T Ạ T C H Í K H O A HỌC' N o - 1993 MỘT SỐ DẶC DIỂM CẤU TRl' C PHÂN T Ử CỦA LECTIN HẠT CHAY (Artocarpus tonkinensis À Chev) DỖ Ngọc Liên Dại hoc Tổng kơp Hà N ó I Michèle Bnllard, Johan Hoebeke Đại học T outs (Pháp) Lecíin ch ửa t rong h t số loài thuộc giống Artocarpus họ dâu t ằ m (Moraceae) d ng glycoprotein nghiền cứu m ạnh mẽ giới p hư ng tiện r ẩt qúi nghiền cứu hóa học miễn dịch, miên dịch tế bào đặc biệt dùng để chẩn đoán lâm sàng bệnh vi rút ký sinh trùng (A ucouturier cộng sự, 1989 [6])- Mói Pineau cộng Ị11 ] t hấ y lectin vài loài thuộc giống A r tocarpus có khả kích thích chọn lọc lymphoxit T-CD4, qua t h nghiệm làm chấ t đánh giá hoạt động ly mph o hào (V bệnh nhân n^ắc bệnh SIDA, bệnh nguy hiểm Th e o Jarrett [9j Darrau [7] th ế gicri tồn 50 loài dircri loài khác thuộc giống Artocarpus, òr Việt Nam, theo điều t nhiều nhà phân loại ngồi nước có t 10 đến 12 loài thuộc giống A rtocarpus [3Ị Các tài liệu nghiên cứu lectin số lồi mít (Artocarpus integriíolia, tên đong nghĩa A heterophillus), bánh mì (A altilis) Sake (A incisa) đả đira nhiều đặc điểm giống khác đặc tính cấu tạo phân t ứ miên dịch chúng Tuy nhiên, số loài thuộc giống chưa nghiên cứu nhiều điều quan trọng cần hiểu b iết t h ấ u đáo đặc tính phân t ứ v miễn dịch loại lectin thuộc loài khác n h a u để cổ thể s dụng xác cố hiệu quÀ nghiên cứu y học, miễn dịch lâm sàng Trước đây, đả có số kết th òn g báo lectin hạt chay [2] Bài tiếp tục trì nh bày số kết nhận đ ược đặc tính phân t lectin hạt chay Cơng trình đ ả v t hưc (V khoa Y, tnròĩig đại học Tours, nước Cộng hòa í ^ p N G U Y Ê N LIỆU VÀ P H Ư Ơ N G P H Á P Hạ t chay đượ c th u hái A Fỉhú Thọ, xấy khơ 50"C sau nghiền nhổ t h n h hột mịn Việc chiết x u ấ t lectin kết t ủ a dịch chiết 60% sunphat amơn bâo hòa đ ả đ ợ c m ô tả trước dây Ị1, 2| Các chế p h ẩm lectin thô đ c dùng để tinh chế cột Sepharose 4B - muxin theo kỷ t hu ật Freier, Gleishmann Riidiger (1985) [8] đả đirợc cải tiến hồn thiện phòn g t h í nghiệm Protein, Khoa Y, đại học Tour3 - Q u trì nh sắc ký lực theo dõi máy p h t nồng độ protein, có ph ậ n vê t động đo thị (Dectector Monitor - ƯV LKB T h ụ y Điền) Hoạt động lectin đirợc đ n h giá n h dà mô t ả trư c dầy Ị1, 2| - Kiếm t độ tinh khiết cứa chế phẩm lectin điện di geỉ polyacrilamit 15%, có mặt 55 SDS, vói m ẫ u lectin có sử lý khơng siV lý beta meca pto êtanol, theo kỷ t h u ậ t Laennnli 1,2) - Tách tiểu đem vị củ a lectin chay bẵng kỷ t h u ậ t sắc ký thể dịch cao áp H P L C hệ thống máy Applied Biosystems - 1000S Diode Array Dectecton” Mỹ - P h â n tích trình t ự axit aniin tận N phân đoạn tácli đư ợ c t H P L C máy phân tích t ự động “Applied Biosystems 477A proteins sequencer” Mỹ Các dần x u ấ t phenyltiohycỉantoin ciia axit anũn đươc xác định vẽ đồ thị t ự đông máy “Model 120A - Analyser” - Xác định số lưẹrng phân t tirozin triptophan theo phưcmg pháp quang phổ d o Tinoco I., Sauer K Wang J c (1978) đả mô tả ị 13] - Sổ lượng phân t xistein phân tii* lectin đirạc xác định theo kỷ t h u ậ t dã Hirs v Timasheff mô tả f 12] K Ế T QUA VÀ T H Ả O LUẬN T in h chế lectin h t chay § ầ £S\ f § 0,3 mo I m 0,2 C: t' ùŨ Ố ^ 4GC i 2Ữ0 lĩ^ầM Hinh Đồ thị slc ký lực chế phẩm lectin thơ (Kết tủa 60% sunphat A mơn bão hòa) cột Sepharose-4B-muxin ( , x cm) đircnig đồ thị (-) chl rỏ nồng độ protein đo 280 nm hoạt động lectin (- - - o -) xuất phdn hấp thụ bring Metyl a - D - galactozit 0,1 M Bàng phưcmg ph áp sắc ký iưc cột Sepharose- 4B - muxin qua 10 lần lặp lại thí nghiệm t 10 gam bột hạt chay có thề thu nhận tính trung binh đirợc 330 miligam protein lectin có độ 56 11IIh khiết cao Như vậy, h m lượng lectin chay cao, trung bình 3,3% so với trọng lưựng bơt hạt khơ có ẩm 8% Hình ành dồ thi (hình 1) cho thấy rõ, sử dụng Methyl a - D galactozit 0,1 M để phản hấ p t h ụ lectin tír cơị Sepharose-4B-muxin có đỉnh protein cổ hoạ t động lectin cao Điều khơng có ý nói có kieu phân t lectin b&i nghiền cửu trirứí (lây [2Ị đà cho t hấ y n h ấ t có dạng izolectin chay Đe kiểm tra n u n độ tinh khiết chế phẩm lectin chay, đà s dụ ng phircrng pháp điện (li geỉ po lyacrylamit 15%, có m ặ t SDS Kết quẢ cho t h chế p hẩ m lectin đả tinh chế cho hai bang r ấ t đậ m Ằ vị trí khoảng 14 17 kD băng m ỈJ vị trí khoảng 18kD Các kết qu ả nghiên cứu phù hcrp với thơn g báo trirớc [2] khác so vói kết q u ả ciia Ahnied Chat ter jee (1986) họ nghiên cứu lectin hạt m An độ [5j Chún g cho lectin chay tồn hai tiểu đơn vị có phân t ứ lượng khoảng 14 17 kD, giống nỉnr nh ừng đieu m Moreira Oliveira đ ă phát ò lectin hạt mít hạ t Sa kê (A incisa) Brezin ' 10] Dể giii thích tirợng xuất băng protein có khối lượng ph â n t ứ lớn điện di đô thị không sử lý bêta m ecapto êtanol lectin t rư c cho diện di, cho chất cấu trúc kị nước lectin chay đả làm cho chuỗi poly pep tit rủ a chúng dễ kết tụ với môi t r n g kiềm Hiện tư ợ n g kết tụ (aggregation) th'n'mg xay đ ả chứng minh ỉf protein m àng kì nước [4Ị *ij/j h ú ữ 7/X rvị r ũ, h 1 i * X1 > /ỉ PK 24.2 0.1*■ ị X y c ,i:\ Ịr Á tỵ A í VX' Ị C.C51 ụ I// íA ỉ £>4 Evnĩpgm 36 30 ơetup ÕtQỈus 42 Pstproc M o n ito r 48 Thơ! g io n phut Hình Đồ thỊ sắc ký trình tách phân đoạn lectin chay máy ắc ký dịch cao áp (HPLC) Các phân đoạn đirọrc tách nồng độ axetônitril đirạc máy t ự động ghi rõ đồ thị T c h riêng tiểu dơn vị lectin phân tích trìn h t ự axit arnin Để hiểu rỏ sâu sắc đặc tính phân t ỉectin chay, sử dụng kỹ h t u ậ t sắc ký thể dịch cao áp ( H P L C ) tách riêng tiểu đ