BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT PHẠM THỊ KIM NHUNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PCR ĐA MỒI VÀ CHẾ TẠO KÍT QUY MƠ PHỊNG THÍ NGHIỆM CHẨN ĐỐN NEISSERIA MENINGITIDIS, HAEMOPHILUS INFLUENZAE TÝP B, STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE Chuyên ngành: Động vật học (Vi sinh vật học) Mã số: 60420103 LUẬN VĂN THẠC SĨ HỌC SINH HỌC Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Hà Nội, 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT PHẠM THỊ KIM NHUNG NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PCR ĐA MỒI VÀ CHẾ TẠO KÍT QUY MƠ PHỊNG THÍ NGHIỆM CHẨN ĐỐN NEISSERIA MENINGITIDIS, HAEMOPHILUS INFLUENZAE TÝP B, STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE Chuyên ngành: Động vật học (Vi sinh vật học) Mã số: 60420103 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Đoàn Trọng Tuyên Hà Nội, 2015 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm màng não bệnh lý nhiễm trùng nghiêm trọng, tỷ lệ tử vong cao không nghĩ đến, chẩn đoán điều trị kịp thời Viêm màng não vi khuẩn bệnh nhiễm trùng hệ thần kinh trung ương cấp tính với biểu lâm sàng đa dạng như: hội chứng màng não rầm rộ, sốt cao, dịch não tủy đục mủ, nhiễm khuẩn huyết Bệnh diễn biến nặng, khơng chẩn đốn, điều trị kịp thời tử vong để lại di chứng nặng nề như: hội chứng màng não, điếc, câm, mù, rối loạn tâm thần, động kinh [7] Bệnh hay gây thành dịch, nơi tập trung đơng người nguy lây nhiễm cao Sự hiểu biết tác nhân gây bệnh thường gặp hỗ trợ cho công tác điều trị xây dựng chương trình phịng chống bệnh tật Quốc gia Hầu hết liệu dịch tễ viêm màng não người lớn xuất phát từ quốc gia phát triển, tác nhân nguyên nhân quan trọng gây bệnh tử vong giới: Streptococcus pneumoniae (phế cầu) 30 - 60%, Neisseria meningitidis (não mô cầu) 13 - 37%, Listeria monocytogiens Haemophilus influenzae [34,18 ] Những năm gần nhiều loại kháng sinh tốt đưa vào sử dụng Tuy nhiên tỷ lệ tử vong trung bình nhiều nước vùng dịch tễ màng não cầu – 10%, phế cầu 30%, Haemophilus influenzae 10 – 14% [7] Tại Việt Nam, nghiên cứu viêm màng não H influenza, S pneumoniae N meningitidis người trưởng thành chưa nhiều, chủ yếu tập trung đối tượng trẻ em Thời gian gần nghiên cứu dịch tễ học mở rộng đối tượng, nhiên chưa có thống kê cụ thể Theo Lê Thanh Bình (Bệnh viện Trung ương Huế) từ 1999 – 2001 có 65 trường hợp tỷ lệ tử vong (9%), tỷ lệ di chứng 11%, nguyên nhân hàng đầu H influenza (35,3%), thứ đến não mô cầu (18,4%), phế cầu (9,2%) Nghiên cứu Phạm Nhật An cộng năm 2001 Viện Nhi Trung ương với bệnh nhân từ đến 15 tuổi chẩn đoán viêm màng não với tỷ lệ H influenzae (50%), S pneumoniae (22,06%), N meningitidis (11,76%), Streptococcus (5,88%) số loại vi khuẩn khác Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Để chẩn đoán ca bệnh trước chủ yếu dựa vào triệu chứng lâm sàng, yếu tố dịch tễ, xét nghiệm kỹ thuật nhuộm soi nuôi cấy phân lập từ mẫu bệnh phẩm lâm sàng Các kỹ thuật có độ nhạy thấp, thời gian phân lập cần 4872 Các kỹ thuật khơng đáp ứng điều kiện chẩn đốn nhanh, điều trị kịp thời, diễn biến ca bệnh xảy nhanh (đặc biệt não mô cầu từ xuất triệu chứng đến tử vong trung bình 18 giờ) [11 ] Thử nghiệm ngưng kết hạt latex phát kháng nguyên polysaccaride bệnh phẩm máu, dịch não tủy H influenza 78 – 100%, S pneumoniae 67- 100% N meningitidis 50 – 93% Kỹ thuật đơn giản, chẩn đốn nhanh kỹ thuật ni cấy (