1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ NGUYỄN THỊ HẢI NGHIÊN CỨU NGUỒN TÀI NGUYÊN CÂY THUỐC NHẰM ĐỀ XUẤT GIẢI PHÁP BẢO TỒN VÀ SỬ DỤNG BỀN VỮNG MỘT SỐ LỒI CĨ GIÁ TRỊ Ở KHU BẢO TỒN THIÊN NHIÊN NA HANG, TỈNH TUYÊN QUANG TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Chuyên ngành: Thực vật học Mã số: 9.42.01.11 Hà Nội – 2018 Luận án hoàn thành Học viện Khoa học Công nghệ Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học: 1 PGS TS Trần Huy Thái PGS TS Nguyễn Tiến Đạt PGS TS Trần Huy Thái PGS TS Nguyễn Tiến Đạt Người phản biện 1: Người phản biện 2: Người phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án tiến sĩ cấp Học viện, họp … , nhà Học viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi …giờ, ngày tháng năm 201… Có thể tìm hiểu luận án tại, Thư viện Quốc gia Việt Nam, Thư viện Học viện Khoa học Công nghệ MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Khu Bảo tồn thiên nhiên (BTTN) Na Hang thành lập theo Quyết định 274/UB-QĐ ngày tháng năm 1994 Uỷ ban nhân dân tỉnh Tuyên Quang Tại có khoảng 68% diện tích rừng ẩm nhiệt đới Trong đó, khoảng 70% rừng núi đá vơi, số cịn lại vùng rừng thường xanh đai thấp Đến năm 2006, Nguyễn Nghĩa Thìn cộng xác định, thống kê khu BTTN Na Hang có 1.162 lồi thực vật, nhiều lồi ghi Sách Đỏ Việt Nam (2007) như: Trai (Garcinia fragraeoides), Nghiến (Excentrodendron tonkinense), Lát hoa (Chukrasia tabularis), Đinh (Markhamia stipulata)… Ngoài kết nghiên cứu số tác giả Viện Điều tra qui hoạch rừng, Chương trình Birdlife international; Nguyễn Nghĩa Thìn Đặng Quyết Chiến (2006); Nguyễn Anh Tuấn cộng (2012); đến nay, chưa có cơng trình nghiên cứu tổng thể tài nguyên thuốc, đặc biệt loài có triển vọng khu BTTN Na Hang Mặt khác, nguồn tài nguyên thuốc khu BTTN Na Hang ngày khan hiếm, số lồi q có nguy tuyệt chủng khai thác bừa bãi, thiếu kế hoạch Tiềm năng, triển vọng nguồn tài nguyên thuốc vốn tri thức địa dân tộc khu BTTN Na Hang phong phú đa dạng; song nghiên cứu chúng chưa đầy đủ Vì thế, nghiên cứu sở khoa học để bảo tồn, phục hồi sử dụng bền vững tính đa dạng loài thuốc khu BTTN Na Hang, tỉnh Tuyên Quang vấn đề thời sự, mang tính cấp thiết, có ý nghĩa khoa học giá trị kinh tế, xã hội cao Từ thực tiễn trên, tác giả tiến hành đề tài “Nghiên cứu nguồn tài nguyên thuốc nhằm đề xuất giải pháp bảo tồn sử dụng bền vững số lồi có giá trị khu Bảo tồn thiên nhiên Na Hang, tỉnh Tuyên Quang" Mục tiêu luận án Nghiên cứu, đánh giá trạng nguồn tài nguyên thuốc khu BTTN Na Hang, tỉnh Tuyên Quang, nhằm đề xuất giải pháp bảo tồn phát triển bền vững số lồi có triển vọng Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án * Ý nghĩa khoa học: Nghiên cứu, đánh giá trạng nguồn tài nguyên thuốc khu BTTN Na Hang; Đề xuất số giải pháp bảo tồn số lồi thuốc có giá trị khoa học kinh tế * Ý nghĩa thực tiễn: Kết đề tài sở khoa học cho quan quản lý, sản xuất, kinh doanh hoạch định sách phát triển, đầu tư sản xuất, tạo nguồn nguyên liệu dược ổn định sử dụng bền vững, đồng thời bảo tồn có hiệu lồi có giá trị tiềm năng; kết nghiên cứu sàng lọc lồi có hoạt chất sinh học, nhằm góp phần định hướng cho việc tạo chế phẩm sinh học làm thuốc Bố cục luận án Luận án gồm 146 trang: Mở đầu - 02 trang; Chương 1: Tổng quan vấn đề nghiên cứu - 32 trang; Chương 2: Đối tượng, nội dung phương pháp nghiên cứu - 11 trang; Chương 3: Kết nghiên cứu Thảo luận - 86 trang; Kết luận kiến nghị - 02 trang; Tài liệu tham khảo - 11 trang CHƢƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Tài nguyên thuốc giới 1.1.1 Lịch sử nghiên cứu tài nguyên thuốc giới Dược thảo phát triển truyền thống văn hóa Trung Quốc từ khoảng 5000 năm trước (2.737 TCN - 2.697 TCN) Tài liệu ghi chép lại tri thức sử dụng thuốc sớm người Sumarian viết chữ tượng hình vào năm 2000 TCN, “Materia Medica” ghi chi tiết tác dụng cỏ chữa bệnh 250 loại thuốc Ấn Độ quốc gia có truyền thống sử dụng loại dược thảo lâu đời.Tài liệu ghi chép sớm sử dụng thuốc tìm thấy sách Rig - Veda vào khoảng 4500 - 1600 TCN, xem sách cổ sử dụng thuốc lịch sử lồi người Hiện nay, có 8.000 lồi thực vật sử dụng làm thuốc biết đến Ấn Độ Không châu Á mà việc sử dụng cỏ làm thuốc xuất từ lâu nước châu Âu Ở châu Phi, tài liệu cổ xưa sử dụng thuốc người Ai Cập cổ đại ghi chép khoảng thời gian 3.600 năm trước với khoảng 800 thuốc 700 thuốc, có Lơ hội, Gai đầu 1.1.2 Đánh giá giá trị sử dụng giá trị kinh tế nguồn tài nguyên thuốc giới 1.1.2.1 Đánh giá giá trị sử dụng nguồn tài nguyên thuốc Trên toàn giới, ước tính có tới 70.000 lồi cỏ sử dụng dân gian WHO thơng báo có 21.000 lồi thực vật sử dụng cho mục đích chăm sóc sức khỏe Trong đó, Ấn Độ sử dụng khoảng 7.500 lồi Tính đến năm 1997, Trung Quốc sử dụng 6.000 loài Tại châu Phi, 5.000 loài thực vật sử dụng cho mục đích y tế Ở châu Âu, với truyền thống lâu đời việc sử dụng thực vật, khoảng 2.000 dược liệu hương liệu sử dụng thương mại… 1.1.2.2 Đánh giá giá trị kinh tế nguồn tài nguyên thuốc Ở quy mơ tồn cầu, doanh số mua bán thuốc ước tính khoảng 16 tỉ Euro năm Trong năm 1990, kim ngạch nhập thuốc toàn giới hàng năm trung bình 4.000 với trị giá 1,224 triệu USD Trong đó, có đến 80% giá trị xuất nhập 12 quốc gia châu Á châu Âu Nhật Bản Hàn Quốc hai quốc gia tiêu thụ thuốc nhiều Trung Quốc Ấn Độ hai quốc gia cung cấp thuốc hàng đầu; Hồng Kông Mỹ trung tâm thương mại quan trọng Nhiều thuốc bị khai thác để sử dụng chỗ mà xuất khắp nơi giới Một lượng lớn thuốc châu Á châu Phi việc khai thác để sử dụng nội địa, chúng cịn dùng để xuất Có tới 80% thuốc xuất từ nước châu Á Nhu cầu thuốc tăng 15-25% năm theo ước tính Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) vào năm 2050 nhu cầu tiêu thụ thuốc tăng nghìn tỷ USD 1.1.3 Tình hình nghiên cứu kinh nghiệm sử dụng thuốc dân tộc giới Điều tra, nghiên cứu thuốc đồng thời với việc hệ thống hóa tri thức truyền thống thuốc, kinh nghiệm địa việc sử dụng thuốc gắn với bảo tồn đa dạng sinh học, bảo tồn giá trị văn hóa thu hút quan tâm hầu giới 1.2 Khái quát tài nguyên thuốc Việt Nam 1.2.1 Lịch sử nghiên cứu tài nguyên thuốc Việt Nam Việt Nam có nhiều cơng trình nghiên cứu như: Hải Thượng Lãn Ông - Lê Hữu Trác (1720 - 1791), Crévost Pétélot (1928 - 1935), Đỗ Tất Lợi (1957), Vũ Văn Chuyên (1966), Nguyễn Nghĩa Thìn (2001), Võ Văn Chi (2012), Lã Đình Mỡi cs (2005)… 1.2.2 Khái quát giá trị sử dụng giá trị kinh tế nguồn tài nguyên thuốc Việt Nam Số liệu thống kê ngành Y tế gần cho biết, năm nước ta tiêu thụ từ 30.000 - 50.000 loại dược liệu khác Ở Việt Nam năm gần đây, năm xuất từ 5.000 đến gần 10.000 dược liệu, với giá trị khoảng 15 triệu USD… Ngoài xuất số bán thành phẩm thuốc dạng hoạt chất như: Berberin, palmatin, rotundin, rutin,… Một số doanh nghiệp xuất thuốc hoạt chất như: Artemisinin, artesunat,… nhiều dạng thuốc Đông dược khác 1.2.3 Tình hình nghiên cứu kinh nghiệm sử dụng thuốc dân tộc Việt Nam Ở Việt Nam, có nghiên cứu thuốc dân tộc đặc trưng cho vùng khác người Tày, Dao, H’Mông VQG Ba Bể (Bắc Kạn); Sán Dìu VQG Tam Đảo (Vĩnh Phúc); Dao Ba Vì (Hà Tây); Mường Cúc Phương; Tày Dao xã Yên Ninh Yên Đổ, huyện Phú Lương (Thái Nguyên); Cao Lan Đội Cấn, huyện Yên Sơn (Tuyên Quang); Mường (Thanh Hóa); Thái (Nghệ An),… 1.2.4 Những nghiên cứu hệ thực vật làm thuốc Na Hang Các nghiên cứu thực vật Na Hang chưa nhiều Ngồi cơng bố Mike Hill & Nevill Kemp (1996); Nguyễn Nghĩa Thìn, Đặng Quyết Chiến (2006); Nguyễn Anh Tuấn Trần Huy Thái (2012); Phan Kế Lộc, Phạm Văn Thế, L.V Averyanov cộng (2013)… chưa có nghiên cứu mang tính hệ thống thuốc 1.3 Vấn đề bảo tồn nghiên cứu nhân giống tài nguyên thuốc Bảo tồn đa dạng sinh học đặc biệt loài thực vật làm thuốc vấn đề tồn cầu, khơng riêng quốc gia mà tổ chức quốc tế (IUCN, WWF, FAO, WHO,…) Theo Akerele (1991) vấn đề bảo tồn thuốc quốc gia nhận biết bảo tồn giá trị sử dụng chúng y học dân tộc Đề cập đến bảo tồn loài thuốc bị đe dọa, Hamann (1991) cho khơng có cách khác phải nắm vững phân bố, tình hình trạng chúng để thiết lập khu vực bảo tồn nội vi hay bảo tồn nguyên vị (in - situ) bảo tồn ngoại vi hay bảo tồn chuyển vị (ex - situ) Vấn đề bảo tồn đa dạng sinh học nói chung, thuốc nói riêng, gắn với bảo tồn tri thức địa Việt Nam quan tâm đặc biệt * Nhân giống hom: Giâm hom phương pháp nhân giống sinh dưỡng, có hệ số nhân giống lớn, giữ đặc tính tốt mẹ tương đối rẻ tiền nên sử dụng rộng rãi nhân giống trồng, cảnh ăn * Nhân giống hạt: Nhân giống hạt phương thức nhân giống truyền thống tự nhiên, cho hệ số nhân giống cao, đồng thời bảo quản vận chuyển giống cách dễ dàng Yếu tố định tới hiệu nhân giống hạt chất lượng hạt giống 1.4 Cây thuốc hoạt tính kháng ung thƣ từ thuốc Tác dụng chữa trị bệnh thuốc hợp chất tự nhiên chúng sinh tổng hợp tích lũy Hiện nay, giới có khoảng 3.000 lồi thực vật báo cáo chứa hợp chất có hoạt tính kháng ung thư Viện nghiên cứu ung thư Hoa Kỳ thu thập 35.000 mẫu thực vật từ 20 quốc gia khác sàng lọc khoảng 114.000 dịch chiết với hoạt tính kháng ung thư Ở Việt Nam năm gần nghiên cứu thuốc có khả chữa trị ung thư quan tâm Nhiều cơng trình nghiên cứu hoạt chất kháng u công bố; song nghiên cứu hai loài từ Ba bét nhỏ (Mallotus microcarpus) Song mơi tàu (Miliusa sinensis) cịn 1.5 Điều kiện tự nhiên, điều kiện kinh tế - xã hội khu BTTN Na Hang Tọa độ địa lý: Từ 22014' - 22035' vĩ độ Bắc; Từ 104017' - 105035' kinh độ Đơng Diện tích khu rừng đặc dụng 22.401,5 nằm địa phận xã Thanh Tương, Sơn Phú, Khau Tinh, Côn Lôn Thị trấn Na Hang Khí hậu nằm vùng khí nhiệt đới gió mùa vùng Đơng Bắc Việt Nam mang đậm tính chất khí hậu vùng núi cao Một năm chia làm mùa rõ rệt, với đặc trưng sau: Mùa hè thường tháng đến tháng 9, khí hậu nóng ẩm, mưa nhiều; mùa đơng, khơ lạnh kéo dài từ tháng 10 đến tháng năm sau; nhiệt độ trung bình năm 23,5°C; lượng mưa bình qn: 1.400 - 1.600 mm Có hệ thống sơng lớn: Sông Năng sông Gâm Tổng xã Thị trấn Na hang có 52 thơn, 3.916 hộ/tổng số 10.081 hộ (chiếm 38,84% số hộ tồn huyện) Có dân tộc chính: Tày, Kinh, Dao, Dân tộc H’mơng Cịn lại dân tộc khác như: Cao Lan, Hán Sản xuất nông nghiệp chủ yếu đất trồng vụ lúa, bình qn lương thực thóc ngơ thấp Phát triển chăn nuôi gia súc ăn cỏ, tận dụng nguồn thức ăn tinh địa phương để chăn nuôi giống lợn, gà, vịt, ngan Sản xuất lâm nghiệp chủ yếu quản lý bảo vệ tài nguyên rừng có Tồn vùng có bệnh viện Đa khoa huyện Thị trấn Na Hang; trạm y tế xã; cán y tế thơn, có 46 thơn/52 thơn Có trường Mầm non với 26 điểm trường; trường tiểu học với 27 điểm trường; trường trung học sở, trường Trung học phổ thông Thị trấn Na Hang trung tâm trị, kinh tế, văn hoá huyện Na Hang, đầu tư xây dựng nhiều cơng trình để phát triển kinh tế, văn hoá, xã hội địa phương CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu, địa điểm thời gian 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Là loài thuốc khu BTTN Na Hang vùng phụ cận 2.1.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu Điều tra, nghiên cứu khảo sát khu BTTN Na Hang, tập trung chủ yếu xã Thanh Tương, Sơn Phú Khâu Tinh, huyện Na Hang, tỉnh Tuyên Quang Các mẫu vật tiến hành nghiên cứu, phân tíchvà lưu giữ phòng Tiêu Thực vật Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam.Nghiên cứu thực nghiệm hố học hoạt tính sinh học tiến hành phịng thí nghiệm Hoạt chất sinh học, Viện Hóa sinh biển - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Thời gian điều tra nghiên cứu từ năm 2014 – 2016 2.2 Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu nguồn tài nguyên thuốc khu BTTN Na Hang, huyện Na Hang, tỉnh Tuyên Quang: Đa dạng nguồn tài nguyên thuốc; Đa dạng thuốc sử dụng hai cộng đồng dân tộc Tày Dao khu BTTN Na Hang - Thử hoạt tính sinh học phân tích cấu trúc hóa học: Sàng lọc hoạt tính sinh học; Nghiên cứu thành phần hố học hoạt tính sinh học mẫu TQ02 từ loài Ba bét nhỏ (Mallotus microcarpus Pax & K Hoffm.) mẫu TQ13 từ lồi Song mơi tàu (Miliusa sinensis Fin & Gagnep.) - Các giải pháp bảo tồn, phát triển sử dụng bền vững loài cấy thuốc có giá trị khu BTTN Na Hang, huyện Na Hang, tỉnh Tuyên Quang: Các loài thuốc có triển vọng phát triển; Thăm dị khả nhân giống hai lồi thuốc có tiềm khai thác sử dụng; Đề xuất số giải pháp nhằm bảo tồn phát triển bền vững số loài thuốc khu BTTN Na Hang 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp kế thừa Kế thừa tài liệu có liên quan đến lĩnh vực nghiên cứu: Danh lục loài thực vật Việt Nam; Từ điển thuốc Việt Nam;Cây thuốc Động vật làm thuốc Việt Nam;Đa dạng thực vật khu Bảo tồn thiên nhiên Na Hang, tỉnh Tuyên Quang 2.3.2 Phương pháp thu thập, xử lí mẫu vật định loại - Phương pháp thu xử lý mẫu: theo Nguyễn Nghĩa Thìn (1997,2007) - Giám định tên khoa học: Sử dụng theo phương pháp hình thái so sánh, theo: Cẩm nang tra cứu nhận biết họ thực vật hạt kín Việt Nam; Cây cỏ Việt Nam; Các Thực vật chí Việt Nam; Danh lục loài thực vật Việt Nam, tập I,II, III; Từ điển Cây thuốc Việt Nam… 2.3.3 Phương pháp đánh giá tính đa dạng nguồn tài nguyên thuốc Để đánh giá tính đa dạng nguồn tài nguyên thuốc khu BTTN Na Hang, dựa theo phương pháp đánh giá Nguyễn Nghĩa Thìn (1997), như: Đa dạng bậc taxon (ngành, lớp, chi, họ, loài), đồng thời xác định số đa dạng, dạng sống chúng Các nhóm bệnh phân chia theo tài liệu Lê Trần Đức (1995) “Cây thuốc Việt Nam trồng hái chế biến trị bệnh ban đầu”và Quyết định số 3465/QĐ-BYT ngày 08 tháng năm 2016… 2.3.4 Phương pháp đánh giá giá trị bảo tồn nguồn gen thuốc Hiện trạng loài đánh giá theo tiêu chí Nghị định 32/2006/NĐ-CP, Danh lục Đỏ thuốc (2006), Sách Đỏ Việt Nam (2007), IUCN Red List (2014), 2.3.5 Phương pháp xây dựng đồ phân bố số lồi thực vật q Bản đồ địa lý khu BTTN Na Hang xây dựng dựa theo đồ địa hình tỷ lệ 1:50.000; hệ tọa độ quốc gia VN2000 Dữ liệu cập nhật đến năm 2015 từ ảnh vệ tinh bao gồm lớp thơng tin như: Lớp địa hình (đường bình độ), giao thơng, khu dân cư, thủy văn, ranh giới hành chính… 2.3.6 Phương pháp nghiên cứu thực vật làm thuốc dân tộc Trong trình nghiên cứu cộng đồng, sử dụng phương pháp điều tra thực vật dân tộc học với công cụ: Đánh giá nhanh nông thôn (RRA) đánh giá nông thơn có tham gia người dân (PRA) Phương pháp PRA tiến hành phòng vấn trực tiếp người dân hai cách: Sử dụng số câu hỏi cho người chọn cán nghiên cứu với người cung cấp thông tin vừa vừa phỏngvấn Đối với nội dung điều tra thu thập thuốc, thuốc sử dụng hai dân tộc Tày Dao khu BTTN Na Hang, lựa chọn điểm điều tra xã tiêu biểu: Thanh Tương, Sơn Phú Khau Tinh Tại xã chọn 15 người hai dân tộc Tày Dao để tiến hành vấn, bao gồm: người già, trung niên người trẻ, có nam nữ; Dân tộc Tày: vấn 30 người, dân tộc Dao vấn 15 người Mỗi người trả lời 20 phiếu Điều tra tình hình khai thác sử dụng, sản lượng, giá thị trường, thời gian khai thác, cho loài thực vật sử dụng làm thuốc, tiến hành với 30 người: người thường xuyên khai thác thuốc rừng; người buôn bán thuốc địa phương hay chợ (tư thương địa phương); ông lang, bà mế địa phương sử dụng dược liệu để làm thuốc chữa bệnh (hội viên Hội Đông Y huyện Na Hang)… khu vực nghiên cứu 2.3.7 Phương pháp nhân giống số thuốc 2.3.7.1.Phương pháp nhân giống sinh dưỡng Nhân giống sinh dưỡng thực cách giâm loại hom từ củ loài Râu hùm (Taccachantrieri Andre) thân loài Hoàng đằng (Fibraureatinctoria Lour.) thu từ mọc tự nhiên Các thí nghiệm bao gồm: a Ảnh hưởng mùa vụ loại hom tới khả sống rễ hom giâm: mùa xác định mùa Xuân, Hạ, Thu, Đông; loại hom bao gồm: hom ngọn, hom thân (bánh tẻ) hom gốc từ củ cành Mỗi cơng thức thí nghiệm 30 hom; lặp lại lần vườn khác Số liệu ghi lại lần sau 60 ngày với hai loài b Ảnh hưởng loại chất điều hòa sinh trưởng nồng độ chất tới tỷ lệ sống rễ hom giâm: Các chất điều hoà sinh trưởng dùng thí nghiệm là: αNAA (Acid α-napthilen acetic), IBA (Indol butyric acid), IAA (Indole Acetic Acid); với loại nồng độ: 1.000ppm; 1.500ppm 2.000ppm, lô đối chứng khơng sử dụng chất điều hồ sinh trưởng Thí nghiệm bố trí 10 cơng thức 2.3.7.2 Phương pháp nhân giống hữu tính Râu hùm (Taccachantrieri Andre) : Hạt giống gieo luống cát ẩm, tránh ánh nắng trực tiếp; đồng thời với thí nghiệm đĩa petri điều kiện phịng thí nghiệm Mỗi thí nghiệm gieo 100 hạt Các thí nghiệm lặp lại lần, theo dõi thời gian nảy mầm hạt.Tổng số hạt thí nghiệm: 100 hạt/cơng thức x cơng thức x lần lặp = 600 hạt Hoàng đằng (Fibraureatinctoria Lour.) : Hạt giống gieo theo phương pháp xử lý hạt (3 công thức) sau: + CT1: Gieo hạt cát ẩm + CT2: Ngâm nước ấm ban đầu 400C 10 giờ, sau gieo cát ẩm + CT3: Ngâm 10 nước lã sau đem gieo cát ẩm Mỗi cơng thức bố trí lần lặp lại, lần lặp 30 hạt Tổng số hạt Hồng đằng thí nghiệm: 30 hạt/công thức x công thức x lần lặp = 270 hạt Chăm sóc bảo quản: Các thí nghiệm tưới nước hàng ngày, theo dõi thường xuyên bảo vệ cẩn thận 2.3.7.3 Phương pháp thu thập số liệu - Thí nghiệm nhân giống sinh dưỡng: Theo dõi, ghi chép: Số hom sống, hom có chồi số chồi; số hom rễ - số rễ, chiều dài trung bình rễ, ảnh hưởng loại hom giống đến tỷ lệ sống, khả nảy chồi rễ - Thí nghiệm nhân giống hữu tính: Các tiêu theo dõi (Số ngày hạt bắt đầu nảy mầm, số ngày hạt nảy mầm hoàn toàn, số hạt nảy mầm… Số ngày để đạt tiêu chuẩn cấy vào bầu) - Theo dõi sinh trưởng giai đoạn vườn ươm: Các tiêu đo đếm bao gồm: Thống kê số sống tổng số bố trí lần lặp Đo đường kính gốc (D00) thước kẹp panme có độ xác tới 1/10mm, đo chiều cao thước mét khắc vạch tới mm (chiều cao vút - Hvn) 2.3.8 Thử hoạt tính sinh học in vitro (gây độc tế bào hoạt tính ức chế α-glucosidase, α-amylase) số lồi thơng dụng có triển vọng 2.3.8.1 Tạo dịch chiết thô: Dung môi chiết mẫu methanol Các mẫu thực vật ngâm chiết với dung môi lần bể siêu âm 40ºC 30 phút Dịch chiết sau gom lại cất loại dung môi thu cao chiết thô 2.3.8.2 Phương pháp thử hoạt tính sinh học Đánh giá hoạt tính kháng tế bào ung thư: Các dòng tế bào ung thư gồm: Ung thư phổi người (A-549, H1975), ung thư vú (MCF-7, MDA-MB-231), ung thư tụy tạng (PANC1), ung thư tiền liệt tuyến (DU145) cung cấp GS Jeong-Hyung Lee, trường Đại học Quốc gia Kangwon, Hàn Quốc Tế bào ung thư nuôi cấy in vitro theo phương pháp Mosmann cs Đánh giá hoạt tính ức chế α-amylase: Hoạt tính ức chế α-amylase thực dựa vào phản ứng tạo màu tinh bột xanh (Starch Azure) với nước Đánh giá hoạt tính ức chế α-glucosidase: Hoạt tính ức chế α-glucosidase thực dựa phản ứng thủy phân 4-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside (pNPG) thành đường glucose p-nitrophenol,hợp chất có màu vàng, xúc tác enzyme α-glucosidase 2.3.8.3 Phương pháp chiết tách phân lập hợp chất - Phân lập chất tinh khiết phương pháp sắc ký gồm: + Sắc ký lớp mỏng thực mỏng tráng sẵn silica gel DC-Alufolien 60 F254 RP-18 F254 Phát vệt chất đèn UV 254 368 nm, phun H2SO4 10% lên mỏng hơ nóng từ từ đến màu + Sắc ký cột pha thường (silica gel 230-400 mesh, Merck), pha đảo (RP-18, YMC ODS), dùng nhựa trao đổi ion (Dianion HP20) hấp phụ cỡ hạt (Sephadex LH20) - Xác định cấu trúc chất phân lập phương pháp phổ đại bao gồm phổ hấp thụ hồng ngoại (IR), tử ngoại (UV), phổ cộng hưởng từ nhân hai chiều (1D 2D-NMR), phổ khối lượng thường (MS) phân giải cao (HRMS) 2.3.8.4 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất Phương pháp chung để xác định cấu trúc hoá học hợp chất kết hợp việc xác định thông số vật lý với phương pháp phổ đại 2.3.9 Xử lý số liệu Tất số liệu xử lí Excel, trình bày dạng mean ± SE Các thuật toán thống kê Student's t-test, F’test phương pháp phân tích phương sai nhân tố ngẫu nhiên (one way ANOVA) để kiểm tra sai khác có ý nghĩa so với đối chứng âm, với P50% 100 μg/ml) gồm: TQ03, TQ04, TQ08, TQ09, TQ10, TQ13 Đối với α-amylase, có 04 mẫu thể tác dụng ức chế >50% 500 μg/ml gồm: TQ05, TQ15, TQ17, TQ18 Trong số mẫu có TQ13 từ lồi Song mơi tàu (Miliusa sinensis Fin & Gagnep.), thể tác dụng ức chế α-glucosidase đáng ý, đồng thời theo tra cứu loài chưa nghiên cứu hoạt tính ức chế α-glucosidase Do mẫu lựa chọn để nghiên cứu sâu thành phần hoá học 3.1.3.2 Nghiên cứu thành phần hoá học hoạt tính sinh học mẫu TQ02 từ lồi Ba bét nhỏ (Mallotus microcarpus Pax & K Hoffm) * Chiết tách phân lập hợp chất Từ mẫu loài (Mallotus microcarpus Pax & K Hoffm), chiết tách xác định cấu trúc 11 hợp chất ký hiệu từ MM1 đến MM11, có 01 hợp chất lần công bố: 3-Methoxybenzensulfonic acid 4-O-β-D-glucopyranoside (MM4) Guaiacylglycerol1-(4-Hydroxy-3methoxyphenyl)-1,2,3-propanetriol (MM1) Antiarol rutinoside (MM2) 3-Methoxybenzensulfonic acid 4-O-βD-glucopyranoside (chất mới) (MM4) Zansimuloside A (MM3) Erigeside (MM5) 3,4’;-Dihydroxypropiophenone 3-Oglucoside (MM6) 14 Methyl salicylate 2-rutinoside (MM7) Leonuriside A (MM8) Syringin (MM9) Coniferin (MM10) Hovetrichoside A (MM11)  Đánh giá tác dụng gây độc tế bào ung thư chất Các chất phân lập từ mẫu TQ02 (Mallotus microcarpus Pax & K Hoffm) đánh giá tác dụng gây độc tế bào dòng ung thư phổi H1975, A549 dòng ung thư vú MCF-7 Kết cho thấy chất 3-Methoxybenzensulfonic acid 4-O-β-Dglucopyranoside (MM4) hợp chất Methyl salicylate 2-rutinoside (MM7) có tác dụng dịng tế bào thử nghiệm Trong chất leonuriside A (MM8) lại có tác dụng mạnh tế bào ung thư vú MCF-7 3.1.3.3 Nghiên cứu thành phần hố học hoạt tính sinh học mẫu TQ13 từ lồi Song mơi tàu (Miliusa sinensis Fin & Gagnep.) * Chiết tách phân lập hợp chất Từ mẫu loài (Miliusa sinensis Fin & Gagnep.), chiết tách xác định cấu trúc 03 hợp chất ký hiệu: MSW2.1, MSW2.2 MSW5.1 Kaempferol 3-O-(2,6-di-O-α-Lrhamnopyranosyl)-β-Dgalactopyranoside (MSW2.1) Quercetin 3-O-(2,6-di-O-α-Lrhamnopyranosyl)-β-D-galactopyranoside (MSW2.2) 15 Daucosteol (MSW5.1) * Đánh giá tác dụng ức chế enzyme α-glucosidase chất phân lập Trong số hợp chất phân lập từ mẫu TQ13 (Miliusa sinensis Fin & Gagnep.), Daucosterol hợp chất phổ biến nghiên cứu nhiều nên không lựa chọn để thử hoạt tính Hai mẫu MSW2.1 MSW2.2 có tác dụng ức chế α-glucosidase với giá trị IC50 557.3 692.5 µM Tác dụng đối chiếu với hoạt tính thuốc chữa tiểu đường acarbose (IC50 671.2 µM) Như nhận định hợp chất flavonoid glycoside phân lập từ mẫuTQ13 (Miliusa sinensis Fin & Gagnep.), hoạt chất có tác dụng ức chế α-glucosidase liên quan đến bệnh tiểu đường 3.2 Các giải pháp bảo tồn, phát triển sử dụng bền vững lồi thuốc có giá trị khu BTTN Na Hang, huyện Na Hang, tỉnh Tun Quang 3.2.1 Các lồi thuốc có triển vọng phát triển 3.2.1.1 Các tiêu chí lựa chọn lồi thuốc có triển vọng phát triển Các lồi có triển vọng lồi đáp ứng tiêu chí sau đây: i/ Lồi có thị trường tiêu thụ; ii/ Có giá trị kinh tế cao; iii/ Có nhu cầu sử dụng cộng đồng lớn thường xuyên; iv/ Thích hợp với phương án trồng để thu nguyên liệu 3.2.1.2 Đề xuất số lồi thuốc có triển vọng cần nghiên cứu khu BTTN Na Hang  Tình hình khai thác sử dụng dược liệu khu BTTN Na Hang Qua điều tra nghiên cứu nguồn tài nguyên thuốc kết hợp với tri thức khai thác sử dụng thuốc cộng đồng dân tộc khu BTTN Na Hang, bước đầu thống kê khoảng 20 loại dược liệu khai thác thị trường có nhu cầu sử dụng Các lồi có độ gặp nhiều phân bố rộng khu vực như: Thiên niên kiện (Homalomena occulta), Tế tân nam (Asarum balansae), Râu hùm (Tacca chantrieri), Nghệ vàng (Curcuma longa), Nghệ đen (Curcuma zedoaria), Hàm ếch (Saururus chinensis), Bổ béo (Gomphandra mollis) Dây đau xương (Tinospora sinensis) Trong đó, có năm lồi bị khai thác cạn kiệt Bình vơi (Stephania rotunda Lour.), Hồng tinh hoa trắng (Disporopsis longifolia Craib.), Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria Lour), Lá khôi (Ardisia silvestris Pitard) Hà thủ ô đỏ (Fallopia multiflora (Thunb.) Haraldson) loài năm qua bị khai thác nhiều để bán sang Trung Quốc Hiện nay, Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria Lour), Lá khơi (Ardisia silvestris Pitard); Hồng tinh hoa trắng(Disporopsis longifolia Craib.); Ba gạc (Rauvolfia verticillata (Lour.) Baill.); Khúc khắc (Heterosmilax gaudichaudiana 16 (Kunth) Maxim.), Bách (Stemona tuberola Lour)… lại loại dược liệu tiêu thụ nhiều  Thị trường tiềm phát triển thuốc Na Hang Qua kết điều tra thấy, giá mua bán số loại dược liệu: Hà thủ đỏ, Hồng tinh hoa trắng, Bình vơi, Hồng đằng, Lá khơi… cao Hiện loài bị khai thác bừa bãi, việc gây trồng bảo tồn lại chưa quan tâm Với loài thuốc kể trên, biết khai thác cách hợp lí, đơi với việc gây trồng, bảo vệ mạnh để phát triển kinh tế, cải thiện đời sống dân tộc khu BTTN Na Hang Các loài như: Nghệ vàng, Nghệ đen, Râu hùm, Giảo cổ lam địa phương nhiều, người dân đưa trồng vườn nhà, phát triển tốt  Đặc điểm lồi thuốc có triển vọng phát triển Từ kết nghiên cứu trên, xin đề xuất 12 lồi thuốc có triển vọng khu vực nghiên cứu (bảng 3.20) để thử nghiệm nhân giống, trồng phát triển Bảng 3.20: Các loài thuốc có triển vọng phát triển khu BTTN huyện Na Hang TT Tên tiếng Việt Thiên niên kiện Tế tân nam Tên dân tộc Vát vẹo (Tày); Sì nhàn chấn (Dao) Muầu đin (Tày, Dao) Biến hóa Mầu đin (Tày, Dao) Bình vơi Dây đau xương Cà tom khao (Tày); Hùng mầu pẹ (Dao) Khau bết phạ (Tày), Tiền mạy hoày (Dao) Bách Râu hùm Giảo cổ lam Hà thủ đỏ Cốc gia vụ (Tày, Dao) 10 Hồng đằng Thau khem (Tày, Dao) 11 Nghệ đen 12 Nghệ vàng Mịn đăm (Tày), Trằn đìa chịa (Dao) Mịn khao (Tày), Trằn đìa pẹ (Dao) Rạng mạ (Tày), Tiệp phầy mua đòi (Dao) Bo thác lủa (Tày), Mào xạm đòi (Dao) Pyắc (Tày), Lạy im (Dao) Tên khoa học Homalomena occulta (Lour.) Schott Asarum balansae Franch Asarum caudigerum Hance Stephania rotunda Lour Tinospora sinensis (Lour.) Merr Họ thực vật Araceae Aristolochiaceae Aristolochiaceae Menispermaceae Menispermaceae Stemona tuberosa Lour Stemonaceae Tacca chantrieri Andr Taccaceae Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino Fallopia multiflora (Thunb.) Haraldson Fibraurea tinctoria Lour Curcuma zedoaria (Berg.) Rosc Curcuma longa L Cucurbitaceae Polygonaceae Menispermaceae Zingiberaceae Zingiberaceae 3.2.2 Thăm dò khả nhân giống hai lồi thuốc có tiềm khai thác sử dụng khu BTTN Na Hang 3.2.2.1 Nhân giống loài Râu hùm (Tacca chantrieri Andre) khu BTTN Na Hang 17  Thí nghiệm nhân giống sinh dưỡng * Nghiên cứu ảnh hưởng thời vụ loại hom từ củ đến tỷ lệ nảy chồi, tỷ lệ rễ loài Râu hùm Các kết thí nghiệm cho thấy, vào mùa Đơng mùa Xuân tỷ lệ nảy chồi rễ loại hom cao so với mùa Hạ Thu Giữa loại hom từ củ thì, 60 ngày sau giâm tỷ lệ nảy chồi rễ hom từ thân củ cao nhất; vào mùa Xuân (86,7% nảy chồi, 77,0% rễ), tiếp đến hom từ phần củ (67,8% nảy chồi rễ), thấp hom từ phần gốc củ (60,4% nảy chồi, 58,1% rễ) * Nghiên cứu ảnh hưởng loại chất kích thích sinh trưởng nồng độ chúng đến tỷ lệ nảy chồi tỷ lệ rễ hom củ giống cắt từ thân loài Râu hùm Sau xử lý chất điều hòa sinh trưởng IAA, α-NAA IBA nồng độ khác (1.000ppm; 1.500ppm 2.000ppm) hom củ giống cắt từ thân loài Râu hùm, hom giống giâm vào mùa Thu (01/9/2016) Kết thử nghiệm cho thấy, tỷ lệ nảy chồi rễ hom giống cao sau 60 ngày giâm (100%) nồng độ 1.500ppm với IBA IAA  Thí nghiệm nhân giống hạt Sau 90 ngày, tỷ lệ hạt nảy mầm cát ẩm trời đạt 14,3% điều kiện phòng đạt 11,0% Cây Râu hùm sau nảy mầm sinh trưởng lá, chiều cao cây; phát triển rễ chiều dài trung bình rễ chậm Cây Râu hùm giai đoạn vườn ươm từ - tháng tuổi có tỷ lệ sống tương đối cao sau tháng đạt 83,33% Cây từ cấy vào bầu tháng tuổi có số đạt 5,44 lá/cây, chiều cao vút sinh trưởng chậm đạt 8,15cm Sau tháng tuổi chăm sóc vườn ươm Râu hùm chưa đủ tiêu chuẩn xuất vườn cần tiếp tục chăm sóc theo dõi tiếp Điều cho thấy nhân giống hạt với lồi Râu hùm khó khăn khơng hiệu so với nhân giống hom từ phần thân củ 3.2.2.2 Nhân giống loài Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria Lour.) khu BTTN Na Hang  Thí nghiệm nhân giống sinh dưỡng * Nghiên cứu ảnh hưởng thời vụ loại hom đến nhân giống lồi Hồng đằng Thí nghiệm sử dụng loại hom: hom ngọn, hom thân (bánh tẻ) hom già từ thân loài Hoàng đằng tiến hành vào mùa Xuân, Hạ, Thu Đông Từ kết thu cho thấy: Sau 60 ngày tất mùa, hom thân có tỷ lệ sống tỷ lệ nảy chồi cao nhất, thấp hom Hom thân với tỷ lệ hom sống 78,9% (mùa Hạ) tỷ lệ hom nảy chồi 76,7% (mùa Xuân), hom đạt tỷ lệ sống 41,1% (mùa Xuân) tỷ lệ nảy chồi 14,1% (mùa Xuân) Điều lý giải hom non chất dinh dưỡng dự trữ hom không đủ cung cấp nên sức sống khả sinh trưởng Các hom giâm vào mùa Hạ có tỷ lệ sống cao với 78,9%; tiếp đến giâm vào mùa Xuân với tỷ lệ sống đạt 71,1% Giâm hom vào mùa Đông mùa Thu cho tỷ lệ hom sống thấp 28,9% 18 37,8% Như vậy, tỷ lệ nảy chồi hom giâm vào mùa Xuân cao nhất, tiếp đến mùa Hạ thấp hom giâm vào mùa Đông * Nghiên cứu ảnh hưởng loại chất kích thích sinh trưởng nồng độ chúng đến hom thân (bánh tẻ) loài Hoàng đằng Thời điểm giâm hom vào mùa Thu (ngày 01/9/ 2016) Kết cho thấy sử dụng chất IBA nồng độ 1.500ppm cho tỷ lệ rễ cao thời gian rễ sớm (96,7% sau 60 ngày) Tiếp đến chất IAA nồng độ 1.500ppm IBA nồng độ 2.000ppm cùngcho kết cao (94,4% sau 60 ngày) Đối với số rễ chiều dài trung bình rễ sử dụng chất IAA nồng độ 1.500ppm cho kết cao  Thí nghiệm nhân giống hạt Thời gian bắt đầu nảy mầm tỷ lệ nảy mầm công thức có khác rõ rệt: CT1 gieo hạt cát ẩm sau 51 ngày hạt bắt đầu nảy mầm đạt tỷ lệ 98,9% Còn CT3 hạt Hoàng đằng gieo sau ngâm nước lạnh 10 có thời gian bắt đầu nảy mầm dài cho tỷ lệ nảy mầm thấp 58 ngày đạt 82,2% Như vậy, hạt Hồng đằng sau thu hái chế biến đem gieo cát ẩm mà không cần sử dụng phương pháp xử lý đạt tỷ lệ nảy mầm cao  Thí nghiệm nghiên cứu sinh trưởng Hoàng đằng vườn ươm Mỗi lần theo dõi 30 cây/ lần lặp Cây từ hạt sau đạt tiêu chuẩn chiều cao trung bình 7cm, đường kính gốc trung bình 0,2cm, có khoảng - thật cấy vào bầu để nuôi dưỡng vườn ươm Về tỷ lệ sống: Tỷ lệ sống Hoàng đằng đạt cao Sau tháng tuổi tỷ lệ sống đạt 98% Về sinh trưởng đường kính: Cho thấy giai đoạn vườn ươm Hồng đằng có sinh trưởng đường kính gốc tương đối nhanh Từ số liệu đo đếm cho thấy sau tháng đạt tiêu chuẩn xuất vườn Hệ số biến động đường kính có xu hướng giảm dần theo tuần tuổi Về sinh trưởng chiều cao: Từ số liệu đo đếm cho thấy, sau tháng nuôi dưỡng giai đoạn vườn ươm đạt chiều cao cần thiết để trồng Hệ số biến động chiều cao Hoàng đằng giai đoạn vườn ươm thấp từ 1,23 - 2,22% Có thể kết luận sinh trưởng Hoàng đằng giai đoạn vườn ươm từ - tháng tuổi đồng 3.2.3 Đề xuất số giải pháp nhằm bảo tồn phát triển bền vững số loài thuốc khu BTTN Na Hang, tỉnh Tuyên Quang 3.2.3.1.Vấn đề bảo tồn nguồn tài nguyên thuốc người dân khu BTTN Na Hang + Trữ lượng loài thuốc khu BTTN Na Hang ngày giảm (thể độ gặp khối lượng sản phẩm khai thác, mua bán) Một số loài thuốc khu BTTN Na Hang, mang lại giá trị kinh tế cao, tạo nguồn thu nhập đáng kể cho người dân khu vực như: Bình vơi, Hồng đằng, Lá khơi, Ba gạc, Khúc khắc… + Những lồi có khả phát triển tốt khu vực, loài phù hợp với điều 19 kiện địa hình, khí hậu địa phương, sinh trưởng nhanh, phát triển tốt, nguồn giống dễ tìm, kỹ thuật trồng đơn giản, trồng vườn nhà, vườn rừng đem lại giá trị kinh tế cho người dân như: Nghệ vàng, Nghệ đen, Râu hùm, Giảo cổ lam… + Để bảo tồn phát triển nguồn thuốc khu BTTN Na Hang đáp ứng nhu cầu tương lai, cần khai thác hợp lý đảm bảo tái sinh tự nhiên (in - situ) kết hợp với việc nghiên cứu nhân trồng (ex – situ) + Có nhiều lồi thuốc bị người dân khai thác mức, đẫn đến cạn kiệt tự nhiên, số loài gần khó gặp như: Bảy hoa, Bình vơi đỏ, loại tầm gửi Nhiều lồi bị lái thương Trung Quốc thu mua với số lượng lớn qua đường tiểu ngạch như: Hoàng đằng, Bình vơi, Ba gạc, Khúc khắc… Đó nguyên nhân suy giảm đa dạng nguồn tài nguyên thuốc + Hiện nay, tri thức sử dụng thuốc, thuốc ông lang, bà mế truyền miệng từ đời trước cho đời sau mà khơng ghi chép lại để lưu giữ lâu dài Thế hệ trẻ địa phương chưa thực quan tâm đến việc thừa kế tri thức sử dụng cỏ làm thuốc từ hệ trước, nên làm cho tri thức sử dụng thuốc ngày bị mai 3.2.3.2 Một số giải pháp nhằm bảo tồn phát triển bền vững số loài thuốc khu BTTN Na Hang Với mục tiêu quản lý, bảo vệ phát triển nguồn tài nguyên thuốc, xin bước đầu đề xuất số điều chỉnh, bổ sung góp phần hồn thiện giải pháp, kế hoạch liên quan có như:  Giải pháp kỹ thuật: Đây giải pháp khoa học - kỹ thuật quan trọng nhất.Trên sở kết nghiên cứu khu BTTN Na Hang thu được,xin có xét đề xuất sau: + Bảo tồn nguyên vị (in – situ): Được tiến hành khu rừng tự nhiên Thác Mơ (độ cao từ 400 đến 600 m), thuộc xã Sơn Phú, huyện Na Hang, tỉnh Tuyên Quang; lựa chọn nơi gần ven suối, tán rừng nơi có che bóng để trồng các loại như: Tế tân nam, Biến hóa, Râu hùm, Thiên niên kiện, Giảo cổ lam, Bình vơi (khu vực 1) Cịn Hồng đằng, Bách bộ, Dây đau xương, Hà thủ ô đỏ, Nghệ đen, Nghệ vàng trồng thung lũng nơi có ánh sáng (khu vực 2) Tổng diện tích 02 khu vườn trồng 500m2, với số lượng 1200 (trung bình 100 cây/lồi) Theo dõi sinh trưởng phát triển khu vực, kết bước đầu cho thấy loài: Nghệ vàng, Nghệ đen, Tế tân nam, Râu hùm, Thiên niên kiện, Hồng đằng có khả sinh trưởng phát triển tốt biểu tỷ lệ sống cao, hoa (Nghệ vàng, Nghệ đen Râu hùm); cịn lồi: Giảo cổ lam, Bình vơi, Dây đau xương, Hà thủ đỏ có tỷ lệ sống không cao, sinh trưởng phát triển chậm, riêng Hà thủ đỏ nhận thấy có hoa; đặc biệt lồi như: Biến hóa, Bách bộ, Dây đau xương có tỷ lệ sống tương đối thấp, nhiều sau trồng có tượng lụi dần chết 20 + Bảo tồn chuyển vị (ex – situ): Thực khu vực vườn rừng 02 hộ gia đình Bản Bung, xã Thanh tương, huyện Na Hang với diện tích 1000m2/hộ với số lượng 100 con/lồi nhân giống Nhìn chung lựa chọn điều kiện tự nhiên phù hợp, thuận lợi chăm sóc tốt nên sinh trưởng phát triển loài tương đối đồng đều, tỷ lệ sống cao Một số giải pháp khác cần có tham gia cộng đồng:  Về nhận thức + Cần đẩy mạnh công tác tuyên truyền, vận động để cấp, ngành, xã cộng đồng dân tộc khu BTTN Na Hang, nâng cao nhận thức giá trị nguồn tài nguyên thuốc, thuốc + Tổ chức lớp tuyên truyền, tập huấn cho người dân địa phương phương pháp khai thác, sử dụng, mở rộng gieo trồng, thu hái bền vững loài thuốc quý  Về chế sách + Cần nâng cao chất lượng nguồn nhân lực.Có sách, chế độ ưu đãi để thu hút đầu tư doanh nghiệp, nhà khoa học, người dân nghiên cứu, sản xuất thử nghiệm giống thuốc + UBND huyện cần quan tâm đầu tư sở vật chất, trang thiết bị kinh phí để cơng tác bảo tồn phát triển nguồn gen thuốc đáp ứng yêu cầu, nhiệm vụ như: ▪ Quy hoạch khu đất có điều kiện tự nhiên thuận lợi cho phát triển thuốc để nhân giống trồng thuốc Qua nghiên cứu thấy có vùng Khau tinh, Bản bung, Nặm pàn, Nặm trang, Thác mơ, Phiêng bung… điều kiện tự nhiên thuận lợi cho việc trồng phát triển loài thuốc ▪ Xây dựng thực sách đặc thù hỗ trợ người dân nghèo thơn giáp rừng tìm kiếm sinh kế bền vững  Về tổ chức: + Các đơn vị, tổ chức xã hộicần chủ động xây dựng chương trình, dự án phát triển thuốc từ nguồn thuốc địa vừa đảm bảo an toàn, chất lượng vừa có tác dụng bảo tồn, phát triển nguồn tài nguyên thuốc gắn với mục tiêu phát triển kinh tế, xã hội địa phương + Xây dựng vườn thuốc xã khu Bảo tồn nhằm bảo tồn lồi thuốc q hiếm, có giá trị phát triển chúng thành nguồn giống phục vụ cho chương trình phát triển dược liệu địa phương + Quan tâm đầu tư nghiên cứu bảo tồn phát triển tài nguyên thuốc Xây dựng thành lập hợp tác xã thuốc Nam xã đem lại hiệu việc bảo tồn phát triển thuốc, đồng thời nâng cao lực tiếp cận thị trường cho người dân, làm tiền đề cho đạo trình thực trì, phát triển mơ hình bền vững địa phương +Giải pháp kết hợp công ty Dược Hội Đông y huyện, xã… để phát triển thuốc từ dược liệu khu vực 21 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận 1/ Nguồn tài nguyên thuốc khu BTTN Na Hang, tỉnh Tuyên Quang đa dạng, phong phú; qua điều tra, nghiên cứu xác định 647 loài, thuộc 433 chi của137 họ ngành Thực vật bậc cao có mạch (chiếm 55,7% tổng số lồi biết) So với tư liệu có đề tài luận án bổ xung thêm 180 loài 2/Tại khu BTTN Na Hang, đồng bào dân tộc Tày Dao có tập quán sử dụng thuốc để chăm sóc sức khỏe chữa trị bệnh từ lâu đời Các loài thuốc mà đồng bào Tày thường khai thác, sử dụng phong phú (223 loài/176 chi/84 họ) nhiều hẳn so với đồng bào dân tộc Dao (164 loài/136 chi/72 họ) Trong số có 151 lồi/130 chi/71 họ, hai dân tộc sử dụng làm thuốc 3/ Sàng lọc hoạt tính sinh học 18 mẫu thuốc thu từ khu BTTN Na Hang cho kết quả: 07 mẫu (TQ02, TQ05, TQ07, TQ10, TQ11, TQ15, TQ16) có tác dụng kháng tế bào ung thư phổi H1975, 03 mẫu (TQ05, TQ14, TQ15) ức chế tế bào ung thư vú MCF-7, 01 mẫu (TQ05) kháng tế bào ung thư vú MDA-MB-231, 01mẫu (TQ13) có khả kháng tế bào ung thư tuỵ tạng PANC1; 06 mẫu (TQ03, TQ04, TQ08, TQ09, TQ10, TQ13) có tác dụng mạnh α-glucosidase (ức chế >50% 100μg/ml) Đối với α-amylase, có 04 mẫu (TQ05, TQ15, TQ17, TQ18) có tác dụng ức chế >50% 500μg/ml 4/ Từ loài Ba bét nhỏ (Mallotus microcarpus Pax & K Hoffm) mẫu TQ02 phân lập xác định cấu trúc hoá học 11 hợp chất, có 01 chất 3-Methoxybenzensulfonicacid 4-O-β-D-glucopyranoside Hợp chất 3-Methoxybenzensulfonic acid 4-O-β-D-glucopyranosidevà hợp chất Methyl salicylate 2-rutinoside có tác dụng dịng tế bào ung thư phổi H1975, A549 ung thư vú MCF-7; Chất Leonuriside A lại có tác dụng mạnh tế bào ung thư vú MCF-7 với giá trị IC50 = 0,48 µM thử nghiệm 5/ Từ lồi Song môi tàu (Miliusa sinensis Fin & Gagnep) mẫu TQ13 phân lập xác định cấu trúc 02 hợp chất flavonoid là: Kaempferol 3-O-(2,6-di-O-α-Lrhamnopyranosyl)-β-D-galactopyranoside; Quercetin 3-O-(2,6-di-O-α-L-rhamnopyranosyl)-β-Dgalactopyranoside 01 hợp chất sterol Daucosterol Cả hai hợp chất flavonoid có tác dụng ức chế α-glucosidase với giá trị IC50 557,3 692,5µM 6/ Từ kết điều tra, nghiên cứu đánh giá tiềm năng, tình hình khai thác, bn bán, sử dụng 20 lồi thuốc có giá trị khu BTTN Na Hang, đề tài bước đầu lựa chọn, đề xuất 12 lồi thuốc có triển vọng cần nghiên cứu gây trồng, tạo nguồn dược liệu phục vụ phát triển kinh tế, xã hội địa phương, đồng thời góp phần bảo tồn bền vững 7/ Các kết nhân giống hai loài Râu hùm (Tacca chantrieri Andre) Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria Lour.) cho thấy: - Nhân giống sinh dưỡng hom từ củ (Râu hùm) từ thân (Hoàng đằng) có xử lý chất kích thích, cho kết đáng ý: Số hom giống nảy mầm, rễ cao - Nhân giống từ hạt loài Râu hùm (Tacca chantrieri Andre) có tỷ lệ nảy mầm thấp (chỉ đạt 11,0 - 14,3%) Cây giai đoạn vườn ươm từ - tháng tuổi có số 22 đạt 5,44 lá/cây, chiều cao vút đạt 8,15cm Cây sinh trưởng chậm, sau tháng tuổi chăm sóc vườn ươm Râu hùm chưa đủ tiêu chuẩn xuất vườn Trong loài Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria Lour.) tỷ lệ hạt nảy mầm cao (đạt 98,9% gieo cát ẩm) Cây giâm bầu sinh trưởng tốt, tỷ lệ sống cao đạt tới 98% sau tháng, bị sâu bệnh giai đoạn tháng tuổi đạt tiêu chuẩn đưa trồng diện tích đại trà 8/ Bước đầu đề xuất số giải pháp (xác định lồi thuốc có tiềm năng, kỹ thuật, tổ chức, quản lý, giáo dục ) nhằm phát triển, gây trồng, khai thác, sử dụng bảo tồn nguồn tài nguyên thuốc đa dạng khu BTTN Na Hang, tỉnh Tuyên Quang Kiến nghị Đề tài kiến nghị tiếp tục điều tra nghiên cứu, việc điều tra, đánh giá, lựa chọn thêm loài có tiềm phát triển Từ thử nghiệm nhân trồng lồi thuốc q, có tiềm nhằm bảo tồn phát triển khu BTTN Na Hang Riêng loài Râu hùm (Tacca chantrieri Andre), đề tài nghiên cứu 02 công thức xử lý gieo ươm hạt giống Râu hùm nên tỷ lệ nảy mầm hạt cịn thấp Cần có tiếp tục nghiên cứu biện pháp kỹ thuật nâng cao tỷ lệ nảy mầm hạt; chăm sóc theo dõi, đánh giá sinh trưởng Râu hùm, giai đoạn vườn ươm tới đủ tiêu chuẩn xuất vườn Tiếp tục điều tra, tìm kiếm lồi có chứa hoạt tính sinh học từ nguồn tài nguyên thuốc khu BTTN Na Hang, đặc biệt hoạt chất có triển vọng chữa trị bệnh hiểm nghèo (ung thư, tim mạch ) 23 NHỮNG ĐIỂM MỚI CỦA LUẬN ÁN  Lần hệ thống tương đối đầy đủ danh lục loài thuốc khu BTTN Na Hang, gồm: 647 loài, thuộc 433 chi, 137 họ ngành thực vật bậc cao có mạch, bổ sung thêm 180 loài; Đã điều tra, tập hợp số loài thuốc mà đồng bào khu BTTN Na Hang thường sử dụng: người Tày 223 loài người Dao 164 lồi Trong số có 151 loài, 130 chi 71 họ, hai dân tộc sử dụng làm thuốc  Bước đầu nghiên cứu nhân giống sinh dưỡng nhân giống từ hạt hai loài Râu hùm (Tacca chantrieri Andre) Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria Lour.) khu BTTN Na Hang  Từ loài Ba bét nhỏ (Mallotus microcarpus Pax & K Hoffm) phân lập xác định 11 hợp chất, phát có 01 hợp chất mới: 3-Methoxybenzensulfonic acid 4-O-β-D-glucopyranoside Từ lồi Song mơi tàu (Miliusa sinensis Fin & Gagnep.) phân lập xác định cấu trúc hợp chất flavonoid gồm: Kaempferol 3-O-(2,6di-O-α-L-rhamnopyranosyl)-β-D-galactopyranoside; Quercetin3-O-(2,6-di-O-α-Lrhamnopyranosyl)-β-D-galactopyranoside 01 hợp chất sterol: Daucosteol Cả hai hợp chất flavonoid có tác dụng ức chế α-glucosidase với giá trị IC50 557,3 692,5 M thử nghiệm hoạt tính 24 DANH MỤC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC ĐÃ CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Nguyễn Thị Hải, Nguyễn Thế Cường, Trần Huy Thái, Chu Thị Thu Hà, Nguyễn Anh Tuấn (2015), Bổ sung số kết điều tra, nghiên cứu nguồn tài nguyên thuốc khu rừng đặc dụng Na Hang, tỉnh Tuyên Quang Hội nghị Khoa học toàn quốc Sinh thái TNSV lần thứ 6, 2015, tr 1093-1099 Nguyễn Thị Hải, Chu Thị Thu Hà, Nguyễn Thế Cường, Nguyễn Anh Tuấn, Trần Huy Thái (2016), Nghiên cứu tri thức sử dụng thuốc đồng bào người Tày khu Bảo tồn thiên nhiên Na Hang, tỉnh Tuyên Quang J Viet Env., 2016, Vol 8, No 5, pp 227283 Tran Huy Thai, Nguyen Thi Hai, Nguyen Thi Hien, Chu Thi Thu Ha, Nguyen The Cuong, Pham Thanh Binh, Nguyen Hai Dang, Nguyen Tien Dat (2017), Cytotoxic constituents of Mallotus microcarpus Pax & Hoffm J Natural Product Communications, 2017, Vol 12 No 3, p 407-408 (SCIE) Nguyễn Thị Hải, Trần Huy Thái, Phạm Hữu Hạnh, Nguyễn Thị Hồng Hạnh, Đoàn Thị Phương Lý (2017), Nhân giống loài Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria Lour.) khu Bảo tồn thiên nhiên Na Hang, tỉnh Tuyên Quang TCNN&PTNT, số 19 kì tháng 10/2017, tr 151-157 Nguyễn Thị Hải, Trần Huy Thái,Nguyễn Thế Cường, Trần Thị Thanh Vân (2017), Đa dạng làm thuốc khu Bảo tồn thiên nhiên Na Hang, tỉnh Tuyên Quang (2017) Tạp chí Đại học Tân Trào, số 6, tháng 9/2017, tr 45-50 ... tài nguyên thuốc nhằm đề xuất giải pháp bảo tồn sử dụng bền vững số lồi có giá trị khu Bảo tồn thiên nhiên Na Hang, tỉnh Tuyên Quang" Mục tiêu luận án Nghiên cứu, đánh giá trạng nguồn tài nguyên. .. 3.1 Nghiên cứu nguồn tài nguyên thuốc khu BTTN Na Hang, tỉnh Tuyên Quang 3.1.1 Đa dạng nguồn tài nguyên thuốc khu BTTN Na Hang Kết nghiên cứu khu BTTN Na Hang, tỉnh Tuyên Quang xác định 647 loài. .. lồi thuốc có tiềm khai thác sử dụng; Đề xuất số giải pháp nhằm bảo tồn phát triển bền vững số loài thuốc khu BTTN Na Hang 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp kế thừa Kế thừa tài liệu có