BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT SỰ TỒN DƯ KHÁNG SINH TRONG THỊT, GAN VÀ THẬN HEO ĐƯỢC GIẾT MỔ CÓ NGUỒN GỐC TỪ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VÀ CÁC TỈNH LÂN CẬN Họ tên sinh viên: LƯƠNG HOÀNG HẢI Ngành: DƯỢC THÚ Y Niên khoá: 2004 – 2009 Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09/2009     i KHẢO SÁT SỰ TỒN DƯ KHÁNG SINH TRONG THỊT, GAN VÀ THẬN HEO ĐƯỢC GIẾT MỔ CÓ NGUỒN GỐC TỪ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VÀ CÁC TỈNH LÂN CẬN     Tác giả LƯƠNG HỒNG HẢI Khố luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Bác sĩ Thú y chuyên ngành Dược thý y Giáo viên hướng dẫn TS LÊ ANH PHỤNG Tp Hồ Chí Minh     ii Tháng 09/2009 XÁC NHẬN CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN Họ tên sinh viên thực tập: Lương Hoàng Hải Tên luận văn: “ Khảo sát tồn dư kháng sinh thịt, gan thận heo giết mổ có nguồn gốc từ thành phố Hồ Chí Minh tỉnh lân cận ” Đã hoàn thành luận văn theo yêu cầu giáo viên hướng dẫn ý kiến nhận xét, đóng góp Hội đồng chấm thi tốt nghiệp Khoa ngày Giáo viên hướng dẫn TS Lê Anh Phụng     iii LỜI CẢM TẠ Thành kính ghi ơn Con xin suốt đời ghi ơn Cha, Mẹ người sinh thành, nuôi lớn khôn dạy dỗ nên người ngày hôm Xin chân thành biết ơn Ban giám hiệu trường Đại Học Nơng Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh tồn thể q thầy, khoa Chăn Ni – Thú Y tận tình giảng dạy, truyền đạt tri thức cho em suốt thời gian học tập trường Chân thành biết ơn TS Lê Anh Phụng BSTY Ngơ Thị Minh Hiển tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho em suốt q trình thực tập hồn thành luận văn Xin gửi lời cảm ơn sâu sắc Ban lãnh đạo Chi Cục Thú Y Thành Phố Hồ Chí Minh Các cơ, chú, anh, chị tram Chẩn Đốn – Xét Nghiệm Điều Trị Chi Cục Thú Y Thành Phố Hồ Chí Minh nhiệt tình giúp đỡ em suốt thời gian thực tập tốt nghiệp Tôi xin cảm ơn tất bạn bè giúp đỡ ủng hộ tơi q trình học tập trình thực luận văn tốt nghiệp       iv MỤC LỤC Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu .2 Chương TỔNG QUAN 2.1 KHÁI QUÁT VỀ KHÁNG SINH .3 1 Khái niệm chung .3 2.1.2 Phân loại kháng sinh 2.1.3 Dược động học chất kháng sinh .5 2.1.3.1 Sự phân bố kháng sinh 2.1.3.2 Sự hấp thu kháng sinh 2.1.3.3 Sự chuyển hóa kháng sinh thể động vật 2.1.3.4 Sự thải trừ kháng sinh 2.1.4 Cơ chế đề kháng kháng sinh 2.2 Sử dụng kháng sinh 2.2.1 Nguyên tắc chọn sử dụng kháng sinh điều trị bệnh nhiễm trùng 2.2.2 Kháng sinh dùng công tác phòng bệnh 10 2.2.3 Kháng sinh dùng kích thích tăng trưởng 11 2.2.4 Phối hợp kháng sinh 12 2.2.5 Hậu việc sử dụng kháng sinh không cách 12 2.3 KHÁNG SINH TỒN DƯ 13 2.3.1 Khái niệm chất tồn dư 13 2.3.2 Giới hạn tồn dư chất kháng khuẩn thịt 14     v 2.3.3 Nguyên nhân tồn dư kháng sinh thịt 15 2.3.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến tồn dư kháng sinh thịt .17 2.3.5 Ảnh hưởng việc tiêu thụ sản phẩm động vật có dư lượng kháng sinh vượt mức cho phép sức khỏe người 18 2.3.6 Các biện pháp hạn chế tồn dư kháng sinh thực phẩm .18 2.3.7 Các phương pháp xác định tồn dư kháng sinh thực phẩm .19 2.3.7.1 Phương pháp sử dụng vi sinh vật 19 2.3.7.2 Phương pháp sắc kí lỏng cao áp 20 2.3.7.3 Phương pháp miễn dịch enzyme .21 2.4 SƠ LƯỢC MỘT SỐ CƠNG TRÌNH NGHIÊN CƯU VỀ SỬ DỤNG FPT ĐỂ PHÁT HIỆN DƯ LƯỢNG KHÁNG SINH TRONG THỊT GIA SÚC GIA CẦM .21 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP .24 2.1 Thời gian địa điểm .24 2.1.1 Thời gian thực đề tài .24 2.1.2 Địa điểm thực 24 2.2 Vật liệu 24 2.2.1 Đối tượng khảo sát 24 2.2.2 Chủng vi sinh vật dùng phát kháng sinh 25 2.2.3 Môi trường 25 2.2.4 Hóa chất 25 2.2.5 Thiết bị dụng cụ 25 2.3 Nội dung 25 2.4 Phương pháp nghiên cứu 26 2.4.1 Bố trí lấy mẫu 26     vi 2.4.2 Cách lấy mẫu bảo quản mẫu 26 2.4.3 Phương pháp tiến hành 27 2.4.3.1 Nguyên tắc 27 2.4.3.2 Điều kiện quy trình .29 2.4.3.3 Đếm số lượng vi khuẩn bào tử 30 2.4.3.4 Cách tạo môi trường phát kháng sinh tồn dư 30 2.4.3.5 Cách cắt mẫu kiểm tra 30 2.4.3.6 Đặt mẫu kiểm nghiệm 31 2.5 Các tiêu khảo sát .32 2.6 Phương pháp xử lý số liệu 32 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 4.1.Tỷ lệ mẫu (thịt, gan, thận) có tồn dư kháng sinh 33 4.2 Tỷ lệ phát tồn dư kháng sinh hai loại mô trở lên cá thể 35 4.3.Tỷ lệ mẫu có tồn dư kháng sinh phân bố theo nguồn gốc .36 4.4 Tỷ lệ quầy thịt tồn dư kháng sinh phân bố theo nguồn gốc 39 4.5 Tỷ lệ nhóm kháng sinh tồn dư mẫu (thịt, gan, thận) 40 4.6 Tỷ lệ nhóm kháng sinh tồn dư mẫu thịt heo phân bố theo nguồn gốc 46 4.7 Tỷ lệ nhóm kháng sinh tồn dư mẫu gan heo phân bố theo nguồn gốc 48 4.8 Tỷ lệ nhóm kháng sinh tồn dư mẫu thận heo phân bố theo nguồn gốc 51 4.9 Tỷ lệ tồn dư ghép nhóm kháng sinh phát mẫu .55 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 58 5.1 Kết luận 58 5.2 Đề nghị     vii DANH MỤC CÁC BẢNG  Bảng 2.1: Các loại hóa chất kháng sinh bị cấm sử đụng Việt Nam 13  Bảng 2.2: Giới hạn tồn dư tối đa kháng sinh sản phẩm chăn nuôi 14  Bảng 2.3: Thời gian tối thiểu lần sử dụng kháng sinh cuối đến hạ thịt heo .16  Bảng 3.1 Phân bố mẫu thịt, gan thận heo từ số sở giết mổ 26  Bảng 3.2 Điều kiện kiểm tra kháng sinh tồn dư phương pháp vi sinh vật 29  Bảng 4.1: Tỷ lệ mẫu (thịt, gan, thận) có tồn dư kháng sinh 33  Bảng Tỷ lệ phát tồn dư kháng sinh hai loại mô trở lên cá thể 35  Bảng 4.3: Tỷ lệ mẫu có tồn dư kháng sinh phân bố theo nguồn gốc 37  Bảng 4.4: Tỷ lệ cá thể heo tồn dư kháng sinh phân bố theo nguồn gốc 39  Bảng 4.5: Tỷ lệ nhóm kháng sinh tồn dư mẫu (thịt, gan, thận) 41  Bảng 4.6: Tỷ lệ nhóm kháng sinh tồn dư mẫu thịt heo phân bố theo nguồn gốc 46  Bảng 4.7: Tỷ lệ nhóm kháng sinh tồn dư mẫu gan heo phân bố theo nguồn gốc 49  Bảng 4.8: Tỷ lệ nhóm kháng sinh tồn dư mẫu thận heo phân bố theo nguồn gốc 52 Bảng 4.9: Tỷ lệ tồn dư ghép nhóm kháng sinh phát mẫu 55  DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1: Cấu trúc hóa học số kháng sinh (Trần Thị Thu Hằng, 2007) .4  Hình 3.1 Cách đặt mẫu kiểm nghiệm mơi trường thử kháng sinh 31  Hình 4.1 Mẫu thịt heo dương tính với nhóm β- lactam mơi trường No10663 44  Hình 4.2 Mẫu thịt heo dương tính với nhóm aminosid mơi trường No10664 44  Hình 4.3 Mẫu thịt heo dương tính với nhóm macrolid mơi trường MHA .45      viii Hình 4.4 Mẫu thịt heo dương tính với nhóm tetracyclines mơi trường NA .45  DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ  Sơ đồ 2.1: Sự phân bố chuyển hóa kháng sinh thể động vật 5  Sơ đồ 2.2: Phối hợp kháng sinh (Trần Thanh Phong, 1996) 11  Sơ đồ 3.1 Quy trình phát kháng sinh tồn dư mẫu kiểm nghiệm phương pháp vi sinh vật - FPT .28  DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.1 Tỷ lệ mẫu có tồn dư kháng sinh phát 35 Biểu đồ 4.2 Tỷ lệ phát hai loại mô trở lên cá thể có tồn dư kháng sinh 36 Biểu đồ 4.3: Tỷ lệ mẫu có tồn dư kháng sinh phân bố theo nguồn gốc 38 Biểu đồ 4.4: Tỷ lệ cá thể tồn dư kháng sinh phân bố theo nguồn gốc 40 Biểu đồ 4.5: Tỷ lệ nhóm kháng sinh tồn dư mẫu (thịt, gan, thận) 44 Biểu đồ 4.6: Tỷ lệ nhóm kháng sinh tồn dư mẫu thịt heo phân bố theo nguồn gốc 48 Biểu đồ 4.7: Tỷ lệ nhóm kháng sinh tồn dư mẫu gan heo phân bố theo nguồn gốc 51 Biểu đồ 4.8: Tỷ lệ nhóm kháng sinh tồn dư mẫu thận heo phân bố theo nguồn gốc 54 Biểu đồ 4.9: Tỷ lệ tồn dư ghép nhóm kháng sinh phát mẫu 57     ix DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT  ELISA: Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay FPT: Four Plate Test hay Frontier Post Test MRL: Maximum Residue Limit HPLC: High Performance Liquid Chromatography MHA: Mueller Hinton Agar NA: Nutrient Agar PCA: Plate Count Agar TSA: Tryptone Soybean Agar UI: International Unit VSV: Vinh Sinh Vật BHI: Brain Heart Infusion AUC: Area under the curve Vd: Volume of distribution MIC: Minimal inhibition concentration Cp: Liều dùng để đạt nồng độ thuốc cần thiết huyết tương ClB: Tốc độ thải thể     x Total Chi-Sq = 0.10 5.90 57 58 0.103 + 0.002 + 7.770 + 0.136 + 0.207 + 0.004 + 0.207 + 0.004 + 0.138 + 0.002 + 0.138 + 0.002 + 0.103 + 0.002 = 8.819 DF = χ2 = 8.819 < χ20,05 = 12.59 => P > 0,05 4.6.4 T  l  nhóm tetracyclines t n d  trong m u th t heo phân b  theo ngu n g c      Dt At Total 6 0.31 5.69 0.31 5.69 10 0.62 11.38 12 0.62 11.38 12 12 24 Total Chi-Sq = 0.41 7.59 0.41 7.59 0.31 5.69 55 8 58 0.310 + 0.017 + 0.310 + 0.017 + 3.065 + 0.167 + 0.621 + 0.034 + 0.414 + 0.023 + 0.414 + 0.023 + 1.533 + 0.084 = 7.030 DF = χ2 = 7.030 < χ20,05 = 12.59 => P > 0,05 4.7.1 T  l  nhóm β‐ lactam t n d  trong m u gan heo phân b  theo ngu n g c      Dt At 0.83 5.17 0.83 5.17 Total 6 25 Total Chi-Sq = 1.66 10.34 1.66 10.34 1.10 6.90 1.10 6.90 0.83 5.17 50 12 12 8 58 0.828 + 0.132 + 0.828 + 0.132 + 1.093 + 0.175 + 1.093 + 0.175 + 1.103 + 0.177 + 1.103 + 0.177 + 1.661 + 0.266 = 8.942 DF = χ2 = 8.942 < χ20,05 = 12.59 => P > 0,05 4.7.2 T  l  nhóm aminosid t n d  trong m u gan heo phân b  theo ngu n g c      Dt At Total 26 Total Chi-Sq = 0.21 5.79 0.21 5.79 12 0.41 11.59 11 0.41 11.59 0.28 7.72 0.28 7.72 0.21 5.79 56 12 12 8 58 0.207 + 0.007 + 3.040 + 0.109 + 0.414 + 0.015 + 0.830 + 0.030 + 0.276 + 0.010 + 0.276 + 0.010 + 0.207 + 0.007 = 5.438 DF = χ2 = 5.438 < χ20,05 = 12.59 => P > 0,05     27 4.7.3 T  l  nhóm macrolid t n d  trong m u gan heo phân b  theo ngu n g c    Total Chi-Sq =     Dt At 1.24 4.76 1.24 4.76 10 2.48 9.52 10 2.48 9.52 1.66 6.34 1.66 6.34 3 1.24 4.76 12 46 0.464 + 0.121 + 0.047 + 0.012 + 0.094 + 0.024 + Total 6 12 12 8 58 28 0.094 + 0.024 + 0.259 + 0.068 + 0.259 + 0.068 + 2.491 + 0.650 = 4.676 DF = 6, P-Value = 0.586 10 cells with expected counts less than 5.0 4.7.4 T  l  nhóm tetracyclines t n d  trong m u gan heo phân b  theo ngu n g c      Dt At 0.62 5.38 0.62 5.38 1.24 10.76 11 1.24 10.76 0.83 7.17 0.83 7.17 0.62 5.38 Total 6 12 12 8 29 Total Chi-Sq = 52 58 0.621 + 0.072 + 0.621 + 0.072 + 6.130 + 0.707 + 0.047 + 0.005 + 0.828 + 0.095 + 0.828 + 0.095 + 0.232 + 0.027 = 10.379 DF = χ2 = 5.438 < χ20,05 = 12.59 => P > 0,05   4.8.1 T  l  nhóm β‐ lactam t n d  trong m u th n heo phân b  theo ngu n g c      Dt At 1.45 4.55 3 1.45 4.55 2.90 9.10 2.90 9.10 1.93 6.07 Total 6 12 12 8 30 Total Chi-Sq = 1.93 6.07 1.45 4.55 14 44 58 1.448 + 0.461 + 1.663 + 0.529 + 0.420 + 0.134 + 1.528 + 0.486 + 1.931 + 0.614 + 1.931 + 0.614 + 0.210 + 0.067 = 12.036 DF = 6, P-Value = 0.061 4.8.2 Tỷ lệ nhóm aminosid tồn dư mẫu thận heo phân bố theo nguồn gốc     Dt At 0.52 5.48 0.52 5.48 11 1.03 10.97 10 1.03 10.97 Total 6 12 12 31 Total Chi-Sq = 0.69 7.31 0.69 7.31 0.52 5.48 53 58 0.517 + 0.049 + 4.251 + 0.401 + 0.001 + 0.000 + 0.901 + 0.085 + 0.690 + 0.065 + 0.690 + 0.065 + 0.517 + 0.049 = 8.281 DF = χ2 = 8.281 < χ20,05 = 12.59 => P > 0,05 4.8.3 Tỷ lệ nhóm macrolid tồn dư mẫu thận heo phân bố theo nguồn gốc     Dt At 0.31 5.69 0.31 5.69 10 0.62 11.38 Total 6 12 32 Total Chi-Sq = 12 0.62 11.38 0.41 7.59 0.41 7.59 0.31 5.69 55 12 8 58 0.310 + 0.017 + 1.533 + 0.084 + 3.065 + 0.167 + 0.621 + 0.034 + 0.414 + 0.023 + 0.414 + 0.023 + 0.310 + 0.017 = 7.030 DF = χ2 = 7.030 < χ20,05 = 12.59 => P > 0,05   4.8.4 T  l  nhóm tetracyclines t n d  trong m u th n heo phân b  theo ngu n g c      Dt At 1.34 4.66 Total 33 Total Chi-Sq = 1.34 4.66 2.69 9.31 2.69 9.31 1.79 6.21 1.79 6.21 1.34 4.66 13 45 12 12 8 58 1.345 + 0.389 + 5.242 + 1.514 + 1.985 + 0.573 + 0.036 + 0.010 + 1.793 + 0.518 + 1.793 + 0.518 + 0.088 + 0.026 = 15.830 DF = 6, P-Value = 0.015 10 cells with expected counts less than 5.0 4.9.1 T  l  t n d  ghép các nhóm kháng sinh trong m i m u th t      34 Dt Total Chi-Sq = At 57 1.67 56.33 54 1.67 56.33 58 1.67 56.33 169 Total 58 58 58 174 0.267 + 0.008 + 3.267 + 0.097 + 1.667 + 0.049 = 5.354 DF = 2, P-Value = 0.069 cells with expected counts less than 5.0 4.9.2 T  l  t n d  ghép các nhóm kháng sinh trong m i m u gan  Total     Dt At Total 12 46 58 5.67 52.33 53 5.67 52.33 58 5.67 52.33 17 157 58 58 174 35 Chi-Sq = 7.078 + 0.766 + 0.078 + 0.008 + 5.667 + 0.614 = 14.212 DF = 2, P-Value = 0.001 4.9.3 T  l  t n d  ghép các nhóm kháng sinh trong m i m u th n  Dt Total Chi-Sq = At 52 6.00 52.00 51 6.00 52.00 53 6.00 52.00 18 156 Total 58 58 58 174 0.000 + 0.000 + 0.167 + 0.019 + 0.167 + 0.019 = 0.372 DF = 2, P-Value = 0.830 4.10 T  l  qu y th t t n d  kháng sinh theo phân b  ngu n g c      Dt At 2.59 3.41 Total 6 36 Total Chi-Sq = 2.59 3.41 6 5.17 6.83 5.17 6.83 3.45 4.55 3.45 4.55 3 2.59 3.41 25 33 12 12 8 58 0.133 + 0.101 + 2.253 + 1.707 + 0.132 + 0.100 + 0.646 + 0.489 + 1.738 + 1.317 + 1.738 + 1.317 + 0.066 + 0.050 = 11.787 DF = 6, P-Value = 0.067 10 cells with expected counts less than 5.0       37                           38 ... Chi Cục Thú Y Thành Phố Hồ Chí Minh Các cơ, chú, anh, chị tram Chẩn Đoán – Xét Nghiệm Điều Trị Chi Cục Thú Y Thành Phố Hồ Chí Minh nhiệt tình giúp đỡ em suốt thời gian thực tập tốt nghiệp Tôi... sinh điều trị Được đồng ý Khoa Chăn Nuôi – Thú Y Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, hướng dẫn TS Lê Anh Phụng BSTY Ngô Thị Minh Hiển, với hỗ trợ Trạm Chẩn đoán Xét nghiệm Điều trị. .. chân thành biết ơn Ban giám hiệu trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh tồn thể q th? ?y, khoa Chăn Ni – Thú Y tận tình giảng d? ?y, truyền đạt tri thức cho em suốt thời gian học tập trường