KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM GỪNG, TỎI, NGHỆ LÊN KHẢ NĂNG KHÁNG E. COLI VÀ MỘT SỐ CHỈ TIÊU TĂNG TRƯỞNG KHI BỔ SUNG VÀO KHẨU PHẦN THỨC ĂN HEO CON TỪ CAI SỮA ĐẾN 90 NGÀY TUỔI

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM GỪNG, TỎI, NGHỆ LÊN KHẢ NĂNG KHÁNG E. COLI VÀ MỘT SỐ CHỈ TIÊU TĂNG TRƯỞNG KHI BỔ SUNG VÀO KHẨU PHẦN THỨC ĂN HEO CON TỪ CAI SỮA ĐẾN 90 NGÀY TUỔI Họ và tên sinh viên : Phạm Thị Nguyên Ngành : Thú Y Lớp : Tại chức 19 Niên khóa : 2002 2007 Tháng 11 năm 2007 i KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM GỪNG, TỎI, NGHỆ LÊN KHẢ NĂNG KHÁNG E. COLI VÀ MỘT SỐ CHỈ TIÊU TĂNG TRƯỞNG KHI BỔ SUNG VÀO KHẨU PHẦN THỨC ĂN HEO CON TỪ CAI SỮA ĐẾN 90 NGÀY TUỔI Tác giả PHẠM THỊ NGUYÊN Khóa luận được đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp bằng Bác Sỹ ngành Thú y Giáo viên hướng dẫn: ThS. NGUYỄN THỊ KIM LOAN Th.S. NGUYỄN THỊ THU NĂM Tháng 11 năm 2007 ii LỜI CẢM TẠ Kính dâng lòng biết ơn sâu sắc cuả con đến cha mẹ, người đã hết lòng nuôi dạy cho con có được như ngày hôm nay. Xin chân thành cảm ơn đến: Ban giám hiệu trường Đại Học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh Ban chủ nhiệm khoa Chăn Nuôi Thú Y, bộ môn Chăn Nuôi chuyên khoa cùng toàn thể quý thầy cô đã tận tình truyền đạt kiến thức và kinh nghiệm quý báu cho tôi trong suốt thời gian học tập và thực tập tốt nghiệp. Xin thành kính ghi ơn: Thạc Sĩ Nguyễn Thị Kim Loan, Thạc Sĩ Nguyễn Thị Thu Năm đã tận tình hướng dẫn tôi thực hiện, hoàn thành đề tài và bảo vệ khóa luận tốt nghiệp. Ban giám đốc bệnh viện thú y và bộ môn vi sinh trường ĐHNL TP. Hồ Chí Minh. BSTY Trần Thị Thanh Trúc đã tận tình chỉ bảo, giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài tại phòng thí nghiệm. Bác Nguyễn Trung Thành chủ trại heo Thành An và gia đình đã giúp đỡ tôi trong thời gian thực tập tốt nghiệp tại trại. Chân thành cảm ơn: Tất cả các bạn lớp Thú Y19 đã động viên, chia sẻ những khó khăn trong suốt thời gian học tập và thực hiện đề tài. Phạm Thị Nguyên iii TÓM TẮT KHÓA LUẬN Khóa luận “Khảo sát ảnh hưởng của chế phẩm gừng, tỏi, nghệ lên khả năng kháng E. coli và một số chỉ tiêu tăng trưởng khi bổ sung vào khẩu phần thức ăn heo con từ cai sữa đến 90 ngày tuổi” đựơc tiến hành từ 17052007 1192007 tại trại heo tư nhân Thành An và phòng vi sinh Bệnh viện Thú Y trường Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh. Qua quá trình thực hiện thí nghiệm trên 72 con heo con từ cai sữa đến 90 ngày tuổi, thí nghiệm gồm 8 lô, 7 lô bổ sung chế phẩm và một lô đối chứng. Kết quả thu được từ các chỉ tiêu theo dõi, chúng tôi rút ra kết luận sau Tổng số vi khuẩn E. coli g phân giảm qua 3 thời điểm lấy mẫu cao nhất ở lô 8, thấp nhất ở lô 2. Sự nhạy cảm vi khuẩn E. coli đối với amoxcillin tăng lên theo 3 thời điểm lấy mẫu. Đường kính vòng kháng khuẩn cao nhất ở lô 2, thấp nhất ở lô 8. Sự nhạy cảm của E. coli đối với colistin cũng tăng dần theo thời 3 điểm lấy mẫu. Đường kính vòng kháng khuẩn cao nhất ở lô 7, thấp nhất ở lô 8. Sự nhạy cảm của E. coli đối với gentamycin tăng theo 3 thời điểm lấy mẫu. Đường kính vòng kháng khuẩn cao nhất ở lô 2, thấp nhất ở lô 8. Đối với norfloxacin: sự nhạy cảm E. coli đối với kháng sinh này tăng dần theo các thời điểm lấy mẫu. Đường kính vòng kháng khuẩn cao nhất ở lô 1, thấp nhất ở lô 8. Đối với dịch chiết tỏi: sự nhạy cảm của E. coli đối với dịch chiết tỏi tăng theo 3 thời điểm lấy mẫu. Đường kính vòng kháng khuẩn cao nhất ở lô 8 lô thấp nhất ở lô 4. Dịch chiết gừng và nghệ, không có khả năng ức chế vi khuẩn E. coli. Dịch chiết hỗn hợp (gừng, tỏi, nghệ): sự nhạy cảm của E. coli đối với hỗn hợp cũng tăng dần theo các thời điểm lấy mẫu. Đường kính vòng kháng khuẩn cao nhất ở lô 8, thấp nhất ở lô 5. Tăng trọng tuyệt đối cao nhất ở lô 6 (608,3gconngày), thấp nhất ở lô 3 (447,3 gconngày). Lượng thức ăn tiêu thụ cao ở lô 2, lô 8 (1,24 kgconngày), thấp nhất ở lô 4 (0,98 kgconngày). iv Hệ số chuyển hóa thức ăn tốt nhất ở lô 4 (1,65 kg thức ăn kg tăng trọng ) và kém nhất ở lô 3 (2,62 kg thức ăn kg tăng trọng). Tỷ lệ ngày con tiêu chảy cao nhất là ở lô 8 (8,05%) thấp nhất ở lô 4 (2,53%) Tỷ lệ ngày con bệnh cao nhất ở lô 3 (21%) và thấp nhất ở lô 7 (1,18%). Chi phí sản xuất: nếu xem lô đối chứng có chi phí thức ăn, chế phẩm và thuốc thú y điều trị bệnh cho 1kg tăng trọng là 100% thì lô 7 có chi phí thấp nhất 68,83% và cao nhất ở lô 3 là 117,65%. v MỤC LỤC Trang Trang tựa........................................................................................................................... i Lời cảm ơn ....................................................................................................................... ii Tóm tắt ........................................................................................................................... iii Mục lục ............................................................................................................................ v Danh sách chữ viết tắt ................................................................................................. viii Danh sách các bảng ........................................................................................................ ix Danh sách các hình .......................................................................................................... x Danh sách các biểu đồ .................................................................................................... xi Chương 1. MỞ ĐẦU ...................................................................................................... 1 1.1 Đặt vấn đề .................................................................................................................. 1 1.2 Mục đích .................................................................................................................... 2 1.3 Yêu cầu ...................................................................................................................... 2 Chương 2. TỔNG QUAN .............................................................................................. 3 2.1 Giới thiệu về chế phẩm gừng, tỏi, nghệ .................................................................... 3 2.1.1 Gừng và các tác dụng ............................................................................................. 3 2.1.1.1 Thành phần hóa học của gừng ............................................................................. 3 2.1.1.2 Công Dụng........................................................................................................... 3 2.1.2 Tỏi và các tác dụng của tỏi ..................................................................................... 4 2.1.2.1 Thành phần hóa học của tỏi ................................................................................. 4 2.1.2.2 Công dụng của tỏi ................................................................................................ 4 2.1.3 Nghệ và các tác dụng .............................................................................................. 5 2.2 Cơ sở sinh lí tiêu hóa heo con và sự phát triển vi sinh vật đường ruột heo con........ 6 2.2.1 Cơ sở sinh lí tiêu hóa heo con ................................................................................ 6 2.2.2 Sự phát triển hệ vi sinh vật đường ruột ở heo con .................................................. 7 2.3 Đặc điểm sơ lược về vi khuẩn E. coli ........................................................................ 8 2.3.1 Hệ thống phân loại.................................................................................................. 8 2.3.2 Đặc điểm hình thái và sự nhuộm màu .................................................................... 8 2.3.3 Đặc tính nuôi cấy và yêu cầu tăng trưởng .............................................................. 8 2.3.4 Đặc tính sinh hóa .................................................................................................... 9 vi 2.3.5 Sức đề kháng .......................................................................................................... 9 2.3.6 Cấu trúc kháng nguyên ........................................................................................... 9 2.3.7 Độc tố ................................................................................................................... 10 2.4 Truyền nhiễm học .................................................................................................... 12 2.4.1 Cơ chế sinh bệnh tiêu chảy ................................................................................... 12 2.4.2 Loài vật mắc bệnh ................................................................................................ 12 2.4.3 Đường xâm nhập .................................................................................................. 12 2.4.4 Chất chứa căn bệnh ............................................................................................... 12 2.4.5 Sự lây lan .............................................................................................................. 13 2.4.6 Điều kiện sinh bệnh .............................................................................................. 13 2.5 Triệu chứng .............................................................................................................. 14 2.6 Bệnh tích .................................................................................................................. 14 2.7 Chẩn đoán ................................................................................................................ 14 2.8 Tiên lượng ............................................................................................................... 15 2.9 Phòng bệnh .............................................................................................................. 15 2.10 Điều trị ................................................................................................................... 15 2.11 Giới thiệu về các kháng sinh được sử dụng làm kháng sinh đồ ............................ 15 2.12 Giới thiệu sơ lược về trại chăn nuôi heo ............................................................... 16 2.12.1 Vị trí .................................................................................................................... 16 2.12.2 Cơ cấu đàn .......................................................................................................... 16 2.12.3 Chuồng trại ......................................................................................................... 16 2.12.4 Thức ăn ............................................................................................................... 17 2.12.5 Vệ sinh thú y ....................................................................................................... 17 Chương 3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH .................................. 19 3.1 Thời gian và địa điểm .............................................................................................. 19 3.1.1 Thời gian ............................................................................................................... 19 3.1.2 Địa điểm ............................................................................................................... 19 3.2 Đối tượng khảo sát ................................................................................................... 19 3.3 Nội dung .................................................................................................................. 20 3.4 Phương pháp tiến hành ............................................................................................ 20 3.4.1 Phương pháp lấy mẫu ........................................................................................... 20 vii 3.4.2 Dụng cụ, hóa chất, môi trường ............................................................................. 20 3.4.3 Quy trình đếm vi khuẩn E. coli trong phân .......................................................... 21 3.4.4 Pha loãng mẫu qua các môi trường ...................................................................... 22 3.4.5 Thử kháng sinh đồ theo phương pháp Kirby Bauer ............................................. 22 3.5 Các chỉ tiêu khảo sát ................................................................................................ 23 3.6 Các công thức tính ................................................................................................... 24 3.7 Xử lý số liệu ............................................................................................................ 24 Chương 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .................................................................. 25 4.1 Số lượng vi khuẩn E. colig phân ở 3 thời điểm 30, 60, 90 ngày tuổi..................... 25 4.2 Sự nhạy cảm của vi khuẩn E. coli đối một số kháng sinh (amoxcillin, colistin, gentamycin, norfloxacin) và dịch chiết gừng, tỏi, nghệ, hỗn hợp (gừng + tỏi + nghệ) 26 4.2.1 Đường kính vòng kháng khuẩn của amoxcillin đối với vi khuẩn E. coli ............. 27 4.2.2 Đường kính vòng kháng khuẩn của colistin đối với vi khuẩn E. coli .................. 28 4.2.3 Đường kính vòng kháng khuẩn của gentamycin đối với vi khuẩn E. coli ........... 29 4.2.4 Đường kính vòng kháng khuẩn của norfloxacin đối với vi khuẩn E. coli ........... 30 4.2.5 Đường kính vòng kháng khuẩn của dịch chiết tỏi, gừng, nghệ đối với vi khuẩn E. coli .................................................................................................................... 31 4.3 Các chỉ tiêu tăng trưởng .......................................................................................... 35 4.3.1 Tăng trọng bình quân và tăng trọng tuyệt đối ...................................................... 35 4.3.2 Lượng thức ăn tiêu thụ và hệ số chuyển hóa thức ăn ........................................... 37 4.4 Các chỉ tiêu bệnh lý ................................................................................................. 39 4.4.1 Tỷ lệ ngày con tiêu chảy ....................................................................................... 39 4.4.2 Tỷ lệ ngày con bệnh khác ..................................................................................... 40 4.5 Chi phí sản xuất ....................................................................................................... 41 Chương 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ ...................................................................... 43 5.1 Kết luận .................................................................................................................... 43 4.2 Đề nghị .................................................................................................................... 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO........................................................................................... 45 viii DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT S Smooth R Rough MPN Most Probale Number EMB Eosin Methylen Blue TSI Triple Sugar Iron MH Muller Hinton MR Methylred VP Voges Proskauer LT Labile Heat toxin ST Stable Heat toxin KIA Kligler Iron Agar NA Nutrient Agar FMD Foot and Mouth Disease APP Actinobacillus Pleuropneumoniae LTB Lauryl Tryptose Broth EC Enrichment Coli ix DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Thành phần hóa học của tỏi ............................................................................. 4 Bảng 2.2: So sánh một số tính chất của ngoại độc tố và nội độc tố .............................. 11 Bảng 2.3: Phân nhóm E. coli theo đặc tính sinh bệnh ................................................... 11 Bảng 2.4 Thành phần dinh dưỡng thức ăn Delice B từ cai sữa đến 15 kg .................... 17 Bảng 2.5 Thành phần dinh dưỡng thức ăn Porcy 15 ..................................................... 17 Bảng 2.6 Qui trình tiêm phòng ...................................................................................... 18 Bảng 3.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm................................................................................... 19 Bảng 3.2 Trọng lượng của các nguyên liệu lấy dịch chiết ............................................ 23 Bảng 4.1 Số lượng E. colig phân heo con sau cai sữa.................................................. 25 Bảng 4.2 Số lượng vi khuẩn thực E. colig phân ở heo con cai sữa .............................. 25 Bảng 4.3: Đường kính vòng kháng khuẩn của amoxcillin đối với vi khuẩn E. coli ..... 27 Bảng 4.4: Đường kính vòng kháng khuẩn của colistin đối với vi khuẩn E. coli .......... 28 Bảng 4.5: Đường kính vòng kháng khuẩn của gentamycin đối với E. coli .................. 29 Bảng 4.6: Đường kính vòng kháng khuẩn của norfloxacin đối với vi khuẩn E. coli ...... 30 Bảng 4.7: Đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết của tỏi đối với E. coli ................ 31 Bảng 4.8: Đường kính vòng kháng khuẩn của hỗn hợp đối với vi khuẩn E. coli ......... 32 Bảng 4.9: Tăng trọng bình quân và tăng trọng tuyệt đối ............................................... 35 Bảng 4.10: Lượng thức ăn tiêu thụ và hệ số chuyển hóa thức ăn ................................. 37 Bảng 4.11: Tỷ lệ ngày con tiêu chảy ............................................................................. 39 Bảng 4.12: Tỷ lệ ngày con bệnh khác ........................................................................... 40 Bảng 4.15: Chi phí sản xuất .......................................................................................... 41 x DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 4.1. Đường kính vòng kháng khuẩn của gừng, tỏi, nghệ đối với vi khuẩn E coli .... 33 Hình 4.2. Đường kính vòng kháng khuẩn của kháng sinh amoxcillin, colistin, gentamycin, norfloxacin đối với vi khuẩn E. coli ......................................... 33 Hình 4.3. Phản ứng IMViC của vi khuẩn E. coli .......................................................... 34 Hình 4.4. Vi khuẩn E. coli trên môi trường EMB ......................................................... 34 xi DANH SÁCH CÁC BIỀU ĐỒ Trang Biểu đồ 4.1: Tăng trọng bình quân ................................................................................ 35 Biểu đồ 4.2: Tăng trọng tuyệt đối.................................................................................. 36 Biểu đồ 4.3: Lượng thức ăn tiêu thụ .............................................................................. 37 Biểu đồ 4.4: Hệ số chuyển hóa thức ăn ......................................................................... 38 Biểu đồ 4.5: Tỷ lệ ngày con tiêu chảy ........................................................................... 39 Biểu đồ 4.6: Tỷ lệ ngày con bệnh khác ......................................................................... 40 1 Chương 1 MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Trong những năm qua ngành chăn nuôi góp phần không nhỏ vào sự phát triển của nền kinh tế nước ta. Trong đó, chăn nuôi heo là một trong những ngành mũi nhọn, nó không những mang lại việc làm và thu nhập cho người chăn nuôi mà còn đáp ứng phần lớn nhu cầu về thịt cho người tiêu dùng. Tuy nhiên, người chăn nuôi còn gặp nhiều khó khăn trong việc khống chế bệnh tật trên đàn heo và đặc biệt trên heo con cai sữa. Trong đó, tiêu chảy do E. coli là một trong những bệnh xảy ra gây thiệt hại kinh tế nghiêm trọng cho người chăn nuôi. Tiêu chảy do E. coli làm heo mất sức, chậm lớn, ảnh hưởng đến chất lượng và số lượng đàn heo. Đã có nhiều biện pháp kiểm soát tiêu chảy do E. coli trên heo con cai sữa như tiêm vaccine cho heo nái mang thai, trộn kháng sinh vào trong thức ăn cho heo con, dùng kháng sinh trị heo bệnh nhưng hiệu quả chưa cao. Mặt khác việc sử dụng kháng sinh trong thời gian dài gây ra hiện tượng kháng thuốc, rối loạn hệ vi sinh vật đường ruột làm ảnh hưởng tăng trọng của heo và sức khỏe người tiêu thụ. Dựa trên nền tảng nguồn tài nguyên thực vật phong phú, các nhà khoa học nghiên cứu ứng dụng các sản phẩm thảo dược bổ sung vào thức ăn chăn nuôi gia súc, gia cầm đã mang lại một số kết quả khả quan. Qua thực tế đó, chúng tôi tìm hiểu được công dụng của gừng, tỏi, nghệ có các chất như vitamin, khoáng, các chất có tác dụng giống kháng sinh. Làm tăng sức đề kháng của heo, tăng khả năng chuyển hóa các chất dinh dưỡng. Đặc biệt là ngăn ngừa và kháng lại nhiều vi khuẩn gây tiêu chảy chủ yếu là do vi khuẩn E. coli gây ra. Việc ứng dụng những sản phẩm này không những mang lại những sản phẩm sạch, không tồn dư kháng sinh, mà còn đảm bảo về mặt dinh dưỡng, ổn định về mặt chất lượng cho người tiêu dùng. Tuy nhiên, thử nghiệm về việc sử dụng gừng, tỏi nghệ trên heo chưa được thực hiện nhiều. 2 Với hy vọng sau khi bổ sung gừng, tỏi, nghệ vào thức ăn giúp heo hạn chế được tiêu chảy, tăng trưởng nhanh hơn và có thể ức chế vi khuẩn E. coli trong ngăn ngừa tiêu chảy. Được sự đồng ý của khoa Chăn Nuôi Thú Y trường Đại Học Nông Lâm TP. HCM, được sự giúp đỡ của trại heo Thành An, dưới sự hướng dẫn của thạc sĩ Nguyễn Thị Kim Loan, thạc sĩ Nguyễn Thị Thu Năm chúng tôi tiến hành đề tài “Khảo sát ảnh hưởng của chế phẩm gừng, tỏi, nghệ lên khả năng kháng E. coli và một số chỉ tiêu tăng trưởng khi bổ sung vào khẩu phần thức ăn heo con từ cai sữa đến 90 ngày tuổi”. 1.2 Mục đích Xác định khả năng kháng khuẩn của các chế phẩm gừng, tỏi, nghệ khi bổ sung vào trong thức ăn ở các mức độ khác nhau đối với vi khuẩn E. coli. Khảo sát tác dụng của chế phẩm gừng, tỏi, nghệ và hỗn hợp (gừng+ tỏi + nghệ) lên khả năng tăng trưởng và việc hạn chế tiêu chảy trên heo con cai sữa. 1.3 Yêu cầu + Đếm số lượng vi khuẩn E. coli gam phân heo con ở 3 thời điểm 30, 60, 90 ngày tuổi. + Đánh giá mức độ nhạy cảm của vi khuẩn E. coli đối với một số kháng sinh (amoxcillin, colistin, gentamycin, norfloxacin) và dịch chiết gừng, tỏi, nghệ, hỗn hợp trên heo con cai sữa trước và sau khi bổ sung chế phẩm. + Theo dõi một số chỉ tiêu tăng trọng đạt được và một số chỉ tiêu bệnh lý khi bổ sung chế phẩm gừng, tỏi, nghệ vào thức ăn heo con cai sữa. 3 Chương 2 TỔNG QUAN 2.1 Giới thiệu về chế phẩm gừng, tỏi, nghệ 2.1.1 Gừng và các tác dụng Gừng có tên khác là can khương, sinh khương Tên khoa học: Zingiber officinale Rose Thuộc họ gừng: Zingiberaceae Gừng là cây sống lâu năm có thể cao 50 100 cm tùy theo đất. Gừng thích hợp với điều kiện nhiệt đới và được trồng ở khắp nước ta. Hiện nay, gừng có mặt ở nhiều nơi trên thế giới, trong đó Trung Quốc là nước xuất khẩu lớn nhất. 2.1.1.1 Thành phần hóa học của gừng Tinh dầu gừng 23%, lipid 3,7%, nhựa dầu 5%, và các chất cay gingerol, zingeron, shagaola. Tinh dầu gừng chứa camplen, phellandren, zingeberen, citrat, borneol và geraneol (Nguyễn Thiện Luân và ctv, 1997). Gingerol là thành phần quan trọng, chiếm tỉ lệ cao nhất của các chất cay quyết định chất lượng của gừng. Hiện nay người ta xác định gingerol là hoạt chất chống oxy hóa mạnh. 2.1.1.2 Công Dụng + Công dụng thông thường Gừng là chất kích thích tiêu hóa, điều trị cảm, nôn mửa, trị ho đau bụng tiêu chảy, nhức đầu, gừng chống lão hóa, gừng là vị thuốc giúp cơ thể thêm nhiệt, gừng có trong vị thuốc nam, ngâm gừng trong rượu để xoa bóp chữa tê phù, tê thấp, đau nhức. Ngoài ra, gừng còn được sản xuất các thực phẩm thuốc để giảm viêm khớp, chống loét, làm mau lành vết thương ở da (Nguyễn Thiện Luân và ctv 1997). + Tác dụng dược lí Gừng là chất gây co mạch, hưng phấn thần kinh trung ương, thần kinh giao cảm, tuần hoàn máu, tăng huyết áp nhẹ. 4 + Tác dụng kháng khuẩn Gừng có tác dụng ức chế một số vi khuẩn Bacillus mycoides, Staphylococcus spp Tinh dầu gừng có thể ức chế Staphylococcus spp, E. coli, Streptococcus spp Salmonella paratyphy. Theo Phạm Xuân Sinh (2002), có thể kết hợp gừng với một số loại thuốc khác điều trị bệnh không muốn ăn, miệng nhạt vô vị, đầy bụng chướng hơi không tiêu. 2.1.2 Tỏi và các tác dụng của tỏi Tỏi có nguồn gốc từ các nước Trung Á, nơi có giờ chiếu sáng nhiều, có ẩm độ không khí thích hợp (Mai Văn Quyền và ctv, 1995). Tên khoa học: Allium sativum L Thuộc họ hành: Liliaceae 2.1.2.1 Thành phần hóa học của tỏi Bảng 2.1 Thành phần hóa học của tỏi Thành phần Hàm lượng tươi (%) H2O 6268 Carbohydate 2630 Protein 1,52,1 Lipid 0,10,2 Xơ 1,5 Hợp chất sulfur 1,13,5 Chất khoáng 0,7 Acid folic 6,26,4 Saponin 0,040,11 Vitamin 0,15 (Lawson, 1993) 2.1.2.2 Công dụng của tỏi + Công dụng thông thường Trong dân gian tỏi được coi là gia vị đem lại sức khỏe cho con người, tỏi có tác dụng ăn ngon miệng và giúp tiêu hóa tốt. Tỏi được dùng làm thuốc chữa bệnh cảm cúm, cảm lạnh, đầy hơi chướng bụng, mụn nhọt, chín mé và dùng để tăng thân nhiệt nhanh cho cơ thể vì trong 100 g tỏi có chứa 121 calo (Nguyễn Văn Thắng và Bùi Thị Mỹ, 1996) 5 Theo Ngưu Hồng Quân (2004), tỏi có chứa hàm lượng chất chống ung thư (nguyên tố vi lượng selen, germani) cho nên ăn tỏi phòng được ung thư dạ dày, ung thư thực quản. + Tác dụng kháng sinh Tỏi là kháng sinh phổ rộng, hoạt chất kháng sinh của tỏi chủ yếu là allicin. Ngoài ra, còn có ajione, diallin, disulfit, diallil trisulfide và các hợp chất chứa lưu huỳnh khác… được tạo ra từ tỏi. Tỏi tươi giã nát có thể ức chế 70 loại vi khuẩn gram âm và vi khuẩn gram dương như Klebsiella, Pasteurella, Corynebacterium và các giống Mycobacterium, thậm chí còn kháng được cả vi khuẩn đã lờn kháng sinh. Hoạt tính kháng sinh do allicin rất đáng lưu ý ngay cả độ pha loãng 1: 85.000 đến 1: 125.000 cũng có thể ức chế được nhiều vi khuẩn khác nhau cả gram âm lẫn gram dương. Bột tỏi đông khô còn có tác dụng chống lại E. coli, Pseudomonas, Salmonella, Micrococcus, Staphylococcus aureus, Klebsiella (Gonzales Fandox và ctv (1944), Xyguang (1986), Kupinie và ctv (1980), trích dẫn từ Dương Vũ Ngọc Minh, 2005). Đáng chú ý hơn là khả năng kháng những giống vi khuẩn E. coli gây nhiễm độc ruột và các vi khuẩn gây bệnh đường ruột khác, trong đó có tiêu chảy ở người và động vật thì dùng tỏi ngăn chặn tốt hơn so với việc dùng những vi khuẩn có lợi cho đường ruột để ngăn chặn tiêu chảy (Sharna và ctv (1997), Rurmar và Sharna (1982), Riss và ctv (1993), trích dẫn từ Dương Vũ Ngọc Minh, 2005). Theo tài liệu Dược học cổ truyền của nhà xuất bản y học Hà Nội (2002), thì tỏi có tác dụng trị giun, dùng trong trường hợp chữa giun kim, giun móc, bệnh lỵ, amip hoặc dùng khi ăn uống không tiêu đầy bụng. + Một số tác dụng khác Tỏi còn kháng lại virus, chống nấm, diệt kí sinh trùng, nguyên sinh trùng, giải độc kim loại nặng, phòng chống bệnh tim mạch, tăng cường miễn dịch, chống ung thư, giảm đường huyết, chống nhiễm độc phóng xạ, tăng cường chống bệnh đường hô hấp, kháng viêm. 2.1.3 Nghệ và các tác dụng Tên khoa học: Curcuma longa Thuộc họ gừng: Zingiberaceae 6 Nghệ là cây thảo dược, cao 0,6 1m, hình trụ hơi dẹt, cắt ngang hay bẻ ra có màu cam sẫm. Lá hình trái xoan thon nhọn hai đầu, hai mặt nhẵn. Nghệ được trồng ở khắp nước ta, hàng năm nước ta xuất khẩu một lượng lớn nghệ. 2.1.3.1 Thành phần hóa học của nghệ Trong củ nghệ có nhiều hợp chất như tinh bột, xơ, song các thành phần được chứng minh là có hoạt tính sinh học gồm: curcuminoid, tinh dầu, polysaccharide và peptid, nhưng tinh dầu và curcuminoid được coi là hoạt chất chính. Hoạt chất mang màu vàng của củ nghệ đó là dẫn xuất của phenolic: hoạt chất chính curcuninoid gồm 3 chất (curcumin, demethoxycurcumin (DMC), bisdemethoxy curcumin (BDMC). Trong đó curcumin chiếm tới 77%. 2.1.3.2 Công dụng + Tác dụng của nghệ Trong dân gian dùng nghệ để làm mau lành sẹo, vết thương xây sát ở da. Kích thích điều hòa tế bào gan (chủ yếu là chất faratolyl methyl carbinol, giải độc, thông mật, làm giảm viêm khớp, được sản xuất thuốc làm hạ cholesterol). Bột nghệ trộn với mật ong dùng để trị viêm loét dạ dày. + Tác dụng kháng khuẩn Curcumin là hoạt chất chính trong nghệ vàng, có khả năng loại bỏ gốc tự do mạnh mẽ và các men gây ung thư có trong thức ăn, nước uống. Bởi vậy curcumin được coi là chất tiêu biểu cho các chất chống ung thư. Curcumin có khả năng diệt khuẩn rất cao, curcumin pha loãng ở 1: 5000 đến 1:40000 có tác dụng kháng lại vi khuẩn: Staphylococcus, Salmonella paratyphi, Mycobacterium tuberculosis, Trychophyton guprseum (Nguyễn Đức Minh, 1995). Curcumin trong nghệ còn có khả năng giải độc, bảo vệ tế bào gan, làm tăng hồng cầu, hạ mỡ máu. Là một chất chống viêm, chống oxy hóa điển hình, có thể sử dụng như một corticoid trong điều trị bệnh mà không gây loãng xương và không gây loét dạ dày. 2.2 Cơ sở sinh lí tiêu hóa heo con và sự phát triển vi sinh vật đường ruột heo con 2.2.1 Cơ sở sinh lí tiêu hóa heo con Trong giai đoạn theo mẹ, heo con có tốc độ tăng trưởng nhanh, hệ tiêu hóa chưa hoàn chỉnh trong đường ruột còn thiếu vi sinh vật có lợi nên hệ tiêu hóa diệt khuẩn 7 kém. Khi heo trước 1 tháng tuổi trong dịch vị hoàn toàn không có HCl tự do, khả năng hoạt hóa pepsinogen kém, quá trình tiêu tiêu hóa protein ở dạ dày bị trở ngại, gây rối loạn tiêu hóa làm số lượng vi sinh vật theo thức ăn vào ruột tăng lên, gây thối rữa các protein, gluxit, cùng với nhiều điều kiện bất lợi như stress, sống xa mẹ…tạo điều kiện cho vi khuẩn có hại phát triển gây tiêu chảy. Theo Nguyễn Văn Hiền (2002), axit clohydric tự do xuất hiện vào thời điểm 2530 ngày tuổi, khả năng diệt khuẩn tốt nhất vào 4050 ngày tuổi. HCl tự do xuất hiện trong dạ dày heo con là một yếu tố quan trọng trong sự phát triển khả năng tiêu hóa thức ăn của heo con vì nó hạ thấp độ pH trong dạ dày tạo điều kiện thích hợp cho men pepsin hoạt động và chống lại sự ô nhiễm thức ăn. Pepsin bắt đầu hoạt động ở pH = 4,2, tối ưu pH = 2, do đó men pepsin chỉ hoạt động tốt khi heo con được 3 tuần tuổi, khi chúng đã có bộ máy tiêu hóa gần như hoàn chỉnh. Sau khi cai sữa, heo con chủ yếu lấy chất dinh dưỡng từ thức ăn, vì vậy bộ máy tiêu hóa của chúng phải qua một quá trình thay đổi hình thái, cấu tạo và hoạt động sinh lí để thích ứng với điều kiện sống mới. Do vậy, nên cho heo con tập ăn sớm để bộ máy tiêu hóa làm quen với thức ăn. 2.2.2 Sự phát triển hệ vi sinh vật đường ruột ở heo con Heo con mới sinh, đường tiêu hóa hoàn toàn không có hệ vi sinh vật. Hệ vi sinh vật đường ruột có được và ở thể cân bằng động là do vi sinh vật xâm nhập từ ngoài vào sữa đầu, chúng biến đổi nhưng trong một giới hạn nhất định và tồn tại suốt đời con vật. + Hệ vi sinh vật đường ruột được chia thành 2 nhóm: Nhóm vi sinh vật tùy nghi: thay đổi theo điều kiện bên ngoài như thức ăn, nước uống bao gồm: tụ cầu, nấm men, Proteus, E. coli… Nhóm vi sinh vật bắt buộc: thích nghi được môi trường định cư vĩnh viễn bao gồm: Lactobacilus acidophilus, E. coli, Enterococcus. + Hai nhóm này luôn ở thạng thái cân bằng là cần thiết cho sức khỏe của heo con (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977). + Vai trò hệ vi sinh vật đường ruột Chúng tham gia vào quá trình tiêu hóa tinh bột và chất xơ tạo ra sản phẩm: acid lactic và các chất khí CO2, NH3… một số phân giải acid amin tạo indol, scatol, phenol… làm cho phân có mùi đặc biệt. 8 Thủy phân urea làm giảm bilirubin ở ruột. Tổng hợp vitamin nhóm B, vitamin K ở manh tràng và trực tràng. 2.3 Đặc điểm sơ lược về vi khuẩn E. coli Escherichia coli được gọi tắt là E. coli chúng còn có tên Bacterium colicommue, Bacillus colicommu. Escherich phát hiện năm 1883 và được phân lập vào năm 1885 từ phân trẻ em. E. coli là vi khuẩn ruột già, chúng thường ở phần sau của ruột, ít khi ở dạ dày hay phần trước của ruột. Vi khuẩn theo phân ra bên ngoài. Do đó, thường thấy vi khuẩn trong đất, trong nước và không khí. Loài động vật ăn thịt và loài hỗn thực bài tiết ra nhiều vi khuẩn E. coli hơn loài ăn cỏ. 2.3.1 Hệ thống phân loại Lớp: Schyzomycetes Bộ: Eubacteriles Họ: Enterobacteriaceae Tộc 1: Echerichiae Giống 1: Escherichia Loài: coli 2.3.2 Đặc điểm hình thái và sự nhuộm màu Trực khuẩn E. coli hình gậy ngắn, gram âm, kích thước dài hay ngắn tùy theo môi trường nuôi cấy, kích thước trung bình 0,5 x 13 μ, hai đầu tròn, không bào tử, tạo giáp mô mỏng, có lông quanh tế bào nên có thể di động được. Trong bệnh phẩm có thể bắt màu lưỡng cực (2 đầu). 2.3.3 Đặc tính nuôi cấy và yêu cầu tăng trưởng Là loại hiếu khí hay hiếu khí tùy nghi, sinh trưởng ở nhiệt độ 15 420C, nhiệt độ thích hợp 370C, pH thích hợp là 7,4. Mọc tốt trên môi trường dinh dưỡng vi khuẩn E. coli tạo khóm S tròn ướt, màu trắng đục, hơi lồi để lâu có dạng khô, rìa hơi nhăn thuộc nhóm R, kích thước 2 3 mm. Trên môi trường thạch máu có chủng dung huyết, có chủng không. Thạch gelatin không tan chảy. Trong canh dinh dưỡng đục đều, sau lắng cặn có mùi phân thối, một số tạo váng mỏng. Trên các môi chẩn đoán chuyên biệt: Môi trường EMB: tạo khóm tím ánh kim. 9 Môi trường Macconkey: tạo khóm đỏ hồng. Môi trường Endo: tạo khóm đỏ hồng. Môi trường Kristensen: tạo khóm màu xanh lá mạ. Môi trường BCP: tạo khóm màu vàng. Môi trường TSI: tạo vàng vàng và sinh hơi. 2.3.4 Đặc tính sinh hóa Lên men sinh hơi đường glucose, galactose, lactose, maltose, arabinose, xylose, shamnose, mannitol, fructose . Lên men hoặc không lên men saccharose. Không lên men dextrin, glucogen. Phản ứng IMViC: Indol (+), Methylred (+), Citrate (), Vogesproskauer (), không tạo H2S và hoàn nguyên NO3 thành NO2 (nitrate (+). 2.3.5 Sức đề kháng E. coli bị diệt ở 600C trong 15 30 phút, 95% bị diệt ở nhiệt độ đông lạnh trong 2 giờ. Chúng có thể sống ở điều kiện thiên nhiên từ vài tuần đến vài tháng. Các chất sát trùng: HgCl2, formol diệt E. coli trong 5 phút. E. coli nhạy cảm với các kháng sinh: colistin, gentamycin, kanamycin, norfloxacin, cifrofloxacin, amoxcillin….. 2.3.6 Cấu trúc kháng nguyên Kháng nguyên O: là kháng nguyên thân chịu nhiệt, có trên 160 loại, có bản chất là lypopolysaccharide, bền với nhiệt và cồn, khi đun ở 1200C2 giờ vẫn giữ được tính kháng nguyên nhưng bị diệt bởi formol, được chia làm 4 nhóm từ O1O4. Kháng nguyên O rất quan trọng trong chẩn đoán và nghiên cứu dịch tễ học bệnh do E. coli gây ra. Kháng nguyên K: là kháng nguyên giáp mô có hơn 100 loại, bản chất là polysaccharide, là loại kháng nguyên chịu nhiệt kém (1000C1 giờ) một số bị phân hủy ở 121OC 2 giờ. Kháng nguyên K gồm 4 loại A, B, L, M các kháng nguyên này có tính ngưng kết chéo với kháng nguyên thân O. Vì vậy khi tiến hành thử ngưng kết cần phải đun sôi lại loại bỏ kháng nguyên K. Type A: rất chịu nhiệt, không bị phá hủy khi đun 1200C1 giờ, tính kháng nguyên, khả năng kết tủa và khả năng ngưng kết đều giữ nguyên. 10 Type B: tương đối chịu nhiệt khi đun ở 1000C1 giờ vẫn giữ khả năng ngưng kết và kết tủa. Type này thường gặp trong nhóm E. coli gây bệnh đường ruột. Type L: không chịu nhiệt, bị phá hủy khi đun 1000C1 giờ, mất khả năng ngưng kết, kết tủa và tính kháng nguyên). Type M: chưa được biết rõ. Kháng nguyên H: là kháng nguyên lông, có 60 loại từ H1 H60, bản chất là protein bị phá hủy bởi cồn, có tính chịu nhiệt, tuy nhiên khi đun ở 1000C2 giờ thì mất tính kháng nguyên, tính ngưng kết đều bị phá hủy. Phần lớn E. coli có chung type kháng nguyên này. Kháng nguyên F: là kháng nguyên tiêm mao kết dính vào tế bào ruột có dạng hình sợi, dài khoảng 4 μm, thẳng hay xoắn, đường kính 2,1 7 nm, các, tiêm mao liên quan đến tiêu chảy ở heo con là: F4 hay K88 với các dạng ab, ac, ad, F5 hay K99, F6 hay 987p, F41, F2413p, F107. 2.3.7 Độc tố + Ngoại độc tố (Exotoxin) bao gồm độc tố đường ruột và độc tố thần kinh. Độc tố đường ruột (Enterotoxin) gồm 2 loại : Độc tố LT: độc tố này không bền với nhiệt, bất hoạt ở 600C15 phút, có trọng lượng phân tử cao và có khả năng gây miễn dịch tốt. Hai loại độc tố LTa và LTb có tính chất kháng nguyên mạnh. Độc tố ST: Có 2 loại STa và STb, tính chất kháng nguyên yếu, độc tố này bền với nhiệt, đề kháng ở 1000C15 phút, trọng lượng phân tử thấp và có khả năng sinh miễn dịch kém. Độc tố thần kinh (Verotoxin) hay độc tố giãn mạch (Vasotoxin) đều có tính chất kháng nguyên. Ngoài ra E. coli còn tiết ra một số độc tố khác như cytotoxin, cyto necrotising factor (CNF) và haemolysin (HLY). + Nội độc tố (Endotoxin) bản chất là lypopolysaccharide của vách tế bào vi khuẩn. Nội độc tố chỉ được giải phóng thích nghi khi tế bào ly giải, nội độc tố còn gây tình trạng shock, nếu không được điều trị thích hợp dễ dẫn đến tử vong. Nội độc tố có khả năng gây sốt và không bị mất tính độc ở 1000C30 phút. 11 Bảng 2.2: So sánh một số tính chất của ngoại độc tố và nội độc tố Tính chất Ngoại độc tố Nội độc tố Định nghĩa Chất độc do vi khuẩn tiết ra ngoài môi trường Chất độc của vi khuẩn được phóng thích khi vi khuẩn bị li giải Độc lực Rất cao Thấp Bản chất hóa học Glycoprotein Lypopolysaccharide Chịu nhiệt độ cao Không Chịu Tính kháng nguyên Mạnh Yếu Sản xuất thành vaccine tốt Không (Lê Huy Chính (2001), trích dẫn bởi Thái Quốc Hiếu, 2002) Bảng 2.3: Phân nhóm E. coli theo đặc tính sinh bệnh Nhóm Đặc tính sinh hóa ETEC E. coli gây độc tố đường ruột (Enterotoxigenic Escherichia coli ) gây tiêu chảy ở heo con EPEC E. coli gây bệnh đường ruột (Enteropathogenic Escherichia coli) gây tiêu chảy trên heo cai sữa AEEC E. coli kết dính và phá hủy tế bào thượng bì ruột (Attaching and Effacing Escherichia coli) EHEC E. coli gây xuất huyết đường ruột (Enterohaemorrhagic Escherichia coli) EIEC Có khả năng xâm nhiễm tế bào (Enteroinvasive Escherichia coli) (Trần Thanh Phong, 1996) 12 2.4 Truyền nhiễm học 2.4.1 Cơ chế sinh bệnh tiêu chảy (Nguyễn Như Pho, 1995) 2.4.2 Loài vật mắc bệnh E. coli gây bệnh trên nhiều loài gia súc, gia cầm và thú hoang dã. Ở heo gây bại huyết, phù đầu, tiêu chảy, viêm vú, viêm tử cung, mất sữa…đối với bệnh tiêu chảy trên heo do E. coli gây ra thường xuất hiện ở heo con theo mẹ, sau cai sữa và chủ yếu nhiễm qua đường tiêu hóa (Đào Trọng Đạt và ctv, 1995). 2.4.3 Đường xâm nhập Heo nhiễm E. coli chủ yếu qua đường ăn, uống (Đào Trọng Đạt và ctv, 1995). 2.4.4 Chất chứa căn bệnh E. coli có nhiều trong phân và ruột già, ruột non thì ít hơn. Ngoài ra E. coli còn có trong phủ tạng (gan, hạch ruột, phổi, tủy xương), máu của con vật bị nhiễm trùng huyết. Độc tố vi sinh vật Vi sinh vật có hại phát triển Tiêu chảy Mất nước và chất điện giải Ngộ độc Thiếu dinh dưỡng Do vi sinh vật có hại phát triển Viêm ruột Kích thích nhu động ruột Chết Ngộ độc thức ăn ứ đọng lại không tiêu Giảm sức đề kháng Stress Ức chế thần kinh phó giao cảm Giảm nhu động ruột Giảm dịch tiêu hóa Nguyên nhân không do vi sinh vật Nhiễm trùng đường tiêu hóa 13 Ngoài ra vi khuẩn E. coli có mặt trong khắp mọi nơi, có thể được phân lập được E. coli từ nền chuồng, thức ăn, nước uống…. 2.4.5 Sự lây lan Truyền lây trực tiếp: tiếp xúc với con vật bệnh, vật mang mầm bệnh có khả năng bài thải mầm bệnh. Truyền lây gián tiếp: qua thức ăn, nước uống và dụng cụ mang mầm bệnh. 2.4.6 Điều kiện sinh bệnh Do heo con: do ăn quá nhiều, heo con không tiêu hóa hết thức ăn, thức ăn còn thừa trong ruột tạo điều kiện cho vi khuẩn E. coli phát triển và gây bệnh (Nguyễn Như Pho, 2001). Theo Trần Thị Dân (2003), ở heo cai sữa, thức ăn thay sữa mẹ có thể khó tiêu hóa hơn sữa, do đó heo con giảm khả năng tiêu hóa, vi sinh vật ruột già dễ lên men làm giảm hấp thu nước ở đường ruột, hậu quả là heo bị tiêu chảy. Yếu tố ngoại cảnh gồm nhiệt độ, sự thay đổi đột ngột. Yếu tố ngoại cảnh làm heo bị stress dẫn đến rối loạn tiêu hóa, tiêu chảy. Chuồng trại: kết cấu không hợp lí, không thông thoáng, không ấm….Làm heo dễ nhiễm bệnh. Do vệ sinh, chăm sóc: kém vệ sinh, chuồng bẩn, phân, chuồng ẩm ướt ... có thể do con người di chuyển từ chuồng heo bệnh sang heo lành. Theo Đào Trọng Đạt và ctv (1995) (trích dẫn bởi Phạm Tất Thắng, 1999), cho rằng sự cân bằng của quần thể vi sinh vật đường tiêu hóa ảnh hưởng lớn đến sức khỏe của động vật chủ. Khi cơ thể gặp những tác động khác như sai sót về chế độ dinh dưỡng, sai sót trong việc dùng thuốc điều trị hoặc dùng kháng sinh hoặc trong một số trường hợp bệnh mà các đáp ứng miễn dịch bị thay đổi đều có thể làm cho quần thể vi sinh vật đường tiêu hóa bị mất cân đối dẫn đến rối loạn tiêu hóa. Bình thường sự điều tiết của hệ vi sinh thái nội tại ngăn cản sự hình thành vi khuẩn gây bệnh trong cơ thể. Nếu các nhân tố điều tiết nội tại bị phá vỡ, các vi khuẩn gây bệnh sẽ có điều kiện phát triển làm cho bệnh tăng sinh. Các chủng E. coli sinh độc tố kết dính vào bề mặt biểu bì, các độc tố được tiết ra vào xoang ruột làm tăng cường sự tiết dịch. Từ đó các chất lỏng vào ruột non đến ruột kết sẽ vượt qua khả năng hấp thu của ruột non, ruột kết gây tiêu chảy. 14 Yếu tố vi sinh vật: ở trong đường ruột heo con đã có sẵn những vi khuẩn gây bệnh: E. coli , Salmonella… khi sức đề kháng của cơ thể yếu sẽ tạo điều kiện cho vi sinh vật gây bệnh phát triển (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977). Do sinh lí heo con: bộ máy tiêu hóa chưa hoàn chỉnh và thân nhiệt thường xuyên không ổn định, khả năng điều tiết thân nhiệt kém, cơ thể không kịp thích nghi với sự thay đổi môi trường dẫn đến rối loạn hấp thu gây tiêu chảy. Do các yếu tố khác: do thiếu sắt dẫn đến thiếu máu heo con còi cọc chậm lớn dễ mắc bệnh. Theo Nguyễn Bạch Trà (1998), thiếu một số vitamine A, PP, B2, B5 làm cho niêm mạc ruột bị lở loét, kích thích nhu động ruột mạnh, gây tiêu chảy. 2.5 Triệu chứng Bệnh thường xuất hiện trên heo con theo mẹ, 4 5 ngày hoặc 10 ngày sau cai sữa do sự thay đổi khẩu phần thức ăn. Heo tiêu chảy phân lỏng xám nâu, ít nhày, tiêu chảy ở giai đoạn ngắn 4 5 ngày, thú chết do sự mất nước và nhiễm trùng huyết. Ngoài ra, còn thấy tình trạng thất điều vận động, ủ rũ, viêm ruột mãn tính. Thường tỉ lệ bệnh 20 50%, tỉ lệ chết thấp hơn 10%. Thú khỏi bệnh khả năng phát triển và tăng trọng kém. Hậu quả của tình trạng này là thú còi cọc chậm lớn kém ăn, chân tay co quắp, da khô, trũng hố mắt. 2.6 Bệnh tích Bệnh tiêu chảy thường có bệnh tích trên niêm mạc là xuất huyết điểm hay mảng, có thể có viêm ruột cata, viêm ruột tụ huyết, xuất huyết, ruột không có vết loét như phó thương hàn. 2.7 Chẩn đoán + Chẩn đoán lâm sàng Dựa vào triệu chứng: tiêu chảy phân lỏng xám, bệnh phát ra đột ngột đau bụng dữ dội ít khi nôn mửa, có thể có sốt hoặc không. Dựa vào nguyên nhân dinh dưỡng: do thức ăn nước uống do môi trường hoặc vi sinh vật. + Chẩn đoán phòng thí nghiệm Chủ yếu phân biệt với Salmonella. E. coli lên men lactose phân biệt sới Salmonella không lên men lactose. 15 Trên môi trường EMB: E. coli tạo khóm tím ánh kim còn Salmonella tạo khóm màu trắng ngà. Trên môi trường KIA: E. coli tạo vàngvàng, Salmonella tạo đỏvàng 2.8 Tiên lượng Tiên lượng tốt hay xấu đối với bệnh tiêu chảy do E. coli tùy vào nhiều yếu tố như độ tuổi mắc bệnh, mức độ nặng nhẹ, nguyên nhân gây bệnh. Đối với heo con bị bệnh thì tiên lượng rất xấu nếu không can thiệp kịp thời thì heo sẽ gầy ốm mất nước nhanh và chết. 2.9 Phòng bệnh Vệ sinh chăm sóc có ý nghĩa quan trọng. Giữ chuồng trại ấm vào mùa đông và mát vào mùa hè, luôn khô ráo, phân và chất thải phải được xử lí tốt, sạch sẽ, nước uống sạch, tiêm sắt đúng quy trình. Nhiệt độ chuồng nuôi nên đảm bảo 32 340C cho heo sơ sinh, 28 300C đối với heo cai sữa (Đào Trọng Đạt, 1995). Ngoài vệ sinh phòng bệnh có thể dùng vaccine tiêm phòng cho heo mẹ lúc 42 ngày và 84 ngày trước khi đẻ để tạo kháng thể truyền qua sữa đầu hoặc cho heo con uống kháng thể vài giờ sau khi sinh (Phạm Sỹ Lăng và ctv, 1995) 2.10 Điều trị Đối với bệnh tiêu chảy thì cần cấp nước, để chống mất nước, tăng cường sức đề kháng của heo bằng vitamin C, glucose. Ngày nay việc sử dụng nhiều kháng sinh đã dẫn đến tình trạng vi khuẩn đề kháng với thuốc Đối với heo tiêu chảy trên lô thí nghiệm chúng tôi sử dụng chất chát như lá ổi, búp ổi. Nếu điều trị không khỏi thì chúng tôi sẽ dùng kháng sinh. 2.11 Giới thiệu về các kháng sinh được sử dụng làm kháng sinh đồ + Amoxcillin (Ax): tác dụng trên vi trùng gram âm và gram dương hấp thu tốt qua đường máu, sau khi vào máu thuốc tập trung ở các mô mềm, phổi, cơ, dưới da, tử cung vào dịch não tủy không vào được xoang khớp. Do đó được dùng để điều trị viêm phổi, viêm ruột, nhiễm trùng da, vết thương móng, nhiễm trùng đường tiết niệu. + Gentamycin (Ge): trong thực tiễn trị liệu dùng gentamycin là kháng sinh phổ rộng trên vi trùng gram dương và gram âm. Gentamycin hấp thu rất nhanh từ vị trí 16 tiêm, khuếch tán tốt trong tử cung bài xuất chủ yếu qua đường thận và một ít qua mật. Gentamycin dùng để điều trị nhiễm khuẩn huyết, tác dụng trên các vi khuẩn đường tiêu hóa, phế quản, phổi, nội mạc tử cung, bàng quang. + Colistin (Co): tác dụng trên vi trùng gram âm. Qua đường uống trị nhiễm trùng đường ruột rất tốt. Qua đường tiêm thì hấp thu trọn vẹn tại vị trí tiêm, trị được nhiễm trùng xoang, đường tiết niệu, sinh dục do vi trùng gram dương. Thuốc phân bố vào trong mô mềm, dịch tiết của phổi, vào được xoang khớp tử cung, dưới da. + Norfloxacin (Nr): thuộc thế hệ 2 của nhóm quinolon, tác dụng trên vi trùng gram âm, gram dương và cả Mycoplasma. Thuốc hấp thu tốt vào trong máu, phân bố tốt ở phổi, dịch tiết ở phổi, ruột, mô mềm, nên trị vi khuẩn đường tiêu hóa cũng rất tốt. 2.12 Giới thiệu sơ lược về trại chăn nuôi heo 2.12.1 Vị trí Trại chăn nuôi Thành An, thuộc xã Gia Kiệm, huyện Thống Nhất, tỉnh Đồng Nai. 2.12.2 Cơ cấu đàn (tính đến ngày 25062007) Đực giống: 01 Heo nái sinh sản: 112 con Heo nái hậu bị: 30 con Heo thịt: 420 con Heo cai sữa: 187 con Heo con theo mẹ: 102 con Tổng đàn: 852 con 2.12.3 Chuồng trại Khu chuồng nái nuôi con là một dãy chuồng đôi, các ô chuồng đối xứng nhau qua hành lang, chuồng được xây theo hướng đông tây mái chuồng lợp bằng tôn tường được xây gạch cao 70 cm, phần còn lại được lắp lưới B 40, bên ngoài được che bằng bạt cuốn. Diện tích của sàn đẻ 2 m x 1,6 m, trong mỗi chuồng có các ô úm heo con bằng sắt, diện tích 0,7 m x 0,5 m. Hệ thống nước uống được bơm từ giếng khoan lên bồn rồi dẫn xuống cho heo uống bằng núm tự động ở mỗi ô, hệ thống cống thoát phân và nước tiểu nằm ở hai bên dãy chuồng. Khu chuồng nái khô, nái chửa, nọc được nuôi trong chuồng cá thể nền xi măng, diện tích chuồng nuôi cá thể của heo nái 0,6 x 2,2 m, diện tích chuồng đực giống 2,2 x 2,7 m. 17 Khu chuồng nuôi heo cai sữa nằm cùng dãy với chuồng nái đẻ. Heo cai sữa được nuôi trên lồng sắt gồm 2 dãy đối xứng nhau, diện tích mỗi ô 2,5 x 3 m sàn cách mặt đất 60 cm, mỗi ô nuôi 25 con. Chuồng nuôi được trang bị hệ thống phun sương, trên mái tôn từ 10 giờ sáng đến 3 giờ chiều. 2.12.4 Thức ăn Trong suốt thời gian từ cai sữa đến 60 ngày tuổi cho ăn thức ăn Delice B của công ty thức ăn Con Cò từ cai sữa đến 15 kg. Sau đó cho ăn thức ăn Porcy 15 cho tới 90 ngày tuổi. Bảng 2.4 Thành phần dinh dưỡng thức ăn Delice B từ cai sữa đến 15 kg Thành phần Tỷ lệ (%) Đạm 19 Xơ thô 5 Ca 0,71,4 P 0,6 Độ ẩm 13 Năng lượng trao đổi (kcalkg) 3300 Bảng 2.5 Thành phần dinh dưỡng thức ăn Porcy 15 Thành phần Tỷ lệ ( %) Đạm 18 Xơ thô 5 Ca 0,71,4 P 0,5 NaCl 0,30,8 Độ ẩm 13 Năng lượng trao đổi (kcalkg) 3100 2.12.5 Vệ sinh thú y Heo được tắm một lầnngày cho cả trại, ngoại trừ heo nái nuôi con, việc tắm còn phụ thuộc vào thời tiết. Dọn vệ sinh chuồng thường xuyên 3 lầnngày. Chuồng 18 được sát trùng định kỳ 2 tuầnlần, nếu có dịch bệnh xảy ra thì sát trùng 1 tuầnlần. Thuốc sát trùng thường dùng là: TH4, Bioxid… Bảng 2.6 Qui trình tiêm phòng loại heo Vaccine Heo con Heo hậu bị Heo nái hửa Heo nái nuôi con Mycoplasma (Hyoresp) 37 ngày tuổi lần 1 2128 ngày tuổi lần 2 Dịch tả (Pestiffa) 45 tuần tuổi lần 1 89 tuần tuổi lần 2 34 tuần trước khi phối 46 tuần trước khi sinh Giả dại (PRVacPlus) 45 tuần trước khi phối 34 tuần trước khi sinh FMD (Aftopor) 68 tuần tuổi 34 tuần trước khi phối 46 tuần trước khi sinh Parvo (FarrowSure B) 23 tuần trước khi phối 23 tuần sau khi sinh APP 5 tuần tuổi 19 Chương 3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 3.1 Thời gian và địa điểm 3.1.1 Thời gian: được tiến hành 552007 đến 1192007 3.1.2 Địa điểm Thí nghiệm được thực hiện tại trại heo Thành An, thuộc xã Gia Kiệm, huyện Thống Nhất, tỉnh Đồng Nai. Phân tích kết quả tại phòng vi sinh Bệnh Viện Thú Y trường Đại học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh. 3.2 Đối tượng khảo sát Thí nghiệm được thực hiện trên 72 heo con cai sữa (từ 30 đến 90 ngày tuổi). Heo con được bố trí thí nghiệm giữa các lô tương đối đồng đều về trọng lượng, giới tính, giống và được nuôi trong cùng một điều kiện chăm sóc, nuôi dưỡng dựa trên thức ăn cơ bản của trại. Thí nghiệm gồm 8 lô, mỗi lô 9 heo con, có 7 lô bổ sung chế phẩm và 1 lô đối chứng. Bảng 3.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm Lô thí nghiệm 1 2 3 4 5 6 7 8 Chế phẩm bổ sung Tỏi Tỏi Gừng Gừng Nghệ Nghệ Hỗn hợp (gừng, tỏi, nghệ) Đối chứng Tổng số con lô 9 9 9 9 9 9 9 9 Tỷ lệ % bổ sung vào thức ăn 0,1 0,2 0,1 0,2 0,1 0,2 0,2 0 Tỷ lệ phối trộn giữa 3 loại chế phẩm gừng : tỏi : nghệ là 1 : 1 :1 20 3.3 Nội dung Đếm số lượng vi khuẩn E. colig phân qua các ngày tuổi 30 (chưa bổ sung), 60, 90 ngày tuổi (sau khi bổ sung chế phẩm). Thử kháng sinh đồ để xác định khả năng nhạy cảm của vi khuẩn E. coli đối với một số kháng sinh (amoxillin, colistin, gentamycin, norfloxacin) và dịch chiết gừng, tỏi, nghệ, hỗn hợp (gừng + tỏi + nghệ). Khảo sát một số chỉ tiêu tăng trọng và các biểu hiện bệnh khi bổ sung chế phẩm vào thức ăn trên heo con sau cai sữa. 3.4 Phương pháp tiến hành Thu thập mẫu vào 3 thời điểm Thời điểm 1: lấy mẫu ngay trước khi bổ sung chế phẩm lúc 30 ngày tuổi (72 mẫu). Thời điểm 2: lấy mẫu cách lần 1 là 30 ngày lúc 60 ngày tuổi (66 mẫu). Thời điểm 3: lấy mẫu cách lần 2 là 30 ngày lúc 90 ngày tuổi (65 mẫu). Hàng ngày theo dõi đàn heo thí nghiệm từ 6 giờ sáng tới 21 giờ tối, ghi nhận lại số heo bị bệnh tiêu chảy, hô hấp, bỏ ăn, cân lượng thức ăn hàng ngày. Lượng thức ăn dư được cân vào sáng hôm sau trước khi cho ăn thức ăn mới. Tiến hành cân trọng lượng heo khi bắt đầu nuôi và khi kết thúc thí nghiệm. 3.4.1 Phương pháp lấy mẫu Chờ heo con vừa thải phân, dùng muỗng đã hấp tiệt trùng gạt bỏ phần phân ở lớp bề mặt, lấy khoảng 25g phân cho vào túi nylon vô trùng cột chặt, sau đó cho vào bình đá chuyển ngay về Bệnh Viện Thú y Đại Học Nông Lâm TP. HCM để xét nghiệm. 3.4.2 Dụng cụ, hóa chất, môi trường + Dụng cụ Ống nghiệm, giá đựng ống nghiệm, bình thủy tinh, pipet, đầu type... + Hóa chất Thuốc thử Kovacs, Methylred,  napthol , KOH 40%... + Môi trường Môi trường LTB (Lauryl Tryptose Broth), EC (Erichment Coli Broth), môi trường EMB (Eosin Methylen Blue), MH (Mueller Hinton), môi trường KIA (Kligler Iron Agar) và NA (Nutrient Agar). 21 3.4.3 Quy trình đếm vi khuẩn E.coli trong phân Theo phương pháp MPN (Most Probable Number) Là phương pháp đánh giá mật độ trung bình của vi khuẩn hiện diện trong mẫu. Pha loãng Mẫu (phân) với nước muối sinh lý ở các nồng độ tương ứng LTB (Lauryl Tryptose Broth) 1ml, cho 1 ống , mỗi nồng độ 3 ống 3 nồng độ liên tiếp Ủ 370C2448 giờ Chọn ống dương tính (đục và sinh h i) EC (Erichment Coli) Chọn ống dương tính (đục và sinh h i) EMB (Eosin Methylen Blue) Chọn khuẩn lạc tím ánh kim KIA vàng vàng và sinh hơi IMViC + +   Tra bảng chuẩn MPN Ủ 420C2448 giờ Ủ 370C2448 giờ 22 3.4.4 Pha loãng mẫu qua các môi trường Trộn đều phân với nước muối sinh lý tiệt trùng theo tỉ lệ 110 (25g phân + 225 ml nước muối) để có được huyễn dịch tương đối đồng nhất, đó là sự pha loãng ban đầu (nồng độ 101), sau đó lấy 1ml ở ống 101chuyển sang ống nước muối sinh lý 9 ml để được 102 tiếp tục thao tác này tới đến 1012 . Chọn 3 nồng độ thích hợp để có được nồng độ tới hạn mỗi nồng độ cho vào 3 ống LTB, mỗi ống 1 ml. Cho các ống LTB trên vào tủ ấm 370C2448 giờ. Kết quả: các ống cho kết quả dương tính là những ống đục và sinh hơi. + Nuôi cấy trên môi trường EC Chọn những ống LTB dương tính lắc đều hút 0,1 ml cho vào các ống EC tương ứng . Đem ủ ấm 42 44,50C24 – 48 giờ. Kết quả: các ống cho kết quả dương tính là những ống đục và sinh hơi. + Nuôi cấy trên môi trường EMB Lấy các ống EC dương tính, dùng que cấy vòng cấy qua đĩa thạch EMB tương ứng ở các nồng độ, đem ủ 370C 24 giờ. Kết quả: vi khuẩn E. coli cho khóm khuẩn lạc màu tím ánh kim đường kính 0,5 – 2 mm, từ những khóm này ta tiến hành các phản ứng sinh hóa bao gồm thử phản ứng IMViC và KIA. Vi khuẩn E. coli cho kết quả IMViC là (+ +  ), KIA: vàng vàng và sinh hơi + Đọc kết quả từ những chỉ số tương ứng và tiến hành so với bảng chuẩn MPN + Trên môi trường NA Lấy khuẩn lạc từ EMB đã xác định là E. coli cấy sang môi trường NA ống đem ủ 37OC 24 giờ. Sau đó làm kháng sinh đồ. 3.4.5 Thử kháng sinh đồ theo phương pháp Kirby Bauer Kháng sinh được dùng là những kháng sinh mà trại đang sử dụng như: amoxcillin, colistin, gentamycin, norfloxacin. Chọn đại diện mỗi lô thí nghiệm 2 gốc vi khuẩn E. coli để làm kháng sinh đồ, heo có gốc vi khuẩn chọn làm kháng sinh đồ được cố định qua các lần lấy mẫu. Ngoài việc sử dụng kháng sinh, chúng tôi còn thử nghiệm khả năng kháng khuẩn của dịch chiết gừng, tỏi, nghệ dựa vào phương pháp này bằng cách sử dụng đĩa 23 giấy tẩm các dịch chiết tương ứng làm kháng sinh đồ. Trọng lượng nguyên liệu được thử như sau. Bảng 3.2 Trọng lượng của các nguyên liệu lấy dịch chiết Tỏi 3 g Gừng 3 g Nghệ 3 g Hỗn hợp (gừng, tỏi, nghệ) 1+1+1=3 g Sau khi cân các nguyên liệu, cho vào túi nylon giã nát dùng giấy lọc vô trùng, lọc lấy nước, dùng găng tay vô trùng vắt lấy nước và bỏ cặn, cho đĩa giấy không tẩm kháng sinh vào và để vào tủ ấm cho đến khi đĩa giấy khô. + Cách tiến hành Lấy vi khuẩn từ môi trường NA đánh vào nước muối sinh lý để được nồng độ tương ứng 108 vi khuẩnml (bằng cách so với độ đục Mac Farland 0,5 %). Dàn đều vi khuẩn trên môi trường thạch MH. Dùng kẹp vô trùng, kẹp đĩa giấy kháng sinh, lấy giấy tẩm dịch chiết tẩm đặt vào đĩa MH. Ủ 370C 24 giờ, đo đường kính vòng kháng khuẩn của kháng sinh và của dịch chiết. 3.5 Các chỉ tiêu khảo sát (1) Số lượng E.colig phân ở 3 thời điểm 30, 60, 90 ngày tuổi (2) Sự nhạy cảm của vi khuẩn E. coli đối với một số kháng sinh (amoxcillin, colistin, gentamycin, norfloxacin) và dịch chiết gừng, tỏi, nghệ, hỗn hợp (gừng, tỏi, nghệ) (3) Các chỉ tiêu tăng trọng Tăng trọng bình quân và tăng trọng tuyệt đối Tiêu thụ thức ăn và hệ số chuyển hóa thức ăn (4) Các chỉ tiêu bệnh lý Tỷ lệ ngày heo con tiêu chảy Tỷ lệ ngày con bệnh khác (5) Chi phí sản xuất Trong phạm vi nghiên cứu này, mục đích chúng tôi chỉ so sánh kinh tế giữa 8 lô thí nghiệm, vì thế chi phí sản xuất chỉ dựa vào thức ăn cơ bản, chế phẩm bổ sung và thuốc thú y, các chi phí khác bao gồm con giống, vaccine và chi phí quản lý không đề 24 cập ở đây. 3.6 Các công thức tính + Tăng trọng bình quân (kgcon) = Trọng lượng cuối thí nghiệm (kgcon) – Trọng l