VIỆN HÀN LÂM VÀ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGUYỄN THỊ PHƯƠNG MAI NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN CYP11B1 Ở BỆNH NHÂN TĂNG SẢN THƯỢNG THẬN BẨM SINH DO THIẾU HỤT 11 BETA HYDROXYLASE LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Hà Nội – 2018 VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGUYỄN THỊ PHƯƠNG MAI NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN CYP11B1 Ở BỆNH NHÂN TĂNG SẢN THƯỢNG THẬN BẨM SINH DO THIẾU HỤT 11 BETA HYDROXYLASE Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 42 01 21 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Huy Hồng PGS.TS Nơng Văn Hải Hà Nội - 2018 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành chia sẻ tới bệnh nhân gia đình họ Đó người ngày đêm phải chống chọi với bệnh tật Họ động lực giúp tơi ln có khát khao giúp đỡ, sẻ chia phấn đấu nghiên cứu khoa học Tơi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Nguyễn Huy Hồng PGS TS Nơng Văn Hải, người thầy hướng dẫn khoa học, tận tình truyền đạt kiến thức kinh nghiệm vô q báu để tơi hồn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn Viện Công nghệ sinh học; ThS Bùi Thị Hải Hà - phụ trách đào tạo Viện Công nghệ sinh học; Viện Nghiên cứu hệ gen, Phòng nghiên cứu hệ gen học chức năng- Viện Nghiên cứu hệ gen, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành nghiên cứu thí nghiệm Tơi xin gửi lời cảm ơn tới GS Rita Bernhardt, mơn Hóa sinh, trường ĐHTH Saarlandes, CHLB Đức giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho chúng tơi tiến hành thí nghiệm Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Ban Giám đốc, phòng ban chức Bệnh viện Nhi trung ương, Khoa Nội tiết-Chuyển hoá-Di truyền Khoa Di truyền Sinh học phân tử, Bệnh viện Nhi trung ương, toàn thể đồng nghiệp khoa, nơi công tác, đồng hành chia sẻ, giúp đỡ, tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành luận án Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS BS Vũ Chí Dũng, trưởng khoa Nội tiết-Chuyển hóa-Di truyền TS BS Ngơ Diễm Ngọc, trưởng khoa Di truyền Sinh học phân tử giúp đỡ, tạo điều kiện chia sẻ kinh nghiệm q báu để tơi hồn thành luận án i Tơi xin bày tỏ kính trọng, tình u thương vơ bờ bến bố mẹ, gia đình, Minh Anh bạn bè tơi, ủng hộ cổ vũ cho suốt thời gian học tập làm việc Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tình u thương sâu sắc tới chồng tôi, BS Đào Trung Dũng hai gái, Phương Linh-Minh Châu Tình yêu, chia sẻ, ủng hộ hy sinh thầm lặng họ chỗ dựa vững chắc, giúp tơi thêm nghị lực để hồn thành luận án Lời cuối cùng, xin dành tặng tới Người Người cho thấy ai, đường đi, để tơi thấy tơi ln có tình u thương vô điều kiện nhiệt huyết sống công việc Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Nguyễn Thị Phương Mai ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Đây cơng trình nghiên cứu tơi số kết cộng tác với cộng khác Các số liệu kết trình bày luận án trung thực, phần công bố tạp chí khoa học chuyên ngành với đồng ý cho phép đồng tác giả Phần lại chưa cơng bố cơng trình khác Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Tác giả Nguyễn Thị Phương Mai iii MỤC LỤC MỞ ĐẦU…………………………………………………………… CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU………………………… 1.1 Lịch sử nghiên cứu bệnh thiếu hụt 11β-hydroxylase…… 1.1.1 Tình hình nghiên cứu giới………………… 1.1.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam………………… 1.1.3 Dịch tễ học bệnh thiếu hụt 11β-hydroxylase……… 1.2 Định nghĩa, sở hóa sinh sinh lý bệnh học TST thiếu hụt 11β-hydroxylase…………………………… 1.2.1 Định nghĩa TSTTBS enzyme tham gia tổng h cortisol……………………………………………… 1.2.2 Cơ sở hóa sinh bệnh TSTTBS………………… 1.2.3 Sinh lý bệnh TSTTBS thiếu 11β-hydroxylase… 1.3 Di truyền phân tử bệnh thiếu hụt 11β-hydroxylase 1.3.1 Gen CYP11B1…………………………………………… 1.3.2 11β-hydroxylase…………………………………… 1.4 Đặc điểm lâm sàng bệnh thiếu hụt 11β-hydroxylase…… 1.4.1 Thể cổ điển………………………………………… 1.4.2 Thể không cổ điển…………………………………… 1.4.3 Người mang gen/dị hợp tử………………………… 1.4.4 Một số đặc điểm lâm sàng khác………………… 1.5 Điều trị bệnh thiếu hụt 11 β hydroxylase……………… 1.5.1 Liệu pháp thay glucocorticoid………………… 1.5.2 Điều trị hạ huyết áp………………………………… 1.5.3 Chẩn đoán điều trị trước sinh…………………… 1.6 Các phương pháp phân tích đột biến gen CYP11B1…… 1.6.1 Phương pháp giải trình tự gen CYP11B1…………… 1.6.2 Phương pháp phân tích ảnh hưởng đột biến m iv tới cấu trúc chức enzyme CYP11B1……… CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu………………………………………… 2.1.1 Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân……………………………… 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ……………………………………… 2.2 Đạo đức nghiên cứu…………………………………… 2.3 Hóa chất thiết bị nghiên cứu……………………………… 2.3.1 Hóa chất nghiên cứu…………………………………… 2.3.2 Thiết bị nghiên cứu……………………………………… 2.4 Phương pháp nghiên cứu……………………………………… 2.4.1 Quy trình thu thập tách chiết mẫu nghiên cứu……… 2.4.2 Phương pháp giải trình tự gen CYP11B1………………… 2.4.3 Phương pháp phân tích đột biến mới…………………… 2.4.4 Các phương pháp tin sinh học…………………………… CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU………………………… 3.1 Kết xác định đột biến gen CYP11B1…………………… 3.1.1 Đặc điểm chung nhóm nghiên cứu………………… 3.1.2 Kết khuếch đại gen CYP11B1……………………… 3.1.3 Kết xác định đột biến gen CYP11B1………………… 3.1.4 Mối tương quan kiểu gen- kiểu hình đột biến mới… 3.1.5 Mối tương quan kiểu gen p.R43Q- kiểu hình…………… 3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng đột biến gen CYP11B1 tới hoạt tính enzyme CYP11B1…………………… 3.2.1 Đột biến p.R51K………………………………………… 3.2.2 Đột biến p.E147D-p.N152K…………………………… 3.3 Phân tích ảnh hưởng đột biến gen CYP11B1 tới cấu trúc enzyme CYP11B1……………………………… 3.3.1 Kết mơ hình cấu trúc chiều enzyme CYP11B1 3.3.2 Ảnh hưởng đột biến tới cấu trúc enzyme CYP11B1………………………………………………… v 3.3.3 Đột biến vùng trượt gen IVS6+5G>T…………………… CHƯƠNG BÀN LUẬN KẾT QUẢ……………………………… 4.1 Các đột biến phát gen CYP11B1 bệnh nhân nghiên cứu……………………………………………………… 4.2 Sự ảnh hưởng đột biến tới hoạt tính enzyme CYP11B1……………………………………………………… 4.2.1 Đột biến p.R51K………………………………………… 4.2.2 Đột biến p.E147D/p.N152K…………………………… 4.2.3 Đột biến Y395X………………………………………… 4.3 Sự ảnh hưởng đột biến tới cấu trúc enzyme CYP11B1……………………………………………………… 4.3.1 Đột biến thay axit amin……………………………… 4.3.2 Đột biến vùng trượt gen………………………………… KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ……………………………………… DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN………………………… TÓM TẮT LUẬN ÁN BẰNG TIẾNG ANH……………………… TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………………… PHỤ LỤC Phụ lục Danh sách bệnh nhân nghiên cứu…………………… Phụ lục Mẫu bệnh án nghiên cứu………………………………… Phụ lục Kết đo nồng độ độ tinh mẫu DNA tách từ máu ngoại vi bệnh nhân………………………… Phụ lục Kiểu gen kiểu hình bệnh nhân nghiên cứu…………… vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt 11βOH 11βOHD 17-CS 17-OH 17-OHCS 17-OHP 21OH 21OHD 3D ACTH AD Cl CMO CMO I CMO II CRH CVS CYP DHEA DHEAS DMEM 137 147 Rosler A, Leiberman E and Cohen T (1992) High frequency of congenital adrenal hyperplasia (classic 11 beta-hydroxylase deficiency) among Jews from Morocco Am J Med Genet 6(42): 827-34 148 Rosler A, Leiberman E, Rosenmann A, Ben-Uzilio R and Weidenfeld J (1979) Prenatal diagnosis of 11beta-hydroxylase deficiency congenital adrenal hyperplasia J Clin Endocrinol Metab 4(49): 546-51 149 Rosler A, Leiberman E, Sack J, Landau H, Benderly A, Moses SW and Cohen T (1982) Clinical variability of congenital adrenal hyperplasia due to 11 beta-hydroxylase deficiency Horm Res 3(16): 133-41 150 Rosler A and White PC (1993) Mutations in human 11 beta-hydroxylase genes: 11 beta-hydroxylase deficiency in Jews of Morocco and corticosterone methyl-oxidase II deficiency in Jews of Iran J Steroid Biochem Mol Biol 1-3(45): 99-106 151 Roumen L., Sanders M P., Pieterse K., Hilbers P A., Plate R., Custers E., de Gooyer M, Smits J F., Beugels I., Emmen J., Ottenheijm H C., Leysen D and J HJ (2007) Construction of 3D models of the CYP11B family as a tool to predict ligand binding characteristics J Comput Aided Mol Des 8(21): 455-71 152 Russell AJ, Wallace AM, Forest MG, Donaldson MD, Edwards CR and Sutcliffe RG (1994) Mutation in the human gene for betahydroxysteroid dehydrogenase type II leading to male pseudohermaphroditism without salt loss J Mol Endocrinol 2(12): 22537 153 Sartorato P, Zulian E, Benedini S, Mariniello B, Schiavi F, Bilora F, Pozzan G, Greggio N, Pagnan A, Mantero F and Scaroni C (2007) Cardiovascular risk factors and ultrasound evaluation of intima-media thickness at common carotids, carotid bulbs, and femoral and abdominal 138 aorta arteries in patients with classic congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency J Clin Endocrinol Metab 3(92): 1015-8 154 Sathya A, Ganesan R and Kumar A (2012) Congenital adrenal hyperplasia masquerading as periodic paralysis in an adolescent girl Singapore Med J 7(53): 148-9 155 Schiffer L, Anderko S, Hannemann F, Eiden-Plach A and Bernhardt R (2015) The CYP11B subfamily J Steroid Biochem Mol Biol 1(151): 3851 156 Shammas C, Byrou S, Phelan MM, Toumba M, Stylianou C, Skordis N, Neocleous V and Phylactou LA (2016) Genetic screening of non-classic CAH females with hyperandrogenemia identifies a novel CYP11B1 gene mutation Hormones (Athens) 2(15): 235-42 157 Shepard TH and Clausen SW (1951) Case of adrenogenital syndrome with hypertension treated with cortisone Pediatrics 6(8): 805-11 158 Simm PJ and Zacharin MR (2007) Successful pregnancy in a patient with severe 11-beta-hydroxylase deficiency and novel mutations in CYP11B1 gene Horm Res 6(68): 294-7 159 Skinner CA, Rumsby G and Honour JW (1996) Single strand conformation polymorphism (SSCP) analysis for the detection of mutations in the CYP11B1 gene J Clin Endocrinol Metab 6(81): 238993 160 Speiser PW, Azziz R, Baskin LS, Ghizzoni L, Hensle TW, Merke DP, Meyer-Bahlburg HF, Miller WL, Montori VM, Oberfield SE, Ritzen M and White PC (2010) Congenital adrenal hyperplasia due to steroid 21hydroxylase deficiency: an Endocrine Society clinical practice guideline J Clin Endocrinol Metab 9(95): 4133-60 139 161 Stikkelbroeck NM, Hermus AR, Suliman HM, Jager GJ and Otten BJ (2004) Asymptomatic testicular adrenal rest tumours in adolescent and adult males with congenital adrenal hyperplasia: basal and follow-up investigation after 2.6 years J Pediatr Endocrinol Metab 4(17): 645-53 162 Stikkelbroeck NM, Otten BJ, Pasic A, Jager GJ, Sweep CG, Noordam K and Hermus AR (2001) High prevalence of testicular adrenal rest tumors, impaired spermatogenesis, and Leydig cell failure in adolescent and adult males with congenital adrenal hyperplasia J Clin Endocrinol Metab 12(86): 5721-8 163 Strandqvist A, Falhammar H, Lichtenstein P, Hirschberg AL, Wedell A, Norrby C, Nordenskjold A, Frisen L and Nordenstrom A (2014) Suboptimal psychosocial outcomes in patients with congenital adrenal hyperplasia: epidemiological studies in a nonbiased national cohort in Sweden J Clin Endocrinol Metab 4(99): 1425-32 164 Thái Thiên Nam NTP, Võ Thương Lan (2002) Phát đột biến gene CYP21 tăng sản thượng thận bẩm sinh thiếu enzyme 21hydroxylase trẻ em gia đình trẻ bị bệnh viện Nhi Nhi Khoa 1(10): 500-505 165 Toaff ME, Toaff R and Chayen R (1975) Congenital adrenal hyperplasia caused by 11 beta-hydroxylase deficiency with onset of symptoms after one spontaneous pregnancy Am J Obstet Gynecol 2(121): 202-4 166 Touitou Y, Lecomte P, Auzeby A, Bogdan A and Besnier Y (1989) Evidence of 11 beta-hydroxylase deficiency in a patient with cortical adrenal adenoma Horm Metab Res 5(21): 272-4 167 Trần Kiêm Hảo NTP, Võ Thị Thương Lan cộng (2006) Ứng dụng kỹ thuật PCR phát số đột biến gene CYP21 gây bệnh tăng sản 140 thượng thận bẩm sinh thiếu 21-hydroxylase Nhi Khoa 1(14): 184188 168 Turcu AF and Auchus RJ (2015) The next 150 years of congenital adrenal hyperplasia J Steroid Biochem Mol Biol 1(153): 63-71 169 Ulmschneider S., Muller-Vieira U., Mitrenga M., Hartmann R W., Oberwinkler-Marchais S., Klein C D., Bureik M., Bernhardt R., Antes I andT.L(2005)Synthesisandevaluationof imidazolylmethylenetetrahydronaphthalenes and imidazolylmethyleneindanes: potent inhibitors of aldosterone synthase J Med Chem 6(48): 1796-805 170 Vinson GP (2011) The mislabelling of deoxycorticosterone: making sense of corticosteroid structure and function J Endocrinol 1(211): 3-16 171 Võ Kim Huệ NTN, Nguyễn Thị Phượng cộng (2000) Nghiên cứu chẩn đoán bệnh tăng sản thượng thận bẩm sinh thiếu 21-hydroxylase trẻ em Nhi Khoa 1(10): 285-293 172 Vũ Chí Dũng BPT, Nguyễn Ngọc Khánh, Cấn Thị Bích Ngọc (2015) Updated registry of congenital adrenal hyperplasia at the north pediatric referral centre of Vietnam Int J Ped Endocrinol 1(2015): 427-435 173 Vũ Chí Dũng BPT, Nguyễn Ngọc Khánh, et al (2015) Phenotype, genotype of congenital adrenal hyperplasia due to mutation in the type II -hydroxysteroid dehydrogenase gene: a report of two Vietnamese families Int J Ped Endocrinol 1(2015): 1-2 174 White P.C, Mornet E, Dupont J and A V (1989) Characterization of two genes encoding human steroid 11 beta-hydroxylase (P-450(11) beta) J Biol Chem 35(264): 20961-7 175 White PC (2001) Steroid 11 beta-hydroxylase deficiency and related disorders Endocrinol Metab Clin North Am 1(30): 61-79 141 176 White PC, Curnow KM and Pascoe L (1994) Disorders of steroid 11 beta-hydroxylase isozymes Endocr Rev 4(15): 421-38 177 White PC, Dupont J, New MI, Leiberman E, Hochberg Z and Rosler A (1991) A mutation in CYP11B1 (Arg-448 His) associated with steroid 11 beta-hydroxylase deficiency in Jews of Moroccan origin J Clin Invest 5(87): 1664-7 178 White PC, New MI and Dupont B (1987) Congenital adrenal hyperplasia (2) N Engl J Med 25(316): 1580-6 179 White PC and Speiser PW (2000) Congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency Endocr Rev 3(21): 245-91 180 Wilkins L, Crigler JF, Jr., Silverman SH, Gardner LI and Migeon CJ (1952) Further studies on the treatment of congenital adrenal hyperplasia with cortisone III The control of hypertension with cortisone, with a discussion of variations in the type of congenital adrenal hyperplasia and report of a case with probable defect of carbohydrate-regulating hormones J Clin Endocrinol Metab 8(12): 1015-30 181 Wilkins L, Lewis RA, Klein R, Gardner LI, Crigler JF, Jr., Rosemberg E and Migeon CJ (1951) Treatment of congenital adrenal hyperplasia with cortisone J Clin Endocrinol Metab 1(11): 1-25 182 Willi U, Atares M, Prader A and Zachmann M (1991) Testicular adrenallike tissue (TALT) in congenital adrenal hyperplasia: detection by ultrasonography Pediatr Radiol 4(21): 284-7 183 Williams RM, Deeb A, Ong KK, Bich W, Murgatroyd PR, Hughes IA and Acerini CL (2010) Insulin sensitivity and body composition in children with classical and nonclassical congenital adrenal hyperplasia Clin Endocrinol (Oxf) 2(72): 155-60 142 184 Wu C, Zhou Q, Wan L, Ni L, Zheng C, Qian Y and Jin J (2011) Novel homozygous p.R454C mutation in the CYP11B1 gene leads to 11betahydroxylase deficiency in a Chinese patient Fertil Steril 3(95): 11223-6 185 Xu C, Qiao J, Liu W, Jiang X, Yan F, Wu J, Han B, Zhang H, Guan Q, Gao L and Zhao J (2012) Identification and functional characterization of a large deletion of the CYP11B1 gene causing an 11beta-Hydroxylase deficiency in a Chinese pedigree Horm Res Paediatr 4(78): 212-7 186 Yanagibashi K, Haniu M, Shively JE, Shen WH and Hall P (1986) The synthesis of aldosterone by the adrenal cortex Two zones (fasciculata and glomerulosa) possess one enzyme for 11 beta-, 18-hydroxylation, and aldehyde synthesis J Biol Chem 8(261): 3556-62 187 Yang L X., Toda K., Miyahara K., Nomoto S., Kinoshita E., Baba T., Yoshimoto M., Araki K., Kurashige T and Hashimoto K (1995) Classic steroid 11 beta-hydroxylase deficiency caused by a C >G transversion in exon of CYP11B1 Biochem Biophys Res Commun 2(216): 723-8 188 Yau M, Khattab A and New MI (2016) Prenatal Diagnosis of Congenital Adrenal Hyperplasia Endocrinol Metab Clin North Am 2(45): 267-81 189 Ye ZQ, Zhang MN, Zhang HJ, Jiang JJ, Li XY and Zhang KQ (2010) A novel missense mutation, GGC(Arg454) > TGC(Cys), of CYP11B1 gene identified in a Chinese family with steroid 11beta-hydroxylase deficiency Chin Med J (Engl) 10(123): 1264-8 190 Yeo G and Burge CB (2004) Maximum entropy modeling of short sequence motifs with applications to RNA splicing signals J Comput Biol 2-3(11): 377-94 143 191 Zachmann M and Prader A (1975) Letter: Gynecomastia with congenital virilizing adrenal hyperplasia (11beta-hydroxylase deficiency) J Pediatr 5(87): 839-40 192 Zachmann M, Tassinari D and Prader A (1983) Clinical and biochemical variability of congenital adrenal hyperplasia due to 11 beta-hydroxylase deficiency A study of 25 patients J Clin Endocrinol Metab 2(56): 222-9 193 Zadik Z, Pertzelan A, Kaufman H, Levin S and Laron Z (1979) Gynaecomastia in two prepubertal boys with congenital adrenal hyperplasia due to 11-beta-hydroxylase deficiency Helv Paediatr Acta 2(34): 185-7 194 Zhang M, Liu Y, Sun S, Zhang H, Wang W, Ning G and Li X (2013) A prevalent and three novel mutations in CYP11B1 gene identified in Chinese patients with 11-beta hydroxylase deficiency J Steroid Biochem Mol Biol 133: 25-9 195 Zhu W, Chen Z, Li Q, Tan G and Hu G (2016) Inhibitors of 11betaHydroxylase (CYP11B1) for Treating Diseases Related to Excess Cortisol Curr Med Chem 6(23): 623-33 PHỤ LỤC 01 DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU STT MSBV 040-75108 01-50826 120308545 125ST- 181760 10 090-105638 11 040-88696 12 13 14 15 130102666 16 12205993 17 18 19 110283397 20 21 22 83ST-156324 23 11345550 24 25 26 160462372 27 28 29 30 31 32 Chú thích: F: Bố; M: Mẹ; OB: Anh trai; YB: Em trai Hà Nội, ngày Cán hướng dẫn PGS TS Nguyễn Huy Hoàng PGS.TS Nông Văn Hải thán năm 2018 g Xác nhận bệnh viện PGS.TS Trần Minh Điển PHỤ LỤC MẪU BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU THÔNG TIN BỆNH NHÂN Mã số bệnh án: Nội trú………………………… Ngoại trú…………………… Họ tên bệnh nhân:…………………………………………………………… Ngày sinh………………………… Giới……………………………………… Địa chỉ:…………………………………………………………………………… Điện thoại liên hệ:………………………………………………………………… Tuổi chẩn đoán/Ngày vào viện:………………………………………………… Mã số lab:………………………………………………………………………… KHÁM LÂM SÀNG Tiền sử bệnh nhân: Cân nặng lúc sinh: Bộ phận sinh dục lúc sinh Nơn sau sinh: Khám tồn thân: Tăng trưởng nhanh: Mức độ nước: Xạm da: Giọng ồm: Trứng cá: Khám phận sinh dục ngồi: Lơng mu: Mức độ nam hoá trẻ gái: Khám dương vật trẻ trai: XÉT NGHIỆM CẬN LÂM SÀNG Nhiễm sắc thể: Phân tích gene CYP21A2: X quang tuổi xương: Chẩn đốn hình ảnh tuyến thượng thận: Chẩn đốn hình ảnh tiểu khung: Xét nghiệm Điện giải đồ nhập viện: Na (mmol/l) Xét nghiệm ACTH, LH, FSH, Steroid: Xét nghiệm ACTH Cortisol 17-OHP Testosterone Progesterone Androstenedione PHẢ HỆ VÀ TIỀN SỬ GIA ĐÌNH Tiền sử gia đình: Bố mẹ có quan hệ huyết thống khơng? Các anh chị em ruột có biểu sau khơng: Mơ hồ giới tính: Xạm da: Dậy sớm: Nơn, khơng tăng cân sau đẻ: Sơ đồ phả hệ: KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ĐỘT BIẾN GENE CYP11B1 Allele Bệnh nhân Bố Mẹ PHỤ LỤC KẾT QUẢ ĐO NỒNG ĐỘ VÀ ĐỘ TINH SẠCH CÁC MẪU DNA TÁCH TỪ MÁU NGOẠI VI CỦA CÁC BỆNH NHÂN Mã số BN CYP11-001 CYP11-002 CYP11-003 CYP11-004 CYP11-005 CYP11-006 CYP11-007 CYP11-008 CYP11-009 CYP11-010 CYP11-011 CYP11-012 CYP11-013 CYP11-014 CYP11-015 PHỤ LỤC KIỂU GEN VÀ KIỂU HÌNH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU BN CYP11-001 CYP11-002 CYP11-003 CYP11-004 CYP11-005 CYP11-006 CYP11-007 CYP11-008 CYP11-009 CYP11-010 CYP11-011 CYP11-012 CYP11-013 CYP11-014 CYP11-015 Ghi chú: Nor: alen không phát đột biến; CĐ-NHĐT: Cổ điển-Nam hóa đơn thuần; CĐ-MM: Cổ điển-Mất muối; KCĐ: Không Cổ điển Hà Nội, ngày Cán hướng dẫn năm 2018 thán g Xác nhận bệnh viện PGS TS Nguyễn Huy Hồng PGS.TS Nơng Văn Hải PGS.TS Trần Minh Điển ... NGHỆ VIỆT NAM VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGUYỄN THỊ PHƯƠNG MAI NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN CYP11B1 Ở BỆNH NHÂN TĂNG SẢN THƯỢNG THẬN BẨM SINH DO THIẾU HỤT 11 BETA HYDROXYLASE Chuyên ngành: Di... Bảng 3.1 Kiểu đột biến gen CYP11B1 phát bệnh nhân nghiên cứu ………………………………………………… Bảng 3.2 Kiểu gen- kiểu hình bệnh nhân có đột biến mới…… Bảng 3.3 Xét nghiệm hóa sinh bệnh nhân MS CYP11B1- 010…………... 11 hydroxylase Hiện nay, giới Việt Nam nghiên cứu ảnh hưởng loại đột biến tới chức hoạt động 11 hydroxylase Xuất phát từ thực tiễn đó, đề tài Nghiên cứu xác định đột biến gen CYP11B1 bệnh nhân