Đang tải... (xem toàn văn)
Quá trình sắc ký dựa trên sự hấp thụ mạnh yếu khác nhau của pha tĩnh đối với các chất tan và sự rửa giải (phản hấp thụ) của pha động để kéo chất tan ra khỏi cột , Sự tác một hỗn hợp phụ thuộc vào tính chất động học của chất hấp phụ. Trong bài này có 2 kiểu hấp phụ: Sắc ký hấp phụ pha thuận (NPHPLC): Pha tĩnh phân cực,pha động không phân cực Sắc ký hấp phụ pha đảo (RPHPLC): Pha tĩnh không phân cực, pha động phân cực
SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO- HPLC (High Performance Liquid Chromatography) SẮC KÝ MỤC TIÊU HỌC TẬP Giải thích nguyên tắc hoạt động máy HPLC Trình bày cấu tạo máy HPLC Mơ tả kỹ thuật HPLC: sắc ký phân bố, sắc ký hấp thụ, sắc ký trao đổi ion, sắc ký gel, sắc ký lực sắc ký huỳnh quang Vận dụng tính tốn số điều kiện chạy HPLC SẮC KÝ Sắc ký ĐN pp tách hỗn hợp chất thành chất riêng Kỹ thuật dựa khác tốc độ di chuyển chất hỗn hợp qua pha tĩnh ảnh hưởng số dung mơi khí (pha động) SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO • Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) đời năm 1967-1968 sở phát triển cải tiến từ PP sắc ký cột cổ điển • HPLC PP chia tách pha động chất lỏng pha tĩnh chứa cột chất rắn phân chia dạng tiểu phân chất lỏng phủ lên chất mang rắn, hay chất mang biến LKHH với nhóm chức HC Carbohydrates fructose Glucose Saccharose Palatinose Trehalulose isomaltose Zorbax NH2 (4.6 x 250 mm) 70/30 Acetonitrile/Water mAU mL/min Detect=Refractive Index time Separations Injector Separation in based upon differential migration between the stationary and mobile phases Stationary Phase - the phase which remains fixed in the column, e.g C18, Silica Mixer Mobile Phase - carries the sample through the stationary phase as it moves through the column Pumps Column Detector Solvents Waste High Performance Liquid Chromatograph Separations Injector Mixer Chromatogram mAU Pumps Start Injection time Column Detector Solvents High Performance Liquid Chromatograph Separations Injector Mixer Chromatogram mAU Pumps Start Injection time Column Detector Solvents Separations Injector Mixer Chromatogram mAU Pumps Start Injection time Column Detector Solvents 10 127 3.4 Detector • Detector huỳnh quang: Rất nhạy, chọn lọc Dùng phân tích vết 128 128 • Ưu điểm: - Độ nhạy cao máy dò UV-Vis - Tính chọn lọc cao chất có huỳnh quang • Nhược điểm: - Khó đốn huỳnh quang - Bị ảnh hưởng lớn môi trường: Dung mơi, pH, nhiệt độ, độ nhớt, cường độ ion, khí tan 129 129 3.4 Detector Detector tán xạ bay hơi: Là detector vạn đ/ứng với chất ptích bay so với pha động sk lỏng 130 3.4 Detector Detector điện hóa: Phát chất ptích dựa vào độ dẫn điện pha động có mặt chất ptích ion dòng điện tạo thành p/ứ oxy hóa khử điện xác định Có loại: - Detector độ dẫn: Thích hợp sk ion, chất phân tích ion mang điện - Detector đo dòng: Loại nhạy nhất, điện cực dễ bị nhiễm bẩn 131 CÁC ĐẠI LƯỢNG ĐẶC TRƯNG 4.1 Hằng số cân K Là tỉ lệ phân bố pha tính sau: Với CS: nồng độ cấu tử pha tĩnh CM: nồng độ cấu tử pha động Hệ số K tùy thuộc vào chất pha tĩnh, pha động chất phân tích 132 CÁC ĐẠI LƯỢNG ĐẶC TRƯNG 4.2 Thời gian lưu tR : thời gian lưu cấu tử từ vào cột đến detector tO : thời gian chất khơng có lực với pha tĩnh qua cột; thời gian pha động từ đầu cột đến cuối cột (còn gọi thời gian lưu chết) tR' : thời gian lưu thật cấu tử. 133 CÁC ĐẠI LƯỢNG ĐẶC TRƯNG 4.3 Hệ số dung lương k’ Với VS : thể tích pha tĩnh VM : thể tích pha động Nếu k’~ 0, tR~ tM: chất nhanh, cột khơng có khả giữ chất lại Nếu k’ lớn (tR lớn): chất cột lâu, thời gian phân tích lâu, mũi có khả bị tù Khoảng k’ lý tưởng 2-5, phân tích hỗn hợp phức tạp, k’ chấp nhận từ 1-20 134 CÁC ĐẠI LƯỢNG ĐẶC TRƯNG 4.4 Số đĩa lý thuyết N đặc trưng cho khả tách mũi sắc ký cấu tử cột N lớn, hiệu tách cao Với: W1/2 chiều rộng mũi sắc ký vị trí ½ chiều cao mũi W: chiều rộng mũi sắc ký vị trí đáy mũi 135 CÁC ĐẠI LƯỢNG ĐẶC TRƯNG 4.5 Độ chọn lọc Đặc trưng cho khả tách hai chất cột Thông thường, α dao động 1,05-2 tốt Nếu α lớn thời gian chạy sắc ký kéo dài 136 CÁC ĐẠI LƯỢNG ĐẶC TRƯNG 4.6 Độ phân giải Là đại lượng biểu thị rõ ba khả cột sắc ký: giải hấp phụ, chọn lọc hiệu tách Nó xác định qua phương trình sau: 137 Bài Khi chạy sắc ký hỗn hợp chất A B thu thời gian lưu 10,8 phút 11,7 phút, chiều dài cột 40 cm Một chất không lưu giữ qua cột 1,7 phút Chiều rộng đáy pic A B tương ứng 1,51 phút 1,65 phút Tính: a Tính số đĩa trung bình? b Hệ số chọn lọc cho A B? c Độ phân giải? 138 Bài Dữ kiện sau thu sắc ký cột dài 40 cm Tên chất tR (phút) W1/2 (phút) Chất không lưu giữ 1,9 - A 10,1 0,77 B 10,4 0,83 C 13,5 1,07 Tính: a Số đĩa lý thuyết trung bình cột? b Chiều cao đĩa? c Độ phân giải giữa: B A, A C 139 140 141 ... loại HPLC: Sắc ký phân bố Sắc ký trao đổi ion Sắc ký lỏng gel Sắc ký hấp phụ (sắc ký lỏng rắn) Sắc ký lực Sắc ký đồng phân quang học 30 PHÂN LOẠI HPLC • Các loại HPLC: Sắc ký phân bố Sắc ký trao... (pha động) SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO • Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) đời năm 1967-1968 sở phát triển cải tiến từ PP sắc ký cột cổ điển • HPLC PP chia tách pha động chất lỏng pha tĩnh...SẮC KÝ MỤC TIÊU HỌC TẬP Giải thích nguyên tắc hoạt động máy HPLC Trình bày cấu tạo máy HPLC Mô tả kỹ thuật HPLC: sắc ký phân bố, sắc ký hấp thụ, sắc ký trao đổi ion, sắc ký gel, sắc ký lực sắc