Đang tải... (xem toàn văn)
Dầu được pha với hexane (1:10). Sau đó 200 μl được chuyển sang ống có chứa 600 μl methanol và 200 μl dung dịch chuẩn (300 μgml αtocopherol acetate trong ethanol) Sau đó mẫu được trộn vortex và ly tâm (5000RPM,5mins). Có thể lọc qua màng lọc 0,45 μm trước khi đưa mẫu vào. 50μl mẫu được nạp vào bộ nạp mẫu. Mẫu có thể được giữ trong bình tối màu ở 20 °C trong khoảng 1 tuần.
Phân tích vitamin E số loại dầu thực vật phương pháp HPLC đảo pha Trần Duy Anh 20140228 KTSH2-K59 Giảng viên hướng dẫn: PGS.TS Quản Lê Hà Trần Duy Anh-20140228-KTSH2K59 Đặc điểm chất cần phân tích Trần Duy Anh-20140228-KTSH2K59 Cách chuẩn bị mẫu • • Dầu pha với hexane (1:10) • • • • Sau mẫu trộn vortex ly tâm (5000RPM,5mins) Sau 200 μl chuyển sang ống có chứa 600 μl methanol 200 μl dung dịch chuẩn (300 μg/ml α-tocopherol acetate ethanol) Có thể lọc qua màng lọc 0,45 μm trước đưa mẫu vào 50μl mẫu nạp vào nạp mẫu Mẫu giữ bình tối màu -20 °C khoảng tuần Trần Duy Anh-20140228-KTSH2K59 Điều kiện chạy sắc kí • • Pha động sử dụng Methanol-Nước (96:4) • • • Tốc độ dòng chảy: ml/min Pha tĩnh Silica gel gắn với C18, kích thước cột 150x4,4 mm, kích thước hạt 5μm (http://www.glsciences.com/c-product/hplc/lc-columns/inertsil-ods-2/) Nhiệt độ cột: 45°C Sử dụng detector UV λ = 292 nm đo sau phút chạy sắc kí Trần Duy Anh-20140228-KTSH2K59 Kết điện di Trần Duy Anh-20140228-KTSH2K59 Nhận xét Ưu điểm: • • • • Chuẩn bị mẫu nhanh, đơn giản Độ nhạy cao Phương pháp có độ xác cao (RSD=2.69%) lượng mẫu thu hồi cao (98,14%) Mẫu dầu phân tích nhiều lần mà khơng làm ảnh hưởng đển chất lượng cột sắc kí Nhược điểm: • Cột C18 khơng phân tách β- γ- tocol Trần Duy Anh-20140228-KTSH2K59 Tài liệu tham khảo • Journal of Chromatography A: Volume 881 issue 1-2 2000 E Gimeno; A.I Castellote; R.M Lamuela-Raventós; M.C de la Torre Rapid determination of vitamin E vegetable oils by RP HPLC • • Analysis of Tocopherols and Tocotrienols by HPLC http://lipidlibrary.aocs.org/Analysis/content.cfm?ItemNumber=40389 Differences Between Using Acetonitrile and Methanol for Reverse Phase Chromatography http://www.shimadzu.com/an/hplc/support/lib/lctalk/35/35lab.html Trần Duy Anh-20140228-KTSH2K59 ... Volume 881 issue 1-2 2000 E Gimeno; A.I Castellote; R.M Lamuela-Raventós; M.C de la Torre Rapid determination of vitamin E vegetable oils by RP HPLC • • Analysis of Tocopherols and Tocotrienols... by HPLC http://lipidlibrary.aocs.org/Analysis/content.cfm?ItemNumber=40389 Differences Between Using Acetonitrile and Methanol for Reverse Phase Chromatography http://www.shimadzu.com/an /hplc/ support/lib/lctalk/35/35lab.html... cần phân tích Trần Duy Anh-20140228-KTSH2K59 Cách chuẩn bị mẫu • • Dầu pha với hexane (1:10) • • • • Sau mẫu trộn vortex ly tâm (5000RPM,5mins) Sau 200 μl chuyển sang ống có chứa 600 μl methanol