BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CHĂN NI – THÚ Y **************** KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ SỰ HIỆN DIỆN CỦA VI SINH VẬT HIẾU KHÍ VÀ BACILLUS TRONG QUY TRÌNH VỆ SINH SẢN XUẤT THUỐC THÚ Y Sinh viên thực : DƯƠNG NGỌC HÂN Lớp : DH06DY Ngành : Thú y chuyên ngành dược Niên khóa : 2006 - 2011 Tháng 8/2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CHĂN NUÔI – THÚ Y **************** DƯƠNG NGỌC HÂN ĐÁNH GIÁ SỰ HIỆN DIỆN CỦA VI SINH VẬT HIẾU KHÍ VÀ BACILLUS TRONG QUY TRÌNH VỆ SINH SẢN XUẤT THUỐC THÚ Y Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Bác sĩ thú y Giáo viên hướng dẫn TS TRẦN THỊ QUỲNH LAN THÁNG 8/2011 i XÁC NHẬN CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN Họ tên sinh viên thực tập: Dương Ngọc Hân Tên luận văn: “Đánh giá diện vi sinh vật hiếu khí Bacillus quy trình vệ sinh sản xuất thuốc thú y” Đã hoàn thành luận văn theo yêu cầu giáo viên hướng dẫn ý kiến nhận xét, đóng góp hội đồng chấm thi tốt nghiệp Khoa ngày…/…/2011 Giáo viên hướng dẫn TS Trần Thị Quỳnh Lan ii LỜI CẢM TẠ Với tình cảm sâu sắc Con xin chân thành biết ơn ba mẹ, người sinh thành hi sinh đời tương lai Xin tỏ lòng biết ơn đến TS Trần Thị Quỳnh Lan tận tình bảo, hướng dẫn giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài Thành kính tri ân Ban Giám Hiệu Trường Đại Học Nông Lâm Tp.HCM Ban Chủ Nhiệm Khoa Chăn Nuôi – Thú Y Bộ mơn Nội Dược, tồn thể Thầy Cơ tận tình giảng dạy hướng dẫn em suốt trình học tập Xin chân thành cảm ơn Ban Giám Đốc công ty TNHH Virbac Việt Nam Th.s Đặng Ngọc Bích Thảo Cùng tồn thể chú, anh chị cơng ty tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình thực tập Cảm ơn Các bạn lớp DY32 người bạn khác đồng hành giúp đỡ suốt thời gian học tập thực đề tài Dương Ngọc Hân iii TÓM TẮT KHÓA LUẬN Đề tài nghiên cứu “Đánh giá diện vi sinh vật hiếu khí Bacillus quy trình vệ sinh sản xuất thuốc thú y” tiến hành công ty TNHH Virbac Việt Nam, thời gian từ 01/01/2011 đến 06/06/2011 Đề tài khảo sát tiêu tổng vi sinh vật hiếu khí Bacillus spp đối tượng: đối tượng tiếp xúc trực tiếp với sản phẩm (máy trộn, bồn chứa), đối tượng tiếp xúc gián tiếp với sản phẩm (tường, cửa, bàn, cân,…) đồng thời khảo sát tồn dư thuốc sát trùng sau vệ sinh sát trùng Kết đạt được: - Đối với tiêu Bacillus spp • Trong quy trình sản xuất thuốc bột, khảo sát bề mặt tiếp xúc trực tiếp với sản phẩm sát trùng hai nồng độ (0,5% 1%) thuốc sát trùng Qua năm đợt khảo sát, tỷ lệ mẫu đạt tiêu chuẩn thay đổi từ 33,33% - 71,34% Khảo sát bề mặt tiếp xúc gián tiếp với sản phẩm có 51,28% mẫu đạt tiêu chuẩn • Trong quy trình sản xuất thuốc nước, khảo sát bề mặt tiếp xúc trực tiếp với sản phẩm Qua hai đợt khảo sát, số mẫu đạt tiêu chuẩn thay đổi từ 66,67% 83,33% Khảo sát bề mặt tiếp xúc gián tiếp với sản phẩm, số mẫu đạt tiêu chuẩn 80,95% - Đối với tiêu tổng vi sinh vật hiếu khí • Trong quy trình sản xuất thuốc bột, qua năm đợt khảo sát sử dụng với hai nồng độ ( 0,5% 1%) thuốc sát trùng Tỷ lệ mẫu đạt tiêu chuẩn qua đợt thay đổi từ 28,57% - 71,43% • Trong quy trình sản xuất thuốc nước, qua hai đợt khảo sát tỷ lệ mẫu đạt tiêu chuẩn thay đổi từ 83,33% - 91,67% - Tồn dư thuốc sát trùng Khảo sát thực qua năm đợt, kết cho thấy 100% mẫu đạt tiêu chuẩn Quy trình vệ sinh sát trùng khơng để lại tồn dư hóa chất bề mặt trang thiết bị tiếp xúc với sản phẩm iv MỤC LỤC Trang Trang tựa i LỜI CẢM TẠ iii TÓM TẮT KHÓA LUẬN iv MỤC LỤC v DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH SÁCH CÁC HÌNH ix DANH SÁCH CÁC BẢNG x DANH SÁCH CÁC SƠ ĐỒ xi Chương 1MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề .1 1.2 Mục đích yêu cầu .1 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu .2 Chương TỔNG QUAN 2.1 Giới thiệu nhà máy sản xuất thuốc thú y Virbac Việt Nam .3 2.1.1 Các dây chuyền sản xuất Nhà máy Virbac Việt Nam 2.1.2 Thị trường sản phẩm Virbac Việt Nam 2.2 Vi khuẩn lây nhiễm môi trường sản xuất 2.2.1 Tổng số vi sinh vật hiếu khí (TSVSVHK) 2.2.2 Một số vi sinh vật hiếu khí thường gặp 2.2.2.1 Escherichia coli .5 2.2.2.2 Salmonella .7 2.2.2.3 Staphylococcus aureus 2.2.3 Bacillus subtilis 11 2.2.3.1 Đặc điểm phân loại 11 2.2.3.2 Đặc điểm hình thái 11 2.2.3.3 Đặc điểm nuôi cấy 11 2.2.3.4 Khả tạo bào tử 12 2.2.3.5 Các chất kháng sinh Bacillus subtilis tổng hợp: 12 2.2.3.6 Sự đề kháng Bacillus subtilis 12 2.2.3.7 Độc tính Bacillus subtilis (Dẫn liệu Nguyễn Nhật Chen, 2008) 13 2.2.3.8 Tình hình nghiên cứu ứng dụng Bacillus subtilis 14 2.2.4 Bacillus licheniformis .15 2.2.4.1 Đặc điểm B licheniformis 15 2.2.4.2 Các nghiên cứu B licheniformis 15 2.2.4.3 Tác hại 16 2.2.4.4 Ứng dụng .16 2.3.1 Khái niệm biofilm 17 2.3.2 Ý nghĩa biofilm an toàn vệ sinh nhà xưởng, trang thiết bị 17 2.4 Một số chất sát trùng thông dụng 18 v 2.4.1 Hydrogen peroxide (H O ) .18 2.4.2 Acid peracetic (CH COOH) 19 2.6 Qui trình vệ sinh sát trùng nhà xưởng sau sản xuất 22 2.6.1 Hóa chất sử dụng 22 2.6.1.1 Hoá chất vệ sinh nhà xưởng 22 2.6.1.2 Hoá chất rửa thiết bị dụng cụ 22 2.6.1.3 Chất sát trùng nhà xưởng, thiết bị dụng cụ 22 2.6.2 Các bước vệ sinh sát trùng 23 2.6.2.1 Thứ tự sát trùng .23 2.6.2.2 Nhà xưởng .23 2.6.2.3 Thiết bị dụng cụ 24 2.6.3 Phương pháp sát trùng 24 2.6.3.1 Nhà xưởng .24 2.6.3.2 Dụng cụ sản xuất 24 2.6.3.3 Thiết bị 24 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 Thời gian địa điểm thực 26 3.1.1 Thời gian 26 3.1.2 Địa điểm 26 3.2 Đối tượng nội dung nghiên cứu 26 3.2.1 Đối tượng 26 3.2.2 Nội dung 26 3.3 Thiết bị - dụng cụ 26 3.3.1 Thiết bị .26 3.3.2 Dụng cụ 27 3.3.3 Môi trường nuôi cấy 27 3.4 Phương pháp tiến hành 27 3.4.1 Sơ đồ lấy mẫu số lượng mẫu .27 3.4.1.1 Khu vực sản xuất thuốc bột 27 3.4.1.2 Khu vực sản xuất thuốc nước 28 3.4.2 Đánh giá diện Bacillus spp TSVSVHK qui trình sản xuất 29 3.4.2.1 Phương pháp lấy mẫu 29 3.4.2.2 Phương pháp phân tích 31 3.4.2.3 Tính kết 31 3.4.2.4 Tiêu chuẩn đánh giá vi sinh vật sản xuất thuốc thú y .32 3.4.3 Khảo sát tồn dư thuốc sát trùng quy trình vệ sinh thiết bị, dụng cụ .32 3.4.3.1 Phương pháp lấy mẫu số lượng mẫu 32 3.4.3.2 Phương pháp phân tích 33 3.4.3.3 Kết 33 3.5 Xử lý thống kê .34 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 4.1 Kết phân tích Bacillus spp 35 vi 4.1.1 Khu vực sản xuất thuốc bột 35 4.1.1.1 Bề mặt trực tiếp .35 4.1.1.2 Bề mặt gián tiếp 37 4.1.2 Khu vực sản xuất thuốc nước 38 4.1.2.1 Bề mặt trực tiếp .38 4.1.2.2 Bề mặt gián tiếp 39 4.2.1 Khu vực sản xuất thuốc bột 39 4.2.2 Khu vực sản xuất thuốc nước 42 4.3 Kết khảo sát tồn dư thuốc sát trùng bề mặt 43 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 44 5.1 Kết luận .44 5.2 Đề nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 PHỤ LỤC 49 vii DANH SCH CC CH VIT TT AFSSA Agence Franỗaise de Sécurité Sanitaire des Aliments BGA Brilliant Green Agar BGB Brilliant Green Bile CFU Colony Forming Unit E.Agg.E.C Enteroaggreagative Escherichia coli E coli Escherichia coli E.H.E.C Enterohaemorrhagic Escherichia coli E.I.E.C Enteroinvasive Escherichia coli E.P.E.C Enteropathogenic Escherichia coli E.T.E.C Enterotoxingenic Escherichia coli EMB Eosin Methyl Blue GMP Good Manufacturing Practices LT Heat labile enterotoxin ST Heat stable enterotoxin SFSTP Sociộtộ Franỗaise des Sciences et Techniques Pharmaceutiques TSA Trypticase Soya Agar TSB Trypticase Soya Broth TVSVHK Tổng số vi sinh vật hiếu khí VP Vosges Proskauer viii DANH SÁCH CÁC HÌNH HÌNH Trang Hình 2.1 Bacillus subtilis kính hiển vi điện tử 11 Hình 2.2 B Licheniformis kính hiển vi điện tử 15 Hình 2.3 Chất tẩy rửa Topax 18 24 Hình 2.4 Chất sát trùng Oxonia active 25 Hình 3.1 Lấy mẫu theo phương pháp tiếp xúc trực tiếp 31 Hình 3.2 Cách lấy mẫu phết 32 Hình 3.3 Lấy mẫu tăm bơng vơ trùng 32 Hình 3.4 Bộ test kit (peracetic acid test) 35 ix mà lượng vi sinh vật tăng lên đáng kể, dẫn đến tỷ lệ mẫu đạt tiêu chuẩn thời điểm thấp 4.3 Kết khảo sát tồn dư thuốc sát trùng bề mặt Mẫu đạt tiêu chuẩn hàm lượng thuốc sát trùng tồn dư Kết sau tổng hợp xử lý trình bày Bảng 4.9 Bảng 4.9 Kết khảo sát tồn dư thuốc sát trùng pH Độ dẫn điện Mẫu đạt Mẫu đạt Đợt Số lượng mẫu Tỷ lệ (%) Số lượng mẫu Tồn dư thuốc sát trùng Mẫu đạt Tỷ lệ (%) Số lượng mẫu Tỷ lệ (%) I 4/4 100 4/4 100 4/4 100 II 4/4 100 4/4 100 4/4 100 III 4/4 100 4/4 100 4/4 100 IV 4/4 100 4/4 100 4/4 100 V 4/4 100 4/4 100 4/4 100 Kết Bảng 4.9 cho thấy việc làm cho kết tốt, khơng tồn dư thuốc sát trùng sau tráng nước tinh khiết Tất mẫu khảo sát không cho thấy tồn dư (dạng vết) chất sát trùng Điều chứng tỏ công đoạn sát trùng thực yêu cầu, tránh lây nhiễm sản phẩm Nếu thiết bị tồn dư thuốc sát trùng đưa đến hai hậu quả: nồng độ thuốc sát trùng tồn dư cao gây ngộ độc cho thú sử dụng sản phẩm, nồng độ thuốc sát trùng tồn dư thấp tạo dòng vi khuẩn đề kháng với thuốc sát trùng 43 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Đối với bề mặt tiếp xúc trực tiếp ( máy trộn, bồn chứa,…) nguy lây nhiễm hai khu vực sản xuất: phòng trộn (các thiết bị trộn) bồn chứa (9,23 CFU/ 25cm2 5,40 CFU/ 25cm2) Khu vực sản xuất thuốc nước cho kết khảo sát đạt tiêu chuẩn tốt khu vực sản xuất thuốc bột (80,95% > 51,28%) Đối với bề mặt gián tiếp (sàn, tường,cửa,…) thường khó vệ sinh sát trùng so với bề mặt trực tiếp (bồn chứa, máy trộn, ), mà kết sát trùng bề mặt trực tiếp thường cao (71,43 % > 51,28%) Sử dụng chất sát trùng Oxonia active nồng độ 1% cho hiệu sát trùng cao sử dụng nồng độ 0,5% (71,43% > 42,86%) Thuốc sát trùng Oxonia active cho kết tác động lên vi sinh vật hiếu khí tốt Bacillus 5.2 Đề nghị Sử dụng chất sát trùng Oxonia active nồng độ 1% cho hiệu cao quy trình vệ sinh sát trùng đối tượng vi sinh vật hiếu khí Nhà máy nên có thêm khảo sát để lựa chọn loại thuốc sát trùng khác tác động tốt Bacillus Việc sát trùng bề mặt gián tiếp (tường, sàn, cửa,…) nên thực sau sản xuất loại sản phẩm vi sinh để tránh nhiễm chéo cho sản phẩm khác Để xây dựng chuẩn hóa quy trình vệ sinh, sát trùng cần lưu ý vấn đề sau: 1) Tăng số lần sát trùng sau đợt sản xuất 44 2) Lặp lại khảo sát với việc lấy mẫu nhiều thời điểm khác nhau, tăng số lượng mẫu khảo sát cho đợt sát trùng nhằm làm tăng độ tin cậy kết đạt được, đồng thời xác định điểm nguy khu vực sản xuất thời điểm làm tăng số lượng vi sinh vật nhiễm bề mặt 3) Cần xác định lại thời gian lấy mẫu thích hợp đánh giá hiệu sát trùng nhà máy thuốc sát trùng cần có thời gian để tác động lên vi sinh vật, khơng nên lấy mẫu khảo sát sau sát trùng mà nên tính tốn thời điểm đến thuốc phát huy tối ưu hiệu lực sát trùng để tiến hành lấy mẫu định kỳ sau đợt sản xuất 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Đặng Ngọc Phương Uyên, 2007 Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất khảo sát khả đối kháng với vi khuẩn E coli gây bệnh tiêu chảy.Khóa luận tốt nghiệp kỹ sư Cơng nghệ sinh học, Đại học Nơng Lâm Tp.Hồ Chí Minh, Việt Nam Hồ Thị Kim Hoa, 2009 Vệ sinh sát trùng chăn nuôi thú y Môi trường sức khỏe vật nuôi Nguyễn Nhật Chen, 2008 Khả đối kháng Bacillus subtilis phân lập từ cá tra Edwardsiella italuri Khóa luận tốt nghiệp kỹ sư Công nghệ sinh học, Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh, Việt Nam Nguyễn Quỳnh Nam, 2006 Phân lập Bacillus từ phân heo thử đối kháng với E coli gây bệnh tiêu chảy heo Khóa luận tốt nghiệp kỹ sư Công nghệ sinh học, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh, Việt Nam Trần Trường Nhân, 2009 Phân lập Bacillus từ phân heo đối kháng với vi khuẩn E coli ứng dụng sản xuất probiotic Khóa luận tốt nghiệp kỹ sư Cơng nghệ sinh học, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh, Việt Nam Võ Thị Trà An, 2010 Thuốc khử trùng thuốc sát trùng, 122 - 132 Dược lý thú y Vũ Văn Ngữ, 1978 Loạn khuẩn đường ruột tác dụng colisubtin.Nhà xuất y học Hà Nội Tài liệu tiếng nước AL-Janabi A.A.H.S., 2006 Identification of bacitracin produced by local isolate of Bacillus licheniformis African Journal of Biotechnology 5(18): 1600 - 1601 Chen T.L., Tsai S.W., 2006 Applications of medium engineering and substrate engineering to improving Carica papaya lipase-catalyzed kinetic resolution of (R, S) - naproxen esters Ph D thesis, Department of Chemical Engineering, China 46 10 Feijoo S.C., Hayes W.W., Watson C.E., Martin J.H., 1997 Effects of Microfluidizer® technology on Bacillus licheniformis spores in ice cream mix Journal of Dairy Science 80(9): 2184-2187 11 Froyshov O., Laland S.G., 1974 On the biosynthesis of bacitracin by a soluble enzyme complex from Bacillus licheniformis European Journal of Biochemistry 46(2): 235 - 242 12 Kampfer P., Andersson M.C., Buzalski T.H., Scoging A.C., 1999 Toxigenic strains of Bacillus licheniformis related to food poisoning Applied and Environmental Microbiology 65(10): 4637 - 4645 13 Lin S.F., Chiou C.M., Yeh C.M., Tsai Y.C., 1996 Purification and partial characterization of an alkaline lipase from Pseudomonas pseudoalkaligenes F-111 Applied Environmental and Microbiology 62(3): 1093 - 1095 14 Lin Z., Zhou C., Wu J., Cheng H., Liu B., Ni Z., Zhou J., Fu J., 2002 Adsorption and reduction of palladium (Pd2+) by Bacillus licheniformis R08 Chinese Science Bulletin 47(15) 15 Nadeem M., Qazi J I., Baig S., Syed Q.U.A., 2008 Effect of medium composition on commercially important alkaline protease production by Bacillus licheniformis N-2 Food Technology and Biotechnology 46(4): 388 - 394 16 Noudeh G.D., Moshafi M.H., Khazaeli P., Akef F., 2007 Studies on bioemulsifier production by Bacillus licheniformis PTCC 1595 American Journal of Pharmacology and Toxicology 2(4): 164 - 169 17 Pepe O., Blaiotta G., Moschetti G., Greco T., Villani F., 2003 Ropeproducing strains of Bacillus spp from wheat bread and strategy for their control by lactic acid bacteria Applied Environmental and Microbiology 69(4): 2321 - 2329 18 Rismani E., Fooladi J., Ebrahimi Por G H., 2006 Biosurfactant production in batch culture by a Bacillus licheniformis isolated from the Persian Gulf Pakistan Journal of Biological Sciences (13): 2498 - 2502 19 Schallmey M., Sing, A., Ward O.P., 2004 Developments in the use of Bacillus species for industrial production Canadian Journal of Microbiology 50(1): - 17 47 20 Snoke J E., Cornell N., 1965 Protoplast Lysis and Inhibition of Growth of Bacillus licheniformis by Bacitracin Journal of Bacteriology 89(2): 415 - 420 21 Veith B., Herzberg C., Steckel S., Feesche J., Maurer K.H., Ehrenreich P., Bäumer S., Henne A., Liesegang H., Merkl R., Ehrenreich A., Gottschalk G., 2004 The complete genome sequence of Bacillus licheniformis DSM13, an organism with great industrial potential Journal of Molecular Microbiology and Biotechnology 7(4): 204 - 211 Tài liệu từ internet: 22 Thu Quynh Mai, “A microbial biorealm page on the genus Bacillus licheniformis”, ngày 19 tháng năm 2011 23 Tony B., “TEM of Bacillus subtilis bacterium“, ngày 25 tháng năm 2011 48 PHỤ LỤC Hóa chất sử dụng vệ sinh sát trùng 1.1 Topax 18-66 Thành phần: chứa alkan, phức hợp alkan anion bề mặt Công dụng: làm sạch, loại bỏ dư lượng sản phẩm chứa chất béo nhiễm bẩn, phù hợp sử dụng cho bề mặt inox (thép không gỉ), nhựa đồng thường sử dụng để làm thiết bị, dụng cụ, sàn, tường,…trong công nghiệp chế biến thực phẩm sản xuất thuốc 1.2 Oxonia active Thành phần: hydrogen peroxide, peracetic acid, acetic acid Công dụng: chất khử trùng phổ rộng, diệt loại vi khuẩn gram âm, gram dương, nấm mốc, virus, bào tử vi khuẩn Xử lý số liệu thống kê 2.1 Bacillus spp So sánh nguy lây nhiễm khu vực - thuốc bột Đợt One-way ANOVA: CFU/25cm2 versus khu vực Analysis of Variance for CFU/25cm Source DF SS MS khu vuc 0.653 0.653 Error 19 9.857 0.519 Total 20 10.510 Level N 12 Pooled StDev = Mean 1.1114 1.4677 StDev 0.9687 0.4621 0.7203 F 1.26 P 0.276 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * -) ( * -) -+ -+ -+ -+ 0.70 1.05 1.40 1.75 Đợt One-way ANOVA: CFU/25cm2 versus khu vuc Analysis of Variance for CFU/25cm Source DF SS MS khu vuc 0.282 0.282 Error 19 3.180 0.167 Total 20 3.462 F 1.69 49 P 0.210 Level N 12 Pooled StDev = Mean 1.0233 1.2575 0.4091 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev StDev -+ -+ -+ -+ 0.5369 ( * ) 0.2818 ( -* -) -+ -+ -+ -+ 0.75 1.00 1.25 1.50 Đợt One-way ANOVA: CFU/25cm2 versus khu vuc Analysis of Variance for CFU/25cm Source DF SS MS khu vuc 0.581 0.581 Error 15 3.615 0.241 Total 16 4.196 Level N Pooled StDev = Mean 0.8134 1.1837 StDev 0.5833 0.3573 0.4909 F 2.41 P 0.141 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+( -* -) ( -* ) -+ -+ -+ -+0.60 0.90 1.20 1.50 Đợt One-way ANOVA: CFU/25cm2 versus khu vuc Analysis of Variance for CFU/25cm Source DF SS MS khu vuc 0.804 0.804 Error 15 5.423 0.362 Total 16 6.227 Level N Pooled StDev = Mean 0.9363 0.5006 StDev 0.6244 0.5737 0.6013 F 2.22 P 0.157 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ 0.40 0.80 1.20 Đợt One-way ANOVA: CFU/25cm2 versus khu vuc Analysis of Variance for CFU/25cm Source DF SS MS khu vuc 0.279 0.279 Error 19 10.288 0.541 Total 20 10.567 Level N 12 Pooled StDev = Mean 0.9653 0.7326 0.7359 StDev 0.7955 0.6893 F 0.51 P 0.482 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ -( * -) ( * ) + -+ -+ -+ -0.35 0.70 1.05 1.40 50 2.1.2 Tỷ lệ mẫu đạt tiêu chuẩn - thuốc bột Chi-Square Test: thuốc bột - bề mặt trực tiếp đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts dat 21 14.00 3.500 khong dat 7.00 7.000 Total 21 14.00 3.500 14 7.00 7.000 21 Total 28 14 42 Chi-Sq = 21.000; DF = 1; P-Value = 0.000 Chi-Square Test: thuốc bột - bề mặt trực tiếp đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts dat 21 15.00 2.400 khong dat 6.00 6.000 Total 21 15.00 2.400 12 6.00 6.000 21 Total 30 12 42 Chi-Sq = 16.800; DF = 1; P-Value = 0.000 Chi-Square Test: thuốc bột - bề mặt trực tiếp đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts dat 17 13.50 0.907 khong dat 3.50 3.500 Total 17 10 13.50 0.907 3.50 3.500 17 Total 27 34 Chi-Sq = 8.815; DF = 1; P-Value = 0.003 cells with expected counts less than 51 Chi-Square Test: thuốc bột – bề mặt trực tiếp đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts dat 17 14.50 0.431 khong dat 2.50 2.500 Total 17 12 14.50 0.431 2.50 2.500 17 Total 29 34 Chi-Sq = 5.862; DF = 1; P-Value = 0.015 cells with expected counts less than Chi-Square Test: thuốc bột – bề mặt trực tiếp đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts dat 21 18.00 0.500 khong dat 3.00 3.000 Total 21 15 18.00 0.500 3.00 3.000 21 Total 36 42 Chi-Sq = 7.000; DF = 1; P-Value = 0.008 cells with expected counts less than Chi-Square Test: thuốc bột – bề mặt gián tiếp Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts dat 78 59.00 6.119 khong dat 19.00 19.000 Total 78 40 59.00 6.119 38 19.00 19.000 78 Total 118 38 156 Chi-Sq = 50.237; DF = 1; P-Value = 0.000 52 Chi-Square Test:thuốc nước – bề mặt trực tiếp đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts dat khong dat Total 12 12 10.00 2.00 0.400 2.000 10.00 0.400 2.00 2.000 12 Total 20 24 Chi-Sq = 4.800; DF = 1; P-Value = 0.028 cells with expected counts less than Chi-Square Test: thuốc nước – bề mặt trực tiếp đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts dat 12 11.00 0.091 khong dat 1.00 1.000 Total 12 10 11.00 0.091 1.00 1.000 12 Total 22 24 Chi-Sq = 2.182; DF = 1; P-Value = 0.140 cells with expected counts less than Chi-Square Test: thuốc nước – bề mặt gián tiếp Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts dat 42 38.00 0.421 khong dat 4.00 4.000 Total 42 34 38.00 0.421 4.00 4.000 42 Total 76 84 Chi-Sq = 8.842; DF = 1; P-Value = 0.003 cells with expected counts less than 53 2.2 Tổng vi sinh vật hiếu khí 2.2.1 So sánh nguy lây nhiễm khu vực – thuốc nước Đợt One-way ANOVA: CFU/25cm2 versus khu vuc Analysis of Variance for CFU/25cm Source DF SS MS khu vuc 0.206 0.206 Error 19 7.752 0.408 Total 20 7.958 Level N 12 Pooled StDev = Mean 0.7936 0.9939 StDev 0.7653 0.5280 0.6388 F 0.51 P 0.486 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( -* ) ( * ) -+ -+ -+ 0.60 0.90 1.20 Đợt One-way ANOVA: CFU/25cm2 versus khu vuc Analysis of Variance for CFU/25cm Source DF SS MS khu vuc 0.058 0.058 Error 19 11.178 0.588 Total 20 11.236 Level ) N Mean 0.9534 StDev 0.7257 12 0.8473 0.7958 Pooled StDev = 0.7670 F 0.10 P 0.757 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -( -* ( * -) + -+ -+ -0.60 0.90 1.20 Đợt One-way ANOVA: CFU/25cm2 versus khu vuc Analysis of Variance for CFU/25cm Source DF SS MS khu vuc 1.579 1.579 Error 15 10.663 0.711 Total 16 12.242 Level N Pooled StDev = Mean 0.8255 0.2150 StDev 1.0046 0.6082 0.8431 F 2.22 P 0.157 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ 0.00 0.50 1.00 Đợt One-way ANOVA: CFU/25cm2 versus khu vuc Analysis of Variance for CFU/25cm 54 Source khu vuc Error Total Level DF 15 16 SS 0.928 2.966 3.894 N MS 0.928 0.198 Mean 0.5362 0.0680 Pooled StDev = StDev 0.5817 0.1924 0.4447 F 4.70 P 0.047 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -( * ) ( -* -) + -+ -+ -0.00 0.35 0.70 Đợt One-way ANOVA: CFU/25cm2 versus khu vực Analysis of Variance for CFU/25cm Source DF SS MS khu vuc 0.147 0.147 Error 19 14.635 0.770 Total 20 14.781 Level N 12 Mean 0.5581 0.3891 Pooled StDev = StDev 0.9708 0.8031 0.8776 F 0.19 P 0.667 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+-( * ) ( -* ) + -+ -+ -+-0.00 0.40 0.80 1.20 2.2.2 Tỷ lệ mẫu đạt tiêu chuẩn Chi-Square Test: thuốc bột đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts đạt 4.50 0.500 không đạt 18 16.50 0.136 Total 21 4.50 0.500 15 16.50 0.136 21 Total 33 42 Chi-Sq = 1.273; DF = 1; P-Value = 0.259 cells with expected counts less than Chi-Square Test: thuốc bột đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts đạt 6.00 không đạt 16 15.00 Total 21 55 0.167 0.067 6.00 0.167 14 15.00 0.067 21 Total 12 30 42 Chi-Sq = 0.467; DF = 1; P-Value = 0.495 Chi-Square Test: thuốc bột đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts đạt 9.39 2.056 không đạt 16 11.61 1.664 Total 21 12 7.61 2.540 9.39 2.056 17 Total 17 21 38 Chi-Sq = 8.315; DF = 1; P-Value = 0.004 Chi-Square Test: thuốc bột đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts đạt 9.95 0.873 không đạt 14 11.05 0.786 Total 21 11 8.05 1.079 8.95 0.971 17 Total 18 20 38 Chi-Sq = 3.709; DF = 1; P-Value = 0.054 Chi-Square Test: thuốc bột đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts đạt 10.50 1.929 không đạt 15 10.50 1.929 Total 21 15 21 56 Total 10.50 1.929 10.50 1.929 21 21 42 Chi-Sq = 7.714; DF = 1; P-Value = 0.005 Chi-Square Test: thuốc nước đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts đạt 10.82 1.348 không đạt 14 10.18 1.432 Total 21 10 6.18 2.358 5.82 2.506 12 Total 17 16 33 Chi-Sq = 7.643; DF = 1; P-Value = 0.006 Chi-Square Test: thuốc nước đợt Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts đạt 12.73 1.092 không đạt 12 8.27 1.679 Total 21 11 7.27 1.910 4.73 2.939 12 Total 20 13 33 Chi-Sq = 7.620; DF = 1; P-Value = 0.006 cells with expected counts less than 57 ... xảy cạnh tranh dinh dưỡng, cạnh tranh không gian sinh sống vi khuẩn nấm Do vi khuẩn phát triển nhanh (trong 24 giờ) sử dụng phần lớn chất dinh dưỡng môi trường, đồng thời tạo số loại kháng sinh