Thiết kế vector biểu hiện các gene mã hóa cho các Enzyme xúc tác quá trình sinh tổng hợp βcarotene trong vi khuẩn Escherichia coli. (Khóa luận tốt nghiệp)

77 375 0
Thiết kế vector biểu hiện các gene mã hóa cho các Enzyme xúc tác quá trình sinh tổng hợp βcarotene trong vi khuẩn Escherichia coli. (Khóa luận tốt nghiệp)

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Thiết kế vector biểu hiện các gene mã hóa cho các Enzyme xúc tác quá trình sinh tổng hợp βcarotene trong vi khuẩn Escherichia coli. (Khóa luận tốt nghiệp)Thiết kế vector biểu hiện các gene mã hóa cho các Enzyme xúc tác quá trình sinh tổng hợp βcarotene trong vi khuẩn Escherichia coli. (Khóa luận tốt nghiệp)Thiết kế vector biểu hiện các gene mã hóa cho các Enzyme xúc tác quá trình sinh tổng hợp βcarotene trong vi khuẩn Escherichia coli. (Khóa luận tốt nghiệp)Thiết kế vector biểu hiện các gene mã hóa cho các Enzyme xúc tác quá trình sinh tổng hợp βcarotene trong vi khuẩn Escherichia coli. (Khóa luận tốt nghiệp)Thiết kế vector biểu hiện các gene mã hóa cho các Enzyme xúc tác quá trình sinh tổng hợp βcarotene trong vi khuẩn Escherichia coli. (Khóa luận tốt nghiệp)Thiết kế vector biểu hiện các gene mã hóa cho các Enzyme xúc tác quá trình sinh tổng hợp βcarotene trong vi khuẩn Escherichia coli. (Khóa luận tốt nghiệp)Thiết kế vector biểu hiện các gene mã hóa cho các Enzyme xúc tác quá trình sinh tổng hợp βcarotene trong vi khuẩn Escherichia coli. (Khóa luận tốt nghiệp)

I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM TÀI: THI T K VECTOR BI U HI N CÁC GENE HÓA CHO CÁC NG SINH T NG H P - carotene TRONG VI KHU N Escherichia coli KHÓA LU N T T NGHI H o IH C : Chính quy Ngành : Công ngh sinh h c Khoa : CNSH-CNTP Khóa h c : 2011-2015 Thái Nguyên, 2015 I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM TÀI THI T K VECTOR BI U HI N CÁC GENE HÓA CHO CÁC NG SINH T NG H P - carotene TRONG VI KHU N Escherichia coli KHÓA LU N T T NGHI H o IH C : Chính quy Ngành : Công ngh sinh h c L p : 43-CNSH Khoa : CNSH-CNTP Khóa h c : 2011-2015 Gi ng d n: ThS Ma Th Trang Thái Nguyên, 2015 ng L IC Trong trình h c t p nghiên c hồn thành khóa lu n t t nghi p s n l c, c g ng c a b n thân b cs ng viên c a th y cô, b Tôi xin bày t lòng bi t p hồn thành khóa lu n: c t i Th ng d n ch b o, gi il ic nghi m công ngh gen ng d n, ch c m c c ng c ki n th c cho i Th.S Ma Th Trang, cán b phòng thí c ti p ch b c, t o m u ki n t t nh h c t p nghiên c u y cô khoa Công ngh sinh h c Công ngh th c ph o d y d su t th i gian qua Cu i xin g i l i c ng viên, chia s i thân b nh c t p nghiên c u Thái Nguyên, tháng 06 Sinh viên Amp : Ampicillin Bp : Base pair C CoA : Coenzyme Acetoacetyl Cs : C ng s DNA : Deoxyribonucleic Acid E coli : Escherichia coli EDTA : Etilendiamin tetraaxetic acit IPTG : Isopropyl Thiogalactoside Kb : Kilo base LB : Laria Broth NCBI : Nation Cetrer for Biotechnology Information PCR : Polymerase Chain Recation S chromofuscus : Streptomyces chromofuscus TAE : Tris-acetate-EDTA UV : Ultraviolet X-gal : 5-bromo-4-chloro-3-indoly- -D-galactoside ROS : Reactive Oxygen Species RNS : Reactive Nitrogen Species Trang B ng carotenoid có th c v t 15 B ng 3.1: Các thành ph n c a vector pRSET-A 27 B ng 3.2: Các thành ph n c a vector pET22b(+) 28 B ng 3.3: Danh m c thi t b s d tài 31 B ng 3.4: Thành ph n ph n ng c t v i EcoRI HindIII 36 B ng 3.5: Thành ph n ph n ng c t v i KpnI EcoRI 36 B ng 3.6: Thành ph n ph n ng c t v i EcoRI XbaI 37 B ng 3.7: Thành ph n ph n ng g n n i 39 Trang Hình 2.1: Cơng th c c u t o c a -carotene .4 chuy n hóa -carotene thành vitamin A Hình 2.3: Bi kh o sát th ki Hình 2.4: Sinh t ng h ng MAV .11 Hình 2.5: Sinh t ng h ng MEP 12 Hình 2.6: Quá trình sinh t ng h p carotenoids t IPP DMAPP 13 Hình 2.7: Quá trình chuy n hóa phyopene thành lycopene .13 Hình 2.8: T ng h p -carotene t lycopene .14 t ng h p - carotene c a BASF .16 t ng h p -carotene c a Roche 17 Hình 2.11: Quá trình chuy n hóa -carotene i s tham gia gene Crt 19 ki m soát s phiên c a T7 promoter 20 h th ng vector bi u hi n pRSET .22 h th ng vector bi u hi n pET 22 a protein tái t h p ch a 6xHis giá th Niken 23 Hình 3.1: C u trúc vector bi u hi n pRSET .26 Hình 3.2: C u trúc vector bi u hi n pET22b(+) .28 Hình 3.3: Quy trình thi t k vector pR-iEIBY 33 Hình 3.4: Quy trình thi t k vector pET22iEIBY 34 Hình 4.1: K t qu n di ki m tra dòng plasmid pR-iEIY 41 Hình 4.2: K t qu n di s n ph m c t ki m tra s có m t c a gene crtY .42 Hình 4.3: Hình minh h Hình 4.4: K t qu ki m tra chi u g n gen crtY vector pR-iEIY 43 n di s n ph m c t ki m tra chi u g n gene crtY pRiEIY 44 Hình 4.5: K t qu n di ki m tra dòng plasmid pR-iEIBY .45 Hình 4.6: K t qu n di s n ph m c t ki m tra s có m t c a gene crtB 46 Hình 4.7: K t qu n di ki m tra dòng plasmid pET22-Y 47 Hình 4.8: K t qu n di ch n l c dòng pET22-Y v i enzyme EcoRI 47 Hình 4.9: Hình minh h ki m tra chi u g n gen crtY vector pET22-Y 48 Hình 4.10:K t qu n di ki m tra chi u g n crtY vector pET22-Y 49 Hình 4.11: K t qu n di ki m tra dòng plasmid pET22-iEIBY 49 Hình 4.12: K t qu Hình 4.13: Hình minh h Hình 4.14: K t qu n di ch n l c dòng pET-iEIBY v i enzyme XbaI EcoRI 50 ki m tra chi u g n c m gene iEIB vector pET22iEIBY .51 n di ki m tra chi u g n c m iEIB vector pET22-iEIBY 52 Hình 4.15: K t qu bi u hi n vector pR-iEIBY ch ng E coli BL21 (DE3) 53 Hình 4.16: K t qu bi u hi n vector pET22iEIBY ch ng E coli BL21 (DE3) 54 Hình 4.17: K t qu so sánh so sánh bi u hi n c a hai h vector pRSET-A pET22b(+) 55 C PH N M tv U .1 .1 1.2 M u 1.3 M c tiêu nghiên c u tài c .3 c ti n PH N T NG QUAN TÀI LI U 2.1 Khái quát v s c t -carotene 2.1.1 C u trúc tính ch t lý hóa 2.1.2 Vai trò c a s c t -carotene v 2.1.2.1 Vai trò c a -carotene 2.1.2.2 i i v i s c kh i ng d ng c a -carotene công nghi p ng t ng h p -carotene 10 2.1.4 Ngu n cung c p -carotene .14 2.1.4.1 Ngu n cung t th c v t .14 2.1.4.2 Ngu n cung t vi sinh v t .15 2.1.4.3 Ngu n cung t t ng h p hóa h c 16 2.1.5 ng d ng công ngh DNA tái t h p vào s n xu t -carotene t nhiên 18 2.2 Vi khu n E.coli h vector bi u hi n s n xu t protein tái t h p .19 m c a vi khu n E coli s n xu t protein tái t h p .19 2.2.2 M t s h th ng vector bi u hi n vi khu n E coli 21 2.3 Tình hình nghiên c c 23 2.3.1 Tình hình nghiên c u th gi i 23 2.3.2 Tình hình nghiên c Ph n V T LI U, N c 25 U 26 3.1 V t li u nghiên c u .26 3.1.1 Vi khu n 26 3.1.2 V t li u .26 3.1.2.1 Enzyme 26 3.1.2.2 Vector 26 3.1.3 Hóa ch t 29 3.1.4 D ng c 31 3.1.5 Thi t b .31 3.1.6 Ph m vi nghiên c u 31 m th i gian nghiên c u .32 3.3 N i dung nghiên c u 32 u 33 t k in silico 34 pb gi i h n 35 n di DNA gel agarose 37 n DNA t gel agarose 38 n gen mong mu n lên vector bi u hi n 38 n b t bào E coli kh bi n 39 n n p DNA plasmid vào t bào kh bi n b ng s c nhi t 39 t DNA plasmid 40 Ph n K T QU VÀ TH O LU N 41 4.1 Thi t k vector bi u hi n mang policistron g m gene idi-crtE-crtI-crtB-crtY n n t ng vector bi u hi n pRSET-A t o vector tái t h p pR-iEIBY .41 4.1.1 K t qu g n gene crtY vào vector pR-iEI t o vector tái t h p pR-iEIY .41 4.1.2 K t qu g n gene crtB vào vector pR-iEIY t o vector tái t h p pR-iEIBY 45 4.2 Thi t k vector bi u hi n mang policistron g m gene idi-crtE-crtI-crtB-crtY n n t ng vector bi u hi n pET22b(+) t o vector tái t h p pET22-iEIBY 46 4.2.1 K t qu g n gene crtY vào vector pET22b(+) t o vector tái t h p pET22-Y 46 4.2.2 K t qu g n c m gene idi-crtE-crtI-crtB vào vector pET22-Y t o vector tái t h p pET22-iEIBY .49 4.3 K t qu ki m tra s ho ng c a gene 52 Ph n K T LU N VÀ KI N NGH 56 5.1 K t lu n 56 5.2 Ki n ngh .56 TÀI LI U THAM KH O 57 N1 U Carotenoid m t d ng s c t t nhiên xu t hi n ch y u loài sinh v t quang h th c v t m, t o m t vài lo i vi khu n (Schmidt- Dannert, 2000) [57] Chúng có vai trò hình thành màu s c cho cây, che ch n ánh sáng (Vershinin, 1999) [70] có kh ng oxy hóa m nh (Stahl and Sies, 2003) [63] Ngày có kho ng 600 lo s n thi t cho ch c tìm th y 40 lo i ng c i (Rao and Rao, 2007) [52] -carotene s c t có màu vàng ho c da cam, thu c nhóm carotenoid Chúng c tìm th y m t s lo u hà lan (Desobry, Netto et al 1998) [18] -carotene c bi t ti n ch t ng h p vitamin A m t lo i vitamin r t c n thi t cho m t (Lampert, Holzschuh et al 2003; Stutz, Bresgen et al 2015) [35, 65] Theo t ch c WHO FAO m u tr em b m c b nh v m t nguyên nhân ch y u thi u provitamin A kh u ph (Harjes, Rocheford et al 2008) [26] d ng su ng v t, -carotene ng, chúng tham gia vào m t lo t trình sinh lý, sinh s n, phát tri n bi u bì c a mơ, c mi n d ch (Sklan, 1987) [60] Nhi u nghiên c d cs ng kh r ng -carotene có tác a q trình oxy hóa b ng cách lo i b g c oxy t b ov t a trình phát tri n c a t nh tim m ch (Igielska-Kalwat, Goscianska et al 2015) [29] u s d ng -carotene Trong nh th ng c a công ty nghiên c u th ng BCC, th t 1,2 t c u s d ng -carotene chi m t tr ng cao nh t v i 262 tri u USD (chi m 21,8%) im 2018 s carotene ng bình quân h u USD (BCC 2011) [11] c s n xu ng chính: M ki ng nhu c - ng t ng h p hóa m nh nên k t qu promoter s phiên c n gene kháng amp trình t gene n c d ch t o thành protein Bi u hi n h vector pET22-iEIBY vi khu n E coli BL21 (DE3) Hình 4.16: K t qu bi u hi n vector pET22iEIBY ch ng E coli BL21 (DE3) ng 1: C n khu n sau c m ng IPTG ng 2: C n khu c c m ng IPTG Theo k t qu hình 4.16, u ki n bi n n p, t bào E coli BL21 (DE3) mang vector pET22iEIBY ch bi u hi n màu s c có s c m ng c a IPTG ( ng 1) so v i c c m ng Tuy nhiên m s c y u, màu s c th hi n màu s bi u hi n màu m không cao T nh ng k t qu cho th y vector tái t h p thi t k u ho ng t c m b o trình phiên mã, d ch mã, t o enzyme xúc tác trình sinh t ng h p -carotene (màu vàng vi khu n E coli DH5 vector pRiEIBY E coli BL21 (DE3) mang vector pET22iEIBY, màu da cam vi khu n E coli BL21 (DE3) mang vector pRiEIBY y, t k thành công hai vector vector bi u hi n pR-iEIBY pET22-iEIBY ch a gene hóa cho ng sinh t ng h p -carotene vi khu n E coli n n t ng vector bi u hi n pRSET-A pET22b(+) So sánh kh u hi n gi a hai h vector pR-iEIBY pET22-iEIBY Hình 4.17: K t qu so sánh bi u hi n c a hai h vector pRSET-A pET22b(+) -A 22b(+) -carotene B pRSET-A (b u pET22b(+) -carotene -carotene - o thành công hai vector bi u hi n pR-iEIBY pET22-iEIBY ch a gene hóa ng sinh t ng h p -carotene vi khu n E coli cho enzyme xúc tác n n t ng vector bi u hi n pRSET-A pET22b(+) - Bi u hi n thành công hai vector pR-iEIBY pET22-iEIBY vi khu n E coli t o a -carotene) màu - B ng c m quan có th cho th y, h vector pRSET-A v i s bi u hi n s c t beta-carotene m s b n th ng b t n (màu da cam) so v i h vector pET22b(+) có bi u hi n màu vàng - Ti p t c nghiên c u chuy n gene idi, crtI, crtE, crtB, crtY lên h vector bi u hi n khác - Bi n n p h vector tái t h p vào ch ng E coli tìm gi i pháp t cho vi c bi u hi n -carotene vi khu n E coli - Ti n hành phân tích c n khu n b ng h p -carotene s c kí l ng hi c t h bi u hi n ch ng bi u khác t ng I Tài li u ti ng vi t Nguy n Th Nguy ng (2012) o ch ng E coli có kh n xu t lycopene T p chí T p chí Nông nghi p & Phát tri n nông thôn k -tháng 3/2012: 10-14 Nguy n Th Lý, T T H V (2010) "Tách tinh d u carotenoid t tr u (Piper betle L.)." H i Ngh Khoa H c & Công Ngh l n 9, Phân ban Cơng ngh Hóa h i h c Bách khoa - Tp.HCM Ha Thi Bich Ngoc, T T H N., Nguy carotenoid m t s u tra h p ch t th c v t c a Vi t Nam" T p chí Khoa h c c T nhiên Công ngh 23: 130-134 II.Tài li u ti ng anh Adetayo O Omoni and R E Aluko (2005) "The anti-carcinogenic and antiatherogenic effects of lycopene: a review." Trends in Food Science & Technology 16(8): 344-350 ANS, E P o F A a N S a t F (2012) "Scientific Opinion on the reevaluation of mixed carotenes (E 160a (i)) and Anupam Singh, Vaibhav Upadhyay, Arun Kumar Upadhyay, Surinder Mohan Singh and A K Panda (2015) "Protein recovery from inclusion bodies of Escherichia coli using mild solubilization process." Microb Fact Cell 14(41): doi: 10,1186 / s12934-12015-10222-12938 Aoki, H., N T Kieu, N Kuze, K Tomisaka and N Van Chuyen (2002) "Carotenoid pigments in GAC fruit (Momordica cochinchinensis SPRENG)." Biosci Biotechnol Biochem 66(11): 2479-2482 Armstrong, G A and J E Hearst (1996) "Carotenoids 2: Genetics and molecular biology of carotenoid pigment biosynthesis." Faseb j 10(2): 228237 Baky., H H A E and G S El-Baroty (2013) "Healthy Benefit of Microalgal Bioactive Substances." Journal of Aquatic Science 1(1): 11-23 10 Baneyx, F (1999) "Recombinant protein expression in Escherichia coli." Curr Opin Biotechnol 10(5): 411-421 11 BCC (2011) "The Global Market for Carotenoids." 12 Bernardo Dias Ribeiro, Daniel Weingart Barreto and M A Z Coelho (2011) -Carotene Production." Food and Bioprocess Technology 4( 5): 693-701 13 Biesalski, H K., G R Chichili, J Frank, J von Lintig and D Nohr (2007) "Conversion of beta-carotene to retinal pigment." Vitam Horm 75: 117-130 14 Britton, G (1995) "Structure and properties of carotenoids in relation to function." Faseb j 9(15): 1551-1558 15 Camps, M (2010) "Modulation of ColE1-like Plasmid Replication for Recombinant 16 Cooper GM (1992) " Elements of human cancer." Boston: Jones and Bartlett Publishers p 16: ISBN 978-970-86720-86191-86728 17 Del Campo, J A., J Moreno, H Rodriguez, M A Vargas, J Rivas and M G Guerrero (2000) "Carotenoid content of chlorophycean microalgae: factors determining lutein accumulation in Muriellopsis sp (Chlorophyta)." J Biotechnol 76(1): 51-59 18 Desobry, S A., F M Netto and T P Labuza (1998) "Preservation of betacarotene from carrots." Crit Rev Food Sci Nutr 38(5): 381-396 19 Dhalla, N S., R M Temsah and T Netticadan (2000) "Role of oxidative stress in cardiovascular diseases." J Hypertens 18(6): 655-673 20 Ernst, H (2002) "Recent advances in industrial carotenoid synthesis." ChemInform 74(11): 2213 2226 21 Fujisawa, M., M Watanabe, S K Choi, M Teramoto, K Ohyama and N Misawa (2008) "Enrichment of carotenoids in flaxseed (Linum usitatissimum) by metabolic engineering with introduction of bacterial phytoene synthase gene crtB." J Biosci Bioeng 105(6): 636-641 22 GBD (2015) "Global, regional, and national age-sex specific all-cause and cause-specific mortality for 240 causes of death, 1990-2013: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013." Lancet 385(9963): 117-171 23 Goodwin, T W (1980) "The Biochemistry of the Carotenoids." Plants 24 Gordon, J E and M Schooff (2002) "Can high-dose supplementation with vitamins C and E, beta carotene, and zinc slow the progression of macular degeneration?" J Fam Pract 51(2): 105 25 Guerin, M., M E Huntley and M Olaizola (2003) "Haematococcus astaxanthin: applications for human health and nutrition." Trends Biotechnol 21(5): 210-216 26 Harjes, C E., T R Rocheford, L Bai, T P Brutnell, C B Kandianis, S G Sowinski, A E Stapleton, R Vallabhaneni, M Williams, E T Wurtzel, J Yan and E S Buckler (2008) "Natural genetic variation in lycopene epsilon cyclase tapped for maize biofortification." Science 319(5861): 330-333 27 Heller, F R., O Descamps and J C Hondekijn (1998) "LDL oxidation: therapeutic perspectives." Atherosclerosis 137 Suppl: S25-31 28 Hyung Seok Choi, Sang Yup Lee, Tae Yong Kim and H M Woo (2010) "In Silico Identification of Gene Amplification Targets for Improvement of Lycopene Production." Appl Environ Microbiol 76(10): 3097 3105 29 Igielska-Kalwat, J., J Goscianska and I Nowak (2015) "Carotenoids as natural antioxidants." Postepy Hig Med Dosw (Online) 69(0): 418-428 30 Ikeda, M and R Katsumata (1992) "Metabolic Engineering To Produce Tyrosine or Phenylalanine in a Tryptophan-Producing Corynebacterium glutamicum Strain." Appl Environ Microbiol 58(3): 781-785 31 Invitrogene (2010) "pRSETa,b and c For high-level expression of recombinant proteins in E coli." invitrogene in TM by life technologies 315-20: 25-0213 32 Jana, S and J K Deb (2005) "Strategies for efficient production of heterologous proteins in Escherichia coli." Appl Microbiol Biotechnol 67(3): 289-298 33 Jones, K L., S W Kim and J D Keasling (2000) "Low-copy plasmids can perform as well as or better than high-copy plasmids for metabolic engineering of bacteria." Metab Eng 2(4): 328-338 34 K L Perry, T A Simonitch, K J Harrison-Lavoie and S T Liu (1986) "Cloning and regulation of Erwinia herbicola pigment genes." J Bacteriol 168(2): 607 612 35 Lampert, J M., J Holzschuh, S Hessel, W Driever, K Vogt and J von Lintig (2003) "Provitamin A conversion to retinal via the beta,beta-carotene-15,15'oxygenase (bcox) is essential for pattern formation and differentiation during zebrafish embryogenesis." Development 130(10): 2173-2186 36 Lee, P C., A Z Momen, B N Mijts and C Schmidt-Dannert (2003) "Biosynthesis of structurally novel carotenoids in Escherichia coli." Chem Biol 10(5): 453-462 37 Lee, P C and C Schmidt-Dannert (2002) "Metabolic engineering towards biotechnological production of carotenoids in microorganisms." Appl Microbiol Biotechnol 60(1-2): 1-11 38 Lewin, B (2003) "Gene VIII Book" 39 Lien Ai Pham-Huy, Hua He and C Pham-Huy (2008) "Free Radicals, Antioxidants in Disease and Health." Int J Biomed Sci 4(2): 89-96 40 Luis Carlos Mata-Gómez, Julio César Montanez, Alejandro Méndez-Zavala and C N Aguilar (2014) "Biotechnological production of carotenoids by yeasts: an overview." Microb Cell Fact 13(12): 1475-2859 41 Lynen, F (1967) "Biosynthetic pathways from acetate to natural products." Pure Appl Chem 14(1): 137-167 42 Maiani, G., M J Caston, G Catasta, E Toti, I G Cambrodon, A Bysted, F Granado-Lorencio, B Olmedilla-Alonso, P Knuthsen, M Valoti, V Bohm, E Mayer-Miebach, D Behsnilian and U Schlemmer (2009) "Carotenoids: actual knowledge on food sources, intakes, stability and bioavailability and their protective role in humans." Mol Nutr Food Res 53 Suppl 2: S194-218 43 Mbuyi, J M., J Dequeker, F Bloemmen and E Stevens (1982) "Plasma proteins in human cortical bone: enrichment of alpha HS-glycoprotein, alpha acid-glycoprotein, and IgE." Calcif Tissue Int 34(3): 229-231 44 Mendis, Shanthi;, Puska, Pekka;, Norrving and Bo (2014) "Global atlas on cardiovascular disease prevention and control." Geneva: World Health Organization in collaboration with the World Heart Federation and the World Stroke Organization: pp3-18 45 Misawa, N., S Yamano and H Ikenaga (1991) "Production of beta-carotene in Zymomonas mobilis and Agrobacterium tumefaciens by introduction of the biosynthesis genes from Erwinia uredovora." Appl Environ Microbiol 57(6): 1847-1849 46 Miura, Y., K Kondo, T Saito, H Shimada, P D Fraser and N Misawa (1998) "Production of the carotenoids lycopene, beta-carotene, and astaxanthin in the food yeast Candida utilis." Appl Environ Microbiol 64(4): 1226-1229 47 Moran, A E., M H Forouzanfar, G A Roth, G A Mensah, M Ezzati, C J Murray and M Naghavi (2014) "Temporal trends in ischemic heart disease mortality in 21 world regions, 1980 to 2010: the Global Burden of Disease 2010 study." Circulation 129(14): 1483-1492 48 Nagao, A (2009) "Absorption and function of dietary carotenoids." Forum Nutr 61: 55-63 49 Novagen (2006) "pET System Manual." TB055 11th Edition, Rev.B 0403, USA 800-207-0144 50 Olson, J A (1999) "Carotenoids and human health." Arch Latinoam Nutr 49(3 Suppl 1): 7s-11s 51 Parker, R S., J E Swanson, C S You, A J Edwards and T Huang (1999) "Bioavailability of carotenoids in human subjects." Proc Nutr Soc 58(1): 155-162 52 Rao, A V and L G Rao (2007) "Carotenoids and human health." Pharmacol Res 55(3): 207-216 53 Reaven, P D., E Ferguson, M Navab and F L Powell (1994) "Susceptibility of human LDL to oxidative modification Effects of variations in betacarotene concentration and oxygen tension." Arterioscler Thromb 14(7): 1162-1169 54 Ribaya-Mercado, J D., C C Maramag, L W Tengco, G G Dolnikowski, J B Blumberg and F S Solon (2007) "Carotene-rich plant foods ingested with minimal dietary fat enhance the total-body vitamin A pool size in Filipino schoolchildren as assessed by stable-isotope-dilution methodology." Am J Clin Nutr 85(4): 1041-1049 55 Robert Mierendorf, Keith Yeager and R Novy (1994) "pET system: Your choice for expression." News letter of Novagen Inc 1(1) 56 Roncone, D P (2006) "Xerophthalmia secondary to alcohol-induced malnutrition." Optometry 77(3): 124-133 57 Schmidt-Dannert, C (2000) "Engineering novel carotenoids in microorganisms." Curr Opin Biotechnol 11(3): 255-261 58 Sies, H and W Stahl (1998) "Lycopene: antioxidant and biological effects and its bioavailability in the human." Proc Soc Exp Biol Med 218(2): 121-124 59 Singh, N., A K Dhalla, C Seneviratne and P K Singal (1995) "Oxidative stress and heart failure." Molecular and Cellular Biochemistry 147(1): 77-81 60 Sklan, D (1987) "Vitamin A in human nutrition." Prog Food Nutr Sci 11(1): 39-55 61 Smith, T A (1998) "Carotenoids and cancer: prevention and potential therapy." Br J Biomed Sci 55(4): 268-275 62 Snodderly, D M (1995) "Evidence for protection against age-related macular degeneration by carotenoids and antioxidant vitamins." Am J Clin Nutr 62(6 Suppl): 1448s-1461s 63 Stahl, W and H Sies (2003) "Antioxidant activity of carotenoids." Mol Aspects Med 24(6): 345-351 64 Stephanopoulos, G (1994) "metabolic engineering." Curr Opin Biotechnol 5(2): 196-200 65 Stutz, H., N Bresgen and P M Eckl (2015) "Analytical tools for the analysis of beta-carotene and its degradation products." Free Radic Res: 1-31 66 Sugantha priya S, Gowri Shankar J, Thirumalaisamy R and K P (2010) "Over Expression of IPTG inducible GST protein in E.coli BL21." Journal of Biomedical Sciences and Research 2(1): 54-59 67 Tawfiq Abu-Rezq S., Suad Al-Hooti, Dangly Jacob, Mustafa Al-Shamali, carotene from the locally isolated 68 The QIAexpressionistTM (2003) "A handbook for high-level expression and purification of 6xHis-tagged proteins." Fifth edition, QIAGEN, Germany 69 Vachali, P., P Bhosale and P S Bernstein (2012) "Microbial carotenoids." Methods Mol Biol 898: 41-59 70 Vershinin, A (1999) "Biological functions of carotenoids diversity and evolution." Biofactors 10(2-3): 99-104 71 Voutilainen, S., T Nurmi, J Mursu and T H Rissanen (2006) "Carotenoids and cardiovascular health." Am J Clin Nutr 83(6): 1265-1271 72 Wolf, G (2001) "The discovery of the visual function of vitamin A." J Nutr 131(6): 1647-1650 73 Yamano, S., T Ishii, M Nakagawa, H Ikenaga and N Misawa (1994) "Metabolic engineering for production of beta-carotene and lycopene in Saccharomyces cerevisiae." Biosci Biotechnol Biochem 58(6): 1112-1114 74 Yoon, S.-H., Hye-Min Park, Ju-Eun Kim, Sook-Hee Lee, Myung-Suk Choi, Jae-Yean Kim, Deok-Kun Oh, Jay D Keasling and S.-W Kim (2007) -Carotene Production in Recombinant Escherichia coli Harboring an Engineered Isoprenoid Precursor Pathway with Mevalonate Addition." Biotechnol 23(3): 599-605 75 Yoon, S H., S H Lee, A Das, H K Ryu, H J Jang, J Y Kim, D K Oh, J D Keasling and S W Kim (2009) "Combinatorial expression of bacterial whole mevalonate pathway for the production of beta-carotene in E coli." J Biotechnol 140(3-4): 218-226 76 Young, I S and J V Woodside (2001) "Antioxidants in health and disease." J Clin Pathol 54(3): 176-186 PH L C C t v i EcoRI C t v i EcoRI HindIII HindIII thi t k in silico vector pR-iEIY b ng ph n m m Vector NTI C t v i EcoRI C t v i EcoRI KpnI vàKpnI G nn i thi t k in silico vector pR-iEIBY b ng ph n m m Vector NTI C t v i EcoRI C t v i EcoRI HindIII HindIII G nn i thi t k in silico vector pET22-Y b ng ph n m m Vector NTI C t v i XbaI C t v i XbaI EcoRI EcoRI G nn i ... Thi t k vector bi u hi n gene mã hóa cho enzyme xúc tác q trình sinh t ng h p -carotene vi khu n Escherichia coli h mm p v t li u cho nghiên c u t o n xu t -carotene tái t h p ch ng vi sinh v... TÀI THI T K VECTOR BI U HI N CÁC GENE MÃ HÓA CHO CÁC NG SINH T NG H P - carotene TRONG VI KHU N Escherichia coli KHÓA LU N T T NGHI H o IH C : Chính quy Ngành : Công ngh sinh h c L p : 43-CNSH... Thi t k thành cơng vector bi u hi n gene mã hóa cho enzyme liên n trình sinh t ng h p -carotene vi khu n Escherichia coli Ki m tra t bi u hi n -carotene ng c a s b n copy t vi khu n E Coli - N

Ngày đăng: 18/02/2018, 15:02

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan