Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu kỹ thuật tách chiết Silumarin từ hạt kế sữa và axit Amin từ đậu tương làm nguyên liệu cho thực phẩm chức năng tăng cường chức năng gan (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu kỹ thuật tách chiết Silumarin từ hạt kế sữa và axit Amin từ đậu tương làm nguyên liệu cho thực phẩm chức năng tăng cường chức năng gan (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu kỹ thuật tách chiết Silumarin từ hạt kế sữa và axit Amin từ đậu tương làm nguyên liệu cho thực phẩm chức năng tăng cường chức năng gan (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu kỹ thuật tách chiết Silumarin từ hạt kế sữa và axit Amin từ đậu tương làm nguyên liệu cho thực phẩm chức năng tăng cường chức năng gan (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu kỹ thuật tách chiết Silumarin từ hạt kế sữa và axit Amin từ đậu tương làm nguyên liệu cho thực phẩm chức năng tăng cường chức năng gan (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu kỹ thuật tách chiết Silumarin từ hạt kế sữa và axit Amin từ đậu tương làm nguyên liệu cho thực phẩm chức năng tăng cường chức năng gan (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu kỹ thuật tách chiết Silumarin từ hạt kế sữa và axit Amin từ đậu tương làm nguyên liệu cho thực phẩm chức năng tăng cường chức năng gan (Luận văn thạc sĩ)
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT NGUYỄN THỊ QUY NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT TÁCH CHIẾT SILUMARIN TỪ HẠT KẾ SỮA VÀ AXIT AMIN TỪ ĐẬU TƯƠNG LÀM NGUYÊN LIỆU CHO THỰC PHẨM CHỨC NĂNG TĂNG CƯỜNG CHỨC NĂNG GAN Ngành: Sinh học 2015 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn thạc sĩ cách hoàn chỉnh, bên cạnh nỗ lực cố gắng thân có hƣớng dẫn nhiệt tình q Thầy Cơ, nhƣ động viên ủng hộ gia đình bạn bè suốt thời gian học tập nghiên cứu thực luận văn thạc sĩ Xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Phạm Việt Cƣờng- Phòng Cơng nghệ sinh học - Viện Hóa sinh Biển, ngƣời hết lòng giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành luận văn Đồng thời, xin đƣợc gửi lời cảm ơn tớ anh chị em phòng Cơng nghệ sinh học - Viện Hóa sinh Biển tận tình giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu để hồn thành đề tài luận văn Xin chân thành biết ơn đến toàn thể quý Thầy Cô môn Vi sinh vật học tận tình truyền đạt kiến thức quý báu nhƣ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu thực đề tài luận văn Cuối xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn đến gia đình, bạn bè, ngƣời khơng ngừng động viên, hỗ trợ tạo điều kiện tốt cho suốt thời gian học tập thực luận văn Hà Nội, Ngày 21 tháng11năm 2014 Học viên Nguyễn Thị Quy MỤC LỤC 1.1.3 Đặc điể flavonoid 10 1.1.4 Tác dụng sinh học 14 1.1.4.1 Sơ lƣợc lịch sử sử dụng làm thuốc 14 1.1.4 silymarin ứng dụng 15 1.1.5 .18 1.1.6 Những thành tựu nghiên cứu chế phẩm silymarin 18 20 1.2.1 Cây đậu tƣơng 20 20 21 1.2.3.1 Thành phần Protein đậu tƣơng 21 1.2.3.2 Tính chất Protein đậu tƣơng 21 ậu tƣơng 23 26 2.1 Vật liệu 26 2.1.1 Nguyên liệu 26 2.1.2 Hoá chấ 26 2.2 Phƣơng pháp 27 silymarin 27 2.2.2 Phƣơng pháp Sắc ký HPLC 28 2.2.3 29 2.2.4 Phƣơng pháp xác định hàm lƣợng axit amin tự 29 2.2.5 29 2.2.5 29 2.2.5 30 2.2.5 30 2.2.5 31 2.2.6 32 CHƢƠNG : KẾT QUẢ 33 33 ết xuất silymarin 33 3.1.2 Kết sắc kí HPLC 37 ả 39 ận axit amin tự tƣơng 42 3.4 Một số đặc tính sinh học chế phẩm chứa sylimarin 47 48 49 3.4.3 52 3.4.3.1 Tác dụng lƣu lƣợng mật 53 3.4.3.2 Tác dụng hàm lƣợng cắn khô bilirubin dịch mật 54 56 4.1 Kết luận 56 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 ADN Acid Deoxyribo Nucleic ARN Acid Ribonucleic ALT Alanine Aminotransaminase AST Aspartate Aminotransaminase CCI4 Cacbon Tetrachlorid EtOH Ethanol MeOH Methanol NaCl cAMP C - TFN-α - LD50 u cao HPLC SKLM Cs CN Công nguyên TPCN WHO UV - Bảng 3.1 Kết khảo sát dung môi để chiết xuất silymarin 34 Bảng 3.2 Kết chiết xuất silymarin phƣơng pháp khác 35 axit amin 39 3.4: ảnh hƣởng thời gian thủy phân bột đậu tƣơng protease lên 44 44 3.6: Hàm lƣợng axit amin tự 3.7: Hàm lƣợng axit amin tự ch thủ 45 ủ 46 Bảng 3.8: Liều uống chế phẩm silymarin lô chuột thực nghiệm thử độc tính cấp 48 Bảng 3.9: Tác dụng chế phẩm silymarin hoạt độ enzym ALT huyết chuột thực nghiệm 51 Bảng 3.10: Tác dụng chế phẩm silymarin bilirubin huyết chuột thực nghiệm 52 Bảng 3.11: Lƣu lƣợng mật lơ chuột thí nghiệm 53 Bảng 3.12: Hàm lƣợng cắn khô dịch mật chuột thực nghiệm 54 Bảng 3.13: Hàm lƣợng bilirubin dịch mật chuột thực nghiệm 54 .10 .37 3.2: Sắc ký đồ mẫu silymarinthu đƣợc sau tách chiế 38 3.3: Sắc ký đồ mẫu silybin chuẩn 38 3.4: 40 3.5 44 V dùng thuốc có nguồn gốc từ thảo dƣợc phối hợp sử dụng thuốc đông dƣợc tân dƣợc cộng đồng Do loại thuốc thảo dƣợc kết hợp đông –tây y khơng chữa đƣợc bệnh mà có tác dụng phụ Vì vậy, thuốc có nguồn gố , đặc biệt thuốc đƣợc dùng rộng rãi theo kinh nghiệm cổ truyền để chữa bệnh đƣợc nhà khoa học giới Việt Nam quan tâm nghiên cứu ọ thể ngƣờ làm cho gan bị xơ, g t viêm gan siêu vi bệnh truyền nhiễm phổ biến giới, ảnh hƣởng đến sức khỏe cộng đồng thập niên Hiện có loại virus gây viêm gan : A, B, C, D, E G, phổ biến nguy hiểm siêu vi B C Khoảng tỷ ngƣời giới nhiễm virus viêm gan B Có khoảng 3% dân số giới nhiễm virus viêm gan C 170 triệu ngƣời n [62], [63] Đã có chứng cho thấy silymarin có tác dụng chữa bệnh xơ gan rƣợu Một hoạt tính triển vọng silymarin chống ung thƣ, sử dụng silymarin kết hợp với phƣơng pháp hóa trị liệu Silymarin hoạt động nhƣ chất chống oxy hóa, bảo vệ mơ loại bỏ chất gây độc cho gan [5], [10] Protein đậu tƣơng đƣợc sử dụng rộng rãi nhƣ thành phần chức nhiều loại thực phẩm chế biến khả tạo gel tính chất hóa lý, cảm quan dinh dƣỡng cao Việc thủy phân protein hạt họ đậu cải thiện đặc tính dinh dƣỡng chúng nhƣ làm chậm trình hƣ hỏng, cải thiện cấu trúc, tăng giảm độ hòa tan, ngăn cản tƣơng tác không mong muốn, loại mùi khó chịu thành phần độc [27], [57] , để sản xuất số loại sản phẩm tăng cƣờng chức gan nhƣ hỗ trợ điều trị bệnh liên quan đến gan Việt Nam, thay sản phẩm nhập ngoại, sở để thực đề tài: “ axit amin ” Nghiên cứu quy trình tách chiết Sylimarin từ hạt kế sữa Nghiên cứu quy trình thuỷ phân thu nhậ CHƢƠNG 1.1 1.1.1 (Sylibum marianum (L.) Gaernt) ,l hai năm, cao 30-150cm Thân thảo thẳng phân nhánh Lá xanh, khơng có kèm, bóng láng, thƣờng có nhiều đốm trắng dọc theo gân, mép có dạng gai, gai màu vàng nhọn; phía ơm lấy thân; dƣới to, có phiến chia thuỳ có cuống Cụm hoa đầu đơn độc, rộng 3-10cm Lá bắc ngồi có phần phụ hình tam giác màu lục thu lại thành gai to, gốc có 4-6 gai nhỏ, ngắn hơn, bên Hoa màu tím, gặp màu trắng, giống nhau, có cánh hoa, nhị bầu với nỗn vòi nhuỵ phình gốc bế hình bầu dục thn, dài 7-8mm, màu đen bóng có vân vàng nhiều ít, tùy thuộc vào giống S.marianum [15], [24], [26] Ra hoa vào tháng đến tháng năm thứ hai Cây có nguồn gốc Địa Trung Hải mọc hoang dại nhiều nơi giới nhƣ miền Nam Trung Âu, Bắc Phi, Trung Đông, Ấn Độ, Trung Quốc, Bắc Nam Mỹ [26] 1.1.2 Thành phần ho ính Sily Dịch chiết hạt chứa khoảng 70-80% silymarin flavonolignans khoảng 20-30% thành phần không xác định, chủ yếu hợp chất polyphenol oxy hóa trùng hợp Thành phần tổ hợp silymarin silybin, đồng nghĩa với silybinin Ngoài silybin hỗn hợp diastereomers A B với tỉ lệ khoảng 1:1, lƣợng lớn flavonolygnants ... điều trị bệnh liên quan đến gan Việt Nam, thay sản phẩm nhập ngoại, sở để thực đề tài: “ axit amin ” Nghiên cứu quy trình tách chiết Sylimarin từ hạt kế sữa Nghiên cứu quy trình thuỷ phân thu... cao HPLC SKLM Cs CN Công nguyên TPCN WHO UV - Bảng 3.1 Kết khảo sát dung môi để chiết xuất silymarin 34 Bảng 3.2 Kết chiết xuất silymarin phƣơng pháp khác 35 axit amin 39 3.4: ảnh hƣởng... phân bột đậu tƣơng protease lên 44 44 3.6: Hàm lƣợng axit amin tự 3.7: Hàm lƣợng axit amin tự ch thủ 45 ủ 46 Bảng 3.8: Liều uống chế phẩm silymarin lô chuột thực