Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu khả năng nhân giống cây Bình Vôi Stephania rotunda Lour bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân giống cây Bình Vôi Stephania rotunda Lour bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân giống cây Bình Vôi Stephania rotunda Lour bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân giống cây Bình Vôi Stephania rotunda Lour bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân giống cây Bình Vôi Stephania rotunda Lour bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân giống cây Bình Vôi Stephania rotunda Lour bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân giống cây Bình Vôi Stephania rotunda Lour bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân giống cây Bình Vôi Stephania rotunda Lour bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM BÙI KHÁNH LY Tên đề tài: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG CÂY BÌNH VƠI (Stephania rotunda Lour) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ Sinh học Khoa : CNSH-CNTP Khóa học : 2012-2016 Thái Nguyên, năm 2016 Thái Nguyên, 2015 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM BÙI KHÁNH LY Tên đề tài: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG CÂY BÌNH VƠI (Stephania rotunda Lour) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VTRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH-CNTP Lớp : 44-CNSH Khóa học : 2012-2016 Giảng viên hƣớng dẫn: PGS.TS Ngơ Xn Bình Bộ khoa học cơng nghệ 2.ThS Nguyễn Thị Tình Khoa CNSH-CNTP - Trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Thái Nguyên, năm 2016 i LỜI CẢM ƠN Đƣợc đồng ý Ban Giám hiệu nhà trƣờng, Ban Chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm, thời gian thực tập em tiến hành thực đề tài “Nghiên khả nhân giống Bình Vơi (Stephania rotunda Lour) phương pháp in vitro” Kết thúc thời gian thực tập Phòng Thí nghiệm Khoa Cơng nghệ Sinh họcCơng nghệ Thực phẩm, đến em hoàn thành đề tài tốt nghiệp Để đạt đƣợc kết nhƣ ngày hôm nay, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban Giám hiệu Trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban Chủ nhiệm Khoa Công nghệ Sinh học-Công nghệ Thực phẩm thầy cô giáo Khoa tạo điều kiện cho em suốt thời gian thực tập Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS.TS Ngơ Xn Bình, ThS Nguyễn Thị Tình ThS Ma Thị Hồn tận tình bảo, giúp đỡ hƣớng dẫn em thời gian thực đề tài Cuối cùng, em xin cám ơn gia đình tạo điều kiện vật chất tốt ln chỗ dựa tinh thần cho em trình thực tập; cảm ơn bạn bè giúp đỡ em thời gian vừa qua Do thời gian thực đề tài có hạn nên khóa luận khơng thể tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận đƣợc ý kiến đóng góp chân thành từ thầy bạn để đề tài đƣợc hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng năm 2016 Sinh viên Bùi Khánh Ly ii DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1: Phân loại khoa học Chi Bình vơi (Stephania spp) [2] Bảng 3.1: Thiết bị, dụng cụ hóa chất 25 Bảng 3.2: Nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ, thời gian chất khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng cho nuôi cấy in vitro sau ngày .27 Bảng 3.3: Nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ BA đến khả tái sinh chồi Bình Vơi sau 20 ngày theo dõi .28 Bảng 3.4: Nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ BA kết hợp với GA3 đến khả tái sinh chồi Bình Vơi sau 20 ngày nuôi cấy 28 Bảng 3.5: Nghiên cứu ảnh hƣởng tổ hợp BA đến khả nhân nhanh chồi Bình Vơi sau 30 ngày ni cấy 29 Bảng 3.6: Nghiên cứu ảnh hƣởng Kinetine đến khả nhân nhanh chồi Bình Vơi sau 30 ngày ni cấy 29 Bảng 3.7: Nghiên cứu ảnh hƣởng NAA than hoạt tính (0,5 g/l) đến khả rễ Bình Vơi sau 40 ngày ni cấy 30 Bảng 3.8: Nghiên cứu ảnh hƣởng IBA than hoạt tính (0,5 g/l) đến khả rễ Bình Vơi sau 40 ngày nuôi cấy 30 Bảng 4.1: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ thời gian sử dụng chất khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng cho nuôi cấy in vitro (sau ngày) 32 Bảng 4.2: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ BA đến khả tái sinh chồi Bình Vơi sau 20 ngày ni cấy 35 Bảng 4.3: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ BA kết hợp với Bảng 4.4: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi sau 30 ngày ni cấy 39 Bảng 4.5: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ Kinetine đến khả nhân nhanh chồi Bình vơi sau 30 ngày muôi cấy 41 iii DANH MỤC HÌNH Trang Hình 2.1: Cây Bình Vơi (Stephania rotunda Lour) .5 Hình 3.1: Sơ đồ nghiên cứu ảnh hƣởng số chất kích thích sinh trƣởng đến khả nhân giống invitro Bình Vơi 26 Biểu đồ 4.1: Biểu diễn ảnh hƣởng nồng độ, thời gian khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng cho nuôi cấy in vitro (sau ngày) 34 Biểu đồ 2: Biểu diễn ảnh hƣởng nồng độ BA đến khả tái sinh chồi Bình Vơi sau 20 ngày ni cấy 36 Hình 4.1: Chồi Bình Vơi MT bổ sung nồng độ BA kết hợp với nồng độ GA3 khác sau 20 ngày nuôi cấy 38 Hình 4.2: Chồi Bình Vôi MT bổ sung tổ hợp BA với nồng độ khác đến khả nhân nhanh sau 30 ngày nuôi cấy 40 Hình 4.3: Chồi Bình Vơi MT MS bổ sung nồng độ Kinetine khác đến khả nhân nhanh sau 30 ngày nuôi cấy 42 Hình 4.4: Rễ Bình Vơi MT MS bổ sung than hoạt tính (0,5 g/l) NAA nồng độ khác sau 40 ngày nuôi cấy 44 Hình 4.5: Rễ Bình Vơi MT MS bổ sung than hoạt tính (0,5 g/l) IBA nồng độ khác sau 40 ngày nuôi cấy 46 iv DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT BA : 6-Benzylaminopurine GA3 : Gibberellic Acid IBA : Indole butyric acid MS : Murashige & Skoog (1962) CS : Cộng CT : Công thức CV : Coeficient of Variation Đ/c : Đối chứng LSD : Least Singnificant Difference Test MS : Murashige & Skoog (1962) MT : Môi trƣờng NAA : α-Naphthalene acetic acid WHO : World Health Organization v MỤC LỤC Trang Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu yêu cầu đề tài .2 1.2.1 Mục tiêu đề tài 1.2.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Ý nghĩa đề tài 1.3.1 Ý nghĩa khoa học: 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn: Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung chi Bình vôi 2.1.1 Nguồn gốc 2.1.2 Phân loại Chi .4 2.1.3 Đặc điểm hình thái phân bố 2.2 Giá trị Bình Vơi .6 2.2.1 Giá trị kinh tế 2.2.2 Giá trị dƣợc liệu 2.3 Tình hình nghiên cứu nƣớc giới 2.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 2.3.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam .10 2.4 Khái niệm sở khoa học nuôi cấy mô-tế bào thực vật 11 2.4.1 Khái niệm 11 2.4.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô-tế bào thực vật 12 2.5 Các giai đoạn nhân giống vơ tính in vitro 12 2.5.1 Giai đoạn chuẩn bị 12 2.5.2 Tái sinh mẫu nuôi cấy .13 2.5.3 Giai đoạn nhân nhanh chồi 13 2.5.4 Tạo hoàn chỉnh 14 vi 2.5.5 Thích ứng in vitro ngồi điều kiện tự nhiên .14 2.6 Một số yếu tố ảnh hƣởng đến q trình ni cấy mơ tế bào thực vật 15 2.6.1 Vật liệu nuôi cấy .15 2.6.2 Điều kiện nuôi cấy 15 2.6.3 Môi trƣờng nuôi cấy mô tế bào thực vật 16 2.7 Tình hình nhân giống sử dụng củ Bình Vơi 22 2.7.1 Nhân giống phƣơng pháp hữu tính 23 2.7.2 Phƣơng pháp nhân giống vơ tính 23 2.7.3 Phƣơng pháp nhân giống in vitro .23 2.7.4 Phƣơng pháp chế biến sử dụng .24 Phần ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 3.1 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 25 3.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 25 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 25 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 25 3.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất .25 3.4 Nội dung nghiên cứu 26 3.5 Phƣơng pháp nghiên cứu 26 3.5.1 Chuẩn bị môi trƣờng nuôi cấy invitro .26 3.5.2 Phƣơng pháp nghiên cứu .26 3.5.3 Nội dung nghiên cứu .27 3.5.4 Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm 30 3.6 Xử lí số liệu 31 Phần KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ thời gian sử dụng chất khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng cho nuôi cấy in vitro 32 4.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng Cytokinine Gibbererllin đến khả tái sinh chồi Bình Vơi 34 vii 4.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ BA đến khả tái sinh chồi Bình Vơi từ đoạn thân mang chồi ngủ 34 4.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ BA kết hợp với GA đến khả tái sinh chồi Bình Vơi từ đoạn thân mang chồi ngủ 36 4.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng số cytokinine đến khả nhân nhanh chồi Bình Vơi 39 4.3.1 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi Bình Vơi .39 4.3.2 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ Kinetine đến khả nhân nhanh chồi Bình Vơi 41 4.4 Nghiên cứu ảnh hƣởng số Auxin đến khả rễ Bình Vơi 43 4.4.1 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ NAA đến khả rễ Bình Vơi .43 4.4.2 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ IBA đến khả rễ Bình Vơi .45 Phần KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 47 5.1 Kết luận 47 5.2 Kiến nghị 47 Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề PGS, TS Lê Xuân Cảnh (Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật) cho biết: năm 1992, trung tâm giám sát bảo tồn giới xếp Việt Nam 16 quốc gia có đa dạng sinh học cao giới Theo số liệu báo cáo quốc gia đa dạng sinh học (năm 2011) cho thấy, Việt Nam ghi nhận đƣợc khoảng 49 nghìn lồi sinh vật, bao gồm: khoảng 7.500 lồi/chủng vi sinh vật; 20 nghìn lồi thực vật cạn dƣới nƣớc; 10.500 loài động vật cạn; 11 nghìn sinh vật biển [44] Nguồn dƣợc liệu Việt Nam phong phú, đa dạng đƣợc sử dụng rộng rãi cộng đồng để chữa trị nhiều bệnh khác Theo kết điều tra nguồn tài nguyên dƣợc liệu Việt Nam giai đoạn 2001 – 2005 Viện dƣợc liệu (2006) cho biết Việt Nam có khoảng 3.948 lồi thực vật bậc cao, bậc thấp nấm lớn đƣợc dùng làm thuốc [45] Một số thuốc đƣợc sử dụng nhiều Bình Vơi Trong củ Bình Vơi có chứa alkaloid bao gồm L-tetrahydropalmatin (rotundin), stepharin, roemerin, cycleanin Ngồi có tinh bột, đƣờng khử oxygen, acid malic, men oxydase [22] Trong quan trọng Ltetrahydropalmatin (rotundin) roemerin cepharanthin Rotundin có tác dụng giảm đau, an thần, gây ngủ hiệu quả, điều hòa hơ hấp điều hòa tốt tim mạch [12] Hàm lƣợng hoạt chất có củ Bình Vơi tƣơi khoảng 0,12 – 0,3% Roemerin có tác dụng gây tê niêm mạc, giãn mạch, hạ huyết áp Cepharanthin đƣợc coi chất có tác dụng kích thích miễn dịch làm giảm nhẹ cách hữu hiệu tác dụng phụ thuốc chống ung thƣ Ngoài ra, Bun Sok-Siya cs (2009) chiết xuất cepharanthin có tác dụng ức chế dòng tế bào ung thƣ đại trực tràng ung thƣ gan [40] Mặt khác, ức chế phát triển trực khuẩn lao Ngoài cơng dụng điều trị bệnh, củ Bình Vơi dùng làm vật trang trí đẹp đƣợc nhiều ngƣời ƣa chuộng [5] ... Tên đề tài: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG CÂY BÌNH VƠI (Stephania rotunda Lour) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VTRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành: Cơng nghệ Sinh học Khoa... đến khả nhân nhanh chồi Bình Vơi .39 4.3.2 Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nồng độ Kinetine đến khả nhân nhanh chồi Bình Vơi 41 4.4 Nghiên cứu ảnh hƣởng số Auxin đến khả rễ Bình. .. 2.7 Tình hình nhân giống sử dụng củ Bình Vơi 22 2.7.1 Nhân giống phƣơng pháp hữu tính 23 2.7.2 Phƣơng pháp nhân giống vơ tính 23 2.7.3 Phƣơng pháp nhân giống in vitro