BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀ O TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN  TRẦN NHƢ̣T TÂN ĐINH LƢỢNG HAI KHÁNG SINH SULFAGUANIDINE VÀ ̣ SULFAMETHOXAZOLE THUỘC NHÓM SULFAMIDE BẰNG PHƢƠNG PHÁP NITRITE LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Hóa Ho ̣c Cầ n Thơ 5/2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀ O TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN  LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC ĐINH LƢỢNG HAI KHÁNG SINH SULFAGUANIDINE VÀ ̣ SULFAMETHOXAZOLE THUỘC NHÓM SULFAMIDE BẰNG PHƢƠNG PHÁP NITRITE HƢỚNG DẪN KHOA HỌC SINH VIÊN THỰC HIỆN ThS Lâm Phƣớc Điền Trầ n Nhƣ ̣t Tân (MSSV: 2077031) Lớp Hóa Học - Khóa 33 Cầ n Thơ 5/2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TƢ̣ NHIÊN  Đề tài “Đinh ̣ lƣơ ̣ng hai kháng sinh Sulfaguanidine và Sulfamethoxazole thuô ̣c nhóm Sulfamide bằng phƣơng pháp Nitrite” Lời cam đoan: Cầ n Thơ, ngày … tháng … năm 2011 Trầ n Nhƣ̣t Tân Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p đa ̣i ho ̣c Chuyên ngành: Hóa Học, mã ngành: 204 Đã đƣơ ̣c bảo vê ̣ và đƣơ ̣c duyê ̣t Hiê ̣u trƣởng: Trƣởng khoa: Trƣởng chuyên ngành Cán hƣớng dẫn Lâm Phƣớc Điề n TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN Độc lập - Tự - Hạnh phúc BỘ MÔN HÓA HỌC - - NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƢỚNG DẪN Cán hƣớng dẫn: ThS Lâm Phƣớc Điề n Đề tài: “Đinh ̣ lƣơ ̣ng hai kháng sinh Sulfaguanidine và Sulfamethoxazole thuô ̣c nhóm Sulfamide bằ ng phƣơng pháp Nitri te” Sinh viên thực hiện: Trầ n Nhƣ̣t Tân - MSSV: 2077031 - Lớp: Hóa Học - Khóa 33 Nội dung nhận xét: a Nhận xét hình thức LVTN: b Nhận xét nội dung LVTN:  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c Nhận xét sinh viên thực đề tài: d Kết luận, đề nghị và điểm: Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2011 Cán hƣớng dẫn Lâm Phƣớc Điề n TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN Độc lập - Tự - Hạnh phúc BỘ MƠN HĨA HỌC - - NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN Cán chấm phản biện: Đề tài: “Đinh ̣ lƣơ ̣ng hai kháng sinh Sulfaguanidine và Sulfamethoxazole thuô ̣c nhóm Sulfamide bằng phƣơng pháp Nitrite” Sinh viên thực hiện: Trầ n Nhƣ̣t Tân - MSSV: 2077031 - Lớp: Hóa Học - Khóa 33 Nội dung nhận xét: a Nhận xét hình thức LVTN: b Nhận xét nội dung LVTN:  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c Nhận xét sinh viên thực đề tài d Kết luận, đề nghị và điểm: Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2011 Cán phản biện LỜI CẢM ƠN  Qua trình thực luận văn này, đã học hỏi đƣợc nhiều kiến thức, kinh nghiệm kỹ thực hành bổ ích Đó nhờ giúp đỡ nhiệt tình thầy cơ, gia đình bạn bè Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: Thầ y Lâm Phước Điền đã động viên, giúp đỡ và tạo điều kiện tốt cho em suốt trình thực luận văn Tất quý thầy cô môn Hóa, Khoa Khoa học Tự nhiên đã truyền đạt cho em kiến thức vơ bổ ích ś t quá trình học tập nghiên cứu Tấ t cả thành viên Gia đình đã ln ủng hộ, động viên và chia sẽ lúc khó khăn, cảm ơn Cha, mẹ đã sinh thành, nuôi dƣỡng và tạo điều kiện tố t nhấ t c ả vật chất lẫn tinh thần để yên tâm học tập đến ngày Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn bạn lớp Hóa Học K33 đã động viên giúp đỡ suốt thời gian học tập trƣờng Cần Thơ, tháng năm 2011 Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang i TÓM TẮT Đề tài : “Đinh ̣ lƣơ ̣ng hai kháng sinh Sulfaguanidin e và Sulf amethoxazole thuô ̣c nhóm Sulfamid e bằ ng phƣơng pháp Nitrit e” đƣơ ̣c thƣ̣c hiê ̣n thƣ̣c hiê ̣n ta ̣i phòng thực tập Hóa Phân Tích , Khoa Khoa ho ̣c Tƣ̣ nhiên , Đa ̣i ho ̣c Cầ n Thơ nhằ m bƣớc đầ u đánh giá chấ t lƣơ ̣ng của thuố c thông qua viê ̣c xác ̣ nh hàm lƣơ ̣ng thƣ̣c của hoạt chất có sản phẩm Đồng thời với đề tài này chúng hy vọng sẽ góp phần vào việc xây dựng các bài thực hành phân tích định lƣợng dƣợc phẩm cho chƣơng trình đào tạo chuyên ngành Hóa Dƣợ c Trong giới ̣n đề tài , chúng tiến hành định lƣơ ̣ng hai hoa ̣t chấ t sulfaguanidine và sulfamethoxazole có chế phẩ m thuố c viên nén Ganidan và Cotrimstada forte với hai cách xác đinh ̣ điể m tƣơng đƣơng phƣơng pháp Nitrite là dùng chỉ thị ngoại (dung dich ̣ hồ tinh bô ̣t tẩ m KI) và chỉ thị nội (dung dich ̣ đỏ trung tiń h 0,1%) Qua thƣ̣c nghiê ̣m xác định đƣợc h àm lƣợng hoạt chất sulfaguanidine thuố c viên nén Ganidan đa ̣t 93,2% dùng chỉ thi ̣ngo ại phát hiê ̣n điể m tƣơng đƣơng và đa ̣t 92,4% dùng chỉ thi ̣nô ̣i phát hiê ̣n điể m tƣơng đƣơng, hàm lƣợng hoạt chất sulfamethoxazole thuố c viên nén Cotrimstada forte đa ̣t 101,63% dùng chỉ thi ̣ngoa ̣i phát hiê ̣n điể m tƣơng đƣơng và đạt 99,63% dùng chỉ thị nội phát điểm tƣơng đƣơng Sử dụng số thao tác thống kê để so sánh đô ̣ lă ̣p la ̣i của hai cách xác đinh ̣ điể m tƣơng đƣơng đƣơ ̣c sƣ̉ du ̣ng quá trin ̀ h thƣ̣c nghiê ̣m, ta thấ y rằ ng hai phƣơng pháp có độ lặp lại nhƣ Trang ii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM LƢỢC .ii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN VỀ KHÁNG SINH 1.1 Lịch sử kháng sinh 1.2 Khái niệm kháng sinh 1.3 Phân loại kháng sinh 1.3.1 Dựa vào mức độ tác dụng 1.3.2 Dựa vào phổ tác dụng của kháng sinh 1.3.3 Dựa vào chế tác dụng 1.3.3.1 Nhóm kháng sinh tác dụng lên tế bào vi khuẩn 1.3.3.2 Nhóm kháng sinh tác dụng lên hệ phi bào 1.4 Các nhóm kháng sinh chính 1.4.1 Nhóm β-lactamine 1.4.1.1 Các Peniciline 10 1.4.1.2 Các cephalosporine 11 1.4.1.3 Các chất ức chế β-lactamase (cấ u trúc Penem) 12 1.4.1.4 Các Penem 12 1.4.1.5 Monobactam aztreonem 13 1.4.1.6 Kháng sinh Vancomycine 13 1.4.2 Nhóm aminoside hay aminoglycoside 14 1.4.2.1 Streptomycine 14 1.4.2.2 Các aminoside khác 15 1.4.3 Chloramphenicol và dẫn xuấ t 16 1.4.4 Nhóm tetracycline 17 1.4.5 Nhóm Sulfamide 19 Trang iii Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên V3 = 3,85 mL Vâ ̣y hàm lƣơ ̣ng phầ n trăm của NaNO2 có mẫu là: % NaNO2  (25  X ).3,45  (25  3,83).3,45  98,3% 1,012 ● Pha dung dich ̣ Natri nitrite nồ ng đô ̣ 0,1N Lƣơ ̣ng NaNO lít dung dịch natri nitrite 0,1N là 6,9 g, nhƣng hàm lƣơ ̣ng phầ n trăm của NaNO dạng tinh thể chỉ là 98,3% nên lƣơ ̣ng cân NaNO tinh thể để pha đƣợc lít dung dịch natri nitrite 0,1N là: m 6,9 100  7,019 g 98,3 Cân chính xác 7,019 gam NaNO2 tinh thể , hòa tan và định mức tới vạch bằng nƣớc cấ t bình đinh ̣ mƣ́c dung tích lít, đâ ̣y nút lắ c đề u ta đƣơ ̣c lít dung dịch natri nitrite nồ ng đô ̣ 0,1N ■ Cách pha các chấ t chỉ thi ̣ ● Pha dung dich ̣ hồ tinh bô ̣t 1% Cân g hồ tinh bô ̣t , sau đó dùng đũa thủy tinh khuấ y kỹ 10 mL nƣớc cấ t , cho tiế p nƣớc cấ t đã đun nón g vào đủ 100 mL, tiế p tu ̣c đun đế n dung dich ̣ cố c suố t Dung dich ̣ hồ tinh bô ̣t 1% này đƣợc sử dụng tuần ● Pha hồ tinh bô ̣t tẩ m kali iodua Hoà tan 0,5 g Kali iodua vào 100 ml dung dịch hồ tinh bột 1%, dùng đũa t hủy tinh khuấ y đề u, bảo quản lọ thuỷ tinh màu nâu, nút mài Độ nhạy: Trộn 0,05 mL (1 giọt) dung dịch natri nitrite 0,1N mL acid hydrochloric, thêm nƣớc vừa đủ 100 mL Mô ̣t gio ̣t dung dịch thu đƣợc kế t hơ ̣p với mô ̣t giọt hồ tinh bột tẩm kali iodua phải xuất màu xanh lam tức khắc Chú ý: Vì thời gian sử dụng hiệu dung d ịch chỉ khoảng 48 giờ, nên mỗi lầ n dùng chỉ nên pha khoảng 10 mL ● Pha chỉ thi đo ̣ ̉ trung tính (C15H16N4 HCl) Hoà tan 0,1 g đỏ trung tính 100 mL ethanol 50°, lắ c kỹ cho tan hoàn toàn ta SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang 39 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên đƣơ ̣c dung dich ̣ chỉ thi ̣đỏ trung tính 0,1% Cho vào chai đƣ̣ng màu sẫm 2.2.2.2 Phân tích mẫu Sơ đồ thí nghiê ̣m P gam mẫu thuốc đã nghiề n miṇ 15 mL dung dich ̣ HCl 10% để hòa tan, thêm tiế p khoảng 150 mL nƣớc Đun nhe ̣ máy khuấ y tƣ̀ gia nhiê ̣t hoă ̣c bế p đế n suố t Làm lạnh chậu nƣớc đá đến nhiệt độ khoảng tƣ̀ 0-5°C Đinh ̣ lƣơ ̣ng bằ ng dung di ch ̣ NaNO2 0,1N PP Dùng chỉ thị ngoại phát hiê ̣n điể m tƣơng đƣơng SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân PP Dùng chỉ thị nội phát điể m tƣơng đƣơng Trang 40 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên Cân chiń h xác p gam (chính xác đến mg ) thuố c đã nghiề n miṇ cho vào bin ̀ h tam giác có chứa sẵn 15 mL HCl 10%, lắ c đề u, sau đó thêm nƣớc vào đế n khoảng 165 mL, tiế p theo ta tiế n hành đun máy khuấ y tƣ̀ gia nhiê ̣t hoă ̣c bế n điê ̣n đế n mẫu tan hoàn toàn và dung dị ch trở nên suố t Ngƣng đun , lấ y bin ̀ h khỏi bế p và tiế n hành làm lạnh chậu nƣớc đá đến nhiệt độ vào khoảng 0-5°C Đem đinh ̣ phân bằ ng dung dich ̣ natri nitrite (NaNO2) 0,1N đã chuẩ n bi ̣sẵn buret , lúc đầu tốc độ khoảng mL/phút, đến gần điểm tƣơng đƣơng ta chuẩn độ chậm lại , khoảng 0,5 mL/phút (chuẩ n đô ̣ tƣ̀ng gio ̣t) Xác định điểm tƣơng đƣơng bằng chất chỉ thị nội (dung dich đỏ trung tiń h 0,1%) và chỉ thị ngoại (dung dich ̣ hồ tinh bô ̣ t tẩ m KI) nhƣ đã trin ̀ h bày và ghi nhận thể tích natri nitrite đã dùng 2.2.2.3 Cơ sở tính toán[7] Tƣ̀ phƣơng trình phản ƣ́ng (1) ta thấ y rằ ng ̣ số cân bằ ng của các chấ t là bằ ng nhau, từ thể tích dung dịch natri nitrite 0,1N đƣơ ̣c ghi nhâ ̣n phầ n thƣ̣c nghiê ̣m, ta tiń h đƣơ ̣c số mol của chúng đã tham gia phản ƣ́ng , đó cũng là số mol của chấ t cầ n phân tích Với nhƣ̃ng chấ t phân tích là nhƣ̃ng chấ t đã biế t khố i lƣơ ̣ng mol phân tƣ̉ nhƣ sulfaguanidine (M = 214) và sulfamethoxazole (M = 253) ta sẽ tin ́ h đƣơ ̣c khố i lƣơ ̣ng của chúng có mẫu đã tính toán đƣơ ̣c số mol ở phầ n Mô ̣t mL dung dich ̣ natri nitrite 0,1N đƣơ ̣c sƣ̉ du ̣ng để chuẩ n đô ̣ tƣơng ƣ́ng với 0,0001 mol NaNO2 tham gia phản ƣ́ng với chấ t cầ n phân tích Do đó , mỗi mL dung dịch Natri nitrite dùng phản ứng chuẩn độ sẽ tƣơng ứng với 0,0214 gam sulfaguanidine và 0,0253 gam sulfamethoxazole SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang 41 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên Chƣơng KẾT QUẢ - THẢO LUẬN 3.1 Đinh ̣ lƣợng sulfaguanidine Cân 10 viên chế phẩ m sulfaguanidine, khố i lƣơ ̣ng là 6,08 gam Vâ ̣y khố i lƣơ ̣ng trung biǹ h mô ̣t viên thuố c sulfaguanidine là 0,608 gam Nghiề n miṇ thuố c bằ ng cố i sƣ́ sau đó cho vào chai thủy tinh , đâ ̣y kín nút Phầ n thuố c đã nghiề n miṇ này đƣơ ̣c dùng quá triǹ h đinh ̣ lƣơ ̣ng 3.1.1 Xác định điểm tƣơng đƣơng bằng chỉ thị hồ tinh bột tẩm KI (PP1) Cân 0,3 gam (chính xác đến 0,002 gam) mẫu thuố c đã nghiề n ở cho vào bin ̀ h tam giác rồ i tiế n hành thí nghiê ̣m theo cách nhƣ đã trin ̀ h bài ở trên, lặp la ̣i thí nghiê ̣m lầ n và sắ p xế p số liê ̣u tăng dầ n, ta thu đƣơ ̣c bảng số liê ̣u thô nhƣ sau: Mẫu VNaNO2 (mL) 10,35 10,65 10,70 10,75 10,75 10,75 10,75 10,80 ■ Xƣ̉ lý thố ng kê [2] Qua bảng số liê ̣u ta nhâ ̣n thấ y V = 10,35 mL là giá tri ̣khác biê ̣t nhấ t so với các giá trị còn lại , có thể là giá tri ̣bấ t thƣờng cầ n loa ̣i bỏ , sƣ̉ du ̣ng chuẩ n Dixon (Qp,n) thố ng kê để kiể m tra, ta có đƣơ ̣c kế t quả sau: R = Vmax - Vmin = 10,80 - 10,35 = 0,45 Vì giá trị ta nghi ngờ là V1 nên tính đƣơ ̣c Qtn  V2  V1 10,65  10,35   0,67 R 0,45 Với xác suấ t 95% (P = 0,95) và số mẫu là n = 8, ta có: Qlt = QP,n = Q0,95,8 = 0,48 (phụ luc 1) Ta thấ y Qtn = 0,67 > Qlt = 0,48 Vâ ̣y loa ̣i bỏ giá tri ̣V1 = 10,35 mL Sau loa ̣i bỏ giá tri ̣V = 10,35 mL, ta thu đƣơ ̣c số liê ̣u mới và bảng số liê ̣u này đƣơ ̣c dùng để tính toán sau cùng SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang 42 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên Bảng 3.1 Số liêụ sau xƣ̉ lý thố ng kê điṇ h lƣơ ̣ng Sulfaguanidine PP1 Mẫu VNaNO2 (mL) 10,65 10,70 10,75 10,75 10,75 10,75 10,80 mSulfaguanidine(g) 0,228 0,229 0,230 0,230 0,230 0,230 0,231 0,230 m Sulfaguanidine (g) ■ Tính hàm lƣơ ̣ng phầ n trăm so với công bố sản phẩm Dƣ̣a vào kế t quả thƣ̣c nghiê ̣m tƣ̀ Bảng 3.1 ta xác đinh ̣ đƣơ ̣c hàm lƣơ ̣ng thƣ̣c tế (mtt) sulfaguanidine có mô ̣t viên thuố c sẽ là : mtt  0,230  0,608  0,466 g 0,3 Trong đó: 0,3 là khối lƣợng chế phẩm đem phân tić h 0,608 là khối lƣợng viên thuốc 0,230 là khối lƣợng sulfaguanidine phân tić h đƣơ ̣c 0,3 gam chế phẩ m Vâ ̣y hàm lƣơ ̣ng phầ n trăm của sulfaguanidine (%SG) so với lƣơ ̣ng công bố sản phẩm là: %SG  mtt  100 0,466  100   93,2% 0,5 0,5 Trong đó: SG là viế t tắ t của sulfaguanidine mtt là khối lƣợng sulfaguanidine mô ̣t viên thuố c có đƣơ ̣c tƣ̀ thƣ̣c nghiê ̣m 0,5 là khối lƣợng sulfaguanidine công bố mô ̣t viên thuố c SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang 43 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên 3.1.2 Xác định điểm tƣơng đƣơng bằ ng chỉ thi đo ̣ ̉ trung tính (PP2) Cân 0,3 gam (chính xác đến 0,002 gam) mẫu thuố c đã nghiề n ở cho vào bình tam giác rồ i tiế n hành thí nghiê ̣m theo cách nhƣ đã trin ̀ h bài ở trên, lặp la ̣i thí nghiê ̣m lầ n và sắ p xế p số liê ̣u tăng dầ n, ta thu đƣơ ̣c bảng số liê ̣u thô nhƣ sau: Mẫu VNaNO2 (mL) 10,60 10,65 10,65 10,65 10,70 10,70 10,70 10,85 ■ Xƣ̉ lý thố ng kê [2] Qua bảng số liê ̣u ta nhâ ̣n thấ y V = 10,85 mL là giá tri ̣khác biê ̣t nhấ t so với các giá trị còn lại , có thể là giá tri ̣bấ t thƣờng cầ n loa ̣i bỏ , sƣ̉ du ̣ng chuẩ n Dixon (Qp,n) thố ng kê để kiể m tra, ta có đƣơ ̣c kế t quả sau: R = Vmax - Vmin = 10,85– 10,60 = 0,25 Vì giá trị ta nghi ngờ là V8 nên tin ́ h đƣơ ̣c Qtn  V8  V7 10,85  10,70   0,60 R 0,25 Với xác suấ t 95% (P = 0,95) và số mẫu là n = 8, ta có: Qlt = Q0,95,8 = 0,48 (phụ luc 1) Ta thấ y Qtn = 0,60 > Qlt = 0,48 Vâ ̣y loa ̣i bỏ giá tri ̣V8 = 10,85 mL Loại bỏ giá trị V = 10,85 mL, ta thu đƣơ ̣c s ố liệu dùng để tính toán sau cùng Bảng 3.2 Số liêụ sau xƣ̉ lý thố ng kê đinh ̣ lƣơ ̣ng sulfaguanidine PP2 Mẫu VNaNO2 (mL) 10,60 10,65 10,65 10,65 10,70 10,70 10,70 mSulfaguanidine (g) 0,227 0,228 0,228 0,228 0,229 0,229 0,229 m Sulfaguanidine (g) SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân 0,228 Trang 44 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên ■ Tính hàm lƣơ ̣ng phầ n trăm so với công bố sản phẩ m Dƣ̣a vào kế t quả thƣ̣c nghiê ̣m tƣ̀ Bảng 3.2 ta xác đinh ̣ đƣơ ̣c hàm lƣơ ̣ng thƣ̣c tế (mtt) sulfaguanidine có mô ̣t viên thuố c sẽ là: mtt  0,228  0,608  0,462 g 0,3 Trong đó: 0,3 là khối lƣợng chế phẩm đem phân tích 0,608 là khối lƣợng viên thuốc 0,228 là khối lƣợng sulfaguanidine phân tích đƣơ ̣c 0,5 g chế phẩ m Vâ ̣y hàm lƣơ ̣ng phầ n trăm của sulfaguanidine (%SG) so với lƣơ ̣ng công bố sản phẩm là: %SG = mtt 100 0,462 100   92,4% 0,5 0,5 Trong đó: SG là viế t tắ t của sulfaguanidine mtt là khối lƣợng sulfaguanidine mô ̣t viên thuố c tƣ̀ thƣ̣c nghiê ̣m 0,5 là khối lƣơ ̣ng sulfaguanidine công bố mô ̣t viên thuố c ■ So sánh đô ̣ lă ̣p la ̣i của hai phƣơng pháp xác đinh ̣ điể m tƣơng đƣơng [2] Dùng chuẩn thống kê Fisher (FP,f1,f2 ) với xác suấ t P = 0,95 hai giá tri ̣f1 = n1 -1 = và f2 = n2 – = 6, (n là số lầ n lă ̣p la ̣i thí nghiê ̣m hay mẫu phân tić h) Thể tić h NaNO sƣ̉ du ̣ng phản ƣ́ng chuẩ n đô ̣ (sau xƣ̉ lý thố ng kê) tƣơng ứng với phƣơng pháp dùng chỉ thị là hồ tinh bột tẩm KI (PP1) và chỉ thị đỏ trung tính (PP2) đƣợc thể bảng dƣới Bảng 3.3 Số liêụ dùng so sánh đô ̣ lă ̣p la ̣i đinh ̣ lƣơ ̣ng sulfaguanidine SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang 45 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên Mẫu PP1[VNaNO2 (mL)] 10,65 10,70 10,75 10,75 10,75 10,75 10,80 PP2[VNaNO2 (mL)] 10,60 10,65 10,65 10,65 10,70 10,70 10,70 Tính toán phƣơng sai: PP1: S12  0,05 PP2: S22  0,04 Giá trị F thực nghiệm là Ftn  S12 0,05   1,25 S 22 0,04 Giá trị F lý thuyết là Flt  F0,95.6,6  4,42 (phụ luc 2) Ta thấ y Ftn  1,25 < Flt  4,42 Vậy hai phƣơng pháp có độ lặp la ̣i nhƣ 3.2 Đinh ̣ lƣơ ̣ng sulfamethoxazole Cân 10 viên chế phẩ m Cotrimstada forte (mỗi viên gồ m 800 mg sulfamethoxazole và 160 mg trimethoprim), khố i lƣơ ̣ng là 11,07 gam Vâ ̣y khố i lƣơ ̣ng trung bình mô ̣t viên chế phẩ m thuố c Cotrimstada forte là thuố c bằ ng cố i sƣ́ sau đó cho vào chai thủy tinh 1,107 gam Nghiề n miṇ , đâ ̣y kin ́ nút Phầ n thuố c đã nghiề n mịn này đƣợc dùng quá trình định lƣợng 3.2.1 Xác đinh ̣ điể m tƣơng đƣơng bằ ng chỉ thi hồ ̣ tinh bô ̣t tẩ m KI (PP1) Cân 0,5 gam (chính xác đến 0,002 gam) mẫu thuố c đã nghiề n ở cho vào bin ̀ h tam giác rồ i tiế n hành thí nghiê ̣m theo cách nhƣ đã trình bài ở trên, lặp la ̣i thí nghiệm lầ n và sắ p xế p số liê ̣u tăng dầ n, ta thu đƣơ ̣c bảng số liê ̣u thô nhƣ sau: Mẫu VNaNO2 (mL) 14,45 14,45 14,45 14,50 14,55 14,55 14,80 14,80 ■ Xƣ̉ lý thố ng kê [2] SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang 46 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên Qua bảng số liê ̣u ta nhâ ̣n thấ y V = V8 = 14,80 mL là giá trị khác biệt so với các giá trị còn lại , có thể là giá tri ̣bấ t thƣờng cầ n loa ̣i bỏ , sƣ̉ du ̣ng chuẩ n Dixon (Qp,n) thố ng kê để kiể m tra, ta có đƣơ ̣c kế t quả sau: R = Vmax - Vmin = 14,80– 14,45 = 0,35 Vì hai giá trị ta nghi ngờ là V và V nên tin ́ h đƣơ ̣c giá tri ̣Q thƣ̣c nghiê ̣m nhƣ sau: Qtn  V8  V6 V7  V6 14,80  15,55    0,71 R R 0,35 ● Xét trƣờng hơ ̣p V8 Với xác suấ t 95% (P = 0,95) và số mẫu là n = 8, ta có: Qlt = QP,n = Q0,95,8 = 0,48 (phụ luc 1) Ta thấ y Qtn = 0,71 > Qlt = 0,48 Vâ ̣y loa ̣i bỏ giá tri ̣V8 = 14,80 mL ● Xét trƣờng hơ ̣p V7 Với xác suấ t 95% (P = 0,95) và số mẫu là n = (do đã loa ̣i bỏ V8), ta có: Qlt = QP,n = Q0,95,7 = 0,51 (phụ luc 1) Ta thấ y Qtn = 0,71 > Qlt = 0,51 Vâ ̣y loại bỏ giá trị V7 = 14,80 mL Sau loa ̣i bỏ hai giá tri ̣V và V 8, ta thu đƣơ ̣c số liê ̣u mới và bảng số liê ̣u này đƣơ ̣c dùng để tính toán sau cùng Bảng 3.4 Số liêụ sau xƣ̉ lý thố ng kê đinh ̣ lƣơ ̣ng sulfamethoxazole - PP1 Mẫu VNaNO2 (mL) 14,45 14,45 14,45 14,50 14,55 14,55 mSulfamethoxazole (g) 0,366 0,366 0,366 0,367 0,368 0,368 m Sulfamethoxazol (g) 0,367 ■ Tính hàm lƣơ ̣ng phầ n trăm so với công bố sản phẩ m SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang 47 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên Dƣ̣a vào kế t quả thƣ̣c nghiê ̣m t Bảng 3.4 ta xác đinh ̣ đƣơ ̣c hàm lƣơ ̣ng thƣ̣c tế (mtt) sulfamethoxazole có mô ̣t viên Cotrimstada forte sẽ là : mtt  0,367 1,107  0,813 g 0,5 Trong đó: 0,5 là khối lƣợng chế phẩm đem phân tích 1,107 là khối lƣơ ̣ng mô ̣t viên nén Cotrimstada forte 0,367 là khối lƣợng sulfamethoxazole phân tić h đƣơ ̣c 0,5 g chế phẩ m Tƣ̀ kế t quả thƣ̣c nghiê ̣m thì hàm lƣơ ̣ng phầ n trăm của sulfamethoxazole (%SM) so với công bố sản phẩ m là : %SM = mtt 100 0,813 100   101,63% 0,8 0,8 Trong đó: SM là viế t tắ t của sulfamethoxazole mtt là khối lƣợng sulfamethoxazole tƣ̀ thƣ̣c nghiê ̣m mô ̣t viên thuố c 0,8 là khối lƣợng sulfamethoxazole công bố mô ̣t viên thuố c 3.1.2 Xác định điểm tƣơng đƣơng bằ ng chỉ thi đo ̣ ̉ trung tính (PP2) Cân 0,5 gam (chính xác đến 0,002 gam) mẫu thuố c đã nghiề n ở cho vào bin ̀ h tam giác rồ i tiế n hành thí nghiê ̣m theo cách nhƣ đã trình bài ở , lặp la ̣i thí nghiê ̣m lầ n và sắ p xế p số liê ̣u tăng dầ n, ta thu đƣơ ̣c bảng số liê ̣u thô nhƣ sau: Mẫu VNaNO2 (mL) 14,25 14,25 14,20 14,20 14,15 14,20 14,25 14,15 Qua bảng số liê ̣u nhâ ̣n thấ y không có giá tri ̣thể tích nào có thể là giá tri ̣bấ t thƣờng nên bảng số liê ̣u đƣơ ̣c dùng để tin ́ h toán sau cùng Bảng 3.5 Số liêụ sau xƣ̉ lý thố ng kê đinh ̣ lƣơ ̣ng sulfamethoxazole - PP2 SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang 48 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên Mẫu VNaNO2 (mL) 14,25 14,25 14,20 14,20 14,15 14,20 14,25 14,15 mSulfamethoxazole (g) 0,361 0,361 0,359 0,359 0,358 0,359 0,361 0,358 0,360 m Sulfamethoxazol (g) ■ Tính hàm lƣơ ̣ng phầ n trăm so với công bố sản phẩ m Dƣ̣a vào kế t quả thƣ̣c nghiê ̣m tƣ̀ Bảng 3.5 ta xác đinh ̣ đƣơ ̣c hàm lƣơ ̣ng thƣ̣c tế (mtt) sulfamethoxazole có viên Cotrimstada forte sẽ là: mtt  0,360  1,107  0,797 g 0,5 Trong đó: 0,5 là khối lƣợng chế phẩm đem phân tích 1,107 là khối lƣợng viên nén Cotrimstada forte 0,360 là khối lƣợng sulfamethoxazole phân tích đƣơ ̣c 0,5 g chế phẩ m Tƣ̀ kế t quả thƣ̣c nghiê ̣m thì hàm lƣơ ̣ng phầ n trăm của so với công bố sản phẩ m là : %SM = sulfamethoxazole (%SM) mtt  100 0,797  100   99,63% 0,8 0,8 Trong đó: SM là viế t tắ t của sulfamethoxazole mtt là khối lƣợng sulfamethoxazole tƣ̀ thƣ̣c nghiê ̣m mô ̣t viên thuố c 0,8 là khối lƣợng sulfamethoxazole công bố mô ̣t viên thuố c ■ So sánh đô ̣ lă ̣p la ̣i của hai phƣơng phá p xác đinh ̣ điể m tƣơng đƣơng [2] SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang 49 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên Dùng chuẩn thống kê Fish er (FP,f1,f2) với xác suấ t P = 0,95, hai giá tri ̣f = n1 -1 = và f2 = n2 – = (n là số mẫu phân tić h sau xƣ̉ lý thông kê) Thể tić h NaNO sƣ̉ du ̣ng phản ƣ́ng chuẩ n đô ̣ (sau xƣ̉ lý thố ng kê) tƣơng ứng với phƣơng pháp d ùng chỉ thị là hồ tinh bột tẩm KI (PP1) và chỉ thị đỏ trung tính (PP2) đƣơ ̣c thể hiê ̣n bảng dƣới Bảng 3.6 Số liêụ dùng so sánh đô ̣ lă ̣p la ̣i đinh ̣ lƣơ ̣ng sulfamethoxazole Mẫu PP1[VNaNO2 (mL)] 14,45 14,45 14,45 14,50 14,55 14,55 loại loại PP2[VNaNO2 (mL)] 14,25 14,25 14,20 14,20 14,15 14,20 14,25 14,15 Tính toán phƣơng sai: PP1: S12  0,049 PP2: S 22  0,042 Giá trị F thực nghiệm là Ftn  S12 0,049   1,17 S 22 0,042 Giá trị F lý thuyết là Flt  FP, f , f  F0,95,5,7  3,97 (phụ luc 2) Ta thấ y Ftn  1,17 < Flt  3,97 Vâ ̣y hai phƣơng pháp có đô ̣ lặp la ̣i nhƣ SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang 50 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên Chƣơng KẾT LUẬN - KIẾN NGHI ̣ 4.1 Kế t luâ ̣n Qua quá triǹ h nghiên cƣ́u và tiến hành thực nghiệm thu đƣơ ̣c kế t quả nhƣ sau: Hàm lƣợng hoạt chất sulfaguanidine thuố c viên nén Ganidan đa ̣t 93,2% dùng chỉ thị ngoại phát điểm tƣơng đƣơng và đạt 92,4% dùng chỉ thi ̣nô ̣i phát hiê ̣n điể m tƣơng đƣơng; hàm lƣợng đạt đƣợc từ thực nghiệm thấp hàm lƣợng công bố sản phẩ m Hàm lƣợng hoạt chất sulfamethoxazole thuố c viên nén Cotrimstada forte đa ̣t 101,63% dùng chỉ thi ̣ngoa ̣i phát hiê ̣n điể m tƣơng đƣơng và đa ̣t 99,63% dùng chỉ thị nội phát điểm tƣơng đƣơng ; hàm lƣợng đạt đƣợc từ thực nghiệm gần đúng với hàm lƣơ ̣ng công bố sản phẩ m Trong hai phƣơng pháp phát hiê ̣n điể m tƣơng đƣơng sƣ̉ du ̣ng đề tài phƣơng phá p dùng chỉ thi ̣ngoa ̣i cho kế t quả đinh ̣ lƣơ ̣ng cao phƣơng pháp dùng chỉ thị nơ ̣i, nhƣng qua thớ ng kê; nhìn chung hai phƣơng pháp có độ lặp lại nhƣ 4.2 Kiế n nghi ̣ Kế t quả nghiên cƣ́u đề tài có thể áp du ̣ng vào viê ̣c xây dƣ̣ng các bài thƣ̣c tâ ̣p, phƣơng pháp và thiế t bi ̣đơn giản , hóa chấ t tƣơng đố i r ẻ tiề n; điề u này khá phù hơ ̣p với điề u kiê ̣n hiê ̣n có của phòng thí nghiê ̣m Do thời gian thƣ̣c hiê ̣n đề tài có giới ̣n nên chúng chỉ áp dụng hai cách phát hiê ̣n điể m tƣơng đƣơng của phản ƣ́ng đ ịnh phân phƣơng pháp Nitrite , chúng tơi đề nghị cần tiến hành so sánh hai cách đã áp dụng với các cách phát điể m tƣơng đƣơng khác nhƣ sƣ̉ du ̣ng chỉ thị tropeolin OO , chỉ thị gồm hỗn hợp tropeolin OO và xanh methylen theo tỷ lê ̣ 2:1 hay phƣơng pháp đo thế … để có kế t luâ ̣n kỹ , chính xác , tƣ̀ đó có thể áp du ̣ng vào công tác kiể m nghiê ̣m chấ t lƣơ ̣ng các sản phẩ m thi ̣trƣờng SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang 51 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Đặng Văn Hòa, Giáo trình kiểm nghiệm thuốc, Bộ mộn Kiểm nghiệm, Khoa Dƣợc, Trƣờng ĐH Y Dƣợc TP.HCM, 1997 [2] Huỳnh Kim Liên, Bài giảng Các phương pháp thống kê Hóa học, Trƣờng ĐH Cầ n Thơ, 2010 [3] Nguyễn Thị Diệp Chi, Giáo trình Thực tập Hóa phân tích đại, Trƣờng ĐH Cần Thơ, 2008 [4] Nguyễn Thị Diệp Chi, Kiểm nghiệm thực phẩm dược phẩm, Trƣờng ĐH Cần Thơ, 2008 [5] Phạm Hữu Điền - Nguyễn Quyết Tiến, Giáo trình Hóa dược, Đa ̣i ho ̣c Sƣ pha ̣m Hà Nội, 2008 [6] Trầ n Thi ̣Thu Hằ ng, Dược lực học, Nhà xuất Phƣơng Đông, 2007 [7] Dược điển Việt Nam I, Dược điển Việt Nam IV, Bộ Y Tế [8] Kháng sinh trị liệu thực hành lâm sàng, Hà Nội : Y học , 2009 [9] http://tailieu.vn/xem-tai-lieu/tieu-luan-ve-khang-sinh.495316.html [10] http://www.ykhoanet.com/duoc/sudungthuoc/27_167.htm [11] http://vet.hcmuaf.edu.vn/data/file/Giao%20trinh%20duoc%20ly_%20Tra%20 An%20/CHUONG%203%20KH%C3%81NG%20SINH.pdf SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang 52 Luâ ̣n văn tố t nghiê ̣p Khoa Khoa Ho ̣c Tƣ̣ Nhiên PHỤ LỤC Phụ lục Bảng các giá trị Q lý thuyế t dùng chuẩ n Dixon n P = 0,90 P = 0,95 P = 0,99 0,89 O,94 0,99 0,68 0,77 0,89 0,56 0,64 0,76 0,48 0,56 0,70 0,43 0,51 0,64 0,40 0,48 0,58 Phụ lục Bảng các giá trị F (P = 0,95) dùng chuẩn Fisher F2→ 161 18,51 10,13 7,72 6,61 5,99 5.59 200 19,00 9,55 6,94 5,79 5,14 4,74 216 19,16 9,28 6,59 5,41 4,76 4,35 225 19,25 9,12 6,39 5,19 4,53 4,12 230 19,30 9,01 6,26 5,05 4,36 3,97 234 19,33 8,94 6,16 4,95 4,42 3,87 F1 SVTH: Trầ n Nhƣ̣t Tân Trang viii ... kháng sinh lấy từ streptomyces aureofaciens (clotetracyclin, 1947), hoă c bán tổng hợp Là bột vàng, ít tan nƣ c, tan base hoă c acid C chế t c dụng phổ kháng khuẩn C c tetracycline kháng sinh. .. c Tƣ̣ Nhiên Bệnh xoắn khuẩn Rickettsia: tetracycline chỉ định tốt Nhƣng tetracycline c chống chỉ định thay bằng chloramphenicol 1.4.4 Nhóm tetracycline Nguồn g c tính chất lý hóa Đều kháng. .. gắ n vào ) C chế ta c đô ̣ng nà y gờ m ca c thu c thu c nhóm β-lactamin, vancomycin, baxitracin ► Thu c t c dụng lên màng tế bào C c thu c làm rối loạn tính thấm vỏ màng nguyên sinh chất