Các dẫn xuất Furocoumarin từ rễ Angelicae Dahuricae (Bạch chỉ) ảnh hưởng chúng tới điều hòa phiên mã gene RXRα I Giới thiệu II.Thực nghiệm III.Kết & thảo luận IV.Kết luận I Giới thiệu • Rễ Angelica Dahurica (Bạch Chỉ), sử dụng rộng rãi y học truyền thống Trung Quốc cho bệnh như: đau răng, đau đầu, ho, hen suyễn, sổ mũi … I Giới thiệu • • • Nhiều nghiên cứu gần tập trung vào tác dụng chống ung thư coumarin chiết xuất từ rễ Angelicae Dahuricae, khả điều hòa phiên mã gene RXRα Trong 18 coumarin tìm thấy, 13, 16, 18 (mỗi chất 20µM) làm tăng đáng kể chức phiên mã gen nuclear receptor RXRα Trong đó, 7-9, 13, 14 & cấu trúc – ( thứ 20 µM) giảm rõ rệt phiên mã RXRα kích thích 9-cis-retionid acid I Giới thiệu • X receptor-α(RXRα) Retinoid thành phần nhóm nuclear receptor nhân tố phiên mã ligand-ativated thành phần heterodimer bắt buộc cho nuclear receptor khác • Nó đóng vai trò mấu chốt nhiều q trình sinh học khác ung thư, tiểu đường, béo phì, xơ vữa động mạch II Thực nghiệm Vật liệu • Rễ khơ Angelicae Dahuricae (Bạch chỉ), xuất xứ: Trung Quốc • Plasmid (pBind RXRα LBD pG5 luc) cung cấp từ Viện Burnham, Medical Research, Trung tâm Ung thư, La Jolla, CA, USA • Tế bào phôi người 293T II Thực nghiệm Ly trích & lập Mẫu nghiền trích dịch chiết, đun hồi lưu ethanol 60% Dịch hòa tan EtOAc sau tinh qua hàng loạt bước sắc kí cột sillicagel , YMC gel ODS rửa methanol, MeOH-H2O II Thực nghiệm Cấu trúc tế bào phương pháp phân tích Dual – Luciferase reporter Gene • Tế bào phơi người 293T ni DMEM trung bình chứa 10% huyết bào thai bò (FBS) • Tế bào chuyển nạp với hai plasmid, 30 ng pBind RXRα LBD 60 ng pG5 luc sử dụng Lipofectamine 2000 (Invitrogen) II Thực nghiệm Cấu trúc tế bào phương pháp phân tích Dual – Luciferase reporter Gene • • 24 sau, tế bào tiếp xúc với hợp chất thử nghiệm 12 h Sau đó, tế bào rửa PBS phân giải với đệm passive lysis buffer (1 × PLB) máy rocking platform 15 phút II Thực nghiệm Cấu trúc tế bào phương pháp phân tích Dual – Luciferase reporter Gene • Các hoạt động Firefly luciferase Rellina luciferase kiểm tra hệ thống phân tích Dual-Luciferase Reporter • Tỷ lệ hoạt động Firefly luciferase Rellina luciferase sở để đánh giá hoạt động phiên mã RXRα III Kết & thảo luận • Sắc kí dịch chiết EtOAc-soluble rễ Angelicae Dahuricae cho Furocoumarin 1, với 17 Furocoumarin khác 2-18 III Kết & thảo luận III Kết & thảo luận • Hợp chất thu dạng bột trắng vô định hình Cơng thức phân tử C17H6O5, thành lập phương pháp phân tích quang phổ, HR – ESI – MS III Kết & thảo luận • • • Quang phổ IR -> nhóm α,β-unsaturated lactone, & α,β-unsaturated carbonyl Quang phổ H-NMR -> methyl, methoxyl, olefinic & methylene proton Quang phổ 13 C-NMR & DEPT ->18 carbon, bao gồm methyl, methoxyl, olefinic methane, ketone carbonyl & quarternary carbon III Kết & thảo luận • Tất hợp chất phân lập dẫn xuất furocoumarin Tác dụng chúng lên hoạt động phiên mã RXRα đánh giá thông qua hệ thống phân tích Dual – Luciferase reporter • 9-cis-retinoid acid (9-cis-RA) biết đến rộng rãi yếu tố tăng cường phiên mã III Kết & thảo luận Tế bào chuyển gene 293T xử lý với hợp chất ( 20 µM) – cis – retinoid acid (RA) (0.1 µM) 12h Hoạt động Firefly luciferase Rellina luciferase đo đạc Mức độ ảnh hưởng từ hoạt động luciferase tính tốn thơng qua tỉ lệ hoạt động Firefly luciferase Rellina luciferase RA sử dụng yếu tố kiểm soát dương III Kết & thảo luận • Trong hợp chất ly trích được, 18 (20 µM) tăng đáng kể (P < 0.01) kích hoạt phiên mã RXRα, 13 16 (20 µM) cho thấy ảnh hưởng yếu (P < 0.05) tăng cường phiên mã III Kết & thảo luận • 18 với ảnh hưởng phụ thuộc nồng độ khoảng 10 – 40 µM III Kết & thảo luận • – , 13, 14 hợp chất (mỗi loại 20 µM) cho thấy giảm đáng kể ảnh hưởng hoạt động luciferase kích thích – cis – RA so với sử dụng – cis – RA III Kết & thảo luận Xử lí đồng thời – cis – Retinoid acid hợp chất thu IV Kết luận • • • Trong số dẫn suất furocoumarin, hợp chất 1, hợp biết 79, 13, 14, 16 18 cho thấy tiềm hoạt động việc điều chỉnh chức kích hoạt phiên mã RXRα Furocoumarin đem lại phương thức việc chống lại bệnh nan y có liên quan đến RXRα, ví dụ chống ung thư chống bệnh tiểu đường Các hoạt động sinh học chất chuyển hóa chế phân tử hoạt động Furocoumarin liên quan đến RXRα nuclear receptor nghiên cứu kĩ tương lai Tài liệu tham khảo • Furocoumarin Derivatives from Radix Angelicae Dahuricae and Their Effects on RXRα Transcriptional Regulation Dong-Ping Liu , Qiang Luo, Guang-Hui Wang, Yang Xu , Xiao-Kun Zhang, Quan-Cheng Chen and Hai-Feng Chen ... coumarin chiết xuất từ rễ Angelicae Dahuricae, khả điều hòa phiên mã gene RXRα Trong 18 coumarin tìm thấy, 13, 16, 18 (mỗi chất 20µM) làm tăng đáng kể chức phiên mã gen nuclear receptor RXRα Trong... µM) tăng đáng kể (P < 0.01) kích hoạt phiên mã RXRα, 13 16 (20 µM) cho thấy ảnh hưởng yếu (P < 0.05) tăng cường phiên mã III Kết & thảo luận • 18 với ảnh hưởng phụ thuộc nồng độ khoảng 10 40... luciferase sở để đánh giá hoạt động phiên mã RXRα III Kết & thảo luận • Sắc kí dịch chiết EtOAc-soluble rễ Angelicae Dahuricae cho Furocoumarin 1, với 17 Furocoumarin khác 2-18 III Kết & thảo