Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu nhân giống cây ba kích Tím bằng phương pháp In Vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây ba kích Tím bằng phương pháp In Vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây ba kích Tím bằng phương pháp In Vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây ba kích Tím bằng phương pháp In Vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây ba kích Tím bằng phương pháp In Vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây ba kích Tím bằng phương pháp In Vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây ba kích Tím bằng phương pháp In Vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây ba kích Tím bằng phương pháp In Vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống cây ba kích Tím bằng phương pháp In Vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - TRẦN VĂN PHÚ Tên đề tài: NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY BA KÍCH TÍM BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH-CNTP Khóa học : 2012 – 2016 Thái Nguyên - 2016 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - TRẦN VĂN PHÚ Tên đề tài: NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY BA KÍCH TÍM BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ Sinh học Lớp : 44-CNSH Khoa : CNSH-CNTP Khóa học : 2012 – 2016 Giảng viên hƣớng dẫn : ThS Nguyễn Thị Tình ThS Nguyễn Xuân Vũ Thái Nguyên - 2016 i LỜI CẢM ƠN Được đồng ý Ban Giám hiệu nhà trường, Ban Chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm, thời gian thực tập em tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu nhân giống ba kích Tím phương pháp In Vitro” Kết thúc thời gian thực tập Phòng Thí nghiệm trung tâm lâm nghiệp, đến em hoàn thành đề tài tốt nghiệp Để đạt kết ngày hôm nay, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban Giám hiệu Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban Chủ nhiệm Khoa Công nghệ Sinh học - Công nghệ Thực phẩm thầy cô giáo Khoa tạo điều kiện tốt cho em suốt thời gian thực tập Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến giáo Nguyễn Thị Tình kỹ sư trung tâm lâm nghiệp trường Đại Học Nông Lâm Thái Nguyên tận tình bảo, giúp đỡ hướng dẫn em thời gian thực đề tài Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình tạo điều kiện vật chất tốt ln chỗ dựa tinh thần cho em trình thực tập cảm ơn bạn bè giúp đỡ thời gian vừa qua xin chân thành cám ơn Trong thời gian thực tập vừa qua em có cố gắng nhiều thời gian có hạn lên em nhiều thiếu sót khóa luận em, em mong nhận ý kiến đóng góp chân thành từ thầy bạn để đề tài hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng năm 2016 Sinh viên Trần Văn Phú ii DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT BA : 6-Benzylaminopurine MS : Murashige & Skoog (1962) CS : Cộng CT : Công thức CV : Coeficient of Variation Đ/c : Đối chứng LSD : Least Singnificant Difference Test MS : Murashige & Skoog (1962) MT : Môi trường NAA : α-Naphthalene acetic acid WHO : World Health Organization PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Cây Ba kích tím ( Morinda officinalis How ) thuốc quý y học cổ truyền Củ ba kích sử dụng loại dược liệu có tác dụng bổ thận âm, bổ thận dương tăng cường gân cốt, tăng sức đề kháng sức dẻo dai trừ phong thấp Dịch chiết củ ba kích có tác dụng giảm huyết áp tác dụng nhanh với tuyến năng, bổ trí não, giúp ăn ngủ ngon Do nhu cầu sử dụng dược liệu tăng mạnh thời gian gần nên Ba Kích Tím bị khai thác ạt, dẫn đến nguồn nguyên liệu trở nên cạn kiệt Mặt khác, vùng phân bố ba kích bị tàn phá nghiêm trọng khiến lồi rơi vào tình trạng gần tuyệt chủng đưa vào sách đỏ Việt Nam cần phải bảo vệ (nghị định số 48/2002/NĐ-CP) Việc đáp ứng nhanh bền vững nguồn giống ba kích có chất lượng tốt yêu cầu cấp bách Nguồn cung cấp giống ba kích chủ yếu phương pháp giâm cành, hệ số nhân thấp (chỉ đạt 0,61/năm); chất lượng giống lại không cao Ngày nay, với phát triển khoa học kỹ thuật việc ứng dụng ni cấy mơ tế bào thực vật (in vitro) nhân giống trở nên phổ biến Nuôi cấy in vitro tạo giống trồng bệnh, chất lượng tốt, đồng cao hệ số nhân lớn thời gian ngắn Giải phần khó khăn nhân giống hữu tính cho đối tượng trồng này, góp phần bảo tồn phát triển giống cung cấp nguyên liệu cho thị trường tiêu thụ ngành y dược 1.2 Mục đích yên cầu đề tài 1.2.1 Mục đích đề tài - Đề tài nhằm nghiên cứu xây dựng cải tiến quy trình nhân giống ba kích tím phương pháp in vtiro có hệ số nhân giống cao dễ ứng dụng sản xuất 1.2.2 Yêu cầu đề tài - Xác định ảnh hưởng nồng độ, thời gian chất khử trùng HgCl2 0.1mg/l đến khả tạo vật liệu vô trùng cho nuôi cấy in vtiro - Xác định ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng auxin cytokinin đến khả tái sinh chồi Ba kích tím (Morinda officinalis How ) - Xác định ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng auxin cytokinin đến khả nhân nhanh chồi Ba kích tím (Morinda officinalis How ) - Xác định ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng auxin cytokinin đến khả rễ Ba kích tím (Morinda officinalis How ) 1.3 Ý nghĩa đề tài 1.3.1 Ý nghĩa khoa học - Kết nghiên cứu đề tài cung cấp dẫn liệu khoa học ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến sinh trưởng phát triển giống ba kích tím phương pháp in vitro - Là tài liệu tham khảo thêm cho việc nghiên cứu sản xuất sở 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn Góp phần nhân nhanh tạo số lượng lớn giống phục vụ mục tiêu bảo tồn loài dược liệu quý theo Nghị định số 48/2002/NĐ-CP, đảm bảo chất lượng cung cấp nguyên liệu cho việc phục hồi phái triển lại ba kích tím PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm sinh thái phân bố Cây Ba kích tím (Morinda officinalis How) thuộc họ cà phê Rubioceae Ba kích tím hình thái Ba kich tím Cây thường xanh sống lâu năm, leo vào khác tự tạo thành bụi lớn Cây ba kích có mọc đối, non màu xanh màu tím, già màu xanh, cuống dài từ - 8mm Lá kèm màu nâu dạng mo, ôm thân Phiến thường hình mác thn nhọn, hình ellip thn dài nhọn hình mác ngược hay hình trứng Hiếm thấy hình mác hẹp dài phiến dài 16cm, rộng 1,9 - 6,5 cm đầu thuôn nhọn hay nhọn sắc, gốc nhọn hình nêm, tròn hay gần bằng, có lõm dạng tim Rễ dạng trụ tròn phân nhánh nhiều cấp thành phận rễ, phân bố tỏa tròn xung quanh gốc, nhìn ngồi có vết thắt đoạn, thịt củ dày, nạc, màu tím trắng ngà Rễ Ba kích - Cành non dạng bốn cạnh, màu tím xanh, có lơng, già tròn khơng lông - Cụm hoa chủ yếu xim tán kép, cụm hoa tán đơn Ở cụm sim tán kép, hoa không cuống, cụm tán đơn hoa có cuống rõ ràng Hoa nhỏ ống đài dạng chén, có - nhỏ khơng Tràng màu trắng, ống tràng dài - 3mm, họng có lơng, đầu có - cánh tràng dạng tam giác nhỏ - Nhị - bao phấn nhọn đầu, hai ơ, đính lưng, nhị cực ngắn Vòi nhụy ngắn, đầu nhụy hai thùy Hoa Ba Kích - Cụm kép nhiều dính liền với đính cuống xim nhỏ tạo thành - Ở cụm đơn, có cuống rõ ràng Mỗi có hạt - Hạt có lơng màu hồng, khô màu trắng Mùa hoa tháng - 5, chín tháng 10 - 11, cá biệt chín từ tháng kéo dài tới đầu tháng 12-1 hay Cây ưa ẩm, ưa sáng có khả chịu bóng, nhỏ Ba Kích thường mọc tự nhiên kiểu rừng thường xanh trở nên thứ sinh, bao gồm rừng xen tre nứa rừng non phục hồi sau nương rẫy Độ cao 400m, cá biệt tới 1000m Đất nơi có Ba kích thường tương đối mầu mỡ, tơi xốp, trung tính chua Cây sinh trưởng phát triển tốt điều kiện nhiệt đới gió mùa nóng ẩm, hoa hàng năm Tái sinh tự nhiên chủ yếu hạt mọc cụm chồi từ phần lại sau chặt, phần rễ sót lại khai thác nảy mầm thành Yêu cầu nhiệt độ trung bình năm 22,5oC - 23,1oC Độ ẩm khơng khí trung bình năm từ 82 - 89% Ba kích mọc tự nhiên loại đất feralit đỏ vàng hay vàng - đỏ, tầng đất thịt tương đối dày, có kết cấu tượng hạt kết vón khơng có đá ong chặt Đất ẩm chua, pH từ 3,6 đến 4,1, hàm lượng mùn 3,78 - 5,91% Hàm lượng tổng số chất 100g đất là: nitơ 0,24 - 0,34mg, lân 0,7 - 1,5mg kali 7mg Ngồi ra, Ba Kích sống đất feralit đỏ sẫm Tầng đất mặt tương đối dày (tới 1m), thành phần giới nặng, cấu tạo hạt tơi xốp, pH chua đến trung tính 4,5 - 6, hàm lượng mùn mức trung bình 4% Tại Hồnh Bồ - Quảng Ninh Sơn Động - Bắc Giang thấy Ba kích mọc đất bồi tụ, pha cát chân núi Loại đất thường nghèo dinh dưỡng so với loại đất Chú ý: Ba Kích khơng thích hợp với đất phù sa loại đất khác đồng Ánh sáng: ánh sáng nhân tố quan trọng, có ảnh hưởng trực tiếp tới sinh trưởng phát triển Ba Kích Trong tự nhiên mọc xen lẫn với loài khác tán rừng, độ che tán 20 - 60% Tuy nhiên để sinh trưởng phát triển được, thường leo lên bụi hay gỗ nhỏ để tiếp cận với ánh sáng Cây chiếu sáng đầy đủ hoa nhiều nhiều hạt bị che bóng Ba Kích mọc hoang vùng rừng thứ sinh, trung du miền núi tỉnh phía Bắc, tán số kiểu rừng nhiệt đới ẩm rộng thường xanh, trở nên thứ sinh gồm bụi dây leo chằng chịt bờ nương rẫy Độ cao phân bố khoảng 100m so với mặt biển Càng lên cao thưa dần, đến độ cao khoảng 100m gặp Có nhiều tỉnh Quảng Ninh, Phú Thọ, Hoà Bình, Hà Giang, Lạng Sơn 2.2 Khái niệm sở khoa học lịch sử nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.1 Khái niệm Nuôi cấy mô tế bào thực vật khái niệm chung cho tất q trình ni cấy từ ngun liệu thực vật môi trường nhân tạo điều kiện vô trùng Nhân giống in vitro hay gọi vi nhân giống thường sử dụng cho việc ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô để nhân giống thực vật, sử dụng phận khác thực vật với kích thước nhỏ Trong thực tế, nhà vi nhân giống thường dùng thuật ngữ nuôi cấy mô nhân giống in vitro hay nuôi cấy in vitro thay cho để phương thức nhân giống thực vật điều kiện vô trùng với mục đích khác 2.2.2 Lịch sử phát triển nuôi cấy mô tế bào thực vật Haberland (1902)là người đề xuất phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật để chứng minh tính tồn tế bào thực vật Theo ông tế bào sống mang tồn thơng tin di truyền lồi Vì ghặp điều kiện thích hợp tế bào phát triển thành cá thể hồn chỉnh Ơng thí nghiệm với tế bào khỉ khổng thành công Điều làm cho nhà hoa học thời hy vọng việc sây dựng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thời gian dài Tuy nhiên sau Garrison(1904-1907) ni tế bào thần kinh ếch huyết tương chưng minh khả nuôi cấy mô tế bào động vật nhân tạo Trên sở thành công nhà khoa học nuôi cấy mô tế bào động vật nhà khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật môi trường dinh dưỡng tự nhiên khong thành công Năm 1922 Robins Kotte thành công nuôi cấy đầu rễ vòng 12 ngày Từ năm 30 kỉ 20 phương phái nuôi cấy tế bào mang nét nuôi cấy mô tế bào đại với kỹ thuật ko khác với nhiều Trong thời gian White nhà bác học người Mỹ Ghautheret (Pháp) có nhiều đóng ghóp việc nghiên cứu môi trường nuôi cấy, nhiều môi trường đến sử dụng Từ năm 1931 phương pháp ni cấy mơ tế bào thực vật coi thức bắt đầu cơng trình nghiên cứu White với việc nuôi cấy rễ cà chua ông người mô phân sinh trưởng thời gian dài nêu cáy chuyển môi trường dinh dưỡng Trong thời gian Ghautheret thành công việc nuôi cấy mô tượng tầng tìm mơi trường dinh dưỡng thích hợp Sau Miller Skoog ni cấy nõi thước xác định vài trò Kinetin kích thích phát triển mơ Những thí nghiêm mơi trường dinh dưỡng mơi trường dinh dưỡng tính chất vật lý tính chất hóa học điều quan trọng định đến thành công nuôi cấy mô, quan tế bào Những thành phần băt buộc môi trường bao gồm chất khoáng từ muối khác nguyên tố đa lượng vi lượng, thành phần hydrocacbon đường ... trưởng auxin cytokinin đến khả nhân nhanh chồi Ba kích tím (Morinda officinalis How ) - Xác định ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng auxin cytokinin đến khả rễ Ba kích tím (Morinda officinalis... triển lại ba kích tím PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm sinh thái phân bố Cây Ba kích tím (Morinda officinalis How) thuộc họ cà phê Rubioceae Ba kích tím hình thái Ba kich tím Cây thường... TRẦN VĂN PHÚ Tên đề tài: NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY BA KÍCH TÍM BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Lớp : 44-CNSH Khoa