BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC     KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP TUYỂN CHỌN BỘ GIỐNG NẤM MEN CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP ENZYME AMYLASE, CELLULASE VÀ KHÁNG KHUẨN TỪ CÁC MẪU NƯỚC THẢI THU THẬP ĐƯỢC TRONG KHU VỰC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Ngành học : CƠNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : DƯƠNG MINH THÙY UYÊN Niên khóa : 2008 – 2012 Tháng 07/2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP TUYỂN CHỌN BỘ GIỐNG NẤM MEN CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP ENZYME AMYLASE, CELLULASE VÀ KHÁNG KHUẨN TỪ CÁC MẪU NƯỚC THẢI THU THẬP ĐƯỢC TRONG KHU VỰC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực KS TRẦN THỊ QUỲNH DIỆP DƯƠNG MINH THÙY UN PGS.TS LÊ ĐÌNH ĐƠN Tháng 07/2012 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, xin chân thành cảm ơn PGS.TS Lê Đình Đơn KS.Trần Thị Quỳnh Diệp trực tiếp hướng dẫn, hết lòng giúp đỡ, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm để em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Xin bày tỏ lòng biết ơn đến Ban giám hiệu Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ Mơn Cơng Nghệ Sinh Học, Thầy Cơ ngồi trường truyền đạt kiến thức quý báu tạo điều kiện thuận lợi cho em thời gian học tập trường Cảm ơn Ban giám đốc, Thầy Cô, Anh Chị thuộc Viện Nghiên Cứu Công Nghệ Sinh Học Và Môi Trường tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian thực khóa luận Xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Cha Mẹ nuôi nấng, dạy bảo trưởng thành ngày hôm nay, người thân gia đình tạo điều kiện động viên suốt q trình học tập trường, ln điểm tựa để vực dậy sau lần vấp ngã, động lực để sống, học tập phấn đấu Cuối cùng, không quên gửi lời cảm ơn đến bạn bè lớp DH08SH giúp đỡ chia khó khăn với tơi suốt năm học thời gian thực đề tài Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 07 năm 2012 Sinh viên Dương Minh Thùy Uyên i TÓM TẮT Nhu cầu sử dụng nước nhu cầu cấp thiết giới.Tuy nhiên, nguồn nước bị ô nhiễm nặng.Vấn đề nghiêm trọng nước phát triển Việt Nam.Xu ngày sử dụng biện pháp sinh học để xử lý nước thải.Nấm men có nhiều lợi ích, sử dụng rộng rãi có nhiều ứng dụng, công nghiệp sản xuất, y học, nghiên cứu Đề tài “Tuyển chọn giống nấm men có khả sinh tổng hợp enzyme amylase, cellulase kháng khuẩn từ mẫu nước thải thu thập khu vực thành phố Hồ Chí Minh” thực viên nghiên cứu công nghệ sinh học môi trường trường Đại học Nơng Lâm thành phố Hồ Chí Minh Trong nghiên cứu này, tiến hành phân lập chủng nấm men có số mẫu nước thải thuộc khu vực thành phố Hồ Chí Minh, quan sát hình thái tế bào, từ khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme amylase cellulase, khảo sát khả kháng hai chủng vi khuẩn E coli Salmonella chủng nấm men điều kiện nhiệt độ, pH, ánh sáng đồng Kết phân lậpđược 27 chủng nấm men có hình dạng khuẩn lạc đặc trưng nấm men Xác định đượcchủng nấm men có khả sinh enzyme cellulase chủng 5.3 phận lập từ mẫu nước thải ởQuận sinh amylase mạnh chủng 10.4 phân lập từ mẫu nước thải trại nuôi Heo trường Đại học Nông Lâm TP.HCM Xác định khả kháng với chủng vi khuẩn E coli Salmonella chủng nấm men phân lập Chủng kháng mạnh với vi khuẩn E coli chủng 6.3 phân lập từ mẫu nước thải Quận với đường kính vòng kháng 20,667 mm Chủng kháng mạnh với Salmonella chủng 6.3 với đường kính vòng kháng 35,5 mm ii SUMMARY Clean water are urgent need in the world However, water is heavily polluted This problem is more serious in developing countries like Vietnam Nowadays biological agents are widely used in wastewater treatment Among those, Yeast have a lot of benefits, is widely used in many applications in industry, medicine and research The thesis entitled “Selected yeast strains capable of synthesizing enzyme amylase, cellulase and antimicrobial from waste water samples collected in the areas of Ho Chi Minh city” was performed at Research institute for biotechnology and environment, Nong Lam University In this study, yeast strains in wastewater collected from areas of Ho Chi Minh city were isolated.To observe cell morphology, which at the possibility of amylaseand cellulasesynthesizing;to surveyE coli and Salmonellaresistant of the yeast strains in the conditions of temperature, pH, light uniformity Twenty seven 27 yeast strains were isolated, which form colonies with yeast characteristics Among those, yeast strain 5.3 had the highest ability to synthesize cellulase enzymes while yeaststrain 10.4 was capable of synthesize amylase enzyme the most effectively Besides, determination of resistance with two strains E coli and Salmonella of isolated yeast strains was also performed The strongest resistant strains with E coli is strains 6.3 with diameters resistance is 20.667 mm The strongest resistant strains with Salmonellais strains 6.3 with diameters resistance is 35.5 mm iii MỤC LỤC   Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii SUMMARY iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỨ VIẾT TẮT vii DANH SÁCH CÁC BẢNG viii DANH SÁCH CÁC HÌNH ix Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Nội dung thực Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 2.1 Nước thải 2.1.1 Khái niệm phân loại nước thải 2.1.1.1 Nước thải sinh hoạt 2.1.1.2 Nước thải công nghiệp (hay nước thải sản xuất) 2.1.1.3 Nước thải tự nhiên 2.1.1.4 Nước thải đô thị 2.1.2 Thành phần lý hóa học nước thải 2.1.2.1 Tính chất vật lý 2.1.2.2 Tính chất hóa học 2.1.3 Các thông số đánh giá ô nhiễm nước .6 2.2 Nấm men 2.2.1 Đặc điểm chung nấm men 2.2.2 Dinh dưỡng nấm men 10 2.2.2.1 Nguồn dinh dưỡng cacbon .11 iv 2.2.2.2 Nguồn dinh dưỡng ni-tơ 11 2.2.2.3 Nguồn dinh dưỡng nguyên tố vô 11 2.2.2.4 Nguồn dinh dưỡng chất sinh trưởng 12 2.2.3 Các hình thức sinh sản nấm men 12 2.2.3.1 Sinh sản vơ tính 12 2.2.3.2 Sinh sản hữu tính .13 2.2.4 Sinh trưởng nấm men 14 2.3 Hệ enzyme amylase cellulase .16 2.3.1 Hệ enzyme amylase 16 2.3.2 Hệ enzyme cellulase .17 2.4 Sơ lược Escherichia coli, Samonella .18 2.4.1 Vi khuẩn Escherichia coli 18 2.4.2 Vi khuẩn Salmonella 19 2.5 Tình hình nghiên cứu nấm men nước 19 2.5.1 Tình hình nghiên cứu nước 19 2.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 20 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 22 3.1 Thời gian địa điểm 22 3.2 Vật liệu, dụng cụ, thiết bị hóa chất 22 3.2.1 Mẫu phân lập .22 3.2.2 Dụng cụ thiết bị .22 3.2.3 Hóa chất 22 3.3 Phương pháp nghiên cứu 23 3.3.1 Phân lập chọn lọc vi khuẩn 23 3.3.1.1 Thu nhận bảo quản 23 3.3.1.2 Phân lập vi khuẩn 23 3.3.1.3 Chọn lọc làm 24 3.3.1.4Bảo quản giống vi khuẩn 24 3.3.2 Quan sát tế bào nấm men 24 3.3.3 Thử nghiệm khả lên men đường 24 3.3.4 Phương pháp khảo sát khả sinh enzyme cellulase phân giải CMC .24 3.3.5 Phương pháp khảo sát khả sinh enzyme amylase phân giải tinh bột 25 v 3.3.6 Xác định hoạt tính kháng khuẩn nấm men 25 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Kết phân lập làm .27 4.2 Kết quan sát hình thái tế bào chủng nấm men phân lập 29 4.3 Kết phản ứng lên men đường chủng nấm men 31 4.4 Kết khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme amylase cellulose 33 4.4.1 Kết khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme cellulase 33 4.4.2 Kết khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme amylase 34 4.5 Kết khảo sát khả kháng với hai chủng vi khuẩn E coli Salmonella 36 4.5.1 Kết khảo sát khả kháng vi khuẩn E coli .36 4.5.2 Kết khảo sát khả kháng vi khuẩn Salmonella .37 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 39 5.1 Kết luận 39 5.2 Đề nghị 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO .40 PHỤ LỤC vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT COD chemical oxygen demand BOD biochemical oxygen demand N ni-tơ P photpho TS total solid SS suspended solids DS dissolved solid DO dessoved oxygen PRC phenol red cacbohydrate vii DANH SÁCH CÁC BẢNG   Bảng Nhu cầu cấp nước lượng nước thải số ngành công nghiệp .4 Bảng Kí hiệu mẫu, loại mẫu nơi lấy mẫu 22 Bảng Mật số nấm men mẫu nước thải phân lập 27 Bảng Đặc điểm phát triển khuẩn lạc chủng nấm men phân lập 28 Bảng Đặc điểm hình thái tế bào chủng nấm men phân lập .30 Bảng 4 Kết lên men đường chủng nấm men sau 48 nuôi cấy .32 Bảng Kết đường kính vòng phân giải enzyme amylase phân giải chất tinh bột môi trường sau ngày nuôi cấy 35 viii Bảng 4.4Kết lên men đường chủng nấm men sau 48 nuôi cấy Ký hiệu chủng Glucose Lactose Maltose Saccharose 1.2 ++ + + + 1.3 ++ - ++ - 1.4 ++ + + + 1.5 ++ + - ++ 2.1 ++ ++ + ++ 2.2 ++ ++ + ++ 2.3 ++ + + + + ++ + + 4.1 ++ ++ ++ - 4.2 + ++ + + 4.3 ++ + ++ + 4.4 ++ + - + 4.5 ++ ++ - ++ 5.3 ++ + ++ - 5.2.1 + ++ ++ ++ 5.2.3 + - ++ - 6.3 ++ ++ - + 6.4 ++ + ++ + 7.3 ++ ++ ++ ++ 8.1 - ++ + + 8.2 ++ ++ ++ ++ 8.3 + ++ ++ + 9.1 ++ ++ ++ ++ 9.3 ++ ++ ++ ++ 10.1 ++ - - - 10.3 + + + + 10.4 ++ + - - (-) âm tính; (+) lên men yếu; (++) dương tính 32 Hình 4.3Kết lên men đường glucose chủng nấm men.ĐC.Đối chứng âm; chủng 9.1, 2.2, 2.3, 10.4, 8.2 lên men đườngglucose mạnh.Các chủng 5.2.3, 5.2.1 lên men đường glucose yếu 4.4 Kết khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme amylase cellulose chủng nấm men phân lập 4.4.1 Kết khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme cellulase 47,3 đường kính vòng phân giải CMC 40,5 45 32,8 40 35 30 25 13,0 5,0 10 0,0 0,0 10 0,0 2,7 0,0 8,2 8,5 9,0 1,0 2,3 0,0 0,0 0,0 1,0 0,0 0,0 3,5 0,0 1 0,0 10 9,5 15 14,5 20 1,0 đườngkínhvòngphângiải CMC(mm) 50 ký hiệu chủng Hình 4.4Kết đường kính vòng phân giải enzyme cellulase chủng nấm men Tiến hành nuôi cấy chủng nấm men phân lập môi trường cảm ứng sinh tổng hợp cellulase với chất CMC.Sau ngày nuôi cấy, đo đường kính vòng phân giải enzyme cellulase khơng bắt màu với thuốc thử Lugol.Kết thể hình 4.4 33 a) b) Hình 4.5Đường kính vòng phân giải enzyme cellulase chủng nấm men.a) Chủng 4.4; b) Chủng 5.2.3 Kết cho thấy đa số chủng nấm men sinh tổng hợp enzyme cellulase phân giải chất CMC có mơi trường ni cấy yếu.Các chủng nấm men sinh enzyme không cao, có chủng sinh enzyme cellulase mạnh 10.4; 5.3; 5.2.3 Trong đó, chủng có đường kính vòng phân giải enzyme cellulase mạnh 5.3 với đường kính vòng phân giải 47,3 mm Các chủng sinh enzyme cellulase yếu 1.3; 4.5 (đường kính vòng phân giải mm), số chủng không sinh enzyme cellulase phân giải chất CMC 1.4; 1.5; 2.2; 2.3; 4.1; 4.2; 4.3; 6.4; 8.2; 9.3; 10.1 4.4.2 Kết khảo sát khả sinh tổng hợp enzyme amylase chủng nấm men phân lập Tiến hành nuôi cấy chủng nấm men phân lập môi trường cảm ứng sinh tổng hợp amylase với chất tinh bột Sau ngày ni cấy, tiến hành đo đường kính vòng phân giải enzyme không bắt màu với thuốc thử Lugol Kết thể qua bảng 4.5 Kết từ bảng cho thấy, tất chủng nấm men khơng có khả sinh tổng hợp enzyme amylase, trừ chủng 10.4 có khả sinh enzyme amylase phân giải tinh bột chủng sinh enzyme mạnh với đường kính vòng phân giải 25,167 mm 34 Bảng 4.5Kết đường kính vòng phân giải enzyme amylase phân giải chất tinh bột môi trường sau ngày ni cấy Ký Đường kính Ký Đường kính vòng Ký Đường kính hiệu vòng phân giải hiệu phân giải enzyme hiệu vòng phân giải chủng enzyme (mm) chủng (mm) chủng enzyme (mm) 1.2 4.2 7.3 1.3 4.3 8.1 1.4 4.4 8.2 1.5 4.5 8.3 2.1 5.3 9.1 2.2 5.2.1 9.3 2.3 5.2.3 10.1 6.3 10.3 4.1 6.4 10.4 25,167 So sánh hai kết thí nghiệm đường kính vòng phân giải enzyme amylase enzyme cellulase, chủng nấm men phân lập có khả sinh tổng hợp enzyme amylase yếu enzyme Cellulase Như 27 chủng nấm men, chủng 10.4 có khả sinh tổng hợp enzyme amylase cellulase mạnh với đường kính vòng phân giải lớn a) b) Hình 4.6Vòng phân giải enzyme amylase chủng nấm men.a) khơng có vòng phân giải enzyme;b) vòng phân giải chủng 10.4 35 4.5 Kết khảo sát khả kháng với hai chủng vi khuẩn E coli Salmonellacủa chủng nấm men phân lập 4.5.1 Kết khảo sát khả kháng vi khuẩn E coli chủng nấm men phân lập 25 20 15 10 10 .1 10 4 1 2 đ n g k ín h v ò n g k h n g k h u ẩ n (m m ) đường kính vòng kháng khuẩn ký hiệu chủng Hình 4.7Đường kính vòng kháng vi khuẩn E coli chủng nấm men Tiến hành nuôi cấy vi khuẩn E coli môi trường Nutrient Agar cấy trang, để khô giờ, tiến hành đặt vòng giấy thấm hấp khử trùng có đường kính 10 mm vào đĩa hút 20 µl dịch nấm men cấy lên giấy thấm Tiến hành cấy có nước cất hấp khử trùng đối chứng Sau ủ 48 giờ, quan sát thấy vòng kháng khuẩn đo đường kính vòng kháng khuẩn chủng nấm men với E coli Kết thể qua hình 4.7 b) a) Hình 4.8Khả kháng với vi khuẩn E.coli chủng nấm men.a) kháng với vi khuẩn E.coli; b) không kháng với vi khuẩn E coli 36 Qua hình 4.7 cho thấy, đa số chủng nấm men có khả kháng vi khuẩn E coli Một số chủng có khả kháng mạnh với E coli chủng 5.3; 5.2.1; 6.3 Đặc biệt, chủng 6.3 kháng mạnh rõ với đường kính vòng kháng khuẩn 20,667 mm Ngồi có nhiều chủng khơng có khả kháng vi khuẩn E coli chủng 1.2; 1.5; 2.1; 2.3; 4.1; 8.1 4.5.2 Kết khảo sát khả kháng vi khuẩn Salmonella chủng nấm men phân lập Tiến hành nuôi cấy vi khuẩn Salmonellatrên môi trường Nutrient Agar cấy trang, để khô giờ, tiến hành đặt vòng giấy thấm hấp khử trùng có đường kính 10 mm vào đĩa hút 20 µl dịch nấm men cấy lên giấy thấm Sau ủ 48 giờ, quan sát thấy vòng kháng khuẩn đo đường kính vòng kháng khuẩn chủng nấm men với Salmonella Kết đường kính vòng kháng khuẩn đo có chênh lệch khơng cao chủng có khả kháng với vi khuẩn Salmonella, thể qua hình 4.9 đường kính vòng kháng khuẩn đường kính vòng kháng khuẩn (mm) 40 35 30 25 20 15 10 10 10 5 4 1 ký hiệu chủng Hình 4.9Đường kính vòng kháng với vi khuẩn Salmonella chủng nấm men phân lập Các chủng nấm men Salmonella cấy môi trường nutrient agar với mật số tế bào kết thể hình 4.9 cho thấy tất chủng nấm men có khả kháng vi khuẩn Salmonella Trong đó, số chủng có khả kháng yếu, tạo vòng kháng khuẩn khơng rõ rệt chủng 1.5; 4.1; 8.1; 37 9.1 với đường kính vòng kháng khuẩn từ 10,333 – 10,833 mm, số chủng có khả kháng vi khuẩn Salmonella mạnh, tạo vòng kháng khuẩn rõ rệt chủng 5.2.3; 6.3 Trong đó, chủng có có vòng kháng khuẩn lớn chủng 6.3 với đường kính vòng kháng 35,5 mm Một số chủng có vòng kháng khuẩn tương đồng nhau, chênh lệch không lớn dao động từ 11 – 16,333 mm So sánh kết hình 4.7 4.9 thấy, đa số đường kính vòng phân giải nấm men E.coli nhỏ đường kính vòng phân giải nấm men Salmonella Như vậy, chủng nấm men có khả kháng mạnh với Salmonella E.coli Qua đó, ta biết khả đề kháng với pH môi trường enzyme nấm men sinh Salmonella E coli, nên vòng kháng tương đối lớn Các chủngvi khuẩn chủng có khả sinh trưởng nhanh, mạnh, chúng dễ dàng phân hủy thực phẩm tạo hợp chất nito có mùi khó chịu Tính kháng khuẩn chủng nấm men tạo điều kiện sử dụng chúng để tạo số sản phẩm có khả chống lại vi khuẩn gây bệnh đường ruột, bổ trợ cho việc sản suất chế phẩm sinh học Hình 4.10Khả kháng với vi khuẩn Salmonella chủng nấm men 6.3 Dựa kết thí nghiệm thấy, nấm men diện nhiều loại nước thải.Chúng phát triển tốt có khả sinh số enzyme ngoại bào, kháng khuẩn, đồng hóa tốt loại đường axit hữu cơ.Có thể sử dụng chủng nấm men để xử lý nước thải giàu chất hữu cơ, chúng đồng hóa tốt thành phần hữu làm tăng pH nước thải tạo điều kiện thuận lợi cho vi sinh vật hữu ích khác phát triển làm môi trường nước 38 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Qua trình phân lập quan sát hình thái tế bào, thu thập 27 chủng nấm men từ mẫu nước thải Trong 27 chủng nấm men,có 26 chủng có khả lên men đường glucose chủng 8.1 khơng có khả lên men đường glucose Có chủng nấm men không lên men đường lactose chủng 1.3; 5.2.3; 10.1.Có chủng khơng lên men đường maltose chủng 1.5; 4.4; 4.5; 6.3; 10.1; 10.4.Đối với đường saccharose có chủng nấm men khơng lên men chủng 1.3; 4.1; 5.3; 5.2.3; 10.1; 10.4 Kết khảo sát khả phân giải tinh bột, có chủng 10.4 phân lập mẫu nước thải trại nuôi heo trường Đại học Nông Lâm TP.HCM có khả sinh enzyme amylase mạnh với đường kính vòng phân giải 25,167 mm Khảo sát khả sinh enzyme cellulase phân giải chất CMC, có chủng 5.3 phân lập mẫu nước thải kênh Hoàng Sa, Quận sinh enzyme Cellulase mạnh với đường kính vòng phân giải 47,3 mm Có 21 chủng nấm men có khả kháng vi khuẩn E coli Các chủng nấm men không kháng E coli chủng 1.2; 1.5; 2.1; 2.3; 4.1; 8.1 Trong đó, có chủng 6.3 phân lập mẫu nước thải kênh Hồng Sa, Quận có khả kháng khuẩn E coli mạnh Tất 27 chủng nấm men có khả kháng lại vi khuẩn Salmonella Với khả sinh hệ enzyme kháng khuẩn mạnh, sử dụng chủng việc tạo chế phẩm sinh học phục vụ cho đời sống người 5.2 Đề nghị Khảo sát khả phân giải ni-tơ, lưu huỳnh nấm men Sử dụng kỹ thuật sinh học phân tử để xác định xác lồi nấm men Thử hoạt tính xác định hàm lượng enzyme thông dụng nấm men sinh để sử dụng sản xuất số chế phẩm sinh học phục vụ cho nông, ngư nghiệp 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Ðức Lượng 2002 Thí nghiệm vi sinh vật học tập 2, NXB đại học Quốc Gia TP.HCM Nguyễn Ngọc Hải 2009 Thực hành nghiên cứu vi sinh vật, NXB nông nghiệp TP.HCM Nguyễn Ðức Lượng Nguyễn Thị Thùy Dương 2003 Công nghệ xử lý nước thải tập Nhà xuất Ðại học Quốc Gia TP.HCM Trần Văn Nhân Ngơ Thị Hoa 2006 Giáo trình cơng nghệ xử lý nước thải Nhà xuất khoa học kỹ thuật Nguyễn Phùng Tiến 2007.Vi sinh vật thực phẩm, tập NXB Y học Hà Nội Lương Ðức Phẩm 2006 Nấm men công nghiệp Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội Nguyễn Như Thanh Vi sinh vật học đại cương NXB Nông Nghiệp Hà Nội Lương Đức Phẩm 2002 Công nghệ xử lý nước thải biện pháp sinh học Nhà xuất giáo dục Việt Nam Trần Đức Hạ.2006 Xử lý nước thải đô thị Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội 10 Vương Thị Hồng Vi.2007 Khảo sát sinh trưởng Saccharomyces sp môi trường cám gạo, rỉ đường số yếu tố ảnh hưởng đến sức sống chúng thực phẩm Khóa luận tốt nghiệp Cơng Nghệ Sinh Học, Ðại học Nông Lâm TP.HCM 11 Nguyễn Thị Thu Hằng 2008 Khảo sát ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng số yếu tố lên phát triển nấm men Saccharomyces Cerevisiae Saccharomyces Boulardii Khóa luận tốt nghiệp Cơng Nghệ Sinh Học, Ðại học Nông Lâm TP.HCM 12 Nguyễn Hữu Nghĩa 2010 Phân lập, chọn lọc khảo sát tính kháng khuẩn, sinh acid lactocillus sp Ðại học Nông Lâm TP.HCM 13 Nguyễn Tiến Dũng.2007 Kiểm nghiệm vi sinh thực phẩm Đại học quốc gia TP.HCM 14 Trần Thị Quỳnh Diệp 2008 Khảo sát khả tổng hợp hệ enzyme amylase, ßglucanase, chitinase yếu tố ảnh hưởng đến enzyme amylase chủng Trichoderma sp Khóa luận tốt nghiệp Công Nghệ Sinh Học trường Đại học Nông Lâm TP.HCM 15 Ban quản lý dựán chuyên gia Việt Nam 2010 Quy trình lấy mẫu áp dụng cho mơ hình thí điểm chăn ni, giết mổ bán buôn thịt gà Dự án xây dựng kiểm sốt chất lượng nơng sản thực phẩm 16 Ngơ Thị Phương Dung 2009 Khảo sát khả lên men tính chịu cồn nấm men Viện nghiên cứu phát triển công nghệ sinh học trường đại học Cần Thơ Tạp chí khoa học 2009:11 374 – 382 40 17 Nguyễn Minh Thùy Nguyễn Văn Thành bùi Thị Thúy Ngân, 2011 Tuyển chọn dòng nấm men phân lập từ nước nốt Đại học cần thơ Tạp chí khoa học 2011: 18b 117 – 126 Tài liệu tiếng Anh 18 Oslan SN, Salleh AB, Rahman RN, Basri M, Chor AL 2012 Locally isolated yeasts from Malaysia: Identification, phylogenetic study and characterization 19 Nishiuchi H, tabira Y, Yamagishi K 2012 A combination of flow cytometry and traditional screening using chemicals to isolate high glutathione-producing yeast mutants 20 Gupta A, Vongsvivut J, Barrow CJ, Puri M 2012.Molecular identification of marine yeast and its spectroscopi analysis astablishes unsaturated fatty acid accumulation 21 Mu Z, Yang Y, Yuan H 2012 Detection and identification of wild yeasts in Koumiss 22 Ge YP, Boekhout T, Zhan P, Shen YN, Li M, Shao HF, Liu WD 2012 Characterization of the Candida parapsilosis complex in East Chine: species distribution differs among cities Tài liệu từ internet 23 http://www.ctu.edu.vn/colleges/tech/bomon/ttktmoitruong/daotao/giao%20trinh%2 0dien%20tu/xlnt/wasterwatercom.htm (truy cập 13/1/2012) 24 http://greenlifecom.com/index.php?option=com_content&view=article&id=51&Ite mid=68&lang=vi (truy cập 13/1/2012) 25 http://www.baomoi.com/Bat-qua-tang-nha-may-xu-ly-nuoc-thai-KCN-LongThanh-dau-doc-song-Dong-Nai/58/6753560.epi (truy cập 27/2/2012) 26 http://science.marshall.edu/murraye/alpha_amylase.htm (truy cập 15/7/2012) 27 http://hoahocngaynay.com/vi/tin-tuc-hoa-hoc/cong-nghe-moi/1389-29072011.html (truy cập 15/7/2012) 28 http://songvuisongkhoe.blogspot.com/2008/06/ng-c-thc-phm-vi-khun-salmonella-lg.html (truy cập 15/7/2012) 29 http://s4.zetaboards.com/BioFood_Tech/topic/9374593/1/ (truy cập 16/7/2012) 30 http://www.thucphamantoanviet.vn/san-xuat-va-buon-ban/rau-qua-va-che/giaoduc-va-111ao-tao/bai_8_b-_lay_mau_nuoc.ppt (truy cập 26/3/2012) 31 www.NCBI.nlm.nlh.gov (truy cập 15/2/2012) 41 PHỤ LỤC   Phụ lục 1.Thành phần môi trường thuốc nhuộm Môi trường Hansen Thành phần Khối lượng Peptone 10 Glucose 50 KH2PO4 MgSO4 Agar 20 Nước cất lít Mơi trường peptone Thành phần Khối lượng Peptone 10 NaH2PO4 KH2PO4 1,5 NaCl Nước cất lít Nước muối sinh lý Thành phần Peptone Khối lượng 1g NaCl 8,5 g Nước cất lít Mơi trường sinh tổng hợp enzyme (môi trường Hans) Thành phần Khối Thành phần Khối lượng lượng KH2PO4 0,5 g Cao nấm men 0,1 g K2HPO4 0,5 g Cellulose 10 g MgSO4.7 H2O 0,1 g agar 15 g Nước cất lít (NH4)SO4 1g CaCl2 0,1 g NaCl 6g pH   Thuốc nhuộm blue methylene Dung dịch A: Xanh methylene Ethanol 95% 0,3 g 30 ml Dung dịch B: KOH loãng (0,01%(w/v))100 ml Trộn A B lại với Môi trường PRC Peptone 10 g NaCl 5g Cao thịt bò 1g Phenol red 0,018 g Carbon 10 g Nước cất lít   Thuốc thử Lugol: hòa tan2 g KI 300 ml nước cất, bổ sung g iot vào, lắc đun sơi đến hòa tan hết dung dịch đồng Phụ lục 2.Các kết xử lý số liệu 2.1.Bảng Anova xử lí số liệu đường kính vòng kháng khuẩn Salmonella chủng nấm men A N A L Y S I SO FV A R I A N C ET A B L E Degrees ofSum ofMean FreedomSquares SquareF-valueProb -Between261872.37772.01477.2610.0000 Within54 50.3330.932 -Total801922.710 Coefficient of Variation = 6.61% 2.2Bảng Anova xử lí số liệu đường kính vòng kháng khuẩn Ecoli chủng nấm men  A N A L Y S I SO FV A R I A N C ET A B L E Degrees ofSum ofMean FreedomSquares SquareF-valueProb -Between26621.83423.91725.2150.0000 Within54 51.2200.949 -Total80673.054 Coefficient of Variation = 7.72% 2.3Bảng Anova xử lí số liệu đường kính vòng phân giải enzyme cellulase chất CMC A N A L Y S I SO FV A R I A N C ET A B L E Degrees ofSum ofMean FreedomSquares SquareF-valueProb -Between159615.411 641.027 984.6180.0000 Within32 20.8330.651 -Total479636.245 Coefficient of Variation = 6.46%   2.4Kết đường kính vòng phân giải enzyme cellulase phân giải chất CMC sau ngày nuôi cấy Ký hiệu chủng Đường kính vòng phân giải enzyme (mm) Ký hiệu chủng Đường kính vòng phân giải enzyme (mm) Ký hiệu chủng Đường kính vòng phân giải enzyme (mm) 1.2 9,5 ± 0,50 4.2 7.3 13 ± 0,87 1.3 ± 0,00 4.3 8.1 2,667 ± 0,76 1.4 4.4 2,333 ± 0,29 8.2 1.5 4.5 ± 0,00 8.3 8,167± 1,04 2.1 3,5 ± 1,00 5.3 47,333 ± 1,04 9.1 14,5 ± 0,5 2.2 5.2.1 ± 1,00 9.3 2.3 5.2.3 40,5 ± 1,00 10.1 ± 0,00 6.3 8,5 ± 0,87 10.3 ± 0,5 4.1 6.4 10.4 32,833 ± 1,53 Cv % 6,46% 2.5Kết đường kính vòng kháng với vi khuẩn E.coli chủng nấm men Ký hiệu chủng Đường kính vòng kháng khuẩn (mm) Ký hiệu chủng Đường kính vòng kháng khuẩn (mm) Ký hiệu chủng Đường kính vòng kháng khuẩn (mm) 1.2 10,000 ± 0,00 4.2 10,833 ± 1,04 7.3 10,333 ± 0,58 1.3 11,833 ± 1,04 4.3 14,333 ± 0,76 8.1 10,000 ± 0,00 1.4 12,167 ± 0,58 4.4 11,333 ± 0,58 8.2 13,167 ± 0,76 1.5 10,000 ± 0,00 4.5 11,767 ± 0,64 8.3 11,800 ± 1,32 2.1 10,000 ± 0,00 5.3 18,000 ± 1,32 9.1 10,333 ± 0,58 2.2 15,333 ± 1,04 5.2.1 18,000 ± 1,80 9.3 14,667 ± 1,26 2.3 10,000 ± 0,00 5.2.3 14,167 ± 1,15 10.1 12,500 ± 0,50 13,000 ± 0,50 6.3 20,667 ± 1,61 10.3 12,200 ± 0,53 4.1 10,000 ± 0,00 6.4 14,167 ± 2,52 10.4 10,167 ± 0,29 CV%   7,72%   2.6Kết đường kính vòng kháng với vi khuẩn Salmonella chủng nấm men phân lập Ký hiệu chủng 1.2 1.3 1.4 1.5 2.1 2.2 2.3 4.1 CV %   Đường kính vòng kháng khuẩn (mm) 14,500 ± 1,50 15,833 ± 0,76 12,167 ± 0,58 10,833 ± 0,29 13,167 ± 0,75 12,000 ± 0,50 12,167 ± 0,29 14,000 ± 0,50 10,333 ± 0,29 Đường kính vòng Ký Đường kính vòng Ký kháng khuẩn hiệu kháng khuẩn hiệu (mm) chủng (mm) chủng 4.2 15,667 ± 0,58 7.3 11,000 ± 0,00 4.3 15,500 ± 1,32 8.1 10,667 ± 0,58 4.4 13,833 ± 0,29 8.2 16,333 ± 1,26 4.5 11,167 ± 0,29 8.3 13,167 ± 1,26 5.3 14,833 ± 0,29 9.1 10,667 ± 0,58 5.2.1 16,333 ± 1,26 9.3 15,500 ± 0,87 5.2.3 22,167 ± 1,26 10.1 15,167 ± 1,04 6.3 35,500 ± 2,29 10.3 12,167 ± 1,04 6.4 13,833 ± 0,76 10.4 15,667 ± 0,76 6,61% ... CÁC MẪU NƯỚC THẢI THU THẬP ĐƯỢC TRONG KHU VỰC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực KS TRẦN THỊ QUỲNH DIỆP DƯƠNG MINH THÙY UYÊN PGS.TS LÊ ĐÌNH ĐÔN Tháng 07/2012 LỜI CẢM ƠN Trước... giúp đỡ chia khó khăn với suốt năm học thời gian thực đề tài Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 07 năm 2012 Sinh viên Dương Minh Thùy Uyên i TÓM TẮT Nhu cầu sử dụng nước nhu cầu cấp thiết giới.Tuy nhiên,... mẫu nước thải thu thập khu vực thành phố Hồ Chí Minh thực viên nghiên cứu công nghệ sinh học môi trường trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh Trong nghiên cứu này, tiến hành phân lập chủng