Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu đánh giá chất lượng vắc xin cúm gia cầm H5N1 Navet – Fluvac 2 trong điều kiện phòng thí nghiệm. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu đánh giá chất lượng vắc xin cúm gia cầm H5N1 Navet – Fluvac 2 trong điều kiện phòng thí nghiệm. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu đánh giá chất lượng vắc xin cúm gia cầm H5N1 Navet – Fluvac 2 trong điều kiện phòng thí nghiệm. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu đánh giá chất lượng vắc xin cúm gia cầm H5N1 Navet – Fluvac 2 trong điều kiện phòng thí nghiệm. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu đánh giá chất lượng vắc xin cúm gia cầm H5N1 Navet – Fluvac 2 trong điều kiện phòng thí nghiệm. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu đánh giá chất lượng vắc xin cúm gia cầm H5N1 Navet – Fluvac 2 trong điều kiện phòng thí nghiệm. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu đánh giá chất lượng vắc xin cúm gia cầm H5N1 Navet – Fluvac 2 trong điều kiện phòng thí nghiệm. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu đánh giá chất lượng vắc xin cúm gia cầm H5N1 Navet – Fluvac 2 trong điều kiện phòng thí nghiệm. (Khóa luận tốt nghiệp)
I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM PH M TH QU NH TRANG tài: NGHIÊN C NG V C XIN CÚM GIA C M H5N1 NAVET - FLUVAC U KI N PHỊNG THÍ NGHI M KHĨA LU N T T NGHI H o: Chuyên ngành: Khoa: Khố h c: IH C Chính quy Thú y - Thú y 2011 2015 I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM PH M TH QU NH TRANG tài: NGHIÊN C NG V C XIN CÚM GIA C M H5N1 NAVET - FLUVAC TR U KI N PHỊNG THÍ NGHI M KHĨA LU N T T NGHI H o: Chuyên ngành: Khoa: L p: Khoá h c: Gi ng d n: IH C Chính quy Thú y - Thú y 43 - TY (N02) 2011 2015 TS Nguy Thái Nguyên, i L IC Trong su t th i gian nghiên c c s ch hoàn thành khóa lu n c a em o t n tình c a th ng d n, s c a ih c t p Trung tâm nghiên c u Công ty N c s c ng tác nhi t tình c a b ng nghi p, s Nhân d p tơi xin bày t lòng bi t n tình tr c ti c ng viên c i c t i TS Nguy t ng d n tơi th c hi n hồn thành khóa lu n Tơi xin bày t lòng c c Trung tâm nghiên c u ng t Gi ng t bào i TS Tr n Xuân H nh Giám Công ty Navetco, ThS Nguy Trung tâm nghiên c u cơng ty Navetco, tồn th anh ch em Trung tâm nghiên c trí thí nghi ng d n v m b em có th hồn thành c khóa lu n Tơi xin bày t lòng bi nghi ct i thân, b ng viên su t th i gian hồn thành khóa lu n Tơi xin chân thành c Sinh viên Ph m Th Qu nh Trang ng ii DANH M C CÁC B NG B ng 4.1:K t qu ki m tra tính nh c a v u 36 B ng 4.2: K t qu ki m tra vô trùng c a v c xin Navet Fluvac 37 B n toàn c a v c xin cúm gia c m Navet Fluvac .37 B ng 4.4 : K t qu ki m tra hi u l c c a v c xin cúm gia c m Navet Fluvac gà 38 B ng 4.5 : K t qu ki m tra hi u l c c a v c xin cúm gia c m Navet Fluvac v t .39 B ng 4.6: K t qu ki m c gà 40 B ng 4.7: K t qu ki c v t 41 iii DANH M C CÁC T AAHL: DC: VI T T T Austraulia Animal Health Laboratory i ch ng GMT: Geometric Mean Titer HA: Haemagglutinin HI: Hemagglutination inhibition reaction HPAI: Highly Pathogenic Avian Influenza LPAI: Low Pathogenic Avian Influenza M: Protein matrix MD: Mi n d ch MPAI: Moderately Pathogenic Avian Influenza NA: Neuraminidase NP: Nucleoprotein PBS: Phosphate buffer saline RDE: Receptor Destroying Enzyme TCID50: Tissue Culture Infectious Dose 50 iv M CL C L IC i DANH M C CÁC B NG ii DANH M C CÁC T VI T T T iii M C L C iv PH N 1: M U tv 1.2 M u 1.3 M c tiêu nghiên c u tài c c ti n PH N 2: T NG QUAN NGHIÊN C U khoa h c pháp lý c tài 2.1.1 Gi i thi u chung v b nh cúm gia c m 2.1.2 Tình hình d ch cúm gia c c th gi i c tính chung c a virus cúm A 2.1.4 Nuôi c y virus cúm gia c m ng v t c m nhi m 10 c truy n lây 11 sinh b nh 12 2.1.8 Tri u ch ng c a b nh cúm gia c m 12 2.1.9 B nh tích 13 2.1.10 Ch nh 13 2.1.11 Ki m soát b nh 14 2.1.12 V c xin phòng b nh cúm gia c m 16 2.2 T ng quan nghiên c c 22 v 2.2.1 Tình hình nghiên c c 23 2.2.2 Tình hình nghiên c c 24 PH N 3: NG, N U 26 ng ph m vi nghiên c u 26 m th i gian ti n hành 27 3.3 N i dung nghiên c u 27 u ch tiêu theo dõi 27 m tra tính nh c a v 3.4.2 Ki m tra vô trùng c a v c xin u 27 ng 28 m tra an toàn 29 m tra hi u l c 29 3.4.5 Ph n t h ng c u (HI) 30 3.4.6 Ki m tra xu t b -time PCR 33 PH N 4: K T QU VÀ TH O LU N 36 4.1 K t qu ki m tra tính nh c a v u 36 4.2 K t qu ki m tra vô trùng 37 4.3 K t qu ki m tra tính an tồn c a v c xin 37 4.4 K t qu ki m tra hi u l c v c xin gà v t 38 4.5 Ki c 40 PH N 5: K T LU N VÀ KI N NGH 43 5.1 K t lu n 43 5.2 Ki n ngh 44 TÀI LI U THAM KH O 45 PH N M U tv B nh cúm gia c m gây b i virus cúm A/H5N1 nh ng c a b nh d ch i s ng kinh t xã h i m t v u c a nhi u qu c gia th gi cúm h c quan tâm c bi t nh vùng d ch.Theo WHO, 20-30% tr em 5- ng c n m ng thành b nhi m n ch ng nghiêm tr ng gây ch t c a 250000 i Gánh n ng kinh t gây b i d c tính - 6000000 USD 100000 dân s , gánh n ng t l t th i d ch ( ý virus H5N1 v u Ng c Hào, 2014) [1] p t c bi i t o ch ng m nguyên nhân ng d ch b nh có hi u qu phòng b nh ngồi vi c ph i th c hi n nghiêm ng t bi n pháp ki m d ch, v sinh phòng d ch, vi c s d ng v c xin phòng b nh có vai trò quan tr ng mang l i hi u qu phòng b nh cao Vi c tiêm v c xin không nh ng b o v m ni, mà làm gi m mb ng ngồi t Vì nh s xu t m kh nh c t o m t lo i v c xin hi u qu b o v gia c m ch ng l i virus cúm m t nh ng m i quan tâ u cơng tác phòng ch ng cúm, nh i d ch c ta t ph i nh p v c xin t Trung Qu c G ty NAVETCO c a Vi n xu c v c xin cúm A/H5N1 dùng virus v c xin ch ng NIBRG-14, v i tên g i Navet - Vifluvac Tuy nhiên, c tính c a virus ng bi i t o thành bi n chúng m ch ng có ngu n v m b o ch nghiên c u m t v c xin cúm khác Navet Fluvac 2, có kh n nh cho gia c m ch ng l i bi n ch ng m i bao g m clade 1.1, 2.3.2.1a, 2.3.2.1b 2.3.2.1c c ch ng v c xin s n xu t t khoa h c xây d ng tiêu chu n ki m nghi m s d ng v c xin, ti n hành nghiên c u tài: Nghiên c ng v c xin cúm gia c m H5N1 NAVET - FLUVAC 1.2 M u ki n phòng thí nghi m ghiên c u c ch ng c a v c xin Navet trùng, tính v t lý, an toàn hi u l c, làm Fluvac v m t: vô khoa h c xây d ng quy trình ki m nghi m s d ng v c xin 1.3 M c tiêu nghiên c u - N ng v c xin cúm gia c m H5N1 Navet Fluvac phòng thí nghi m - Trau d i ki n th c th c t , kinh nghi m chuyên môn t , t rèn luy n, h c h i nâng cao tay ngh cho b n thân tài c Cung c p thông tin khoa h c v kh tiêm v c xin Navet gia c m th o h c a gia c m Fluvac ch ng l i bi n ch ng m i c a virus cúm c l c cao H5N1 c ti n K t qu ng v c xin Navet Fluvac tri n khai s d ng v c xin th c ti n s n xu t, nh m phòng ch ng d ch cúm gia c m PH N T NG QUAN NGHIÊN C U khoa h c pháp lý c tài 2.1.1 Gi i thi u chung v b nh cúm gia c m B nh cúm gia c m hay b nh cúm gà (Avian Influenza AI), m t b nh truy n nhi m gây b i virus cúm typ A thu c h c c g i d ch t gà (Fowl plague) H i ngh l n th nh t v b nh cúm gia c m t i Beltsville truy n nhi m cao M b B nh cúm gia c - HPAI) T ch c thú y th gi i (OIE) x p HPAI vào danh m c 15 b nh nguy hi m nh t c ng v t (Nguy n Bá Hiên, 2014) [6] Virus cúm typ A gây b nh ch y u cho gia c m ni lồi chim cs ng c a virus loài chim hoang chim hoang v t ch t nhiên c a virus cúm A Ngoài gây b nh cho lồi chim, virus cúm typ A có th gây b nh cho m t s ng v t khác bao g m ng a, l n, h i c u cá voi (Nguy n Bá Hiên, 2014) [6] Protein b m t c a virus cúm A có c u trúc t glycoprotein, bao g m t h ng c u (Haemagglutinin - HA), protein enzyme c t th th NA (Neuraminidase) m M (Matrix) D a vào s khác c a kháng nguyên b m t HA NA thành nhi u typ khác Hi virus cúm A nh type N (N1-N9) (Nguy n Bá Hiên, 2014) [6] Cúm gia c m th -H16) cl c cao (Highly Pathogenic Avian Influenza-HPAI) virus cúm A/H5N1 m t phân typ nhóm cúm A gây b nh c p tính cho gà, gà tây loài chim khác v i t lây lan nhanh t l ch t cao 40 4.5 Ki c u qu c a vi c tiêm phòng v c xin phòng b nh cúm gia c m, vi c theo dõi t l b o h lâm sàng, vi c ki m tra s th i c a virus ng, cung c p thêm thông tin xác nh n ch ng c a v c xin hi u qu c a vi c tiêm phòng nh n kh a virus ki m tra, t t c gà, v c l y m u swab gia c m nh p vào ngày th 3, 10 c ki m tra b n B ng 4.6: K t qu ki Lơ v c xin Lơ thí nghi m S ng (con) MD 10 DC 01 MD 10 DC 02 MD 10 DC 03 -PCR c gà K t qu bà (Realtime PCR) S Ngày ki m d ng s tra ki m tra 1/10 1/10 10 0/10 5/5 10 2/10 3/10 10 1/10 5/5 10 2/10 1/10 10 0/10 5/5 10 c T l % 10 10 0,0 100 20 30 10 100 20 10 0,0 100 41 B ng 4.7: K t qu ki Lơ v c xin Lơ thí nghi m MD c v t K t qu S ng (con) 10 01 Ngày ki m tra c (Realtime PCR) S d ng s ki m tra 2/10 T l % 20 1/10 10 10 0/10 0,0 5/5 100 2/10 20 2/10 20 10 1/10 10 5/5 100 3/10 30 1/10 10 10 0/10 0,0 5/5 100 DC 5 10 MD 10 02 DC 5 10 MD 10 03 DC 5 10 M u ki xem âm tính CT T cl c 35 Qua b ng ta có th th y m th i c a lơ gà thí nghi m qua ngày l y m u ki m tra sau ngày, ngày 10 ngày 42 c virus cúm gia c m, lô v c xin ch có ng s 10 , lơ v c xin có c xin ng s 10 c virus cúm gia c m, lô v c xin có ng 10 con, lơ v v ng s 10 con, lô ng s 10 c k t qu ô v c xin ng s 10 con, lô v c xin Gà, v i virus cúm c tiêm phòng v c xin có m gà, v c tiêm v c xin Gà v có m th i virus th i i ch ng không tiêm v ng th i virus cao T k t qu virus nh t , có th th y gà, v t c tiêm lô v c xin th i 43 PH N K T LU N VÀ KI N NGH 5.1 K t lu n T nh chung, s n xu t v c xin c n ph i ki m tra ch tiêu nh, vơ trùng, an tồn hi u l c Vi c ki m tra nh ng ch tiêu không nh m b o v c xin xu thơ có th t ch c tính y u t n ho ng s d ng theo yêu c u mà nh c a gi ng, quy trình s n xu t ng s n xu t v c xin Qua k t qu ng v c xin cúm gia c m, rút nh ng k t lu n sau: - V c xin cúm gia c m Navet c tính Fluvac công ty Navetco s n xu nh t nh - V c xin cúm gia c m Navet Fluvac công ty Navetco s n xu t c ch tiêu v vô trùng - V c xin Navet gà , v t v i li u g -G Fluvac t tiêu chu n an toàn s d ng tiêm cho u s d ng c tiêm v c xin cúm gia c m Navet virus cúm gia c Fluvac có th ch c v i t l b o h 80 Trong nh ng vùng có tình hình d ch t ph c t c m x y cao nên tiêm v c xin cho gà vào th l ngày tu i ho c l n 100% nh cúm gia m 14 ngày tu i nh c vùng b d ch uy hi p tiêm v c xin cho gà tiêm m c 21 44 5.2 Ki n ngh Công nh n k t qu nghiên c cho phép s n xu t l c xin Navet Trong nh ng vùng có d ch t ph c t cao nên tiêm v c xin cho gà, v t vào th sau tu n ho c l ngh m quy n Fluvac t i Vi t Nam nh cúm gia c m x y m 14 ngày tu i nh c l vùng b uy hi p, tiêm v c xin cho gà, v t vào ngày tu i 21 tiêm m 45 TÀI LI U THAM KH O I Ti ng Vi t u Ng c Hào (2014), T p chí ng công ngh v Khoa h c k thu t thú y, t p XXI S 5, tr 84 Tr n Xuân H nh, Tô Th Ph Thanh Th y, Ph m S Tú (2013), hi u l c c a v c xin NAVET VIFLUVAC phòng b nh cúm A/H5N1 clade 1.1 2.3.2.1c b c ti p xúc tr c ti p , T p chí Khoa h c k thu t thú y , t p XX S 5, tr 22 Nguy n Bá Hiên, Tr n Xuân H nh, Ph (2010), Công ngh ch t o s d ng v c xin Vi t Nam, Nxb Nông Nghi p, Hà N i Nguy n Bá Hiên (2010), Giáo trình mi n d ch h c ng d ng, Nxb Nông Nghi p, Hà N i (2014), B nh cúm Nguy n Bá Hiên, Ph m S ng v t, Nxb Nông Nghi p, Hà N i Nguy n Bá Hiên, Hu nh Th M L Ng c Thúy (2014), Giáo trình B nh truy n nhi m Thú y, Nxb Nông nghi p, Hà N i Ph m S Tài (1997), Thu u tr v c xin s d ng thú y, Nxb Nông nghi p, Hà N i Nguy n H u Nam, Nguy n Tr ng Kim, Nguy n Xuân Hùng (2011), Giáo nh v c xin phòng b nh, Nxb Nơng nghi p, Hà N i Nguy Giáo n Bá Hiên, Tr n Th trình Vi sinh v t thú y, Nxb Nông nghi p, Hà N i 10 Nguy Phùng Qu ng (2006), th c hành vi sinh v t thú y, Nxb Nông nghi p, Hà N i 11 Nguy n Ng c Ti Inui (2011), , Nguy n Tùng, Ken a virus cúm gia c Vi t Nam v c xin phòng b nh cúm gia c thu t thú y, t p XVIII S 6, tr 76 c l c cao H5N1 t i T p chí Khoa h c k 46 II Ti ng Anh 12 Cox N.J., Fuller F., Kaverin N., Klenk H D., Lamb R A., Mahy W., McCauley J W., Nakamura K., Palese P., Webster R G (2000), Orthomyxoviridae Virus taxonomy, Seventh report of the international committee on taxonomy of virus, Academic Press: San Deigo 13 Frederick A., Murphy E., Paul J., Gibbs, Marian C., Horzinek (1999), Veterinary Virology, Third edition, Academic Press 14 Swayne D E., Halvorson D A., (2003), Chapter Influenza In Diseases of Poultry (Eds: Y M Saif, H J BRNAes, A M Fadl, J R Glisson, L R Mc Dougald, D E Swayne), 11th edition A Blackwell, Iowa 15 Wang W., (2010), Glycosylation at 158N of the hemagglutinin protein and receptor binding specificity synergistically affect the antigenicity and immunogenicity of a live attenuated H5N1 A/Vietnam/1203/2004 vaccine virus in ferrets, 84, 6570-7 16 Webster R., Cox N., Stohr K (2002), WHO manual on animal influenza diagnosis and surveillance III Các tài li u tham kh o t Internet 17 http:/www.fao.org/newsroom/en/news/2008/1000775/index.html 2008 18 http:/www.who.int/mediacentre/factsheets/avian_influenza/en/index.html 2008 47 M T S HÌNH NH C A nh 1: Ki nh t c a v c xin TÀI nh 2: Ly tâm v c xin ki m tra tính nh nh 3: Ki m tra tính ch 48 nh 5: V c xin cúm Navet Fluvac sau ly tâm v t ch t ng sau ly tâm 49 nh 6: Các m u hóa ch tách chi t RNA nh 7: Tách chi t RNA c a gà v t 50 nh8: Vortex m th c hi n tách chi t RNA nh 9: Máy ly tâm s d ng tách chi t m u RNA 51 nh 10 - 11: Ti n hành làm ph n ng Realtime - PCR 52 nh 12: nh 13: Hóa ch t m u vào máy ch y Realtime - PCR th c hi n ph n ng Realtime - PCR 53 nh 14 - 15: Máy ch y Realtime - PCR 54 nh 16: Gà kh e m nh sau tiêm v ki m tra an toàn v c xin ... nghiên c c 22 v 2. 2.1 Tình hình nghiên c c 23 2. 2 .2 Tình hình nghiên c c 24 PH N 3: NG, N U 26 ng ph m vi nghiên c u 26 m th i gian ti n hành 27 3.3 N i dung nghiên. .. 12 2.1.8 Tri u ch ng c a b nh cúm gia c m 12 2.1.9 B nh tích 13 2. 1.10 Ch nh 13 2. 1.11 Ki m soát b nh 14 2. 1. 12 V c xin phòng b nh cúm gia c m 16 2. 2... xin, ti n hành nghiên c u tài: Nghiên c ng v c xin cúm gia c m H5N1 NAVET - FLUVAC 1 .2 M u ki n phòng thí nghi m ghiên c u c ch ng c a v c xin Navet trùng, tính v t lý, an tồn hi u l c, làm Fluvac