Thao tác vơ trùng phòng xét nghiệm Khái niệm tầm quan trọng 1.1 Khái niệm Thao tác vô trùng tất việc làm trình thực quy trình kỹ thuật, khơng vi sinh vật từ môi trường từ người thực nhiễm vào đối tượng, vật liệu xét nghiệm ngược lại 1.2 Tầm quan trọng Thao tác vô trùng kỹ thuật quan trọng xét nghiệm vi sinh vật Nếu không thực thao tác vô trùng dẫn đến hậu sau: 1.2.1 Hỏng vật liệu xét nghiệm Tất môi trường ni cấy vi sinh vật đòi hỏi phải vơ trùng Môi trường nuôi cấy vi sinh vật bị bội nhiễm khơng bảo quản lạnh bị hỏng Ngồi mơi trường ni cấy, sinh phẩm kháng huyết thanh, kháng nguyên, bệnh phẩm số hố chất có đủ điều kiện cho vi sinh vật bội nhiễm phát triển làm hỏng 1.2.2 Không đánh giá kết làm sai lệch kết Nếu vật liệu xét nghiệm bị bội nhiễm không kiểm tra phát hiện, bị bội nhiễm q trình thực kỹ thuật, làm hỏng hồn tồn xét nghiệm khơng đánh giá kết Khi lấy bệnh phẩm trình phân lập bị bội nhiễm, vi sinh vật bội nhiễm phát triển lấn át vi sinh vật nguyên bệnh nhiễm trùng Đối với vi sinh vật gây bệnh hội nhiều khó xác định vi sinh vật phân lập có phải nguyên bội nhiễm Nếu mơi trường định danh tính chất sinh vật hố học bị bội nhiễm dẫn đến định danh sai, làm cho kết không phù họp.  1.2.3 Làm biến đổi vi sinh vật lưu giữ Các vi sinh vật giữ chủng mơi trường thích hợp Q trình lưu giữ phải đảm bảo vơ trùng tránh không để bị nhiễm vi sinh vật từ bên vào, làm cho vi sinh vật giữ bị lấn át có trao đổi chất liệu di truyền gây biến chủng 1.2.4 Ô nhiễm môi trường Vi sinh vật từ loại bệnh phẩm, từ mơi trường ni cấy gây nhiễm mơi trường sống bên ngồi 1.2.5 Gây nhiễm trùng cho cán y tế bệnh nhân Trong trình thực kỹ thuật, không thực đúng, thao tác vơ trùng, người làm xét nghiệm, bị nhiễm trùng trình lấy mẫu xét nghiệm bệnh nhân, không thực thao tác vơ trùng gây nhiễm trùng cho bệnh nhân 2 Các dụng cụ cần thiết để tiến hành cấy vơ trùng 2.1 Phòng xét nghiệm Được khử trùng: phòng xét nghiệm phải khử trùng hố chất sát trùng thích hợp Khơng có luồng gió lưu thơng: Tất cửa phòng xét nghiệm phải đóng kín khơng sử dụng quạt 2.2 Bốc vơ trùng 2.3 Đèn khử trùng: dùng đèn cồn để khử trùng que cấy q trình xử lý, ni cấy, phân lập vi sinh vật 2.4 Các dụng cụ vô trùng khác: đĩa petri, ống nghiệm, pipet phải tiệt trùng 2.5 Trang thiết bị bảo hộ cho người làm xét nghiệm Mũ, trang, áo chồng Mơt số thao tác vô trùng 3.1 Tiệt trùng que cấy - Tiệt trùng que cấy trước lấy mẫu xét nghiệm: Đưa que cấy vào lửa đèn cồn, giữ que cấy đứng thẳng, vòng tròn đầu kim loại chìm  nửa đèn, đầu que nóng đỏ cho que cấy nằm ngang đẩy lên phía để tiệt trùng tiếp phần thân que cấy - Tiệt trùng que cấy sau sử dụng: Que cấy phải tiệt trùng sau sử dụng Thao tác giống tiệt trùng que cấy trước lấy mẫu xét nghiệm Đốt que cấy lửa đèn cồn 3.2 Thao tác với ống nghiệm - Trước mở nút, ống nghiệm phải cầm nghiêng góc nhỏ 45 độ so với mặt phẳng ngang Nếu ống nghiệm mở tư đứng thẳng nghiêng góc lớn, bụi bẩn vi sinh vật khơng khí rơi vào ống nghiệm gây nhiễm bẩn - Ngay sau mở trước nút, ống nghiệm phải hơ lửa đèn cồn, nhằm mục đích tiêu diệt vi sinh vật bám miệng phần thành ống sát miệng Hơ đủ nóng, vừa hơ vừa xoay để tồn miệng ống nóng Tư cầm nghiệm 3.3 Cách để đĩa petri - Trên bàn: Khi đĩa petri khơng gói để bàn nắp phải Nếu để đĩa lật ngược bụi vi sinh vật khơng khí rơi vào khe nắp đĩa, rơi vào môi trường nuôi cấy - Trong tủ ấm: Sau cấy làm kháng sinh đồ, đĩa petri đặt ngược tủ ấm (nắp phía dưới) để hạn chế bay nước từ môi trường thạch Đĩa petri đặt bàn tư (a) sai (b) 3.4 Cấy phân vùng môi trường phân lập Phân lập loại vi khuẩn kỹ thuật nhằm tách vi khuẩn từ mẫu xét nghiệm có nhiều loại vi khuẩn khác Kết q trình có vi khuẩn Kỹ thuật cấy phân vùng thực theo trình tự sau: - Lấy mẫu cần phân lập vi khuẩn đưa vào môi trường: Dùng que cấy vô trùng lấy mẫu đặt vào vị trí gần rìa đĩa mơi trường - Tạo vùng thứ nhất: Dùng que cấy tiệt trùng ria qua nơi đặt mẫu xét nghiệm tạo thành vùng chiếm khoảng 1/4 diện tích đĩa mơi trường - Tạo vùng thứ hai: Đốt que cấy để tiệt trùng sau ria để tạo vùng thứ hai Những đường ria cắt vào đầu đường ria cuối vùng thứ Diện tích vùng thứ hai chiếm khoảng 1/3 diện tích đĩa mơi trường - Tạo vùng thứ ba: Đảo mặt que cấy ria tạo vùng thứ ba, cách làm tương tự ria tạo vùng thứ hai Diện tích vùng thứ ba chiếm khoảng 1/3 diện tích đĩa mơi trường Chú ý: Các đường ria cấy xít tận dụng diện tích bề mặt môi trường để dàn mỏng mẫu xét nghiệm Sơ đồ cấy phân vùng đĩa môi trường phân lập 3.5 Cấy vi khuẩn lên môi trường thạch nghiêng Mơi trường đặc đun nóng hố lỏng, đổ vào ống nghiệm, giữ ống tư nghiêng thích họp, chờ thạch đặc lại ống thạch nghiêng Kỹ thuật cấy thạch nghiêng thực theo trình tự sau: - Dùng que cấy vô trùng lấy vi khuẩn, huyền dịch lấy ăng cấy, khuẩn lạc chạm đầu que cấy lên mặt khuẩn lạc đủ - Mở nút ống môi trường, khử trùng miệng ống, đặt đầu que cấy lấy vi khuẩn vào chỗ thấp mặt thạch, ria ria lại nhiều làn, sau vừa ria vừa đưa dần que cấy lên cao đến hết mặt thạch - Khử khuẩn miệng ống nút ống môi trường Khử khuẩn que cấy đặt lên giá Đặt ống môi trường ria cấy vào tủ ấm - Đối với mơi trường xác định tính chất sinh vật hố học vi khuẩn, ống mơi trường có phần đứng phần nghiêng Đầu tiên vi khuẩn cắm sâu vào phần đứng, sau kéo que cẩy lên ria bề mặt phần nghiêng ... để tiến hành cấy vơ trùng 2.1 Phòng xét nghiệm Được khử trùng: phòng xét nghiệm phải khử trùng hoá chất sát trùng thích hợp Khơng có luồng gió lưu thơng: Tất cửa phòng xét nghiệm phải đóng kín... Trang thiết bị bảo hộ cho người làm xét nghiệm Mũ, trang, áo chồng Mơt số thao tác vô trùng 3.1 Tiệt trùng que cấy - Tiệt trùng que cấy trước lấy mẫu xét nghiệm: Đưa que cấy vào lửa đèn cồn,... tiệt trùng tiếp phần thân que cấy - Tiệt trùng que cấy sau sử dụng: Que cấy phải tiệt trùng sau sử dụng Thao tác giống tiệt trùng que cấy trước lấy mẫu xét nghiệm Đốt que cấy lửa đèn cồn 3.2 Thao