BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO HỌC VIỆN QUÂN Y BỘ QUỐC PHỊNG TRẦN XN TRÍ NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC CỦA VIÊN NÉN CEFACLOR 375MG GIẢI PHÓNG KÉO DÀI Chuyên ngành: Công Nghệ Dược Phẩm Bào Chế thuốc Mã số: 62 72 04 02 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2017 Cơng trình hồn thành tại: HỌC VIỆN QUÂN Y Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS BÙI TÙNG HIỆP PGS.TS NGUYỄN MINH CHÍNH Phản biện 1: PGS.TS Nguyễn Đăng Hòa Trường Đại học Dược Hà Nội Phản biện 2: PGS.TS Nguyễn Trọng Thông Trường Đại học Y Hà Nội Phản biện 3: PGS.TS Trần Thế Tăng Cục Quân Y Luận án bảo vệ Hội đồng chấm luận án cấp Trường họp tại: Học viện Quân Y Vào hồi ngày tháng năm Có thể tìm luận án thư viện: - Thư viện Quốc Gia Việt Nam - Thư viện Học viện Quân Y MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Vấn đề thực trạng sử dụng kháng sinh kháng kháng sinh mang tính tồn cầu, đặc biệt trộ i nước phát triển với gánh nặng bệnh nhiễm khuẩn nh ững chi phí b buộc cho việc thay kháng sinh cũ kháng sinh mới, đắt tiền Để góp ph ần ngăn chặn kháng kháng sinh, mang lại lợi ích kinh tế hiệu cao điều trị, giảm tác dụng không mong muốn, giảm độc tính, giảm số lần dùng thuốc, trì nồng độ thu ốc máu định… việc đời thuốc có dạng bào chế viên nén giải phóng kéo dài hồn tồn cần thiết đáp ứng yêu cầu cấp thiết liệu trình điều trị nhiễm khuẩn nay, với bệnh nhiễm khuẩn mạn tính viêm xoang, viêm tai giữa… Viên nén giải phóng kéo dài dạng thuốc tốt để phân phối cho bệnh nhân tương lai Hầu tất loại thuốc đưa thị trường dạng viên nén Cefaclor kháng sinh thuộc nhóm cephalosporin có tác dụng diệt khuẩn q trình ức chế tổng hợp thành tế bào vi khuẩn Thời gian bán thải sinh học thuốc ngắn đáng kể (0,6 – 0,9 giờ) Vì vậy, cefaclor cần bào chế dạng giải phóng kéo dài Tại Việt Nam, đến thời điểm khảo sát, chưa có chế phẩm dạng giải phóng kéo dài có chứa hoạt chất Cefaclor sản xuất nước Mặt khác, để so sánh loại chế phẩm, việc xét tương đương sinh học yếu tố quan trọng để cấu thành nên chất lượng thuốc, đảm bảo thuốc an toàn hiệu cho người bệnh sử dụng Đánh giá tương đương sinh học in vivo phương pháp đánh giá chất lượng thuốc đích thực vấn đề cộm ngành Dược nhiều nước giới Vì vậy, nhằm đáp ứng yêu cầu điều trị kinh tế nước, đề tài: “Nghiên cứu bào chế bước đầu đánh giá tương đương sinh học viên nén cefaclor 375mg giải phóng kéo dài” thực với hy vọng góp phần phát triển công nghệ sản xuất thuốc TDKD đánh giá TĐSH người nước Mục tiêu nghiên cứu: Bào chế viên nén cefaclor 375 mg giải phóng kéo dài quy mơ phòng thí nghiệm Đề xuất tiêu chuẩn sở bước đầu đánh giá độ ổn định chế phẩm Bước đầu đánh giá tương đương sinh học chế phẩm Đã nghiên cứu bào chế viên nén cefaclor 375mg TDKD lần đánh giá TĐSH người Việt Nam có khả ứng dụng vào thực tiễn Đã đề xuất tiêu chuẩn sở bước đầu đánh giá độ ổn định chế phẩm Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng cefaclor dịch thử khả phóng thích hoạt chất phương pháp quang phổ UV-Vis; Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng cefaclor chế phẩm huyết tương người phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Phương pháp ứng dụng để đánh giá TĐSH dạng thuốc khác có chứa cefaclor Ứng dụng phương pháp để nghiên cứu đánh giá TĐSH viên cefaclor TDKD người Bước đầu đánh giá TĐSH viên thực nghiệm so sánh với viên đối chiếu Bố cục luận án: Luận án gồm 133 trang, bao gồm: - Đặt vấn đề mục tiêu nghiên cứu: trang - Tổng quan tài liệu: 36 trang - Đối tượng phương pháp nghiên cứu: 24 trang - Kết nghiên cứu: 53 trang - Bàn luận: 15 trang - Kết luận kiến nghị: trang Luận án có 61 bảng, 17 hình vẽ, 105 tài liệu tham khảo (cụ thể 14 tài liệu Tiếng Việt, 91 tài liệu Tiếng Anh) Chương TỔNG QUAN Phần tổng quan chia làm phần chính: thuốc giải phóng kéo dài (GPKD); cefaclor bào chế viên cefaclor giải phóng kéo dài; độ ổn định thuốc tuổi thọ thuốc; sinh khả dụng tương đương sinh học Phần thuốc GPKD bao gồm hệ thống trị liệu giải phóng kéo dài, số dạng thuốc giải phóng kéo dài đường uống, ưu nhược điểm thuốc giải thích kéo dài, tá dược dùng cho viên giải phóng kéo dài Phần nghiên cứu cefaclor bào chế viên cefaclor giải phóng kéo dài bao gồm cơng thức hóa học cefaclor, tính chất lý hóa, định tính, định lượng, dược động học, tác động dược lực, công dụng, cách dùng, liều dùng viên nén cefaclor 375mg, chế phẩm chứa cefaclor thị trường Việt Nam, đặc tính kỹ thuật bào chế viên cefaclor giải phóng kéo dài, số nghiên cứu dạng bào chế giải phóng kéo dài chứa cefaclor Phần nghiên cứu về độ ổn định thuốc tuổi thọ thuốc bao gồm độ ổn định thuốc, điều kiện nghiên cứu độ ổn định thuốc tuổi thọ thuốc Phần nghiên cứu sinh khả dụng tương đương sinh học bao gồm khái niệm sinh khả dụng tương đương sinh học, phương pháp đánh giá sinh khả dụng, đánh giá tương đương sinh học in vitro, in vivo số nghiên cứu bào chế đánh giá tương đương sinh học cefaclor nước Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu, thiết bị đối tượng nghiên cứu Các nguyên liệu, hóa chất dung môi đạt tiêu chuẩn dược điển USP, BP, DĐVN đạt tinh khiết dùng phân tích Thiết bị bào chế thiết bị phân tích đại trang bị phòng thí nghiệm Học viện quân y – Hà Nội, Viện Kiểm nghiệm thuốc Tp.HCM – TP.HCM, Công ty TNHH dược phẩm Shinpoong Daewoo– TP.Biên Hòa, Đồng Nai, Bệnh viện quận - TP.HCM Thuốc đối chiếu: viên Ceclor® SR số lơ 070141, hạn dùng 21/09/2013, hãng sản xuất Eli Lilly Suzhou Pharmaceutical Co, Ltđ Người tình nguyện (NTN) khỏe mạnh thể chất lẫn tinh thần, tuổi: từ 18-50, chiều cao cân nặng chênh lệch không 10%, giới tính: giới, tốt nên chọn nam, chọn nữ phải đảm bảo không mang thai, chủng tộc: chủng tộc NTN phải kiểm tra sức khỏe làm xét nghiệm lâm sàng để đảm bảo chức chuyển hóa bình thường chức gan, thận không nhạy cảm với Cephalosporin 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu bào chế Định lượng hoạt chất dịch thử khả giải phóng hoạt chất phương pháp quang phổ Định lượng hoạt chất chế phẩm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Bào chế viên nhân giải phóng kéo dài chứa cefaclor 375 mg Thiết kế thí nghiệm bố trí theo phương pháp mạng đơn hình với trợ giúp phần mềm Modde 5.0; tối ưu hóa công thức nhờ phần mềm Modde 5.0 mạng thần kinh nhân tạo Inform 3.2 Nghiên cứu xây dựng quy trình bao phim bảo vệ 2.2.2 Đề xuất tiêu chuẩn sở nghiên cứu độ ổn định viên cefaclor 375 mg giải phóng kéo dài Đề xuất tiêu chuẩn sở Viên nén GPKD cefaclor 375 mg bào chế quy mô pilot đề xuất tiêu chuẩn hình thức viên, độ đồng khối lượng, hàm lượng hoạt chất, PPĐT, định lượng, độ hòa tan viên Độ ổn định Nghiên cứu dài hạn: mẫu viên nén cefaclor 375mg GPKD bào chế theo cơng thức tối ưu ép vĩ cứng, đóng hộp carton bảo quản o nhiệt độ thường (30 ± C/ 75 ± 5% RH) Nghiên cứu lão hóa cấp tốc: mẫu viên nén cefaclor 375mg GPKD bào chế theo công thức tối ưu ép vĩ cứng, đóng hộp carton bảo o quản nhiệt độ 40 ± C/ 75 ± 5% RH Xác định tuổi thọ Tuổi thọ thuốc xác định thời điểm hàm lượng hoạt chất giảm đến giới hạn theo quy định bảo quản điều kiện dài hạn Trong trường hợp này, tuổi thọ thuốc xác định hàm lượng cefaclor giảm 90% so với hàm lượng nhãn điều kiện dài hạn 2.2.3 Nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học 2.2.3.1 Nghiên cứu định lượng cefaclor huyết tương phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao: - Xử lý mẫu huyết tương định lượng - Xây dựng thẩm định phương pháp phân tích định lượng huyết tương: thẩm định phương pháp phân tích theo tiêu chuẩn FDA Mỹ nội dung sau: Độ chọn lọc - đặc hiệu Đường chuẩn khoảng tuyến tính Giới hạn định lượng (LLOQ) Độ – độ lặp lại ngày, độ lặp lại khác ngày Hiệu suất chiết Độ ổn định mẫu thử (độ ổn định cefaclor huyết tương) 2.2.3.2 Tương đương sinh học in vitro: Xác định cách so sánh tỉ lệ hoạt chất hòa tan vào mơi trường thử độ hòa tan từ thuốc thử thuốc đối chiếu khoảng thời gian định Lượng hoạt chất hòa tan so sánh dựa vào yếu tố tương tự f2 theo công thức sau: t=n -0,5 f2 = 50 x log{[1 + (1/n)∑( Rt - Tt ) ] x 100} t=1 Khi giá trị f2 từ 50-100 hai chế phẩm xem có độ hòa tan tương đương 2.2.3.3 Tương đương sinh học in-vivo Nghiên cứu người tình nguyện khỏe mạnh, mơ hình thử nghiệm chéo, liều đơn, hai thuốc, hai giai đoạn Tính tốn khoảng tin cậy 90% để so sách thơng số dược động học C max, AUC, MRT So sách Tmax theo phương pháp thống kê phi tham số 2.2.4 Xử lý kết nghiên cứu: Số liệu xử lý phương pháp thống kê thích hợp Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ 3.1.1 Thẩm định phương pháp định lượng hoạt chất thành phẩm 3.1.1.1 Thẩm định phương pháp định lượng cefaclor dịch thử khả giải phóng hoạt chất quang phổ UV-Vis - Tính tuyến tính: kết phương pháp định lượng viên nén Cefaclor GPKD tuyến tính khoảng nồng độ từ 8,75-45 µg/ml - Độ đúng: kết tỉ lệ phục hồi từ 99,2%-99,65% nằm giới hạn cho phép (98%-102%) nên PPĐL đạt độ - Độ lặp lại: Phương pháp định lượng đạt độ lặp lại giá trị RSD không 2% Kết RSD = 0,9% nên PPĐL cho độ lặp lại nằm giới hạn quy định 3.1.1.2 Thẩm định phương pháp định lượng Cefaclor thành phẩm sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) -Tính tuyến tính: kết phương pháp định lượng viên nén Cefaclor GPKD tuyến tính khoảng nồng độ từ 0,17 - 0,40 mg/ml - Độ đúng: kết tỉ lệ phục hồi từ 98,1%-98,7% nằm giới hạn cho phép (98%-102%) nên PPĐL đạt độ - Độ lặp lại: Phương pháp định lượng đạt độ lặp lại giá trị RSD không 2% Kết RSD = 0,85% nên PPĐL cho độ lặp lại nằm giới hạn quy định 3.1.2 Khảo sát tiêu viên đối chiếu Các tiêu cảm quan, khối lượng trung bình, hàm lượng, khả GPHC viên đối chiếu để làm sở cho việc xây dựng công thức bào chế viên nén cefaclor GPKD Bảng 3.8: Kết thử nghiệm khả GPHC viên đối chiếu Thời điểm (phút) Viên 30 16,39 60 33,70 120 62,69 180 88,01 240 92,45 Tỷ lệ giải phóng (%) Viên Viên 16,76 16,55 32,11 34,57 63,02 64,29 89,03 87,69 92,74 93,77 Viên 16,40 32,34 64,60 89,99 93,87 Viên 16,30 32,62 65,45 90,89 93,05 Trung bình Viên (%) 16,86 16,54 32,77 33,87 62,27 63,72 89,07 89,11 91,89 92,96 %HCPT 100 USP 29 (%) 5-30 20-50 ≥80 Ceclor® SR 80 60 40 20 0 100 200 300 THOI GIAN (PHUT) Hình 3.3: Đồ thị biểu diễn tốc độ GPHC viên đối chiếu Kết thử nghiệm khả giải phóng hoạt chất viên đối chiếu ceclor® SR cho thấy: Hoạt chất giải phóng kiểm sốt nhờ chế hòatan cốt (matrix) tạo thành polyme tạo khung xốp trơ không bền vững Cốt rã theo thời gian polyme thân nước hòa tan chậm Lớp bao phim hòa tan nhanh 3.1.3 Bào chế viên cefaclor giải phóng kéo dài 3.1.3.1 Nghiên cứu lựa chọn tá dược bào chế viên nén cefaclor giải phóng kéo dài Dựa theo bào chế số công thức cấu trúc dạng viên qua thực nghiệm, sử dụng phương pháp thăm dò cổ điển, chúng tơi khảo sát số cơng thức ban đầu nhằm tìm xác thành phần CT (cơng thức) khoảng giới hạn thành phần phần trăm ngắn 11 Viên nén bào chế theo công thức bảng với phương pháp ghi mục 2.2.1.3 thử hòa tan theo phương pháp ghi mục 2.2.1.1 Kết thể bảng 3.20 Bảng 3.20: Phần trăm dược chất giải phóng từ viên thực nghiệm Thời gian Thí nghiệm TN1 TN2 TN3 TN4 TN5 TN6 TN7 TN8 TN9 TN10 TN11 TN12 TN13 TN14 TN15 TN16 TN17 TN18 TN19 TN20 TN21 Nhận xét: Y30 Y60 Y120 Y180 Y240 f2 30,17 26,54 14,15 24,15 15,77 15,47 15,41 28,70 26,30 21,76 19,79 17,67 16,06 13,01 14,57 14,99 16,36 17,53 18,81 20,32 26,44 50,55 44,41 22,85 45,12 24,07 23,98 40,16 45,94 46,08 26,85 31,34 29,94 39,39 19,60 23,14 22,86 24,48 27,79 29,07 30,93 45,68 84,11 71,89 35,75 74,51 38,44 38,66 67,79 74,07 68,99 45,28 46,2 51,41 67,23 32,77 36,56 37,14 40,91 46,89 47,24 52,08 75,35 100 90,58 47,22 94,97 49,77 50,42 88,92 93,30 89,98 59,58 61,76 68,80 85,93 43,83 48,26 49,83 54,90 64,72 64,27 69,14 96,57 100 100 58,69 100 59,79 62,65 96,78 96,48 97,25 72,01 73,35 85,21 95,79 54,30 57,97 55,96 69,10 79,16 80,50 83,12 100 41,91452 54,3623 27,85557 52,70321 29,22376 30,02486 70,30713 51,49657 55,68185 36,50751 38,35437 47,22152 71,96228 25,6168 28,10986 28,13205 33,18313 41,32644 41,66825 47,00132 50,41898 12 - Tốc độ giải phóng dược chất từ viên thực nghiệm khác nhau, f2 thay đổi nhiều, 7/21 cơng thức có f2 > 50 3.1.3.3 Lựa chọn công thức tối ưu Dựa vào đồ thị giải phóng dược chất từ viên đối chiếu tiêu chuẩn USP 29 Điều kiện tối ưu đặt sau: 5% ≤ Y30 ≤ 30% 20% ≤ Y60 ≤ 50% Y240 ≥ 80% Công thức tối ưu lựa chọn nhờ phần mềm Inform 3.2 Kết tối ưu thể công thức sau: Thành phần công thức tối ưu Thành phần Khối lượng (mg) Cefaclor HPMC E15 Mannitol PVP-K30 Magnesi stearat Aerosil 375,0 148,5 7,15 11 5,5 2,75 Lực gây vỡ viên: 9-10 kP Tá dược dính PVPK30 (tỷ lệ cố định 2%) Tiến hành bào chế viên nén cefaclor GPKD theo công thức tối ưu cho kết bảng 3.21 Bảng 3.21: Phần trăm HCGP từ viên tối ưu, đối chiếu, dự đoán Thời gian (phút) Mẫu Dự đoán Viên tối ưu Viên đối chiếu 30 60 120 180 240 17,12 17,9 16,54 22,03 33,53 33,87 56,98 60,00 63,72 77,78 90,79 89,11 82,64 96,20 92,96 13 Hình 3.9: Đồ thị giải phóng viên tối ưu, viên đối chiếu, viên dự đoán Dựa số liệu giải phóng viên tối ưu viên đối chiếu, f2= 70,56 Phần trăm HCGP viên tối ưu thực nghiệm gần với viên dự đoán lý thuyết thời điểm nhanh Tuy nhiên, so với viên đối chiếu giống Vì ta chọn công thức tối ưu để bào chế viên nén cefaclor GPKD 3.2 KẾT QUẢ ĐỀ XUẤT TIÊU CHUẨN CƠ SỞ VÀ NGHIÊN CỨU ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA VIÊN CEFACLOR GIẢI PHÓNG KÉO DÀI 3.2.1 Nghiên cứu đề xuất tiêu chuẩn sở viên cefaclor giải phóng kéo dài Sản xuất nâng cấp số lượng viên lô từ CT tối ưu, kết qủa viên nén gởi kiểm tra Viện Kiểm Nghiệm TP HCM có kết qủa đạt theo TCCS đề xuất (dựa tiêu chuẩn USP, BP, DĐVN) tiêu chuẩn USP 29 thử độ giải phóng họat chất 14 3.2.2 Độ ổn định thuốc - Chỉ tiêu theo dõi: hình thức, hàm lượng dược chất, độ hòa tan o - Kết sau 36 tháng theo dõi nhiệt độ thường (30 ± C/ 75 ± 5% RH), hình thức khơng thay đổi, hàm lượng cefaclor lô lô đạt giới hạn quy định (> 90%, từ 90,06 - 90,89%), lô không đạt quy định (=89,99% < 90%) o - Kết sau tháng theo dõi điều kiện lão hóa cấp tốc (40 ± C/ 75 ± 5% RH), Hàm lượng cefaclor giảm theo thời gian bảo quản 3.2.3 Tuổi thọ thuốc Kết nghiên cứu độ ổn định, tuổi thọ thuốc dự đoán 24 tháng bảo quản điều kiện 30 ± oC/ 75 ± 5% RH điều kiện bảo quản thuốc đề nghị sau: - Thuốc ép vào vỉ nhựa o - Nhiệt độ bảo quản ≤ 30 C, độ ẩm tương đối < 70% 3.3 ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HOC 3.3.1 Xây đựng thẩm định phương pháp định lượng hoạt chất huyết tương Từ kết thẩm định độ chọn lọc - đặc hiệu, đường chuẩn khoảng tuyến tính, giới hạn định lượng dưới, độ – độ lặp lại, hiệu suất chiết, độ ổn định mẫu thử cho thấy: phương pháp xây dựng đáp ứng yêu cầu phân tích hoạt chất huyết tương theo qui định FDA Phương pháp áp dụng để định lượng cefaclor huyết tương người để nghiên cứu TĐSH viên nén cefaclor TDKD 3.3.2 Tương đương sinh học in vitro Hệ số tương tự f2 = 80,91 nên thuốc thử thuốc đối chiếu tương đương invitro 15 3.3.3 Tương đương sinh học in vivo 3.3.3.1 Kết định lượng cefaclor huyết tương Kết phân tích nồng độ cefaclor huyết tương người tình nguyện (NTN) sau uống viên ceclor viên nghiên cứu CEF Đồ thị nồng độ trung bình thuốc đối chiếu Ceclor® thuốc nghiên cứu CEF huyết tương người tình nguyện biểu diển theo đồ thị hình 3.17 Hình 3.17 Đồ thị nồng độ trung bình thuốc đối chiếu Ceclor® thuốc nghiên cứu CEF huyết tương người Bảng 3.47: Nồng độ trung bình cefaclor huyết tương (t NTN) Thi gian (gi) viờn Ceclorđ (àg/ml) viờn nghiên cứu CEF (n = 8) (µg/ml)( n = 8) 0,50 0,75 1,00 1,25 1,50 2,00 3,00 4,00 6,00 2,974 ± 1,799 3,830 ± 1,620 4,845 ± 1,614 6,999 ± 3,,532 8,062 ± 3,825 11,18 ± 3,441 12,197 ± 4,677 7,059 ± 2,314 3,856 ± 1,213 3,421 ± 1,986 4,762 ± 1,480 6,100 ± 2,321 6,622 ± 2,692 8,361 ± 3,253 10,905 ± 3,889 13,002 ± 6,281 6,884 ± 1,182 3,217 ± 1,279 16 Kết số liệu thông số dược động học sau uống thuốc nghiên cứu CEF thuốc đối chiếu Ceclor® Bảng 3.48: Số liệu thông số dược động học sau uống thuốc nghiên cứu CEF thuốc đối chiếu Ceclor® Đối tng tham gia Cmax (àg/ml) ceclor (R) đ CEF (T) Tmax(gi) đ ceclor (R) CEF (T) AUC0-6 (àg/ml).h ceclor (R) ® CEF (T) AUC0-∞ (µg/ml).h ceclor (R) ® CEF (T) MRT(h) ceclor® (R) CEF (T) 13,536 7,592 2 31,045 29,056 34,117 52,922 2,921 7,649 10,610 11,619 2 39,182 40,026 49,651 54,720 4,490 4,908 12,877 15,336 3 50,284 47,452 67,233 51,246 4,615 3,106 18,321 21,321 3 60,529 58,089 72,016 68,990 3,672 3,544 18,529 20,014 3 43,553 48,305 50,976 59,284 3,646 3,982 12,389 13,583 3 42,570 46,667 49,015 48,281 3,305 2,972 6,670 6,574 4 25,414 26,669 41,174 43,606 6,508 6,508 12,977 15,501 3 50,869 47,608 68,282 50,597 4,638 3,005 T B S D 13,239 13,943 2,875 2,875 42,931 42,984 54,058 53,706 4,224 4,459 3,871 5,289 0,641 0,641 11,272 10,558 13,713 7,686 1,121 1,765 Những giá trị thơng số dược động học cefaclor từ thuốc Ceclor® từ thuốc nghiên cứu CEF tóm tắt trình bày Bảng 3.49 Bảng 3.49: Giá trị thơng số dược động học trung bình thuốc nghiên cứu CEF thuốc đối chiếu Ceclor® Thơng số dược động học Thuốc đối chiếu Ceclor® Thuốc nghiên cứu CEF AUC0-6 (µg/ml.h) 42931 ± 11272 42984 ± 10558 AUC0-∞ (µg/ml.h) 54058 ± 13713 53706 ± 7686 Cmax (μg/ ml) 13,239 ± 3,871 13,943 ± 5,289 Tmax (giờ) 2,875 ± 0,641 2,875 ± 0,641 17 Giá trị Tmax thuốc thử thuốc chứng giống cặp số liệu xử lý phần mềm Equivtest kiểm tra lại phần mềm Viện kiểm nghiệm thuốc TP.HCM cho ta kết quả: Bảng 3.51 Kết luận phân tích phương sai giá trị thơng số DĐH Cmax AUC0-6 , AUC0-∞, Thông số AUC0-6 AUC0-∞ Cmax Tỉ số % (Thử /Chứng) 100,42 96,26 101,45 85,37 - 120,57 102,16 85,40 - 122,21 Khoảng tin cậy 90% - 104,75 Yêu cầu: 80 - 125 % Kết luận: hai thuốc tương đương sinh học Chương BÀN LUẬN 4.1 VỀ PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG Trong chế phẩm: khảo sát thẩm định quy trình định lượng phương pháp quang phổ tử ngoại phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao đạt yêu cầu cho định lượng cefaclor chế phẩm Trong huyết tương: khảo sát thẩm định quy trình định lượng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao đạt yêu cầu cho phân tích dịch sinh học Mẫu huyết tương ổn định suốt q trình phân tích va lưu trữ Ý nghĩa thực tiễn, hai phương pháp áp dụng giai đoạn nghiên cứu phát triển thuốc phòng kiểm nghiệm sở nghiên cứu, sở sản xuất, trung tâm kiểm nghiệm Đã xây dựng quy trình định lượng cefaclor huyết tương người phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, phương pháp 18 áp dụng nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng xác định tương đương sinh học chế phẩm uống (thuốc bột, thuốc viên) chứa cefaclor Ý nghĩa khoa học, phương pháp định lượng nhiều tài liệu công bố chi tiết thực nêu cách khái quát, sơ Do đó, cần thiết phải thẩm định quy trình định lượng để xác định độ tuyến tính, độ lặp lại, độ phương pháp định lượng xác định hàm lượng cefaclor huyết tương người nhằm phục vụ cho việc nghiên cứu dược động học cefaclor, nghiên cứu khảo sát thẩm định quy trình định lượng cách khoa học Ngoài ra, hai phương pháp quang phổ tử ngoại sắc ký lỏng hiệu cao cơng bố tài liệu độc lập, chưa có so sánh hai phương pháp Trong đề tài này, kết định lượng đạt từ hai phương pháp xác định khác không ý nghĩa 4.2 VỀ KỸ THUẬT BÀO CHẾ Sản phẩm kiểm nghiệm toàn diện tiêu chuẩn theo USP 29 để so sánh với kết kiểm nghiệm viên lô pilot sau Kết kiểm nghiệm cho thấy viên đạt yêu cầu chất lượng theo USP 29 Việc nâng cấp cỡ lô nhằm xác định hiệu việc xây dựng quy trình sản xuất, giảm thiểu khác biệt tính chất sản phẩm lơ labo lơ pilot Trong q trình nâng cấp cỡ lô từ quy mô labo lên quy mô pilot, tỷ lệ thành phần chất công thức không đổi so với lô labo khối lượng lớn 30 lần; thơng số quy trình 19 điều chỉnh cho tính chất sản phẩm khơng thay đổi so với lô labo Những thiết bị dùng sản xuất quy mô labo dùng cho quy mô pilot, khác thiết bị trộn dùng quy mô pilot lớn 30 lần so với quy mơ labo Do đó, giai đoạn nâng cấp cỡ lô, viên điều chế theo phương pháp xát hạt ướt, cần khảo sát thời gian trộn ban đầu thời gian trộn sau Ngoài ra, ảnh hưởng nhiều độ ẩm môi trường sản xuất nhận biết trình dập viên, bao viên đóng vỉ mà nhận biết cách rõ ràng sau thời gian thuốc bảo quản nhiệt độ cần nghiên cứu Vì ảnh hưởng độ ẩm mơi trường sản xuất tiếp tục khảo sát Chế phẩm điều chế điều kiện độ ẩm môi trường khác (20, 30, 45, 65 75 ± 5%), nhiệt độ giữ cố định 30 ± oC, đóng vỉ bảo quản o 40 ± C/ 75 ± 5% RH Kết cho thấy viên đạt độ ổn định cao điều chế điều kiện nhiệt độ ≤ 30oC độ ẩm ≤ 80% Về ý nghĩa thực tiễn nghiên cứu kỹ thuật bào chế, quy trình sản xuất viên nén chứa cefaclor xây dựng thành công với thơng số cơng thức, quy trình điều kiện môi trường sản xuất xác định Đã giải vấn đề độ ổn định chế phẩm Về ý nghĩa khoa học, kết nghiên cứu chứng minh tính khả thi phương pháp nghiên cứu phát triển thuốc: Ở quy mô labo, nghiên cứu thành phần công thức xây dựng tiêu chuẩn sản phẩm (khơng thay đổi quy trình sản xuất); quy mô pilot quy mô sản xuất, khảo sát điều kiện sản xuất (dùng công thức tối ưu không thay đổi tiêu chuẩn sản phẩm) 20 4.3 ĐỀ XUẤT TIÊU CHUẨN CƠ SỞ VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA VIÊN NÉN CEFACLOR 375 MG GIẢI PHÓNG KÉO DÀI 4.3.1 Tiêu chuẩn sở viên nén cefaclor 375 mg giải phóng kéo dài Kết qủa viên nén gởi kiểm tra Viện Kiểm Nghiệm TP HCM có kết qủa đạt theo TCCS đề xuất (dựa tiêu chuẩn USP, BP, DĐVN) tiêu chuẩn USP 29 thử độ giải phóng họat chất 4.3.2 Độ ổn định chế phẩm 4.3.2.1 Độ ổn định Độ ổn định thuốc điều kiện nhiệt độ độ ẩm nghiên cứu theo quy định hành Những mẫu thuốc từ lô thành phẩm bảo quản bao bì dự kiến đưa thị trường o nghiên cứu độ ổn định điều kiện cấp tốc 40 ± C/ 75 ± 5% RH o điều kiện dài hạn 30 ± C/ 75 ± 5% RH Dưới điều kiện dài hạn 30 ± oC/ 75 ± 5% RH, kết độ ổn định thuốc sau: - Cảm quan bên ngồi viên khơng thay đổi so với mẫu ban đầu - Hàm lượng cefaclor sau tháng bảo quản 93,83 ± 0,51% (trung bình từ lơ 4.3.2.2 Tuổi thọ thuốc Tuổi thọ thuốc xác định dựa vào hàm lượng cefaclor Tuổi thọ thuốc ước tính theo nguyên lý van’t Hoff 23 tháng o Tuổi thọ thực thuốc xác định điều kiện 30 ± C/ 75 ± 5% RH 24 tháng Kết cho thấy hoạt chất không bền tác động nhiệt độ độ ẩm, tuổi thọ ước tính từ nhiệt độ độ ẩm cao điều kiện dự kiến thuốc bảo quản khơng xác Và thuốc bảo quản điều kiện khác điều kiện ghi nhãn chất lượng thuốc không 21 đảm bảo Ý nghĩa thực tiễn, từ kết nghiên cứu độ ổn định, điều kiện bảo quản thuốc đề nghị sau: thuốc đóng vào vỉ nhựa o kháng ẩm Nhiệt độ bảo quản ≤ 30 C, độ ẩm tương đối < 80% Kết nghiên cứu đáp ứng yêu cầu phục vụ hồ sơ đăng ký lưu hành thuốc theo quy định 4 TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC IN VITRO Trong nghiên cứu phát triển thuốc generic, việc xác định tương đương sinh học yêu cầu nhằm so sánh sinh khả dụng thuốc nghiên cứu với thuốc đối chiếu Kết thử nghiệm cho phép dự đốn thuốc nghiên cứu có tương đương trị liệu với thuốc đối chiếu hay không sở cho việc lựa chọn thay thuốc Trong nghiên cứu này, viên Ceclor chọn làm thuốc đối chiếu thuốc phép lưu hành thị trường nhiều nước giới, chứng minh an toàn hiệu lâm sàng tốt nhiều bệnh nhiễm trùng Hàm lượng hoạt chất thuốc nghiên cứu thuốc đối chiếu khác không 5% , chế phẩm đạt yêu cầu cho thử nghiệm so sánh xác định tương đương sinh học Chỉ tiêu độ hòa tan dùng công cụ để nhận biết yếu tố công thức ảnh hưởng đến chất lượng sinh khả dụng thuốc dùng để chứng minh sinh khả dụng thuốc Kết thử nghiệm độ hòa tan cho thấy thuốc nghiên cứu tương đương sinh học in vitro với thuốc đối chiếu, giá trị hệ số tương tự f2 = 80,91 Hai thuốc đạt yêu cầu cho thử nghiệm tương đương sinh học in vitro 4.5 TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC IN VIVO Nghiên cứu tương đương sinh học in vivo thực điều kiện quy định kiểm soát chặt chẽ để giảm thiểu ảnh hưởng yếu tố thuốc kết thử nghiệm Tám người tình nguyện nam Việt Nam khỏe mạnh tham gia vào nghiên cứu Số lượng 22 đủ kết trung bình có độ tin cậy Tất người tình nguyện khơng hút thuốc, khơng nghiện rượu, nghiện thuốc Các thông số sinh học chức gan, thận người tình nguyện nằm giới hạn bình thường Người tình nguyện có chế độ sinh hoạt giống nhau, cung cấp thức ăn uống suốt thời gian thử nghiệm Với tiêu chuẩn hóa nêu trên, đảm bảo giảm dao động nồng độ máu khác biệt khả hấp thu thải trừ thuốc người tình nguyện Sau người tình nguyện uống thuốc, mẫu máu người tình nguyện lấy thời điểm 0, 15, 30, 45, 60, 75, 90, 120, 180, 240, 360 480 phút Khoảng cách lấy mẫu đảm bảo nồng độ thuốc tối đa máu, thời gian đạt nồng độ thuốc tối đa số tốc độ thải trừ đánh giá Số lượng mẫu đủ để xác định thông số sinh khả dụng (AUC, Cmax, Tmax) TĐSH thuốc xác định theo phương pháp trắc nghiệm bên kép cách tính khoảng tin cậy 90% thơng số sinh khả dụng trung bình thu từ thuốc nghiên cứu để so sánh với giới hạn 80-125% số liệu trung bình thu từ thuốc đối chiếu (giới hạn tương đương) - Đối với Cmax cefaclor, khoảng tin cậy 90% giá trị trung bình Cmax thuốc nghiên cứu CEF 89,145% - 120,115% nằm giới hạn tương đương 80% - 125% Vậy giá trị C max thuốc thử CEF thuốc đối chiếu Ceclor® tương đương - Đối với AUC0-6 cefaclor, khoảng tin cậy 90% giá trị trung bình AUC0-6 thuốc nghiên cứu CEF 99,080% - 108,516% nằm giới hạn tương đương 80% - 125% Vậy: giá trị AUC 0-6 thuốc thử CEF thuốc đối chiếu Ceclor® tương đương 23 - Đối với Tmax cefaclor, giá trị Tmax thuốc thử CEF thuốc đối chiếu Ceclor® hoàn toàn nên tương đương 100% Những kết chứng minh thuốc nghiên cứu tương đương sinh học in vivo với thuốc đối chiếu Về ý nghĩa thực tiễn, kết xác định TĐSH cho phép kết luận chế phẩm nghiên cứu tương đương trị liệu với Ceclor, đăng ký sản xuất thay trị liệu theo quy định thuốc generic Về ý nghĩa khoa học, lần nghiên cứu đánh giá SKD TĐSH chế phẩm chứa hoạt chất cefaclor PTKD với chế phẩm đối chiếu thực người tình nguyện Việt Nam Kết nghiên cứu góp phần làm sáng tỏ cách thiết kế thực thử nghiệm đánh giá SKD TĐSH thuốc, vấn đề bước đầu phát triển Việt Nam, vấn đề cộm ngành Dược KẾT LUẬN VỀ KỸ THUẬT BÀO CHẾ Đã xây dựng thẩm định quy trình định lượng phương pháp quang phổ tử ngoại phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao cho định lượng cefaclor chế phẩm Đã xây dựng thẩm định quy trình định lượng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao cho định lượng cefaclor huyết tương người Đã xây dựng công thức tối ưu quy trình sản xuất viên nén GPKD cefaclor 375mg phương pháp xát hạt ướt VỀ TIÊU CHUẨN CƠ SỞ VÀ ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA THUỐC Đề xuất TCCS cho viên nén GPKD cefaclor 375 mg Viên nén cefaclor 375 mg GPKD bào chế quy mô pilot đề xuất tiêu chuẩn hình thức viên, độ đồng khối lượng, hàm lượng hoạt chất, phương pháp định tính, định lượng, độ hòa tan viên 24 Đã theo dõi độ ổn định thuốc điều kiện cấp tốc điều kiện dài hạn Sau năm bảo quản điều kiện nghiên cứu độ ổn định dài hạn o 30 ± C/ 75 ± 5% RH, chế phẩm giữ độ ổn định tính chất cảm quan, hàm lượng, độ hòa tan độ ẩm Tuổi thọ thuốc ấn định 24 tháng VỀ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC Đối với huyết tương: xây dựng thẩm định quy trình định lượng cefaclor huyết tương người phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao đạt yêu cầu cho phân tích dịch sinh học Mẫu huyết tương ổn định suốt trình phân tích lưu trữ TĐSH in vitro: thuốc nghiên cứu có độ hòa tan tương đương với thuốc Ceclor TĐSH in vivo: xác định thông số SKD thuốc nghiên cứu sau cho uống liều đơn NTN khỏe mạnh sau: Cefaclor: Cmax = 13,986 μg/ ml, AUCo-t (µg/ml.h) = 169769, T max = 2,875 Bằng phương pháp trắc nghiệm bên kép đưa đến kết luận thuốc nghiên cứu CEF TĐSH invivo với thuốc đối chiếu Ceclor KIẾN NGHỊ Thẩm định quy trình sản xuất lơ sản xuất cơng nghiệp để chứng minh tính lặp lại kiểm sốt mặt thống kê quy trình sở sản xuất theo quy định GMP Tiếp tục theo dõi đánh giá độ ổn định thuốc điều kiện bảo quản lưu hành thực tế thị trường Việt Nam 25 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CÔNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN Trần Xuân Trí, Nguyễn Minh Chính, Bùi Tùng Hiệp (2013), “Khảo sát phương pháp định lượng hoạt chất cefaclor ”, Tạp chí Y học Việt Nam, 405(1), tr 26 -32 Trần Xuân Trí, Nguyễn Minh Chính, Bùi Tùng Hiệp (2013), “Xây dựng công thức bào chế viên phóng thích kéo dài hoạt chất cefaclor 375 mg”, Tạp chí Y học Việt Nam, 405(2), tr 110 - 114 ... tiêu nghiên cứu: Bào chế viên nén cefaclor 375 mg giải phóng kéo dài quy mơ phòng thí nghiệm Đề xuất tiêu chuẩn sở bước đầu đánh giá độ ổn định chế phẩm Bước đầu đánh giá tương đương sinh học chế. .. giải phóng kéo dài, số dạng thuốc giải phóng kéo dài đường uống, ưu nhược điểm thuốc giải thích kéo dài, tá dược dùng cho viên giải phóng kéo dài Phần nghiên cứu cefaclor bào chế viên cefaclor giải. .. nhanh 3.1.3 Bào chế viên cefaclor giải phóng kéo dài 3.1.3.1 Nghiên cứu lựa chọn tá dược bào chế viên nén cefaclor giải phóng kéo dài Dựa theo bào chế số công thức cấu trúc dạng viên qua thực