TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN ==  == VŨ THỊ MAI NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY DÃ YÊN THẢO RŨ HỒNG ĐẬM (Petunia hybrida L.) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Di truyền học HÀ NỘI – 2018 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN ==  == VŨ THỊ MAI NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY DÃ YÊN THẢO RŨ HỒNG ĐẬM (Petunia hybrida L.) BẰNG KỸ THUẬT NI CẤY MƠ TẾ BÀO THỰC VẬT KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Di truyền học Người hướng dẫn khoa học TS PHAN THỊ THU HIỀN HÀ NỘI – 2018 HÀ NỘI, 2018 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Phan Thị Thu Hiền giảng viên Khoa Sinh - KTNN Trường Đại học Sư phạm Hà Nội tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin cảm ơn tới Ban Giám hiệu trường ĐHSP Hà Nội 2, Ban Chủ nhiệm khoa Sinh- KTNN trường ĐHSP Hà Nội tạo điều kiện để tơi hồn thành khóa luận Trong thời gian thực đề tài nhận giúp đỡ tận tình Phạm Phương Thu- Phòng thí nghiệm Di truyền học, thầy La Việt Hồng Mai Thị Hồng- Phòng thí nghiệm Sinh lý thực vật giúp đỡ, đóng góp ý kiến để tơi hồn thành đề tài khóa luận, nhân xin gửi lời cảm ơn Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể cán Trung tâm Hỗ trợ Nghiên cứu Khoa học Chuyển giao Cơng nghệ, Phòng thí nghiệm sinh lí thực vật- trường ĐHSP Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi thiết bị, phương tiện để tơi hồn thành khóa luận Cảm ơn gia đình bạn bè ln động viên, góp ý cho tơi q trình học tập hồn thành đề tài Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Sinh viên VŨ THỊ MAI LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa công bố Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Sinh viên VŨ THỊ MAI DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BAP: 6-Benzyl amoni purin NAA: Napthlacetic acid MS: Murashige Skoog Nxb: Nhà xuất Cs: Cộng DANH MỤC BẢNG Bảng 2.2.1 Ảnh hưởng BAP đến khả tạo cụm chồi hoa Dã yên thảo 29 Bảng 2.2.2 Ảnh hưởng kinetin đến khả tạo cụm chồi hoa Dã yên thảo 30 Bảng 2.2.3 Ảnh hưởng BAP Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Dã yên thảo 30 Bảng 2.3 Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ hoa Dã yên thảo in vitro 31 Bảng 2.4 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Dã yên thảo 32 Bảng 3.1 Tỷ lệ nảy chồi Dã yên thảo khử trùng 34 công thức 34 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi Dã yên thảo sau tuần nuôi cấy 36 Bảng 3.3 Ảnh hưởng kinetin đến khả nhân nhanh chồi Dã yên thảo sau tuần nuôi cấy 39 Bảng 3.4 Ảnh hưởng BAP kinetin đến khả nhân nhanh Dã yên thảo in vitro sau tuần nuôi cấy 41 Bảng 3.5 Ảnh hưởng BAP NAA đến chồi in vitro Dã yên thảo sau tuần nuôi cấy 43 Bảng 3.6 Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Dã yên thảo 45 in vitro 45 Bảng 3.7 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Dã yên thảo in vitro 48 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hoa Dã yên thảo Hình 1.2 Một số loài Dã yên thảo tự nhiên Hình 3.1 Chồi Dã yên thảo 35 Hình 3.2 Cụm chồi Dã yên thảo sau tuần nuôi cấy môi trường bổ sung BAP 38 Hình 3.3 Cụm chồi Dã yên thảo sau tuần ni cấy mơi trường có bổ sung kinetin 40 Hình 3.4 Chồi Dã yên thảo rũ hồng đậm môi trường MS bổ sung BAP + kinetin sau tuần nuôi cấy 42 Hình 3.5 Chồi Dã yên thảo rũ hồng đậm môi trường MS bổ sung BAP NAA 44 Hình 3.6 Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Dã yên thảo in vitro sau tuần nuôi cấy 46 Hình 3.7 Cây Dã yên thảo rũ hồng đậm giai đoạn rèn luyện 49 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Phạm vi nghiên cứu Ý nghĩa đề tài Nội dung nghiên cứu NỘI DUNG Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Giới thiệu Dã yên thảo rũ hồng đậm 1.1.1.Vị trí, phân loại 1.1.2 Mô tả 1.1.3 Nguồn gốc, phân bố 1.1.4 Một số đặc điểm hoa Dã yên thảo 1.1.4.1 Các loại Dã yên thảo 1.1.4.2 Cách trồng Dã yên thảo 1.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1.1 Tính tồn tế bào 1.2.1.2 Sự phân hóa phản phân hóa tế bào 10 1.2.2 Các giai đoạn ni cấy mô tế bào thực vật 11 1.2.2.1 Khử trùng mẫu nuôi cấy khởi đầu 11 1.2.2.2 Giai đoạn nhân nhanh chồi 11 1.2.2.3 Tạo hoàn chỉnh 12 1.2.2.4 Giai đoạn huấn luyện in vitro ngồi mơi trường tự nhiên 12 1.2.3 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến nuôi cấy mô tế bào thực vật 12 1.2.3.1 Thành phần môi trường dinh dưỡng nuôi cấy mô 12 1.2.3.2 Các loại muối khoáng 13 1.2.3.3.Nguồn cacbon 15 1.2.3.4 Chất điều hòa sinh trưởng 16 1.2.3.5 Các nhóm chất bổ sung 19 1.2.3.6 Chất độn – thạch (Agar) 20 1.3 Tình hình nghiên cứu nuôi cấy mô tế bào thực vật nước 21 1.3.1 Nghiên cứu nước 21 1.3.2 Tình hình ni cấy mơ Việt Nam 22 1.3.3 Tình hình ni cấy in vitro Dã yên thảo giới 23 1.3.4 Tình hình ni cấy in vitro Dã yên thảo Việt Nam 23 CHƯƠNG II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Vật liệu nuôi cấy 25 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 25 2.3 Thiết bị dụng cụ 25 2.4 Môi trường nuôi cấy Dã yên thảo 26 2.5 Điều kiện nuôi cấy in vitro 26 2.6 Phương pháp nghiên cứu 26 2.6.1 Bố trí thí nghiệm 26 2.6.2 Tạo vật liệu nuôi cấy 27 2.6.3 Nhân nhanh Dã yên thảo phương pháp tạo cụm chồi in vitro29 2.6.4 Tạo rễ hoa Dã yên thảo in vitro 31 2.6.5 Bước đầu huấn luyện Dã yên thảo in vitro môi trường tự nhiên 32 2.7 Phương pháp xử lý số liệu 32 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Khử trùng tạo mẫu in vitro 33 3.2 Nhân nhanh hoa Dã yên thảo phương pháp tạo cụm chồi in vitro 35 3.2.1 Ảnh hưởng BAP đến khả nhân nhanh chồi in vitro Dã yên thảo 35 3.2.2 Ảnh hưởng kinetin đến khả nhân nhanh chồi in vitro Dã yên thảo 39 3.2.3 Ảnh hưởng tổ hợp BAP kinetin đến khả nhân nhanh chồi Dã yên thảo in vitro 40 3.2.4 Ảnh hưởng tổ hợp BAP NAA đến khả nhân nhanh chồi in vitro Dã yên thảo 43 3.3 Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ chồi in vitro Dã yên thảo 45 3.4 Bước đầu huấn luyện dã yên thảo in vitro môi trường tự nhiên 47 CHƯƠNG IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 xanh đậm Tuy nhiên, môi trường bổ sung kinetin có hệ số nhân chồi thấp so với mơi trường có bổ sung BAP Cụ thể, mơi trường bổ sung 0,1 mg/l BAP có hệ số nhân chồi 67,5 (hình 3.2.A) mơi trường bổ sung 0,1 mg/l kinetin có hệ số nhân chồi 9,75 (hình 3.3.B) Tuy nhiên bổ sung kinetin vào mơi trường ni cấy MS mẫu ni cấy tái sinh tạo thành chồi đơn phát triển tốt (Hình 3.3) Như vậy, môi trường bổ sung kinetin cho hiệu nhân nhanh chồi in vitro thấp Kết phù hợp với nghiên cứu Nguyễn Thị Thùy Vân nhân chồi in vitro Dã yên thảo cho thấy môi trường bổ sung kinetin không cho hệ số nhân chồi nhanh [22] A B C D Hình 3.3 Cụm chồi Dã yên thảo sau tuần nuôi cấy mơi trường có bổ sung Kinetin (A-Mơi trường đối chứng MS, B-Môi trường bổ sung kinetin với nồng độ 0,1 mg/l, C-Môi trường bổ sung kinetin với nồng độ 0,3 mg/l, D-Môi trường bổ sung kinetin với nồng độ 0,5 mg/l) 3.2.3 Ảnh hưởng tổ hợp BAP kinetin đến khả nhân nhanh chồi Dã yên thảo in vitro BAP kinetin chất điều hòa sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin có vai trò đẻ nhánh tạo chồi Việc kết hợp chất có tác dụng nhân nhanh chồi phát triển cao so với riêng rẽ [24], chúng 40 sử dụng kết hợp nồng độ tốt BAP 0,1 mg/l với kinetin có nồng độ từ 0,1 mg/l đến 0,5 mg/l bổ sung vào môi trường MS) Kết thể bảng 3.4 hình 3.4 Bảng 3.4 Ảnh hưởng BAP kinetin đến khả nhân nhanh Dã yên thảo in vitro sau tuần nuôi cấy Công Thành Hệ số nhân thức phần chồi MS0 MS Số lá/ chồi Chiều cao 2,50 ± 0,5b 10,00 ± 1,22a 55,00 ± 6,28 a 5,00 ± 1,58 a 11,50 ± 2,38a 26,50 ± 6,94 b 2,25± 2,23b 10,75 ± 2,68a 27,50 ± 8,2b 1,75± 2,04b 8,25 ± 2,04a 22,50 ± 5,26 b CT1 MS + 0,1 mg/l BAP + 0,1 mg/l kinetin CT2 MS + 0,1 mg/l BAP + 0,3 mg/l kinetin CT3 MS + 0,1 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin (Ghi chú: Trong phạm vi cột, giá trị mang chữ khác sai khác có ý nghĩa thống kê mức α= 0,05) 41 A B C Hình 3.4 Chồi Dã yên thảo rũ hồng đậm môi trường MS bổ sung BAP + kinetin sau tuần nuôi cấy (A-Môi trường bổ sung 0,1 mg/l BAP + 0,1 mg/l kinetin, B-Môi trường bổ sung 0,1 mg/l BAP + 0,3 mg/l kinetin, C-Môi trường bổ sung 0,1 mg/l BAP + 0,5 mg/l kinetin) Sự kết hợp BAP kinetin lại không làm tăng hiệu cho nhân chồi Dã yên thảo Các chồi tạo nên từ mơi trường có bổ sung kinetin có chất lượng chồi thấp, không mập, mỏng Cụ thể, CT1 công thức tốt mà cho hệ số nhân chồi (hình 3.4-A) Ở CT2 CT3 cho hệ số nhân chồi thấp 2,25 1,75 (hình 3.4-B,C) Kết luận phù hợp với nghiên cứu Bùi Thị Cúc cs Dã yên thảo hoa hồng sọc tím [4] Kết nhóm nghiên cứu đưa bổ sung tổ hợp BAP kinetin chồi tạo thành nhỏ, thấp, không tạo thành chồi riêng rẽ, khơng xác định hệ số nhân chồi [4] Như thấy bổ sung thêm kinetin vào mơi trường có BAP ức chế khả nhân chồi Dã yến thảo rũ hồng đậm 42 3.2.4 Ảnh hưởng tổ hợp BAP NAA đến khả nhân nhanh chồi in vitro Dã yên thảo Trong thí nghiệm kết hợp hợp chất cytokinin với auxin nồng độ khác để nghiên cứu khả nhân nhanh chồi in vitro Dã yên thảo rũ hồng đậm Việc kết hợp BAP NAA nhiều người nghiên cứu nhiều loài khác nghiên cứu Phan Thị Thu Hiền Lan đai châu đỏ, nghiên cứu Ba kích Hồng Thị Thế cs, Lê Hồng Thủy tiên nghiên cứu dừa cạn dã yên thảo [9, 14, 15]… Kết nghiên cứu việc sử dụng tổ hợp BAP NAA thể bảng 3.5 hình 3.5 Bảng 3.5 Ảnh hưởng BAP NAA đến chồi in vitro Dã yên thảo sau tuần nuôi cấy Công Thành phần thức Hệ số Số lá/ chồi Chiều cao nhân chồi MS0 MS 2,50± 0,5b 10,00± 1,22a 55,00± 6,28a CT1 MS + 0,1 mg/l 8,5± 1,22a 10,25± 4,15a 26,50± 7,95b 7,0± 0,43a 8,75 ± 3.41a 12,5± 12,09c 6,0± 0,43a 7,25 ± 2,94a 9,75± 10,25c BAP + 0,1 mg/l NAA CT2 MS + 0,1 mg/l BAP + 0,3 mg/l NAA CT3 MS + 0,1 mg/l BAP + 0,5 mg/l NAA (Ghi chú: Trong phạm vi cột, giá trị mang chữ khác sai khác có ý nghĩa thống kê mức α= 0,05) 43 A B C Hình 3.5 Chồi Dã yên thảo rũ hồng đậm môi trường MS bổ sung BAP NAA (A-Môi trường bổ sung 0,1 mg/l BAP + 0,1 mg/l NAA, B-Môi trường bổ sung 0,1 mg/l BAP + 0,3 mg/l NAA, C-Môi trường bổ sung 0,1 mg/l BAP + 0,5 mg/l NAA) Kết thể bảng 3.5 hình 3.5 cho thấy, kết hợp BAP NAA chồi có khả nhân nhanh, xuất mô sẹo tái sinh chồi từ mô sẹo So với việc sử dụng BAP để nhân nhanh chồi mơi trường bổ sung NAA có hệ số nhân chồi thấp hơn, với hệ số nhân đạt 8,50 (hình 3.5-A) Tuy nhiên, chồi mơi trường bổ sung thêm NAA lại có chất lượng tốt hơn, chồi mọc riêng rẽ dễ tách rời nhau, mập, khỏe, thân đồng màu xanh đậm, to, dày Cụ thể, CT1 có hệ số nhân đạt 8,5; số 10,25; chiều cao 26,5 (hình 3.5-A); CT2 có hệ số nhân 7; số 8,75 chiều cao chồi đạt 12,5 (hình 3.5-B); CT3 hệ số nhân 6; số 7,25 chiều cao chồi đạt 9,75 (hình 3.5-C) Kết tương tự với kết Bùi Thị Cúc cs [4] Kết nhóm nghiên cứu môi trường MS bổ sung 0,75 mg/l 44 BAP 0,1 mg/l NAA cho hiệu nhân chồi chất lượng chồi tốt [4] 3.3 Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ chồi in vitro Dã yên thảo Mục tiêu thí nghiệm tìm mơi trường tối ưu kích thích tạo rễ chồi in vitro Dã yên thảo Chúng nghiên cứu môi trường MS (đối chứng) mơi trường MS có bổ sung NAA nồng độ khác Kết thí nghiệm sau tuần nuôi cấy thể bảng 3.6 hình 3.6 Bảng 3.6 Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Dã yên thảo in vitro Công Thành phần Số rễ/ mẫu thức Chiều dài rễ MS0 MS 4,75 ± 1,78 b 32,25 ± 10,35 a CT1 MS + 0,1 mg/l NAA 21,25 ± 2,58 a 14,50 ± 2,29b CT2 MS + 0,2 mg/l NAA 9,25 ± 3,03 b 6,00 ± 4,09bc CT3 MS + 0,3 mg/l NAA 7,00 ± 2,23b 4,00 ± 0,7c CT4 MS + 0,5 mg/l NAA 8,25 ± 2,27 b 4,25 ± 1,47c (Ghi chú: Trong phạm vi cột, giá trị mang chữ khác sai khác có ý nghĩa thống kê mức α= 0,05) 45 A B D E C Hình 3.6 Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Dã yên thảo in vitro sau tuần nuôi cấy (A-Môi trường MS bản, B-Môi trường bổ sung 0,1 mg/l NAA, C-Môi trường bổ sung 0,2 mg/l NAA, D-Môi trường bổ sung 0,3 mg/l NAA, E-Môi trường bổ sung 0,5 mg/l NAA) Kết bảng 3.6 hình 3.6 cho thấy chồi Dã n thảo rễ mơi trường MS (đối chứng) với chiều dài rễ lên tới 3,8 cm Tuy nhiên chất lượng rễ lại thấp, rễ mảnh, yếu có màu trắng nhạt Ở mơi trường có bổ sung thêm NAA số rễ/ chồi lớn so với môi trường không bổ sung NAA Chất lượng rễ môi trường tốt hơn, rễ 46 mập, màu trắng đục Trong đó, môi trường bổ sung NAA với nồng độ 0,1 mg/l có kết tốt với hệ số rễ 21,25 Khi tăng dần nồng độ NAA tỉ lệ rễ giảm đáng kể môi trường bổ sung NAA nồng độ 0,3 mg/l hệ số rễ Kết ngược lại với kết nghiên cứu Nguyễn Thùy Vân Dã yên thảo [22] Khi đưa mơi trường có bổ sung NAA khơng có tác dụng kích thích rễ mà làm cho sinh trường mơi trường MS bình thường Nguyên nhân dẫn tới khác biệt đặc điểm di truyền giống Dã yến thảo khác Điều thú vị kết tương đương với Bùi Thị Cúc cs nghiên cứu rễ Dã yên thảo hoa hồng sọc tím [4] Cụ thể, nhóm nghiên cứu đưa môi trường bổ sung 0,1 mg/l NAA cho kết tốt với tỉ lệ rễ đạt 100%, số rễ/chồi 51,87 chiều dài rễ trung bình 0,96 cm [4] Như vậy, mơi trường thích hợp cho rễ Dã yên thảo rũ hồng đậm môi trường bổ sung 0,1 mg/l NAA 3.4 Bước đầu huấn luyện dã yên thảo in vitro mơi trường tự nhiên Ở thí nghiệm mục đích chúng tơi tìm giá thể tốt để phù hợp với Dã yên thảo in vitro điều kiện tự nhiên để dễ dàng thích nghi Đầu tiên phải loại bỏ thạch cách rửa vòi nước, ý khơng làm đứt rễ Sau trồng vào giá thể chuẩn bị sẵn để đánh giá tỉ lệ sống (bảng 3.7) Trong tuần đầu, sử dụng lưới đen để che kín giúp khơng bị nước nhanh hay héo ánh sáng mặt trời Khi cứng cáp bỏ lưới tránh trường hợp bị thối rễ thiếu ánh sáng quang hợp Tưới nước đặn ngày không tưới trực tiếp vào gốc cây, thực tưới nhỏ giọt 47 Bảng 3.7 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống Dã yên thảo in vitro Công Loại giá thể thức CT1 50% đất thịt + Số Số Số Tỷ lệ cây sống sống trồng chết 20 20 0% 20 14 30% 20 11 45% 50% cát CT2 Đất hữu (chất hữu cơ-24.91%, hàm lượng mùn-14,45%, K 20 tổng số-0,73%, N tổng P2O5 số-0,9%, tổng số- 0,3%, trung vi lượng gồm Mg, Mn, Zn, B, Cu, Mo, Sắt dạng Chelate) CT3 30% đất thịt + 20% cát + 30% tro trấu + 20% phân xanh Từ kết cho thấy, CT1 (đất thịt + cát) khơng thể sống đất thịt rắn, chất dinh dưỡng, cát lại dễ bị rửa trôi nên nhanh bị héo, thối khơng nhận chất dinh dưỡng từ mơi trường Ở giá thể lại tỉ lệ sống cao, giá thể tơi xốp, giàu chất dinh dưỡng giúp dễ hấp thụ nên phát triển tương đối tốt Kết nghiên cứu phù hợp nghiên cứu Nguyễn Thị Thùy Vân [22] Cụ thể, nhóm nghiên 48 cứu đưa mơi trường thích hợp rèn luyện Dã n thảo mơi trường bao gồm tro trấu + xơ dừa + đất thịt + cát với tỷ lệ sống 40% [22] Hình 3.7 Cây Dã yên thảo rũ hồng đậm giai đoạn rèn luyện 49 CHƯƠNG IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Từ kết thí nghiệm tơi đưa kết luận sau đây: Khử trùng tạo mẫu Dã yên thảo rũ hồng đậm sạch, có khả tái sinh chồi cao cách xử lý sơ khử trùng Javen 7,5% vòng 10 phút cho hiệu khử trùng đạt 52% Mơi trường thích hợp để nhân nhanh chồi MS + 30 g/l saccarose + g/l agar + 0,1 mg/l BAP Mơi trường thích hợp để tạo rễ MS + 30 g/l saccarose + g/l agar + 0,1 mg/l NAA Môi trường thích hợp để rèn luyện hoa Dã n thảo cho ngồi mơi trường tự nhiên đất thịt + cát + tro trấu + phân xanh với tỷ lệ sống 45% 4.2 Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu hồn thiện quy mơ nhân nhanh để tăng hiệu sản xuất thực nghiệm giảm chi phí hoa Dã yên thảo hoa cảnh khác có giá trị cao kỹ thuật nuôi cấy in vitro 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Tạ Như Thục Anh, Trần Dụ Chi, Vũ Văn Vụ (2008), Bước đầu nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến phát sinh hình thái mơ Hoắc hương ni cấy in vitro, Tạp chí VNU journal of Science Natural sciences and Technology, pp.24 Lê Văn Bình, Hồ Hữu Nghị, Lê Thị Muội (1993), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, Nxb Nơng nghiệp Ngơ Xn Bình, Bùi Bảo Hồn, Nguyễn Thúy Hà (2003), giáo trình cơng nghệ sinh học, Nxb Nông nghiệp Bùi Thị Cúc, Đồng Huy Giới, Bùi Thị Thu Hương (2007), Nhân nhanh in vitro Dạ yên thảo hoa hồng sọc tím, tạp chí khoa học công nghệ lâm nghiệp 2017, tr 3-10 Trần Quốc Cường (2011), Hiệu BA, NAA, TDZ lên tái sinh chồi Dã yên thảo (petunia sp.) in vitro, Luận văn tốt nghiệp đại học Hoa viên cảnh, Trường Đại học Cần Thơ Hà Bích Hồng, Vũ Thị Thơm, Vũ Đức Lợi, Lê Anh Tuấn, Nguyễn Thanh Hải (2012), Xây dựng quy trình nhân giống Đinh lăng nhỏ (Polyscias fruticosa L Harms, Tạp chí dược học, số 450 Phạm Hồng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam, Quyển II (in lần 2), Nxb Trẻ Phan Thị Thu Hiền (2017), Nghiên cứu quy trình sản xuất giống Lan đai châu đỏ (Rhynchostylis gigantea L.) công nghệ nuôi cấy in vitro, Tạp chí khoa học Đại học Sư phạm Hà Nội II Trần Hợp (2000), Cây cảnh hoa Việt Nam, Nxb Nơng nghiệp 10 Nguyễn Như Khanh, Nguyễn Văn Đính (2006), Sinh học phát triển thực vật, Nxb Giáo dục Hà Nội 51 11 Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, Ong Xuân Phong (2013), Phương pháp nghiên cứu Sinh lý học thực vật, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội 12 Nguyễn Xuyến Thành Thắng, Trương Công Phi (2012), Xây dựng quy trình nhân giống in vitro Hà thủ đỏ (Polygonum multiflorum thumb, Tạp chí khoa học Trường Đại học Lạc Hồng 13 Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật nghiên cứu ứng dụng, Nxb Nơng nghiệp Hà Nội 14 Hồng Thị Thế, Nguyễn Thị Phương Thảo, Ninh Thị Thảo, Nguyễn Thị Thủy, Quy trình nhân giống in vitro Ba kích (Morinda officenalis How), Tạp chí Khoa học Phát triển 2013, tập 11, số 3, tr.285-292 15 Lê Hồng Thủy Tiên (2006), Khảo sát hoa ống nghiệm Dừa cạn Dã yên thảo, Luận văn kỹ sư Công nghệ sinh học, Trường Đại học Nông lâm Thành phố Hồ Chí Minh 16 Nguyễn Bảo Tồn (2004), Giáo trình ni cấy mơ tế bào thực vật, Tủ sách Đại học Cần Thơ 17 Võ Châu Tuấn, Trần Quang Dần (2012), Nghiên cứu khả tái sinh in vitro mật thân (Ewrycoma longifolla jak.), Tạp chí khoa học công nghệ , số 12, 2, tr.126 18 Võ Châu Tuấn, Huỳnh Minh Tư (2010), Nghiên cứu nhân giống in vitro Ba kích (Morinda officinalis how), Tạp chí khoa học cơng nghệ Đại học Đà Nẵng, số 19 Bùi Minh Trí (2003), Bài giảng sinh lý Thực vật 20 Thanh Truyền (2014), “Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô để nhân giống thử nghiệm hoa Dã yên thảo”, Trung tâm ứng dụng tiến Khoa học Công nghệ Bến Tre 52 21 Nguyễn Thị Út, Nguyễn Thị Xuân Tâm, Từ Thị Út (2010), Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi in vitro Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn), Tạp chí khoa học Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên 22 Nguyễn Thị Thùy Vân (2015), Nhân nhanh Dã yên thảo (Petunia hybrid) kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thưc vật, khóa luận tốt nghiệp chuyên ngành sinh lý thực vật, trường Sư phạm Hà Nội II 23 Vũ Văn Vụ (1999), Sinh lý thực vật ứng dụng, Nxb Giáo dục Hà Nội Tài liệu tiếng anh 24 Asad S., Nosheen H A and Rukhsana B (2009), Effect of different cultural conditions on micropropagation of rose (rosa indica L.), Institute of Mycology and Plant pathology, University of the Punjab Lahore, Pakistan, pp.2877-2882 25 Kirby E G and Vasil I K (1979), Effect of Pollen Protein Diffusates on Germination of Eluted Pollen Samples of Petunia hybrida in vitro, Department of Botany, University of Florida, Gainesville, Florida, Bot 44, pp 361-367 26 Sakakibara H., Takei K., Hirose N (2006), Interactions between nitrogen and cytokinin in the regulation of metabolism and development, Trends in plant Science, volume 11, issue 9, pp 440-448 27 Kortessa Dimasi-Therion, Athanasios S Economou, Evangelos M Sfakiotakis (1993), Promotion of petunia (Petunia hybrida L.) regenration in vitro by ethylene, Department of horticulture, Aristotle University, 55006 Thessalonniki, Greece, Tissue and Organ Culture 32, pp 219-225 53 28 L.J.W Gilissen(1977), The Influence of Relactive Humidity on the Swelling of Pollen Grains in vitro, Dept Of Botany, Faculty of Sciences, University, Toernooiveld, Nijmegen, The Netherlands, Planta 137, pp 299-301 29 Manorama Mulin and Kiem Tran Thanh Van (1989), Obtention of in vitro flowers from thin epidermal cell layers ofpetunia hybrid (hort.), Instirut de Physiologie Végétale, C.N.R.S., 91198 Gif-sur-Yvette Cedex (France), Plant Science 62, pp 113-121 30 Murashige T and Skoog F (1962), Plant growth Substamces in commercial uses of tissue culture In: Plant growth Substances 1979, ed By F.Skoog Springer- Verag, Berlin Heidelberg New York, pp 426-434 Tài liệu internet 31 http://www.ebook.edu.vn - công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật 32 http://plants.usda.gov 33 http://caycongtrinh.com.vn 54 ... KTNN ==  == VŨ THỊ MAI NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY DÃ YÊN THẢO RŨ HỒNG ĐẬM (Petunia hybrida L.) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Di truyền học... sản suất giống giảm giá thành nên chọn đề tài này: “NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY DÃ YÊN THẢO RŨ HỒNG ĐẬM (Petunia hybrida L.) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT” Mục đích nghiên cứu Khảo... Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.1.1 Tính tồn tế bào Cơ sở tảng nuôi cấy mô, tế bào thực vật học thuyết tính tồn tế bào nhà thực vật học