Bé N«ng nghiƯp & PTNT ViƯn Di trun N«ng nghiƯp Đờng Phạm Văn Đồng - Từ Liêm - Hà Nội Báo cáo tổng kết khoa học kỹ thuật Dự án sản xuất thử nghiệm cấp nhà nớc Hoàn thiện công nghệ chế tạo thiết bị sản xuất loại hoa Salem Đồng tiền kép chất lợng cao công nghệ vi nhân giống phục vụ làng nghề trồng hoa Thuộc chơng trình: Khoa học Công nghệ M số: KC.07 DA.07 Chủ nhiệm dự án: PGS TS Lê Thị ánh Hồng 6977 08/9/2008 Hà Nội 2007 Danh sách thành viên tham gia dự án Sản xuất thử nghiệm TT Họ tên Nơi công tác Nhiệm vụ PGS.TS Lê Thị ánh Hồng Viện Di truyền Nông nghiệp CN Dự án TS Nguyễn Đức Doanh Viện Di truyền Nông nghiệp Cộng tác viên CN Lê Kim Hoàn Viện Di truyền Nông nghiệp Cộng tác viên Th.S Nguyễn Thanh Hà Viện Di truyền Nông nghiệp Cộng tác viên Th.S Ngun Thanh Nga ViƯn Di trun N«ng nghiƯp Cộng tác viên CN Nhữ Viết Cờng Viện Di truyền Nông nghiệp Cộng tác viên CN Nguyễn Thế Quyết Viện Di truyền Nông nghiệp Cộng tác viên KS Nguyễn Văn Dũng Viện Di truyền Nông nghiệp Cộng tác viên 10 CN Trần Bích Thuỷ Viện Di truyền Nông nghiệp Cộng tác viên 11 KS Vũ Duy Thanh Viện Di truyền Nông nghiệp Cộng tác viên 13 Nguyễn Thuý Mùi Viện Di truyền Nông nghiệp Cộng tác viên 14 Dơng Thu Hơng Viện Di truyền Nông nghiệp Cộng tác viên 15 TS Nguyễn Đức Phơng Trung tâm Nghiên cứu Máy Thuỷ khí & Cơ giới hoá Tới tiêu, Viện CĐNN &CNSTH Chủ nhiệm Dự án nhánh 16 Nguyễn văn Nghị Thôn Thái lai, Xã Minh trí, ngời nhận Sóc sơn, Hà nội chuyển giao kỹ thuật trồng SL ĐTK 17 Trờng Trung cấp Nông nghiệp HN (Nguyễn Thị Trờng) Trờng Trung cấp Nông nghiệp HN Trại trởng Trại THSX Mỹ đình - Trởng ban trồng trọt BVTV; c¬ së nhËn chun giao kü tht trång SL ĐTK 18 ND Trần Văn Xuân Hợp tác xã T©y tùu ng−êi nhËn chun giao kü tht trång SL ĐTK Lời cảm ơn Chúng xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Bộ Khoa học Công nghệ, Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn, Vụ Chuyên ngành, ban chủ nhiệm Chơng trình KC07, Viện, trờng, doanh nghiệp, Chuyên gia, Nhà Khoa học, Cộng tác viên quan tâm quản lý chặt chẽ, giúp đỡ tận tình, hợp tác toàn diện, tạo điều kiện thuận lợi cho việc thực đề tài Chúng xin chân thành cảm ơn: Viện Di truyền Nông nghiệp Phòng Tài vụ Viện Di truyền Nông nghiệp Trạm chuyển giao Kỹ thuật, Văn giang, Viện Di truyền Nông nghiệp Trờng Trung cấp Nông nghiệp Hà nội Xã Minh trí, Huyện Sóc sơn , Thành phố Hà nội Hợp tác xã Tây tựu, Hà nội Công ty TNHH Nông sinh Trung tâm Hoa, Cây cảnh, Viện Di truyền Nông nghiệp Trạm Nghiên cứu Dợc Liệu, Tam Đảo, Vĩnh Phúc 10 Các chủ hộ Xã Minh Trí, huyện Sóc Sơn, Xã Tây tựu Huyện Từ liêm, Mỹ Đình, Từ Liêm, Hà nội Thị trấn Tam Đảo, Vĩnh Phúc Bà Hoàng Hải Bà Nguyễn Thị Trờng Ông Nguyễn Văn Xuân Ông Ngô Văn Dân Ông Nguyễn Văn Nghị Ông Bùi Văn Lệ Ông Nguyễn Văn Biểu Ông Nguyễn Văn Cân Ông Nguyễn Văn Xuân Đã tạo điều kiện thuận lợi hợp tác nghiên cứu, lao động cần cù sáng tạo, tận dụng khai thác tiềm sẵn có để hoàn thành nhiệm vụ nghiên cứu D1-1-ĐGMOI Bộ Nông nghiệp ptnt VIện Di truyền Nông nghiệp Cộng hoà xã hội chủ nghĩa Việt nam Độc lập-Tự do-Hạnh phúc Bản tự đánh giá tình hình thực đống góp Dự án sản xuất thử nghiệm cấp Nhà nớc (kèm theo định số 13/ 2004 QĐ-BKHCN ngày 25/5/2004 Bộ trởng Bộ Khoa học Công nghệ) Tên đề tài: Hoàn thiện công nghệ chế tạo thiết bị sản xuất loại hoa Salem, Đồng tiền kép chất lợng cao công nghệ vi nhân giống phục vụ làng nghề trồng hoa M số: KC.07.DA.07: Thuộc chơng trình: Khoa học Công nghệ phục vụ Công nghiệp hoá, Hiện đại hoá Nông nghệp Nông thôn; KC.07 Chủ nhiệm dự án: PGS.TS Lê Thị ánh Hồng Cơ quan chủ trì Dự án : ViƯn Di trun N«ng nghiƯp Thêi gian thơc hiƯn Dù ¸n: 01/2004-10/2005 Tỉng kinh phÝ thùc hiƯn dù án: 054,10 triệu đồng Kinh phí hỗ trợ từ ngân sách Nhà nớc cho Dự án: 800,00 triệu ®ång Kinh phÝ thu håi: 075,20 triÖu ®ång Tình hình thực Dự án so với hợp đồng 7.1 Về mức độ hoàn thành khối lợng công việc Đề tài hoàn thành đầy đủ khối lợng nh ®· ®Ị thut minh ®Ị tµi ®ã lµ: Hoàn thiện đa quy trình công nghệ vi nhân giống in vitro hoa Salem Đồng tiền kép Cải tiến hoàn thện lọai giá thể trồng cho sau ống nghiệm (Salem Đồng tiền kép) phù hợp với điều kiện phía Bắc Việt nam Cải tiến phơng pháp nhân in vi vo ë Salem (kü thuËt t¹o h¹t cho Salem) Đồng tiền kép áp dụng hoàn thiện kỹ thuật ELISA nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu số bệnh hại giống Salem Đồng tiền kép Quy trình đợc hoàn thiện với hợp tác nhiệt tình chuyên gia Bệnh học Thuỵ điển Dr Christer Olsson (SLU-Uppsala), Cộng hoà Ph¸p Dr Yves Maury; Samson R; Josette A; Jean P (INRA-Versaille), Thái lan Asocc.Prof Kasem Soytong (Đại học kingMongKut') TS Đặng Vũ Thị Thanh Trởng Phòng Th.S Nguyễn Mai Chi cán Nghiên cứu Phòng Chẩn đoán Giám định Dịch hại, Viện Bảo vệ Thực vật Chúng hoàn thiện đợc quy trình chuẩn đoán nhanh, nhËy bƯnh nÊm h¹i Phytophthora cryptogea, Botritis cinerea, bƯnh vi khn Ralstonia solanacearum, Pseudomonas cichorii, bƯnh virus kh¶m d−a cht (CMV), bệnh v rus gây héo rũ cà chua (TSWV) ë ViƯt nam vµ cã thĨ sư dơng réng r·i cho phòng thí nghiệm nghiên cứu bệnh ngời sản xuất hoa ứng dụng cho chẩn đoán bệnh trồng khác Đa đợc giá thể trồng hoa cắt thơng mại Salem Đồng tiền kép sản xuất, giảm ô nhiễm môi trờng, tăng suất chất lợng hoa cắt Đa đợc quy trình thu hái, bảo quản hoa phục vụ vận chuyển xa xuất Thời gian thu hái, cấp độ nở hoa, dung dịch bảo quản, thời gian nhiệt độ bảo quản Lựa chọn mẫu hộp, Quy trình công nghệ đóng gói hoa thơng phẩm cho thị trờng nớc xuất Lựa chọn mô hình thiết kế cải tiến cấu trúc nhà trồng phù hợp với sản xuất Salemvà đồng tiền kép Lựa chọn mẫu thiết kế cải tiến phần che phủ, thông gió lới chống côn trùng giảm nhiệt thích hợp 10 Hoàn thiện thiết kế hệ thống tơi phù hợp cho sản xuất hoa Salem Đồng tiền kép HƯ thèng t−íi phun 11 Hoµn thiƯn thiÕt kÕ hƯ thống tới phù hợp cho sản xuất hoa Salem §ång tiỊn kÐp HƯ thèng t−íi nhá giät 12.ThiÕt kÕ đa mô hình hệ thống thiết bị cung cấp dinh dỡng cho sản xuất hoa salem Đồng tiền kép 13 Đào tạo kỹ thuật: Dự án đào tạo đợc sản xuất giống salem Đồng tiền kép, kỹ thuật sản xuất hoa ) cắt ngời pha chế môi trờng, có Cetificate kèm theo (phụ lục Tên 14 mở nhiều lớp đào tạo cho cán từ Viện nuôi cáy mô chản đoán bệnh, đào tạo cho nông dân vè kỹ thuật canh tác hoa điều kiện mái che trồng giá thểv.v 15 Đã dợc chấp nhận xuất báo khoa học 7.2 yêu cầu khoa học tiêu sản phẩm KHCN Các quy trình nhân giống in vitro hoa Salem Đồng tiền kép có hệ số nhân chồi cao > 10, khả rễ cao rễ khoẻ Cây bệnh 100 % (III.4.2 Kết chẩn đoán bệnh virus gây héo rũ TSWV hoa Salem Đồng tiền kép từ nuôi cấy mô bảng 18 trang) Nh giảm đợc giá thành giống Các loại giá thể đa làm rút ngắn thời gian hoa Salem đồng tiền kép từ 7-10 ngày Tăng suất hoa cắt diện tích M2 Nhà mái che có lới giảm nhiệt độ, có hệ thống tới tiêu giá thể trồng nhân tạo giúp cho ngời trồng kiểm soát đợc bệnh cỏ hại Tiết kiệm đợc công chi phí cho sản xuất Protocol đùng để chẩn đoán bệnh đợc Việt nam hoá 100% hoàn toàn phù hợp với điều kiƯn ViƯt nam 7.3 vỊ tiÕn ®é Thùc hiƯn Đề tài thực theo tiến độ Về đóng góp dự án 8.1 Về giải pháp khoa học Công nghệ - Dự án giải pháp công nghệ mà học tập cải tiến giải pháp KHCN nớc ngoài, sử dụng vật liệu sẵn có Việt nam, phù hợp với điều kiện Việt nam 8.2 Về phơng pháp nghiên cứu - Dự án ứng dụng cải tiến phơng pháp trồng trọt hoa Salem Đồng tiền kép dới điều kiện có mái che vật liệu để trồng nhân tạo, kết hợp với biện pháp tới tiêu đại nh; tới nhỏ giọt, tới phun kết hợp với phơng pháp bãn ph©n b»ng mét hƯ thèng cung cÊp dinh d−ìng phù hợp với điều kiện Việt nam - Dự án ứng dụng hoàn thiện phơng pháp Miễn dịch Liên kết Huyết để đạt đợc độ xác độ tin cậy phù hợp với điều kiện cụ thể Phòng thí nghiệm đồng ruộng Việt nam Với dạng khác Kỹ thuật ELISA đợc xây dựng Quy trình để chẩn đoán sớm, xác loại bệnh hại virus gây ra, loại bệnh hại nấm gây ra, loại bệnh hại vi khuẩn gây hoa Salem Đồng tiền kép Các Protocol sử dụng để chẩn đoán loại trồng khác 8.3 Những đóng góp khác - Dự án đa đợc gía thể cho ơm Salem Đồng tiền kép giá thể trồng hoa cắt Salem Đồng tiền kép mà giá thể cha đợc công bố Việt nam thời điểm - Dự án đa đợc quy trình thu hái bảo quản hoa Salem Đồng tiền kép mà quy trình cha đợc công bố Việt nam thời điểm - Dự án đa đợc mẫu hộp cách đóng gói hoa Salem Đồng tiền kép - Ngoài dự án đa đợc mô hình hệ thống tới tiêu cho hoa Salem Đồng tiền kép - Dự án tạo sở liệu khoa học phục vụ cho công tác đào tạo giảng dậy Bên cạnh Dự án đào tạo đợc cán sản xuất giống Salem Đồng tiền kép kỹ thuật sản xuất hoa cắt ngời pha chế môi trờng Chủ nhiệm dự án PGS.TS Lê thị ánh Hồng Bài tóm tắt Mục tiêu đề tài Có đợc quy trình công nghệ hệ thống thiết bị sản xuất loại hoa Salem, Đồng tiền kép có hiệu kinh tế, đạt tiêu chuẩn xuất đợc ứng dung làng nghề trồng hoa Phơng pháp nghiên cứu Để thực tốt dự án sử dụng phơng pháp: Nuôi cấy lớp mỏng tế bào dựa sở TS Kiếm Trần Thanh Vân (Đại học Orsay- Pháp) Các kỹ thuật Miễn dịch liên kết Enzyme Các thí nghiệm so sánh hiệu loại giá thể khác dùng để ơm trồng Salem nh Đồng tiền kép Các thí nghiệm tạo hạt cho Salem nhân giống gieo hạt salem nhân giống vô tính kỹ thuật tách nhánh Đồng tiền kép Chúng nghiên cứu đa mo hìmh nhà trồng có mái che, hệ thống hạ cờng độ ánh sáng nhiệt độ nhà trồng, hệ thống tới tiêu nhỏ giọt tới phun Hệ thống pha chế thức ăn cách thu hái bảo quản hoa SAlem, Đồng tiền kép mẫu hộp kỹ thuật đống gói bảo quản hoa Salem Đồng tiền kép Kết bật tính Đề tài Cải tiến hoàn thiện qui trình công nghệ nhân giống in vitro hoa Đồng tiền kép hoa Salem Cải tiến hoàn thiện loại giá thể trồng cho sau ống nghiệm (Salem Đồng tiền kép) phù hợp với điều kiện phía bắc Việt Nam Cải tiến phơng pháp nhân in vitro Salem Đồng tiền kép áp dụng hoàn thiện kỹ thuật ELISA nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu số bệnh hại giống Salem Đồng tiền kép vờn ơm nhằm loại bỏ tối đa nhân nguồn bệnh giảm nguồn lây nhiễm ban đầu Cải tiến giá thể trồng hoa cắt thơng mại Salem Đồng tiền kép sản xuất, giảm ô nhiễm môi trờng, tăng suất chất lợng hoa cắt áp dụng hoàn thiện kỹ thuật ELISA nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu số giống bệnh hại giống Salem Đồng tiền kép vờn sản xuất hoa thơng phẩm nhằm tăng suất chất lợng hoa cắt sản xuất hoa bền vững Quy trình thu hái, bảo quản hoa phục vụ vËn chuyÓn xa xuÊt khÈu Lùa chän mÉu hép, quy trình công nghệ đóng gói hoa thơng phẩm cho thị trờng nớc xuất Lựa chọn mô hình thiết kế cải tiến cấu trúc nhà trồng phù hợp với sản xuất Salem Đồng tiền kép Lựa chọn mẫu thiết kế cải tiến phần che phủ, thông gió lới chống côn trùng giảm nhiệt thích hợp 10 Hoàn thiện thiết kế hệ thống tới phù hợp cho sản xuất hoa Salem Đồng tiền kép Hệ thống tới phun 11 Thiết kế đa mô hình hệ thống thiết bị cung cấp dinh dỡng cho sản xuất hoa Salem Đồng tiền kép 12 Đào tạo kỹ thuật (4 ngời sản xuất giống Salem Đồng tiền kép gốc, kỹ thuật viên sản xuất hoa cắt ng−êi pha chÕ m«i tr−êng) 13 Chun giao kü tht trồng hoa Salem Đồng tiền kép đến số sở sản xuất Mục lục TT I I.1 I.1.1 I.1.2 I.1.3 I.2 I.2.1 I.2.2 I.3 I.3.1 I.3.2 I.3.3 I.4 I.4.1 I.4.2 I.5 II II.1 II.1.1 II.1.2 II.1.3 II.1.4 II.1.5 II.1.6 II.1.7 II.2 II.2.1 II.2.1.1 2.1 2.2 II.2.1.2 Danh mục Mở đầu Tổng quan Tình hình công nghệ thiết bị sản xuất hoa Salem Đồng tiền kép giới Tình hình công nghệ Tình hình thiết bị giới Tình hình bệnh hại sản xuất hoa Salem Đồng tiền kép Tình hình công nghệ thiết bị sản xuất hoa Salem Đồng tiền kép Việt Nam Tình hình nghiên cứu triển khai công nghệ nớc Tình hình nghiên cứu triển khai hệ thống thiết bị nớc Thiết bị chăm sóc nhà trồng HƯ thèng t−¬iÝ phun m−a HƯ thèng t−íi nhá giät Hệ thống pha chế thức ăn Tình hình giá thể trồng sản xuất hoa Salem Đồng tiền kép Hoa Salem Hoa Đồng tiền kép Tình hình bệnh hại sản xuất hoa Salem Đồng tiền kép Nguyên vật liệu phơng pháp nghiên cứu Nguyên vật liệu Nguyên vật liệu cho nuôi cấy mô in vitro Nguyên vật liệu cho thí nghiệm hoàn thiện quy trình pha trộn loại giá thể cho vờn ơm vờn sản xuất hoa cắt Salem Đồng tiền kép Nguyên vật liệu dùng chẩn đoán bệnh Nguyên vật liệu dùng thu hái bảo quản hoa Nguyên vật liệu dùng thiết kế mẫu hộp hoa Đồng tiền kép Salem Nguyên vật liệu dùng hệ thống tới phun nhỏ giọt Nguyên vật liệu dùng hệ thống pha chế thức ăn Phơng pháp nghiên cứu Phơng pháp nhân giống in vitro Nghiên cứu hoàn thiện cải tiến quy trình công nghệ vi nhân giống hoa Đồng tiền kép §iỊu kiƯn nghiªn cøu Néi dung nghiªn cøu Nghiªn cøu hoàn thiện quy trình công nghệ vi nhân giống hoa Đồng tiền kép Một số cải tiến quy trình công nghệ vi nhân giống hoa Đồng tiền kép Phơng pháp bố trí thí nghiệm Các tiêu theo dõi Nghiên cứu hoàn thiện cải tiến quy trình công nghệ vi nhân giống hoa Salem Trang 4 10 10 14 15 15 15 16 16 16 16 17 19 19 19 22 22 23 23 23 23 23 23 23 23 23 24 24 24 24 25 2.1 2.2 II.2.2 II.2.3 II.2.4 II.2.5 II.2.6 II.2.7 II.2.8 II.2.9 II.2.10 II.2.11 II.2.12 III III.1 III.1.1 III.1.1.1 III.1.1.2 III.1.2 III.1.2.1 III.1.2.2 III.2 III.2.1 III.2.2 Điều kiện nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Nghiên cứu hoàn thiện quy trình công nghệ vi nhân giống hoa Salem Một số cải tiến quy trình công nghệ vi nhân giống hoa Salem Phơng pháp bố trí thí nghiệm Các tiêu theo dõi Phơng pháp nghiên cứu cải tiến giá thể trồng cho sau ống nghiệm Salem Đồng tiền kép Nghiên cứu phơng pháp nhân in vivo Salem Đồng tiền kép Phơng pháp chẩn đoán bệnh kỹ thuật ELISA (Enzym Linked Immuno Sorbent Assay) ( Clark Adams, 1977) Phơng pháp nghiên cứu cải tiến giá thể trồng hoa cắt thơng mại Salem Đồng tiền kép sản xuất Phơng pháp thu hái bảo quản hoa Nghiên cứu mẫu hộp, quy trình công nghệ đóng gói hoa thơng phẩm cho thị trờng nớc xuất (hoa Đồng tiền kép Salem) Nghiên cứu đa mô hình hệ thống thiết bị cung cấp dinh dỡng cho sản xuất hoa Salem Đồng tiền kép Lựa chọn thiết kế cải tiến phần che phủ, thông gió lới chống côn trùng giảm nhiệt thích hợp Nghiên cứu hoàn thiện thiết kế hệ thống tới phù hợp cho sản xuất hoa Salem Đồng tiền ké Hệ thống tới phun Nghiên cứu hoàn thiện thiết kế hệ thống tới phù hợp cho sản xuất hoa Salem Đồng tiền kép Nghiên cứu đa mô hình hệ thống thiết bị cung cấp dinh dỡng cho sản xuất hoa Salem Đồng tiền kép Kết nghiên cứu bàn luận Hoàn thiện cải tiến quy trình công nghệ nhân giống in vitro hoa Đồng tiền kép Salem Hoàn thiện cải tiến quy trình công nghệ nhân giống in vitro hoa Đồng tiền kép Hoàn thiện quy trình công nghệ nhân giống in vitro hoa Đồng tiền kép Một số cải tiến quy trình công nghệ nhân giống in vitro hoa Đồng tiền kép Quy trình công nghệ vi nhân giống in vitro hoa Đồng tiền kép Hoàn thiện cải tiến quy trình công nghệ nhân giống in vitro hoa Salem Hoàn thiện quy trình công nghệ nhân giống in vitro hoa Salem Kết số cải thiện trình vi nhân giống hoa Salem Quy trình công nghệ vi nhân giống in vitro hoa Salem Cải tiến hoàn thiện loại giá thể trồng cho sau ống nghiệm (Salem Đồng tiền kép) phù hợp với điều kiện phía Bắc Việt Nam Cải tiến hoàn thiện loại giá thể trồng cho sau ống nghiệm phù hợp với điều kiện phía Bắc Việt Nam (Salem) Quy trình (QT-1) Cải tiến hoàn thiện loại giá thể trồng cho sau ống nghiệm phù hợp với điều kiện phía Bắc Việt Nam (Salem) Cải tiến hoàn thiện loại giá thể trồng cho sau ống nghiệm phù hợp với điều kiện phía Bắc Việt Nam (Đồng tiền kép) 25 25 25 25 25 25 25 27 28 30 32 33 33 34 34 34 34 36 36 36 36 41 47 49 49 53 56 58 58 61 61 III.3 III.3.1 III.3.2 III.3.2.1 III.4 III.4.1 III.4.2 III.4.3 III.4.4 III.4.5 Quy trình (QT-2) Cải tiến hoàn thiện loại giá thể trồng cho sau ống nghiệm phù hợp với điều kiện phía Bắc Việt Nam (Đồng tiền kép) Hoàn thiện phơng pháp in vivo hoa Salem hoa Đồng tìên kép Hoàn thiện phơng pháp in vivo hoa Đồng tìên kép Quy trình hoàn thiện phơng pháp in vivo hoa Đồng tìên kép Cải tiền phơng pháp nhân in vivo Salem (tạo hạt nhân giống gieo hạt Các kết nghiên cứu hoàn thiện Tạo hạt Quy trình hoàn thiện phơng pháp tạo hạt hoa Salem áp dụng hoàn thiện kỹ thuật ELISA nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu số bệnh hại giống Salem Đồng tiền kép vờn ơm vờn sản xuất nhằm loại bỏ tối đa nhân nguồn bệnh giảm nguồn lây nhiễm áp dụng nghiên cứu hoàn thiện kỹ thuật ELISA nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu bệnh thối cuống lá, thối rễ vờn ơm thối cuống hoa vờn sản xuất nấm hại Phytophthora cryptogea gây Đồng tiền kép Salem nhằm tăng suất chất lợng hoa thơng phẩm Quy trình (QT- 1) Kỹ thuật DAS- ELISA nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu bệnh nấm hại Phytophthora cryptogea gây Đồng tiền kép Salem áp dụng nghiên cứu cải tiến độ nhậy kỹ thuật ELISA nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu bệnh hại sau nuôi cấy mô vờn ơm virus (TSWV) gây Đồng tiền kép Salem [Kỹ thuật DAS- ELISA có gắn hệ thống Avidine- Biotine (AB)] Quy trình (QT- 2) áp dụng nghiên cứu cải tiến độ nhậy kỹ thuật ELISA nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu bệnh hại sau nuôi cấy mô vờn ơm virus TSWV gây Đồng tiền kép Salem áp dụng nghiên cứu hoàn thiện kỹ thuật ACP- ELISA nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu bệnh héo rũ, hoại tử vờn ơm vờn sản xuất vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây Đồng tiền kép Salem nhằm tăng suất chất lợng hoa thơng phẩm Quy trình (QT- 3) Kỹ thuật ACP- ELISA nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu bệnh vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây Đồng tiền kép Salem áp dụng nghiên cứu hoàn thiện kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu bệnh đốm bạc vi khuẩn hùynh quang Pseudomonas cichorii gây vờn ơm vờn sản xuất Đồng tiền kép Salem nhằm tăng suất chất lợng hoa thơng phẩm Quy trình (QT- 4) kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu bệnh đốm bạc vi khuẩn hùynh quang Pseudomonas cichorii gây Đồng tiền kép Salem áp dụng hoàn thiện phép thử ELISA màng (DOTELISA) nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu bệnh khảm da 64 65 65 68 68 70 70 74 77 77 80 82 84 86 89 90 92 94 10 IV KÕt luËn vµ đề nghị IV.1 Kết luận IV.1 Hoàn thiện cải tiến quy trình công nghệ vi nhân giống in vitro Salem Đồng tiền kép Đa môi trờng nhân nhanh tối u cho hoa §ång tiÒn kÐp (MS +2 mg/l Ki + 0,01 mg/l NAA + 0,5 mg/l BAP) víi hƯ sè nh©n cao 10,6 chồi/mẫu giống Đỏ tơi, 11,3 chồi/mẫu giống Hồng phấn môi trờng nhân nhanh tối −u cho c©y hoa Sa lem (MS+0,3 mg/l BAP + 0,1 mg/l NAA) víi hƯ sè nh©n cao 12,2 chåi/mÉu Đa môi trờng tối u cho tạo rễ in vitro hoa Đồng tiền kép (1/2 MS + mg/l IAA) víi tû lƯ rƠ 96,6%, số rễ trung bình 4,3 rễ/chồi giống Đỏ tơi, tơng ứng 97,3% 4,4 rễ/chồi giống Hồng phấn Môi trờng tối u cho tạo rễ in vitro c©y hoa Sa lem (1/2 MS+0,4 mg/l NAA) víi tû lệ rễ 100%, giá trị trung bình 7,2 rễ/chồi Đã cải thiện chế độ dỡng khí bình nuôi Đồng tiền kép cách thông khí qua nắp bình góp phần tăng hệ số nhân lên 12,45 chồi/mẫu, tăng hệ số nhân so với không cải tiến 1,9 Còn giống Hồng phấn hệ số nhân chồi 13,6 chồi/mẫu tăng so với cải tiến 2,3 Đã cải thiện điều kiện rễ chồi Đồng tiền kép cách sử dụng than hoạt tÝnh m«i tr−êng rƠ (1/2MS + 0,5g/l than hoạt tính) góp phần tăng tỷ lệ tạo rễ lên 100% so với môi trờng sử dụng IAA (96,95) Tăng số rễ/chồi bình quân 3,30 rễ/chồi Còn Salem giảm hàm lợng agar 0,5 g (6,3g/l) tỷ lệ tạo rễ tăng lên 100% so với sử dụng agar 6,8 g/l Số lợng rễ tăng lên 2,7 rễ/chồi Chúng sử dụng ánh sáng tự nhiên thay chiếu sáng nhân tạo cho Salem Đồng tiền kép, góp phần giảm chi phí lợng làm cho thích nghi với điều kiện môi trờng Việt Nam sớm Giảm độ ẩm tơng đối bình nuôi xuống 60-70% để giảm tợng thuỷ tinh hoá hoại tử chồi mẫu Đối với Đồng tiền kép đa kỹ thuật tạo rễ bình nuôi cấy (ex vitro) Nhúng phần gốc chồi in vitro vào dung dich IBA 1000mg/l 30 giây, trồng vào khay giá thể chuẩn bị săn Sau tuần tỷ lệ hình thành rễ là: 97,6%, số rễ đạt đợc 5,8 rễ/ chồi Với kỹ thuật thay việc tạo rễ in vivo, giảm chí phí đầu vào đáng kể cho giống, giảm thời gian nhân giống, khoẻ cứng cáp, thích nghi với điều kiện bên sớm Từ kết đa đợc quy trình nhân vi giống hoa Đồng tiền kép hoa Salem IV.1.2 Cải tiến hoàn thện lọai giá thể trồng cho sau ống nghiệm (Salem Đồng tiền kép) phù hợp với điều kiện phía Bắc Việt nam Chúng đa đợc quy trình pha trộn giá thể ơm in vitro cho Salem Đồng tiền kép Giá thể thoát nớc, giữ ẩm, đạt tỷ lệ sống 100% Giá thể cho Salem có thành phần 60% trấu hun+10% cát+20% mụn dừa+10% hạt xốp, phân sinh học, chế phẩm trừ nấm sinh học Giá thể cho Đồng tièn kép có thành phần 55% trấu hun+10% cát+25% mụn dừa+10% hạt xốp, ph©n sinh häc, chÕ phÈm trõ nÊm sinh häc IV.1.3 Cải tiến phơng pháp nhân in vivo Salem Đồng tiền kép 10 Đa đợc qui trình nhân giống in vivo hoa Đồng tiền kép Biện pháp nhanh, đỡ tốn chi phí mua giống, nhng áp dụng vào vờn sản xuất nhỏ, sản 140 xuất lớn lợng tách không đáp ứng đợc Tốt nên nhổ khóm hoa đồng tiền kép lên, rễ già đợc cắt bỏ Rễ đợc cắt ngắn lại từ - cm Lá đợc cắt để lại 12 - 15 cm Các rễ đợc nhúng vào dung dịch diệt nấm trồng vào giá thể cho cắt hoa 11 Đa đợc biện pháp tạo hạt Salem cho suất cao qui trình nhân giống gieo hạt làm cho giá thành rẻ so với qui trình nhân giống mua từ in vitro IV.1.4 áp dụng hoàn thiện kỹ thuật ELISA nhằm chẩn đoán nhanh nhậy, đặc hiệu số bệnh hại giống Salem Đồng tiền kép Quy trình đợc hoàn thiện với hợp tác nhiệt tình chuyên gia Bệnh học Thuỵ điển Dr Christer Olsson (SLU-Uppsala), Cộng hoà Pháp Dr Yves M; Samson R; Josette A; Jean P (INRA-Versaille), Thái lan Asocc.Prof Kasem Soytong (Đại học kingMongKut') TS Đặng Vũ Thị Thanh Trởng Phòng Th.S Nguyễn Mai Chi cán Nghiên cứu Phòng Thí nghiệm Giám định Bệnh cây; Viện Bảo vệ Thực vật 12 Chúng đa quy trình chuẩn đoán bƯnh b»ng kü tht ELISA Quy tr×nh DAS - ELISA, chẩn đoán bệnh nấm Phytophthora cryptogea Quy trình ACP - ELISA chẩn đoán bệnh nấm Botritis cinerea Quy trình DOT - ELISA chẩn đoán bệnh virus CMV Quy trình DAS - ELISA có gắn hệ thống Avidine - Biotine để làm tăng độ nhậy phép chẩn đoán mẫu ( in vitro, đỉnh sinh trởng) lợng vi sinh vật gây hại xâm nhiễm ít, cần chẩn đoán sớm để phòng ngừa Ngoài đa đợc quy trình ELISA huỳnh quang ®Ĩ chÈn ®o¸n bƯnh vi khn hnh quang nh− Pseudomonas cichorii kỹ thuật ACP - ELISA để chẩn đoán bệnh vi khuẩn Ralstonia solanacearum Các kỹ thuật đợc viết thành protocol tiếng Việt có đầy đủ loại dung dịch đệm thành phần Có thể dùng protocol để chẩn đoán bệnh hại đối tợng trồng khác 13 Việc kiểm soát loại bệnh hại hoa cần đợc trọng để giúp ngời nông dân thu đợc suất cao đơn vị canh tác Làm giảm ô nhiễm môi trờng, bảo vệ sức khoẻ ngời sản xuất, tang thu nhập hớng tới sản xuất hoa chất lợng cao IV.1.5 Cải tiến giá thể trồng hoa căt thơng mại Salem Đồng tiền kép sản xuất, giảm ô nhiễm môi trờng, tăng suất chất lợng hoa cắt 14 Chúng đa đợc quy trình pha trộn giá thể trồng trởng thành cho Salem Đồng tiền kép Giá thể thoát nớc, giữ ẩm, đạt tỷ lệ sống 100% cho suất cao so với đối chứng Giá thể cho Salem có thành phÇn 40% xØ than + 40% trÊu hun 1/2 + 20% mơn dõa, ph©n chng tÊn/1000 m2, ph©n sinh học + phân vi lợng + chế phẩm trừ nấm sinh học Giá thể cho Đồng tiền kép có thành phÇn 40% xØ than +35% trÊu hun 1/2 + 25% mơn dõa + ph©n chng5 tÊn/1000 m2, ph©n sinh häc + phân vi lợng + chế phẩm trừ nấm sinh học IV.1.6 Quy trình thu hái, bảo quản hoa phục vụ vận chuyển xa xuất IV.1.6.1 Quy trình thu hái, bảo quản hoa phục vụ vận chuyển xa xuất Đồng tiền kép) Qua kết nghiên cứu rút đợc số kết luận sau: Hoa đợc thu vào buổi sáng từ 5-8 Mùa Đông thu dến sáng Hoa đợc thu cấp độ nở cánh hoa nhị phát triển hoàn toàn độ lớn có hàng nhị nở 141 Cách thu hái: nghiêng cành hoa phía dới, xoay xoay lại lần đẩy sang phÝa (theo chiÒu thuËn tay) gèc hoa sÏ rêi khỏi gốc mà không bị gãy cành Các hoa đợc thu thành bó 30 Dung dịch bảo quản là: nớc máy đợc để lắng 24 tiếng+Chất diệt khuẩn (Hypochlorite Natri 10mg/l), pH