bố trí thí nghiệm xác định điều kiện thu nhận β-chitin 47 2.2.3 Bố trí thí nghiệm xác định điều kiện deacetyl β-chitin thu nhận chitosan 53 2.2.4 Bố trí thí nghiệm phân lập vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn 60 2.2.5 Bố trí thí nghiệm tổng quát đánh giá khả kháng khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn trái cà chua sau thu hoạch β-chitosan điều kiện in vitro in vivo 62 2.3 PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH, XÁC ĐỊNH CÁC CHỈ TIÊU 69 2.3.1 Phƣơng pháp xác định thành phần hóa học 69 2.3.2 Phƣơng pháp xác định thành phần acid amin thành phần khoáng 69 2.3.3 Phƣơng pháp xác định tính chất -chitin chitosan 69 2.3.4 Phƣơng pháp cắt mạch chitosan 70 2.3.5 Phƣơng pháp phân lập chủng vi khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn 71 2.3.6 Phƣơng pháp chuẩn bị mẫu dịch vi khuẩn Erwinia carotovora 72 2.3.7 Phƣơng pháp gây bệnh nhân tạo 73 2.3.8 Phƣơng pháp đánh giá hiệu kháng khuẩn β-chitosan điều kiện in vitro 73 2.3.9 Phƣơng pháp đánh giá hiệu kháng khuẩn β-chitosan điều kiện in vivo 73 2.3.10 Phƣơng pháp xác định tổng hàm lƣợng phenol tổng số trái cà chua 74 2.3.11 Phƣơng pháp xử lý số liệu 74 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 75 3.1 Thành phần hóa học mai mực LOLIGO SP 75 3.1.1 Thành phần hóa học 75 3.1.2 Thành phần khoáng 77 3.1.3 Thành phần acid amin 78 3.2 XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN THU NHẬN VÀ ĐÁNH GIÁ TÍNH CHẤT -CHITIN TỪ MAI MỰC LOLIGO SP 80 iv 3.2.1 Đánh giá sơ ảnh hƣởng nhiệt độ, nồng độ NaOH thời gian đến trình khử protein mai mực Loligo sp 80 3.2.2 Đánh giá ảnh hƣởng yếu tố nhiệt độ, thời gian nồng độ NaOH đến hiệu khử protein cắt mạch sản phẩm β-chitin 82 3.2.3 Tính chất sản phẩm β-chitin từ mai mực ống 90 3.3 ĐIỀU KIỆN DEACETYL -CHITIN VÀ TÍNH CHẤT CHITOSAN TỪ MAI MỰC LOLIGO SP 99 3.3.1 Đánh giá sơ ảnh hƣởng yếu tố nhiệt độ, nồng độ NaOH thời gian đến hiệu deacetyl -chitin 99 3.3.2 Ảnh hƣởng chi tiết yếu tố nhiệt độ, nồng độ NaOH thời gian đến hiệu deacetyl chitin cắt mạch chitosan 102 3.3.3 Điều kiện deacetyl lần 108 3.3.4 Hiệu suất thu nhận tính chất sản phẩm chitosan 109 3.3.5 Đề xuất quy trình thu nhận chitin, chitosan từ mai mực ống Loligo sp 116 3.4 KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA CHITOSAN 117 3.4.1 Nghiên cứu phân lập, xác định chủng Erwinia sp gây bệnh thối nhũn trái cà chua sau thu hoạch 117 3.4.2 Khả kháng khuẩn β-chitosan điều kiện in vitro 124 3.4.3 Khả kháng khuẩn β-chitosan điều kiện in vivo 128 3.4.4 Đề xuất quy trình bảo quản cà chua sau thu hoạch dung dịch chitosan từ mai mực Loligo sp 136 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 138 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ .140 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 141 PHỤ LỤC v DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt AAS Atomic absorption spectrophotometric Phổ hấp thu nguyên tử AOAC Association of Official Analytical Chemists Hiệp hội nhà hố phân tích ANOVA Analysis of Variance Phân tích phƣơng sai -chitosan Chitosan from β-chitin Chitosan từ β-chitin χcr Degree of crystallinity Độ kết tinh C95 Tomato C95 Giống cà chua C95 CrI Crystalline Index Chỉ số kết tinh DA Degree of acetyl Độ acetyl DNA Deoxyribonucleic acid Axit deoxyribonucleic DD Degree of deacetyl Độ deacetyl DP Deproteinization Quá trình khử protein DM Demineralization Quá trình khử khống DC Decolorization Q trình khử màu Ecc Erwinia carotovora subsp carotovora Erwinia carotovora subsp carotovora Eca Erwinia carotovora subsp atroseptica Erwinia carotovora subsp atroseptica Echr Erwinia chrysanthemi Erwinia chrysanthemi EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid Ethylenediaminetetraacetic axit FTIR Fourier Transform Infrared Quang phổ hấp thụ hồng ngoại GlcN D-glucosamine D-glucosamine GlcNAc N-acetyl glucosamine N-acetyl glucosamine MIC Minimum Inhibitory Concentration Nồng độ ức chế tối thiểu MHS Mark-Houwink-Sakurada equation Phƣơng trình Mark-HouwinkSakurada Mw The average molecular weight Khối lƣợng phân tử trung bình NL/DM Material / solvent Ngun liệu / dung mơi vi Nd Not detected Không phát NMR Nuclear Magnetic Resonance Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân OD Optical density Độ hấp phụ quang học Pl Pectate lyases Enzyme phân giải pectin Pnl Pectin lyases Enzyme phân giải pectin Pme Pectin methylesterases Enzyme phân giải pectin PG Potato glucose Môi trƣờng potato glucose PCR Polymerase chain reaction Phƣơng pháp khuếch đại gen PDA Potato dextrose agar Môi trƣờng thạch khoai tây rARN Ribosomal ribonucleic ARN riboxom SEM Scanning Electron Microscope Kính hiển vi điện tử quét Size-exclusion chromatographySEC-MALLS Multi-angle static light scattering Phƣơng pháp sắc ký loại trừ kết hợp với phân tán ánh sáng tĩnh đa góc sp Species Loài spp Species pluriel Nhiều loài subsp Subspecies Phân loài SPSS Statistical Package for the Social Sciences Phần mềm thống kê SS Sum of Squares Tổng bình phƣơng độ lệch TEM Transmission Electron Microscope Kính hiển vi điện tử truyền qua TLTK References Tài liệu tham khảo VASEP Vietnam Association of Seafood Exporters and Producers Hiệp hội chế biến xuất Thuỷ sản Việt Nam VNF Viet Nam Food Công ty Cp Việt Nam Food XRD X-ray powder diffraction Phổ nhiễu xạ tia X wt.% Weight percent Phần trăm theo khối lƣợng vii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hóa học nguyên liệu số loại phế liệu thủy sản thông dụng để sản xuất chitin Bảng 1.2 Thành phần hóa học số mai mực Bảng 1.3 Thành phần khoáng nguyên liệu mai mực .8 Bảng 1.4 Các dung mơi thƣờng sử dụng để hòa tan chitosan .20 Bảng 1.5 Tính chất chitosan ảnh hƣởng độ deacetyl 21 Bảng 1.6 Thành phần tính chất số loại chitosan thƣơng mại 21 Bảng 1.7 Điều kiện khử protein trình sản xuất chitin từ nguyên liệu khác .28 Bảng 1.8 Nguồn nguyên liệu thủy sản, điều kiện xử lý loại chitin 30 Bảng 1.9 Điều kiện deacetyl thu nhận chitosan từ nguồn chitin khác 32 Bảng 1.10 Khối lƣợng phân tử trung bình (Mw) chitosan điều kiện deacetyl khác .34 Bảng 1.11 Bảng tổng hợp chủng vi khuẩn gây bệnh thối nhũn (soft rot) 41 Bảng 3.1 Thành phần hóa học mai mực ống Loligo sp 75 Bảng 3.2 Thành phần khoáng mai mực Loligo sp., loại mực khác vỏ tôm 77 Bảng 3.3 So sánh thành phần acid amin mai mực ống Loligo sp kết tham khảo 79 Bảng 3.4 Tính chất mai mực ống sản phẩm β-chitin 92 Bảng 3.5 Thành phần khoáng mai mực sản phẩm β-chitin 93 Bảng 3.6 Hàm lƣợng acid amin mai mực sản phẩm β-chitin 93 Bảng 3.7 Độ dịch chuyển hóa học proton DCl/D2O 25oC β-chitin 98 Bảng 3.8 Hiệu suất thu hồi chitin chitosan 110 Bảng 3.9 So sánh chất lƣợng thƣơng mại chitosan β-chitosan .110 Bảng 3.10 Hàm lƣợng acid amin lại β-chitin β-chitosan 111 Bảng 3.11 Thành phần khoáng kim loại mai mực, β-chitin β-chitosan 113 Bảng 3.12 Độ dịch chuyển hóa học proton DCl/D2O 70oC β-chitosan 115 Bảng 3.13 Mẫu cà chua thu nhận từ chợ nông sản 118 Bảng 3.14 Kết đánh giá đặc tính sinh hóa sinh lý dòng vi khuẩn 120 Bảng 3.15 Khả kháng khuẩn Erwinia carotovora chitosan với khối lƣợng phân tử khác chitosan thƣơng mại (C-120) 125 viii PHỤ LỤC 2.2 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ ẢNH HƢỞNG CỦA YẾU TỐ NHIỆT ĐỘ ĐẾN QUÁ TRÌNH KHỬ PROTEIN Nhiet Protein lại Mw 70 1.55 1.8 1.65 8360 8550 8725 75 1.65 1.55 1.4 8675 8465 8240 80 0.5 0.8 0.7 8170 8328 8462 85 0.35 0.25 0.5 6730 6630 6830 90 0.4 0.2 0.3 5155 5040 5255 Nhietdo Pro Độ lệch Mw Độ lệch 70 1.67 0.13 8545 183 75 1.53 0.13 8460 218 80 0.67 0.15 8320 146 85 0.37 0.13 6730 100 90 0.30 0.10 5150 108 F Sig Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Protein Source Type III Sum df Mean Square of Squares Corrected Model 5.063a 1.266 Intercept 12.331 12.331 Nhietdo 5.063 1.266 Error 162 10 016 Total 17.555 15 Corrected Total 5.224 14 a R Squared = 969 (Adjusted R Squared = 957) 78.289 762.722 78.289 000 000 000 Protein Duncan Nhietdo N Subset 90.00 3000 85.00 3667 80.00 75.00 70.00 Sig .535 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 016 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 6667 1.000 1.5333 1.6667 228 Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Mw Source Type III Sum df Mean Square F Sig of Squares Corrected 26352060.000a 6588015.000 266.529 000 Model Intercept 830527215.000 830527215.000 33600.370 000 Nhietdo 26352060.000 6588015.000 266.529 000 Error 247178.000 10 24717.800 Total 857126453.000 15 Corrected Total 26599238.000 14 a R Squared = 991 (Adjusted R Squared = 987) Mw Duncan Nhietdo N Subset 90.00 5150.0000 85.00 6730.0000 80.00 8320.0000 75.00 8460.0000 70.00 8545.0000 Sig 1.000 1.000 125 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 24717.800 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 PHỤ LỤC 2.3 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ ẢNH HƢỞNG CỦA YẾU TỐ THỜI GIAN ĐẾN QUÁ TRÌNH KHỬ PROTEIN Protein lại Thoigian Mw 4.74 3.9 4.35 8530 8650 8763 1.85 1.75 8350 8180 8520 1.35 1.3 1.35 8454 8240 8020 10 1.15 0.65 0.9 7150 7010 6870 12 0.55 0.65 0.7 6060 6140 5980 14 0.65 0.45 0.5 5220 5020 5120 Thoigian Protein Độ lệch Mw Độ lệch 4.33 0.42 8648 117 1.87 0.13 8350 170 1.33 0.15 8238 217 10 0.90 0.1 7010 140 12 0.63 0.08 6060 80 14 0.53 0.10 5120 100 F Sig Thời gian: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Protein Source Type III Sum df Mean Square of Squares Corrected Model 30.472a 6.094 Intercept 46.048 46.048 Thoigian 30.472 6.094 Error 545 12 045 Total 77.065 18 Corrected Total 31.017 17 a R Squared = 982 (Adjusted R Squared = 975) 134.172 1013.777 134.172 000 000 000 Protein Duncan Thoigian N Subset 14.00 5333 12.00 6333 10.00 9000 8.00 1.3333 6.00 1.8667 4.00 Sig .067 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 045 Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 4.3300 1.000 Khối lƣợng phân tử trung bình: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Mw Source Type III Sum df Mean Square F Sig of Squares Corrected 30447885.611a 6089577.122 290.977 000 Model Intercept 942894262.722 942894262.722 45054.079 000 Thoigian 30447885.611 6089577.122 290.977 000 Error 251136.667 12 20928.056 Total 973593285.000 18 Corrected Total 30699022.278 17 a R Squared = 992 (Adjusted R Squared = 988) Mw Duncan Thoigian N Subset 14.00 5120.0000 12.00 6060.0000 10.00 7010.0000 8.00 8238.0000 6.00 8350.0000 4.00 8647.6667 Sig 1.000 1.000 1.000 362 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 20928.056 PHỤ LỤC 2.4 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ ẢNH HƢỞNG CỦA YẾU TỐ NỒNG ĐỘ NAOH ĐẾN QUÁ TRÌNH KHỬ PROTEIN Protein lại NaOH Mw 3.0 2.1 2.2 2.4 9130 9305 9465 3.5 1 0.8 9110 9220 8994 4.0 0.65 0.5 0.75 8685 8405 8545 4.5 0.35 0.35 0.3 7860 8025 7935 5.0 0.2 0.25 0.25 6440 6320 6200 NaOH Protein Độ lệch Mw Độ lệch 3.0 2.23 0.15 9300 168 3.5 0.93 0.12 9108 113 4.0 0.63 0.13 8545 140 4.5 0.33 0.03 7940 83 5.0 0.23 0.03 6320 120 Nồng độ NaOH: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Protein Source Type III Sum df Mean Square of Squares Corrected Model 7.836a 1.959 Intercept 11.441 11.441 NaOH 7.836 1.959 Error 108 10 011 Total 19.385 15 Corrected Total 7.944 14 a R Squared = 986 (Adjusted R Squared = 981) F 180.831 1056.062 180.831 Sig .000 000 000 Protein Duncan NaOH N Subset 5.00 2333 4.50 3333 4.00 6333 3.50 3.00 Sig .267 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 011 9333 2.2333 1.000 1.000 Khối lƣợng phân tử trung bình: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Mw Source Type III Sum of df Mean Square F Squares Corrected 17239245.600a 4309811.400 263.849 Model Intercept 1019106821.400 1019106821.400 62390.221 NaOH 17239245.600 4309811.400 263.849 Error 163344.000 10 16334.400 Total 1036509411.000 15 Corrected Total 17402589.600 14 a R Squared = 991 (Adjusted R Squared = 987) Sig .000 000 000 Mw Duncan NaOH N Subset 6320.0000 5.00 4.50 7940.0000 4.00 3.50 3.00 Sig 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 16334.400 8545.0000 1.000 9108.0000 9300.0000 096 PHỤ LỤC 3.1 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ SƠ BỘ ẢNH HƢỞNG CỦA YẾU TỐ (NHIỆT ĐỘ, NỒNG ĐỘ NAOH VÀ THỜI GIAN) ĐẾN QUÁ TRÌNH DEACETYL Thời gian 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 Nhiệt độ 30C NaOH NaOH NaOH 40% 50% 60% 33 35 40 35 40 50 38 45 55 40 50 60 42 53 65 44 55 69 45 61 72 48 65 76 54 72 78 57 75 83 58 77 85 58 80 86 60 81 - Nhiệt độ 60C NaOH NaOH NaOH 40% 50% 60% 41 50 55 50 60 70 60 67 80 66 72 87 68 75 88.6 74 80 79 86 83 86.6 83 - Nhiệt độ 90C NaOH NaOH NaOH 40% 50% 60% 52 60 68 65 80 95 70 90 95.5 80 91.3 88 88.2 - PHỤ LỤC 3.2 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ ẢNH HƢỞNG CỦA YẾU TỐ NHIỆT ĐỘ ĐẾN QUÁ TRÌNH DEACETYL Nhietdo Gi trị trung ình Độ lệch chuẩn DD Mw DD Mw 50 60.2 7784 2.6 192 60 65.7 6976 1.3 182 70 75.6 6824 1.6 288 80 90 87.9 90.1 6254 5604 0.4 0.6 182 328 Độ deacetyl (DD): Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: DD Source Type III Sum df Mean Square of Squares Corrected Model 2080.710a 520.177 Intercept 86518.446 86518.446 Nhietdo 2080.710 520.177 Error 24.727 10 2.473 Total 88623.882 15 Corrected Total 2105.437 14 a R Squared = 988 (Adjusted R Squared = 984) F 210.371 34989.888 210.371 Sig .000 000 000 DD Duncan Nhietdo N Subset 60.2667 50.00 60.00 65.7667 70.00 80.00 90.00 Sig 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 2.473 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 75.6667 1.000 Khối lƣợng phân tử trung bình (Mw): Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: DD Source Type III Sum df Mean Square F of Squares Corrected 8002667.600a 2000666.900 33.952 Model Intercept 671123958.826 671123958.826 11389.216 Nhietdo 8002667.600 2000666.900 33.952 Error 589262.672 10 58926.267 Total 679715889.098 15 Corrected Total 8591930.272 14 a R Squared = 931 (Adjusted R Squared = 904) 87.9333 90.1000 122 Sig .000 000 000 DD Duncan Nhietdo N Subset 5604.3300 90.00 80.00 6254.3300 70.00 60.00 50.00 Sig 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 58926.267 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 6824.3300 6976.6700 460 7784.9200 1.000 PHỤ LỤC 3.3 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ ẢNH HƢỞNG CỦA YẾU TỐ NỒNG ĐỘ NAOH ĐẾN Q TRÌNH DEACETYL NaOH Gi trị trung ình Độ lệch chuẩn DD Mw DD Mw 30 43.3 8100 2.7 35 45.27 8100 2.1 40 59.73 7423 1.9 246 45 75.83 7211 3.6 238 50 83.57 6702 1.7 213 55 85.67 4916 1.5 294 Độ deacetyl (DD): Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: DD Source Type III Sum of Squares df 5326.277a 77369.978 5326.277 67.857 82764.113 5394.134 Corrected Model Intercept NaOH Error Total Corrected Total Mean Square 5 12 18 17 1065.255 77369.978 1065.255 5.655 F Sig 188.382 13682.258 188.382 000 000 000 a R Squared = 987 (Adjusted R Squared = 982) DD Duncan NaOH N Subset 43.3000 45.2700 30.00 35.00 40.00 59.7300 45.00 50.00 55.00 Sig .330 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 5.655 75.8300 1.000 83.5700 85.6700 301 Khối lƣợng phân tử trung bình (Mw): Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Mw Source Type III Sum of Squares Corrected Model 21123039.072a 101.304 000 Intercept 901100161.214 901100161.214 21607.913 000 21123039.072 4224607.814 000 Error 500427.877 12 41702.323 Total 922723628.164 18 21623466.949 17 NaOH Corrected Total df Mean Square F 4224607.814 Sig 101.304 a R Squared = 977 (Adjusted R Squared = 967) Mw Duncan NaOH N Subset 55.00 50.00 45.00 7211.0000 40.00 7423.0000 30.00 8100.0000 35.00 8100.0000 Sig 4916.0000 6702.3300 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 41702.323 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 .228 1.000 PHỤ LỤC 3.4 SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ ẢNH HƢỞNG CỦA YẾU TỐ THỜI GIAN ĐẾN QUÁ TRÌNH DEACETYL Thời gian 12 16 20 24 Gi trị trung ình DD 62.9 84.0 87.1 88.1 89.1 89.5 Độ lệch chuẩn Mw 7753 7567 7081 6512 5669 4963 DD 2.37 0.79 1.15 1.39 1.46 1.92 Mw 184 187 136 167 56 101 Độ deacetyl (DD): Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: DD Source Corrected Model Intercept Thoigian Error Total Corrected Total Type III Sum of Squares 1574.528a 125365.266 1574.528 30.627 126970.422 1605.155 df Mean Square 5 12 18 17 F 314.906 125365.266 314.906 2.552 Sig 123.383 49119.188 123.383 000 000 000 a R Squared = 981 (Adjusted R Squared = 973) DD Duncan Thoigian N 62.9300 4.00 8.00 12.00 16.00 20.00 24.00 Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 2.552 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 Subset 84.0000 1.000 87.1000 88.1000 89.1000 89.5000 113 Khối lƣợng phân tử trung bình (Mw): Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Mw Source Type III Sum of Squares Corrected Model 18151139.516a 168.102 000 Intercept 781955712.771 781955712.771 36209.328 000 Thoigian 18151139.516 3630227.903 000 Error 259145.062 12 21595.422 Total 800365997.349 18 18410284.577 17 Corrected Total df Mean Square 3630227.903 F 168.102 Sig a R Squared = 986 (Adjusted R Squared = 980) Mw Duncan Thoigian N Subset 24.00 4963.0000 20.00 16.00 12.00 8.00 7567.3300 4.00 7753.3300 Sig 5669.3300 6512.3300 7081.0000 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Based on observed means The error term is Mean Square(Error) = 21595.422 a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 b Alpha = 0.05 1.000 147 PHỤ LỤC 3.5 SỐ LIỆU DEACETYL LẦN Thời gian Gi trị trung ình Độ lệch chuẩn DD Mw DD Mw 72.9 7753 1.3 184 84.0 7567 0.3 187 12 87.1 7081 0.9 36 16 88.1 6512 1.3 167 20 89.0 5669 0.5 56 24 89.5 4963 0.9 101 SỐ LIỆU DEACETYL LẦN Thời gian Gi trị trung ình Độ lệch chuẩn DD Mw DD Mw 91.3 6831 1.0 36 92.7 5589 1.1 167 12 94 4745 1.3 56 16 94.2 3521 1.4 187 PHỤ LỤC 3.6 KẾT QUẢ KHÁNG KHUẨN TRONG ĐIỀU KIỆN IN VIVO b a Vết bệnh bên bên trái cà chua thời điểm 36 đƣợc xử lý với dung dịch chitosan S-138 có trọng lƣợng phân tử 138 kDa nồng độ 0,6% 0% 0% 0.6% NC NC 1% 1.5% 0.6% 1% 1.5% Kích thƣớc vết bệnh bên kích thƣớc vết bệnh bên thời điểm 72 sau chủng bệnh đƣợc xử lý với dung dịch chitosan S-138 nồng độ (0; 0,6; 1; 1,5%) ĐC N M ĐC N M Kích thƣớc vết bệnh bên ngồi kích thƣớc vết bên trái cà chua thời điểm 36 sau chủng bệnh đƣợc xử lý với chitosan 1,5%, chitosan thƣơng mại (M), chitosan S-138 (N), trái không xử lý dung dịch chitosan (ĐC) PHỤ LỤC 3.7 ĐẶC TÍNH SINH HĨA, SINH LÝ CỦA ERWINIA SPP Theo Janse 2005, chƣơng 2, trang 48 ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG HOÀNG NGỌC CƢƠNG NGHIÊN CỨU THU NHẬN VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN ERWINIA SP GÂY BỆNH THỐI NHŨN TRÊN CÀ CHUA SAU THU HOẠCH CỦA CHITOSAN TỪ MAI. .. luận án: Nghiên cứu thu nhận đánh giá khả kháng khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn cà chua sau thu hoạch chitosan từ mai mực ống Ngành: Công nghệ chế biến thủy sản Mã số: 62540105 Nghiên cứu sinh:... gây bệnh thối nhũn trái cà chua sau thu hoạch 61 Hình 2.14 Sơ đồ thí nghiệm tổng quát đánh giá khả kháng khuẩn Erwinia sp gây bệnh thối nhũn cà chua sau thu hoạch chitosan