1 MỞ ĐẦU Virus cúm thể độc lực cao (Highly pathogenic avian influenza - HPAI) H5N1 thuộc type A, họ Orthomyxoviridae, chủng có khả gây tử vong cao 50% gia cầm bị nhiễm Dịch cúm gia cầm H5N1 xuất nhiều quốc gia châu Á, châu Âu, châu Phi thực mối đe dọa nghiêm trọng toàn cầu Từ dịch cúm gia cầm H5N1 xuất tới nay, giới có 250 triệu gia cầm bị tiêu hủy, gây thiệt hại nặng nề kinh tế cho ngành chăn nuôi Đặc biệt, không gây bệnh gia cầm, virus cúm A/H5N1 có khả lây truyền từ gia cầm sang người Theo thống kê Tổ chức Y tế Thế gới, từ tháng 01/2003 đến tháng 12/2016 có 856 trường hợp mắc cúm A/H5N1, 452 trường hợp tử vong, chiếm 52,8% (www.wpro.who.int/emerging_diseases/AvianInfluenza/en) Với độc lực mạnh, khả đột biến lớn, số lượng vật chủ không ngừng tăng lên, virus H5N1 trở thành mối đe dọa đại dịch xảy tồn cầu Do đó, việc nghiên cứu tìm biện pháp dự phòng điều trị virus cúm A/H5N1 vô cấp bách Dịch cúm gia cầm A/H5N1 bùng phát Việt Nam vào cuối năm 2003 tỉnh phía Bắc, sau nhanh chóng lan tới hầu hết tỉnh/thành nước thời gian ngắn, hàng triệu gia cầm bị chết tiêu hủy gây thiệt hại lớn mặt kinh tế cho ngành chăn nuôi Sử dụng vắc xin cho gia cầm xem biện pháp hữu hiệu để ngăn chặn lan truyền virus cúm giảm thiểu thiệt hại virus cúm gây ngành chăn nuôi Hai loại vắc xin thương mại sử dụng rộng rãi giới để tiêm phòng cho gia cầm vắc xin bất hoạt vắc xin sống nhược độc sử dụng vector virus làm dẫn truyền Cúm A/H5N1 vấn đề có tính thời Việt Nam, vắc xin phòng cúm A/H5N1 ứng dụng 10 năm, năm dịch bệnh xảy có nguy phân type (H5N6, H5N2, H7N9) xâm nhập Virus cúm gia cầm biến đổi liên tục tạo nên clade nên việc tiếp tục nghiên cứu để có công nghệ sản xuất vắc xin hiệu hơn, dễ tự động hóa hơn, cho phép thích ứng nhanh với biến thể virus cần thiết Các nhà khoa học nỗ lực nghiên cứu tạo loại vắc xin khác vắc xin đơn vị, vắc xin DNA, vắc xin sống nhược độc để đáp ứng yêu cầu phòng chống dịch cúm gia cầm cách triệt để Việc nghiên cứu sản xuất kháng nguyên HA để tạo vắc xin đơn vị góp phần đa dạng hóa cơng nghệ sản xuất vắc xin; không phụ thuộc vào nguồn cung cấp phôi trứng gà; cho phép phân biệt gia cầm tiêm vắc xin gia cầm nhiễm bệnh ngồi mơi trường giám sát huyết thanh; sản xuất thời gian ngắn, đáp ứng yêu cầu phòng chống dịch bệnh có biến chủng xảy Xuất phát từ yêu cầu sở khoa học trên, thực đề tài: “Nghiên cứu biểu kháng nguyên hemagglutinin (HA) tái tổ hợp virus cúm A/H5N1 đánh giá tính sinh miễn dịch gà” với mục tiêu: - Biểu kháng nguyên HA tái tổ hợp virus cúm A/H5N1 - Đánh giá tính sinh miễn dịch gà protein HA tái tổ hợp, làm sở để tạo vắc xin phòng cúm A/H5N1 Nội dung nghiên cứu đề tài (1) Nghiên cứu biểu kháng nguyên HA hệ biểu E coli BL21 - Biểu gen ha1, ha1-2 tế bào E coli BL21 - Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố nhiệt độ, IPTG đến biểu gen - Tinh chế kiểm tra tính kháng nguyên protein tái tổ hợp (2) Nghiên cứu biểu kháng nguyên HA tế bào nấm men P pastoris - Nghiên cứu biểu kháng nguyên HA dạng dung hợp với Trx có vị trí cắt thrombin (T) enterokinase (E) (Trx-TE-HA) - Nghiên cứu cải biến mã ba biểu kháng nguyên HA1 nấm men P pastoris - Nghiên cứu biểu kháng ngun HA dạng dung hợp trx khơng có trình tự cắt enterokinase thrombin (3) Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố lên trình biểu protein HA tái tổ hợp; lên men thu hồi protein HA tái tổ hợp (4) Đánh giá tính sinh miễn dịch gà protein HA tái tổ hợp Đóng góp mới luận án Luận án cơng trình Việt Nam nghiên cứu biểu kháng nguyên HA tái tổ hợp virus cúm A/H5N1 E coli nấm men P pastoris, làm sở để tạo vắc xin phòng cúm A/H5N1 Từ cấu trúc thiết kế biểu gen khác nhau, với nhiều chủng biểu điều kiện biểu khác chọn chủng nấm men P pastoris SMD1168 biểu TrxHA1 Sản lượng HA tổng hợp nồi lên men đạt 84 mg/l Hiệu giá HI trung bình huyết gà sau tuần gây miễn dịch nhắc lại với 100 g TrxHA1 tái tổ hợp qua đường tiêm da cổ đạt 7-7,2 log2, hiệu giá HI sau tuần gây miễn dịch nhắc lại đường nhỏ mắt mũi đạt 6,6 - 7,0 log2 Hiệu giá HI huyết gà gây miễn dịch với protein HA tái tổ hợp tương đương với hiệu giá HI huyết gà tiêm vắc xin bất hoạt Re-1 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ VIRUS CÚM A/H5N1 1.1.1 Cấu trúc virus cúm A Virus cúm thuộc họ Orthomyxoviridae, gồm type A, B, C virus cúm type A có nhiều type huyết khác chủ yếu gây bệnh cho người, động vật chim, gia cầm, lợn Các hạt virus cúm A (virion) có hình cầu hình khối đa diện, đường kính 80 -120 nm, đơi có dạng hình sợi, khối lượng phân tử khoảng 250 triệu Da (Hình 1.1A) Kết phân tích thành phần hóa học virion cho thấy RNA chiếm khoảng 0,8 - 1,1%, protein chiếm khoảng 70 74%; lipid - 8% lại carbonhydrate Hạt virus có cấu tạo đơn giản gồm vỏ (capsid), vỏ bọc (envelope) lõi RNA sợi đơn âm Hệ gen virus cúm A, B có sợi RNA âm (PA, PB1, PB2, HA, NA, M, NP NS) tổng kích thước khoảng kb mã hóa cho 15 loại protein khác (Hình 1.1B) (Palese, 2007; Amorij, 2008) A B Hình 1.1: Hình thái cấu trúc virus cúm A (Nguồn: WHO; Amorij, 2008) Các đoạn PA, PB1, PB2 mã hóa enzyme phức hợp polymerase (RNA transcriptase) virus, có độ dài ổn định có tính bảo tồn cao Phân đoạn HA NA (neuraminidase) mã hóa cho protein bề mặt virus Hai protein có tính kháng ngun đặc trưng cho chủng virus cúm A Đoạn NP mã hóa cho nucleoprotein (NP) - thành phần phức hệ phiên mã, chịu trách nhiệm vận chuyển RNA nhân bào tương tế bào chủ Phân đoạn M mã hóa cho protein đệm - matrix protein virus gồm hai tiểu phần M1 M2 tạo khung đọc mở khác phân đoạn RNA Protein M1 protein nền, thành phần virus có chức bao bọc RNA tạo nên phức hợp ribonucleoprotein tham gia vào trình “nảy chồi” virus Protein M2 chuỗi polypeptide ngắn, có khối lượng phân tử khoảng 11 kDa, protein M2 đâm xun nhơ khỏi vỏ ngồi, chịu trách nhiệm tháo vỏ virus giải phóng hệ gen virus vào bào tương tế bào chủ trình xâm nhiễm (Palese, 2007; Bouvier, 2008; Neumann, 2009) Hiện nay, nhà khoa học phát 18 loại kháng nguyên HA (H1H18) 11 loại kháng nguyên NA (N1-N11) (Tong, 2013) Trong lịch sử ghi nhận phân type H1, H2, H3 N1, N2 gây bệnh cho người Gần phân type H5, H7, H9 gây bệnh cho người với mức độ nguy hiểm (Li, 2015; Bui, 2016) Bệnh dịch chủng H5N1 gây có khả lây lan cao động vật lông vũ, gây chết hàng loạt chim gia cầm (Webster, 2002; Schrauwen, 2014; Webster, 2014) 1.1.2 Chu trình tái virus cúm A Quá trình xâm nhiễm nhân lên virus xảy chủ yếu tế bào biểu mơ đường hơ hấp, đường tiêu hóa thể vật chủ (Nicholson, 2003; Palese, 2007; Neumann, 2009; de Graaf, 2014) Các giai đoạn trình xâm nhiễm sau (Hình 1.2): Giai đoạn - giai đoạn hấp phụ: hạt virus gắn với tế bào chủ thông qua liên kết phân tử HA với thụ thể có chứa nhóm sialic acid bề mặt tế bào chủ Virus cúm gia cầm gắn đặc hiệu với thụ thể sialic acid α 2-3 galactose (SAα2-3Gal) virus cúm người gắn đặc hiệu với thụ thể sialic acid α 2-6 galactose (SAα2-6Gal) (de Graaf, 2014) Do có tính đặc hiệu với thụ thể nên virus cúm gia cầm dễ dàng lây nhiễm sang người ngược lại, hình thành rào cản lồi, thu hẹp khả lây nhiễm virus vật chủ định Ở số động vật (như lợn, gà ) có hai loại thụ thể nên bị nhiễm virus cúm gia cầm virus cúm người (Schrauwen, 2014; Neumann, 2015) Hình 1.2: Chu trình xâm nhiễm chép virus cúm A (Nguồn: Neumann, 2009) Trong thể vật chủ cảm nhiễm, khả bám gắn gây bệnh virus cúm tùy thuộc vào mơ quan Nhìn chung, virus cúm A có tính thích ứng lây nhiễm với biểu mô đường hô hấp gây bệnh chủ yếu đường hô hấp (de Graaf, 2014) Tuy nhiên, khả liên kết virus cúm với tế bào chủ phụ thuộc vào hoạt tính neuraminidase niêm mạc đường hơ hấp có lớp mucin bao phủ, tạo nên hàng rào mà virus phải xuyên qua để gắn với tế bào Lớp mucin chứa nhiều sialic acid hình thành mạng lưới có tác dụng ngăn cản virus bám vào bề mặt tế bào (Sanders, 2010) Nhờ hoạt tính sialidase phân cắt nhóm sialic acid mà neuraminidase giúp cho virus tiếp cận với tế bào cảm nhiễm bên đường hô hấp Giai đoạn - xâm nhập tế bào: virus xâm nhập vào tế bào chủ yếu đường ẩm bào Sau virus gắn vào tế bào, màng tế bào lõm lại hình thành túi bao bọc virus Túi khép kín lại, sau tách khỏi màng tế bào tạo thành túi nội bào (endosome) Để tránh bị phân hủy môi trường pH thấp endosome, protein M2 hoạt động mạnh, bơm ion H+ vào hạt virus Giai đoạn - tháo vỏ virus: dòng chảy ion H+ từ lòng túi ẩm bào vào hạt virus làm lớp protein M1 bị phá vỡ tách khỏi phức hợp RNP Hoạt động kênh ion H+ làm thay đổi cấu trúc không gian HA bộc lộ peptide chịu trách nhiệm hòa tan vỏ, nhờ vỏ virus dung hợp với màng endosome giải phóng phức hợp RNP vào bào tương tế bào Giai đoạn - tổng hợp RNA protein virus: Phức hợp RNP vận chuyển vào nhân tế bào để phiên mã tạo mRNA Phân tử mRNA phiên mã nhân từ chuỗi RNA sợi đơn (-) virus sử dụng mồi đoạn 10-13 nucleotide cắt từ đầu 5’ mRNA có gắn mũ vật chủ, sau gắn polyA lấy từ mRNA tế bào chủ Enzyme cắt mồi endonuclease virus mang theo mRNA hoàn thiện virus khỏi nhân, vào bào tương để tiến hành tổng hợp protein Kết trình phiên mã từ đoạn RNA hệ gen tạo 15 phân tử protein Trong nhân tế bào, RNA hệ gen virus tổng hợp nên sợi dương từ khuôn sợi âm hệ gen virus, từ sợi dương chúng tổng hợp nên RNA hệ gen virus nhờ RNA - polymerase Các sợi không adenine hóa (gắn thêm adenine) gắn mũ đầu 5’ 3’, chúng kết hợp với nucleoprotein (NP) tạo thành phức hợp ribonucleoprotein hoàn chỉnh vận chuyển tế bào chất Đây đặc điểm khác biệt so với virus khác (quá trình xảy tế bào chất vật chủ) Các protein PB1, PB2, PA, NP virus sau tổng hợp đưa vào nhân tế bào kết hợp với RNA virus hình thành phức hợp RNP, sau phức hợp lại đưa trở lại bào tương Các protein khác (HA, NA, M2) glycosyl hóa mạng lưới nội chất phức hệ Golgi tế bào Giai đoạn - lắp ráp giải phóng virus khỏi tế bào: sau trải qua cải biến sau dịch mã, protein HA, NA M2 đưa đến màng tế bào chủ gắn với lớp lipid kép Khi mật độ protein màng đủ lớn phức hợp RNP protein M2 tập hợp lại màng tế bào Sau phân đoạn RNA hệ gen thành phần khác tập hợp đầy đủ phức hợp RNP, protein vỏ virus protein M1 lắp ráp lại với để hình thành hạt virus hệ Các virus hình thành gắn vào màng tế bào liên kết HA với nhóm sialic acid màng tế bào Các hạt virus sau giải phóng theo chế nảy chồi khỏi màng tế bào nhờ tác dụng cắt nhóm axit sialic neuraminidase 1.1.3 Kháng nguyên virus cúm A/H5N1 1.1.3.1 Kháng nguyên HA HA kháng nguyên bề mặt quan trọng virus cúm A phân đoạn gen mã hóa Ở virus cúm A/H5N1 phân đoạn có kích thước 1776 bp, vùng mã hóa cho protein H5 khoảng 1698 - 1710 bp tùy thuộc vào chủng virus (Xiong, 2013; Nguyễn Thị Bích Nga, 2011) Về cấu tạo, phân tử HA có dạng trimer, gồm phân tử protein HA0 (Hình 1.3) Khối lượng phân tử HA0 70 - 75 kDa HA0 chia thành hai tiểu đơn vị HA1 (36 kDa) HA2 (27 kDa) Vị trí liên kết thụ thể Peptid dung hợp Vỏ virus Hình 1.3: Mơ hình cấu trúc bậc bậc hemagglutinin (Nguồn: Amorij, 2008) Tiểu phần HA1 kết thúc nhóm amino, chứa số vị trí gắn gốc đường, vị trí gắn thụ thể tế bào chủ vị trí định kháng nguyên (Amorij, 2008) Phần lớn cấu trúc bậc hai HA1 phiến β cuộn xoắn lại tạo thành vùng hình cầu phân tử HA Tiểu phần HA2 kết thúc nhóm carboxyl, chứa phần xuyên màng peptit dung hợp màng Cấu trúc bậc hai HA2 đoạn xoắn  kết hợp với tạo thành vùng dạng sợi, gắn với vỏ virus Cấu trúc HA0 bền vững nhờ cầu nối disulfide tiểu phần HA1 HA2 Protein HA tổng hợp dạng polypeptide HA0 mạng lưới nội chất, chúng tập hợp lại thành dạng trimer Sau đó, chúng vận chuyển tới bề mặt tế bào thông qua máy Golgi Tại bề mặt tế bào enzym protease tế bào chủ phân cắt HA0 thành HA1 HA2 (Sriwilaijaroen, 2012) Vùng nối HA1 HA2 có chứa amino acid kiềm tính vùng phân cắt hai tiểu đơn vị protein HA0 tác dụng protease Trình tự amino acid vùng phân cắt HA có vai trò định độc lực virus (Velkov, 2013) Ở chủng virus, điển hình H5N1 thể độc lực cao, chuỗi amino acid kiềm tính vùng phân cắt HA nhận biết protease nội bào phổ biến, giúp virus lây nhiễm tái nhiều mô quan khác thể vật chủ gây nên triệu chứng toàn thân nặng nề (Perdue, 2000; Luczo, 2015) Ngược lại, vị trí phân cắt hai tiểu phần HA1, HA2 chủng virus thể độc lực thấp có amino acid kiềm Arg số amino acid kiềm vị trí -3 - nên chịu tác dụng protease ngoại bào (trypsin-like) Do đó, virus H5N1 thể độc lực thấp nhân lên mơ quan có enzym đường tiêu hóa đường hơ hấp (Steinhauer, 1999; Gambotto, 2008) Có khoảng 400 phân tử HA bề mặt capsid virus HA có vai trò quan trọng q trình nhận diện, gắn vào tế bào chủ khởi động trình xâm nhiễm virus vào tế bào chủ (Bender, 1999) Sự xâm nhiễm virus khởi đầu kết hợp đặc hiệu HA virus với thụ thể bề mặt tế bào vật chủ, sau vỏ virus hòa với màng tế bào giải phóng RNA hệ gen vào tế bào vật chủ Quá trình kết hợp phụ thuộc vào phù hợp cấu hình không gian thụ thể chứa sialic acid tế bào đích với vị trí gắn với thụ thể phân tử HA virus cúm, định xâm nhiễm dễ dàng virus loài vật chủ khác Vị trí amino acid 226 (aa226) tiểu đơn vị HA1 xác định vị trí định phù hợp gắn HA với thụ thể đặc hiệu Ở hầu hết chủng virus cúm A 10 lưu hành tự nhiên vị trí glycine, thích ứng với thụ thể Gal α-2,3 sialic acid (chứa sialic acid liên kết với nhóm hydroxyl (4-OH) galactose góc quay α-2,3) tế bào biểu mơ đường hô hấp chim gia cầm (vật chủ tự nhiên virus cúm A) (Gamblin, 2010) Ngoài ra, số vị trí amino acid khác glutamine 222, glycine 224, hay cấu trúc SGVSS NGQSGR có liên quan chặt chẽ đến khả thích ứng với thụ thể chứa sialic acid bề mặt màng tế bào chủ (Schrauwen, 2014; Luczo, 2015) 1.1.3.2 Kháng nguyên NA Neuraminidase (sialidase), enzyme có chất glycoprotein gắn bề mặt capsid virus cúm A Gen mã hóa cho protein NA có chiều dài thay đổi theo phân type virus cúm A Ở virus cúm H5N1, gen na có kích thước thay đổi khoảng 1350–1410 bp (Baigent, 2001; Wagner, 2002; Keawcharoen, 2005; Nguyễn Thị Bích Nga, 2011; Xiong, 2013) NA có khối lượng phân tử khoảng 53 kDa, có cấu trúc hình nấm, bao gồm đầu chứa tiểu đơn vị có đoạn peptide kị nước cắm sâu vào vỏ virus, tiểu đơn vị tạo thành trung tâm hoạt động enzyme NA chứa chuỗi polypeptide đơn hướng phía đối diện với kháng nguyên HA Chuỗi gồm amino acid có tính bảo thủ cao, chứa amino acid ưa nước (Castrucci, 1993; Shtyrya, 2009) Enzyme NA cắt đứt liên kết gốc sialic acid màng tế bào nhiễm với phân tử carbohydrate protein HA, giải phóng hạt virus khỏi màng tế bào nhiễm, đẩy nhanh lây nhiễm virus thể vật chủ ngăn cản tập hợp hạt virus màng tế bào Mặt khác, NA tham gia vào phân cắt liên kết giai đoạn “hòa màng”, đẩy nhanh q trình “cởi áo” (uncoating) giải phóng hệ gen virus vào bào tương tế bào nhiễm, giúp cho trình nhân lên virus diễn nhanh (Wagner, 2002) Ngoài ra, NA phân cắt liên kết glycoside, giải phóng neuraminic acid làm tan, lỗng màng nhầy bề mặt biểu mơ đường hơ hấp tạo điều kiện cho virus nhanh chóng tiếp cận tế bào biểu mơ khỏi chất ức chế khơng đặc hiệu Cùng với vai trò kháng nguyên HA, khâu tác động NA tham gia làm gia tăng độc lực gây bệnh 117 51 Galarza JM, Latham T, Cupo A (2005) Virus-like particle (VLP) vaccine conferred complete protection against a lethal influenza virus challenge Viral Immunol 18(1): 244-251 52 Gamblin SJ, Skehel JJ (2010) Influenza hemagglutinin and neuraminidase membrane glycoproteins J Biol Chem 285(37): 28403-28409 53 Gambotto A, Barratt-Boyes SM, de Jong MD, Neumann G, Kawaoka Y (2008) Human infection with highly pathogenic H5N1 influenza virus Lancet 371(9622): 1464-1475 54 Gao M, Soloff AC, Lu X, Montecalvo A, Nguyen DC, Matsuoka Y, Robbins PD, Swayne DE, Donis RO, Katz JM, Barratt-Boyes SM, Gambotto A (2006) Protection of mice and poultry from lethal H5N1 avian influenza virus through adenovirus-based mmmunization J Virol 80(4):1959-1964 55 Gao M, Shi Z (2013) Process Control and Optimization for Heterologous Protein Production by Methylotrophic Pichia pastoris Chin J Chem Eng 21(2) 216-226 56 Ge J, Deng G, Wen Z, Tian G, Wang Y, Shi J, Wang X, Li Y, Hu S, Jiang Y, Yang C, Yu K, Bu Z, Chen H (2007) Newcastle disease virus-based live attenuated vaccine completely protects chickens and mice from lethal challenge of homologous and heterologous H5N1 avian influenza viruses J Virol 81(1):150-158 57 Gellissen G (2000) Heterologous protein production inmethylotrophic yeasts Appl Microbiol Biotechnol 54: 741-750 58 Gleeson MA, White CE, Meininger DP, Komives EA (1998) Generation of protease-deficient strains and their use in heterologous protein expression Methods Mol Biol 103: 81-94 59 Gonỗalves AM, Pedro AQ, Maia C, Sousa F, Queiroz JA, Passarinha LA (2013) Pichia pastoris: a recombinant microfactory for antibodies and human membrane proteins J Microbiol Biotechnol 23(5): 587-601 60 Gopal GJ, Kumar A (2013) Strategies for the production of recombinant protein in Escherichia coli Protein J 32(6): 419-425 61 Grgacic EV, Anderson DA (2006) Virus-like particles: passport to immune recognition Methods 40(1): 60-65 62 Gustafsson C, Govindarajan S, Minshull J (2004) Codon bias and heterologous protein expression Trends Biotechnol 22(7): 346-353 118 63 Halbherr SJ, Ludersdorfer TH, Ricklin M, Locher S, Berger Rentsch M, Summerfield A, Zimmer G (2015) Biological and protective properties of immune sera directed to the influenza virus neuraminidase J Virol 89(3): 1550-1563 64 Lê Huy Hàm (2011) Nghiên cứu tạo giống bèo tái tổ hợp mang kháng nguyên H5N1 phòng chống bệnh cúm gia cầm Báo cáo tổng kết đề tài 147149 Viện Di truyền nông nghiệp, Bộ NN PTNT 65 Trần Xuân Hạnh (2012) Sản xuất vaccine cúm gia cầm NAVET-VIFLUVAC, chủng NIBRG-14 Việt Nam Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y 3: 89-93 66 Trần Xuân Hạnh; Tô Thị Phấn; Đỗ Thanh Thủy; Phạm Sĩ Tú; Tơ Long Thành; Tống Hữu Hiền; Nguyễn Hồng Đăng; Đàm Thị Vui (2013) Thử hiệu lực vacxin Navet-Vifluvac phòng bệnh cúm A/H5N1 Clade 1.1 2.3.2.1c phương pháp cơng cường độc tiếp xúc trực tiếp Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y 5: 22-29 67 Hanson A, Imai M, Hatta M, McBride R, Imai H, Taft A, Zhong G, Watanabe T, Suzuki Y, Neumann G, Paulson JC, Kawaoka Y (2016) Identification of Stabilizing Mutations in an H5 Hemagglutinin Influenza Virus Protein J Virol 90(6): 2981-2992 68 Nguyễn Lê Khánh Hằng, Lê Thị Quỳnh Mai (2016) Đặc điểm vi rút cúm A/H5N1 A/H5N6 gia cầm Việt Nam, 2012-2015 Tạp chí Y học dự phòng 10(183): 126-133 69 Nguyễn Lê Khánh Hằng, Ứng Thị Hồng Trang (2016) Tình trạng nhiễm vi rút cúm gia cầm khoẻ mạnh thu thập chợ buôn bán, giết mổ gia cầm Hà Nội, 2012-2014 Tạp chí Y học dự phòng 10 (183): 119-125 70 Hervé PL, Lorin V, Jouvion G, Da Costa B, Escriou N (2015) Addition of Nglycosylation sites on the globular head of the H5 hemagglutinin induces the escape of highly pathogenic avian influenza A H5N1 viruses from vaccineinduced immunity Virology 486: 134-145 71 Nguyễn Thị Minh Hiền, Lê Văn Hiệp, Lê Văn Bé, Nguyễn Thị Lan Phương, Trần Ngọc Nhơn, Đặng Thị Hồng Vân (2009) Nghiên cứu sản xuất vaccine cúm A/H5N1 cho người trứng gà có phơi từ chủng NIBRG-14 Tạp chí Y học dự phòng 2: 83-89 72 Hilleman MR (2002) Realities and enigmas of human viral influenza: pathogenesis, epidemiology and control Vaccine 20(25-26): 3068-2087 119 73 Hirota K, Murata M, Sachi Y, Nakamura H, Takeuchi J, Mori K, Yodoi J (1999) Distinct roles of thioredoxin in the cytoplasm and in the nucleus A two-step mechanism of redox regulation of transcription factor NF-kappaB J Biol Chem 274(39): 27891-27897 74 Nguyễn Thị Hoa, Đồng Văn Quyền (2015) Nghiên cứu tạo Baculovirus tái tổ hợp biểu hemagglutinin (HA) virus cúm A/H5N1 clade 2.3.2.1b Tạp chí Cơng nghệ sinh học 37(1): 103-109 75 Lê Thanh Hoà, Đoàn Thị Thanh Hương (2011) Nghiên cứu virus cúm A/H5N1 Việt Nam Thái Lan: Dịch tễ phân tử, chẩn đoán vaccine phòng chống Báo cáo tổng hợp Kết khoa học Công nghệ đề tài Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm khoa học Công nghệ Việt Nam 76 Holsinger LJ, Nichani D, Pinto LH, Lamb RA (1994) Influenza A virus M2 ion channel protein: a structure-function analysis J Virol 68(3):.1551-1563 77 Horimoto T, Kawaoka Y (2006) Strategies for developing vaccines against H5N1 influenza A viruses Trends Mol Med 12(11): 506-514 78 Houser K, Subbarao K (2015) Influenza vaccines: challenges and solutions Cell Host Microbe 17(3): 295-300 79 Phạm Thanh Hồng, Nguyễn Văn Khoa, Cao Thị Bảo Vân (2015) Biểu protein Hemagglutinin vi rút cúm A/H5N1 hệ thống Baculovirus tế bào Sf9 (Spodoptera frugiperda) ni cấy huyền phù Tạp chí Y học dự phòng (165): 174-180 80 Hu H, Gao J, He J, Yu B, Zheng P, Huang Z, et al (2013) Codon Optimization Significantly Improves the Expression Level of a Keratinase Gene in Pichia pastoris PLoS One 8(3): 10.1371/journal.pone.0058393 81 Hu ZP, Yin J, Zhang YY, Jia SY, Chen ZJ, Zhong J (2012) Characterization of the immune responses elicited by baculovirus-based vector vaccines against influenza virus hemagglutinin Acta Pharmacologica Sinica 33: 783-790 82 Huang RB, Du QS, Wang CH, Chou KC (2008) An in-depth analysis of the biological functional studies based on the NMR M2 channel structure of influenza A virus Biochem Biophys Res Commun 377: 1243-1247 83 Đỗ Thị Huyền, Bùi Hồng Vân, Văn Thị Như Ngọc, Trương Văn Dung, Trương Nam Hải (2009) Biểu gen HA5 mã hoá kháng nguyên hemagglutinin (HA) virus cúm A/H5N1 Escherichia coli Tạp chí Cơng nghệ sinh học 7(2): 185-192 120 84 Jegerlehner A, Schmitz N, Storni T, Bachmann MF (2004) Influenza A vaccine based on the extracellular domain of M2: weak protection mediated via antibody-dependent NK cell activity J Immunol 172(9): 5598-5605 85 Jeong H, Kim HJ, Lee SJ (2015) Complete Genome Sequence of Escherichia coli Strain BL21 Genome Announc 3(2): 10.1128/genomeA.00134-15 86 Kang SM, Yoo DG, Lipatov AS, Song JM, Davis CT, Quan FS, Chen LM, Donis RO, Compans RW (2009) Induction of long-term protective immune responses by influenza H5N1 virus-like particles PLoS One 4(3): 10.1371/journal.pone.0004667 87 Keawcharoen J, Amonsin A, Oraveerakul K, Wattanodorn S, Papravasit T, KRNAda S, Lekakul K, Pattanarangsan R, Noppornpanth S (2005) Characterization of the hemagglutinin and neuraminidase genes of recent influenza virus isolates from different avian species in Thailand Acta Virol 49(4): 277-280 88 Kelleher ZT, Sha Y, Foster MW, Foster WM, Forrester MT, Marshall HE (2014) Thioredoxin-mediated denitrosylation regulates cytokine-induced nuclear factor κB (NF-κB) activation J Biol Chem 289(5): 3066-3072 89 Khurana S, Verma S, Verma N, Crevar CJ, Carter DM (2010) Properly Folded Bacterially Expressed H1N1 Hemagglutinin Globular Head and Ectodomain Vaccines Protect Ferrets against H1N1 Pandemic Influenza Virus PLoS One 5(7):10.1371/journal.pone.0011548 90 Khurana S, Larkin C, Verma S, Joshi MB, Fontana J, Steven AC, King LR, Manischewitz J, McCormick W, Gupta RK, Golding H (2011) Recombinant HA1 produced in E coli forms functional oligomers and generates strain-specific SRID potency antibodies for pandemic influenza vaccines Vaccine 29(34): 5657-5665 91 Kilbourne ED, Pokorny BA, Johansson B, Brett I, Milev Y, Matthews JT (2004) Protection of mice with recombinant influenza virus neuraminidase J Infect Dis 189: 459-461 92 Kopera E, Dwornyk A, Kosson P, Florys K, Sączyńska V, Dębski J, Adamczewska VC, Szewczyk B, Ostoja WZ, Grzelak K (2014) Expression, purification and characterization of glycosylated influenza H5N1 hemagglutinin produced in Pichia pastoris Acta Biochim Pol 61(3): 597-602 121 93 Krainer FW, Dietzsch C, Hajek T, Herwig C, Spadiut O, Glieder A (2012) Recombinant protein expression in Pichia pastoris strains with an engineered methanol utilization pathway Microb Cell Fact 11(12): 10.1186/1475-285911-22 94 Lambert LC, Fauci AS (2010) Influenza Vaccines for the Future N Engl J Med 363(21): 2036-2044 95 Lardinois A, Steensels M, Lambrecht B, Desloges N, Rahaus M, Rebeski D, Berg T (2012) Potency of a recombinant NDV-H5 vaccine against various HPAI H5N1 virus challenges in SPF chickens Avian Dis 56(4): 928-936 96 Le TH, Nguyen NT (2014) Evolutionary dynamics of highly pathogenic avian influenza A/H5N1 HA clades and vaccine implementation in Vietnam Clin Exp Vaccine Res 3: 117-127 97 Lee EK, Kang HM, Kim KI, Choi JG, To TL, Nguyen TD, Song BM, Jeong J, Choi KS, Kim JY, Lee HS, Lee YJ, Kim JH (2015) Genetic evolution of H5 highly pathogenic avian influenza virus in domestic poultry in Vietnam between 2011 and 2013 Poult Sci 94(4): 650-661 98 Lee YT, Kim KH, Ko EJ, Lee YN, Kim MC, Kwon YM, Tang Y, Cho MK, Lee YJ, Kang SM (2014) New vaccines against influenza virus Clin Exp Vaccine Res 3(1): 12-28 99 Li F, Yang S, Zhao L, Li Q, Pei J (2012) Synonymous condon usage bias and overexpression of a synthetic xynB Gene from Aspergillus niger NL1 in Pichia pastoris Bio Res 7(2): 2330-2343 100 Li P, Anumanthan A, Gao XG, Ilangovan K, Suzara VV, Düzgüneş N, Renugopalakrishnan V (2007) Expression of recombinant proteins in Pichia pastoris Appl Biochem Biotechnol 142: 105-124 101 Li XL, Yang Y, Sun Y, Chen WJ, Sun RX, Liu K, Ma MJ, Liang S, Yao HW, Gray GC, Fang LQ, Cao WC (2015) Risk Distribution of Human Infections with Avian Influenza H7N9 and H5N1 virus in China Sci Rep 5: 10.1038/srep18610 102 Li Y, Zhang X, Xu Q, Fu Q, Zhu Y, Chen S, Peng D, Liu X (2013) Characterisation and haemagglutinin gene epitope mapping of a variant strain of H5N1 subtype avian influenza virus Vet Microbiol 162(2-4): 614-622 103 Lin YJ, Deng MC, Wu SH, Chen YL, Cheng HC, Chang CY, Lee MS, Chien MS, Huang CC (2008) Baculovirus-derived hemagglutinin vaccine protects 122 chickens from lethal homologous virus H5N1 challenge J Vet Med Sci 70(11): 1147-1152 104 Liu WC, Gong T, Wang QH, Liang X, Chen JJ, Zhu P (2016) Scaling-up Fermentation of Pichia pastoris to demonstration-scale using new methanolfeeding strategy and increased air pressure instead of pure oxygen supplement Sci Rep 6: 10.1038/srep18439 105 Luczo JM, Stambas J, Durr PA, Michalski WP, Bingham J (2015) Molecular pathogenesis of H5 highly pathogenic avian influenza: the role of the haemagglutinin cleavage site motif Rev Med Virol 25(6): 406-430 106 Macauley-Patrick S, Fazenda ML, McNeil B, Harvey, L.M (2005) Heterologous protein production using the Pichia pastoris expression system Yeast 22: 249-270 107 Macken CA, Webby RJ, Bruno WJ (2006) Genotype turnover by reassortment of replication complex genes from avian influenza A virus J Gen Virol 87(10): 2803-2815 108 Mahmood K, Bright RA, Mytle N, Carter DM, Crevar CJ, Achenbach JEHeaton PM, Tumpey TM, Ross TM (2008) H5N1 VLP vaccine induced protection in ferrets against lethal challenge with highly pathogenic H5N1 influenza viruses Vaccine 26 (42): 5393-5399 109 Marcelin G, Sandbulte MR, Webby RJ (2012) Contribution of antibody production against neuraminidase to the protection afforded by influenza vaccines Rev Med Virol 22(4): 267-279 110 Milián E, Kamen AA (2015) Current and emerging cell culture manufacturing technologies for influenza vaccines Biomed Res Int: 10.1155/2015/504831 111 Morvarid AR, Zeenathul NA, Tam YJ, Zuridah H, Mohdazmi ML, Azizon BO (2012) Effect of glycerol feed in methanol induction phase for Hepatitis B surface sntigen expression in Pichia pastoris strain KM71 Pertanika J Sci & Technol 20 (1): 31-42 112 Nayak B, Rout SN, Kumar S, Khalil MS, Fouda MM, et al (2009) Immunization of Chickens with Newcastle Disease Virus Expressing H5 Hemagglutinin Protects against Highly Pathogenic H5N1 Avian Influenza Viruses PLoS One 4(8):10.1371/journal.pone.0006509 113 Neumann G, Hatta M, Kawaoka Y (2003) Reverse genetics for the control of avian influenza Avian disease 47: 882-887 123 114 Neumann G, Noda T, Kawaoka Y (2009) Emergence and pandemic potential of swine-origin H1N1 influenza virus Nature 459: 931-939 115 Neumann G, Kawaoka Y (2015) Transmission of influenza A viruses Virology 279-280: 234-246 116 Nguyễn Thị Bích Nga, Lương Thị Hồng Vân, Lê Thanh Hòa (2011) Phân tích đặc điểm chuỗi Polypeptide NA(N1) số chủng virus cúm A/H5N1 gây bệnh gia cầm thu thập năm 2004 - 2009 Việt Nam Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 1: 47-54 117 Nguyễn Thị Bích Nga, Lương Thị Hồng Vân, Lê Thanh Hòa (2011) Biến đổi di truyền HA (H5) virus cúm A/H5N1 qua phân tích trình tự gen số chủng gây bệnh gia cầm Việt Nam giai đoạn 2004-2010 Tạp chí Y học Việt Nam 2: 134-139 118 Văn Thị Như Ngọc, Đỗ Thị Huyền, Nguyễn Thanh Nhàn, Nguyễn Phước Hải, Trương Văn Dung, Trương Nam Hải (2007) Biểu gen ha5-1 mã hoá tiểu phần kháng nguyên Hemagglutinin (HA) virus cúm A/H5N1 Escherichia coli Tạp chí Công nghệ sinh học 5(3): 185-192 119 Nicholson KG, Wood JM, Zambon M (2003) Influenza Lancet 362(93970): 1733-1745 120 Nwe N, He Q, Damrongwatanapokin S, Du Q, Manopo I, Limlamthong Y, Fenner B.J, Spencer L, Kwang J (2006) Expression of hemagglutinin protein from the avian influenza virus H5N1 in a baculovirus/insect cell system significantly enhanced by suspension culturê BMC Microbiology 24: 6-16 121 Okamatsu M, Nishi T, Nomura N, Yamamoto N, Sakoda Y, Sakurai K, Chu HD, Thanh LP, Van Nguyen L, Van Hoang N, Tien TN, Yoshida R, TakadaA, Kida H (2013) The genetic and antigenic diversity of avian influenza viruses isolated from domestic ducks, muscovy ducks, and chickens in northern and southern Vietnam, 2010–2012 Virus Genes 47: 317-329 122 Palese P, Shaw ML (2007) Orthomyxoviridae: the viruses and their replication In: Knipe DM, Howley PM, editors Fields virology Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkin 123 Paoletti E (1996) Application of poxvirus vectors to vaccination: an update Proc.Acad.Sci USA 93: 11349-11353 124 Perdue ML, Suarez DL (2000) Structural features of the avian influenza virus hemagglutinin that influence virulence Vet Microbiol 74: 77-86 124 125 Phue JN, Lee SJ, Trinh L, Shiloach J (2008) Modified Escherichia coli B (BL21), a superior producer of plasmid DNA compared with Escherichia coli K (DH5α) Biotechnol Bioeng 101: 831-836 126 Nguyễn Thị Lan Phương, Lê Văn Bé, Dương Hữu Thái, Lê Kim Hoà, Trần Ngọc Nhơn, Vũ Thị Thu Hương, Nguyễn Hoàng Tùng, Nguyễn Thị Lý (2015) Chất lượng vắc xin cúm IVACFLU-A/H5N1 dự tuyển thử nghiệm lâm sàng Tạp chí Y học dự phòng (169): 46-51 127 Pietrzak M, Macioła A, Zdanowski K, Protas-Klukowska AM, Olszewska M, Śmietanka K, Minta Z, Szewczyk B, Kopera E (2016) An avian influenza H5N1 virus vaccine candidate based on the extracellular domain produced in yeast system as subviral particles protects chickens from lethal challenge Antiviral Res 133: 242-249 128 Ping J, Lopes TJ, Nidom CA, Ghedin E, Macken CA, Fitch A, Imai M, Maher EA, Neumann G, Kawaoka Y (2015) Development of high-yield influenza A virus vaccine viruses Nat Commun 6(8148): 10.1038/ncomms9148 129 Potvin G, Ahmad A, Zhang Z (2012) Bioprocess engineering aspects of heterologous protein production in Pichia pastoris Biochem Eng 64: 91-105 130 Pushko P, Pujanauski LM, Sun X, Pearce M, Hidajat R, Kort T, Schwartzman LM, Tretyakova I, Chunqing L, Taubenberger JK, Tumpey TM (2015) Recombinant H7 hemagglutinin forms subviral particles that protect mice and ferrets from challenge with H7N9 influenza virus Vaccine 33(38): 4975-4982 131 Qiao C, Jiang YP, Jia YQ, Tian GB, Liu M, Deng GH, Wang XR, Meng QW, Tang XY (2003) Protection of chickens against highly lethal H5N1 and H7N1 avian influenza viruses with a recombinant fowlpox virus co-expressing H5 haemagglutinin and N1 neuraminidase genes Avian Pathol 32: 25-31 132 Qiao C, Tian G, Jiang YP, Li Y, Shi J, Yu K, Chen H (2006) Vaccines developed for H5 highly pathogenic avian influenza in China Ann NY Acad Sci 1081: 182-192 133 Qiao C, Jiang Y, Tian G, Wang X, Li C, Xin X, Chen H, Yu K (2009) Recombinant fowlpox virus vector-based vaccine completely protects chickens from H5N1 avian influenza virus Antiviral Res 81(3): 234-238 134 Quan FS, Yoo DG, Song JM, Clements JD, Compans RW, Kang SM (2009) Kinetics of immune responses to influenza virus-like particles and dosedependence of protection with a single vaccination J Virol 83(9): 4489-4497 125 135 Redkiewicz P, Sirko A, Kamel KA, Góra-Sochacka A (2014) Plant expression systems for production of hemagglutinin as a vaccine against influenza virus Acta Biochim Pol 61(3): 551-560 136 Rockman S, Brown LE, Barr IG, Gilbertson B, Lowther S, Kachurin A, Kachurina O, Klippel J, Bodle J, Pearse M, Middleton D (2013) Neuraminidase-inhibiting antibody is a correlate of cross-protection against lethal H5N1 influenza virus in ferrets immunized with seasonal influenza vaccine J Virol 87(6): 3053-3061 137 Rosano GL, Ceccarelli EA (2014) Recombinant protein expression in Escherichia coli: advances and challenges Front Microbiol 5(172): 10.3389/fmicb.2014.00172 138 Rybicki EP (2010) Plant-made vaccines for humans and animals Plant Biotechnol J 8(5): 620-637 139 Sączyńska V (2014) Influenza virus hemagglutinin as a vaccine antigen produced in Bacteria Acta Biochim Pol 61(3): 561-572 140 Saelens X, Vanlandschoot P, Martinet W, Maras M, Neirynck S, Contreras R, Fiers W, Jou WM (1999) Protection of mice against a lethal influenza virus challenge after immunization with yeast-derived secreted influenza virus hemagglutinin Eur J Biochem 260 (1): 166-175 141 Sahdev S, Khattar SK, Saini KS (2008) Production of active eukaryotic proteins through bacterial expression systems: a review of the existing biotechnology strategies Mol Cell Biochem 307: 247-264 142 Sambrook J, Russell DW (2001) Molecular Cloning A Laboratory Manual, 3rd ed Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY 143 Sanders CJ, Doherty PC, Thomas PG (2011) Respiratory epithelial cells in innate immunity to influenza virus infection Cell Tissue Res 343: 13-21 144 Schotsaert M, de Filette M, Fiers W, Saelens X (2009) Universal M2 ectodomain-based influenza A vaccines: Preclinical and clinical developments Expert Rev Vaccine 8: 499-508 145 Schrauwen EJ, Fouchier RA (2014) Host adaptation and transmission of influenza A viruses in mammals Emerg Microbes Infect 3(2): 10.1038/emi.2014.9 126 146 Sguazzaa GH, Fuentealbaa NA, Tizzanoa MA, Galosi CM, Pecoraroa MR (2013) Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression system Rev Argent Microbiol 45(4): 222-228 147 Shehata AA, Fiebig P, Sultan H, Hafez M, Liebert UG (2012) Expression of Truncated Sequences of Influenza A Virus Subtype H5 in Pichia pastoris J Am Sci 8(8): 433-441 148 Shimizu Y S, Myint CO, Okamatsu M, Sakoda Y (2013) Influenza Virus-like Particles Containing HA, NA, and M1 Induced Protection in Chickens against a Lethal Challenge with the Highly Pathogenic H5N1 Avian Influenza Virus J Vaccines Vaccin (201): 10.4172/2157-7560.1000201 149 Shtyrya YA, Mochalova LV, Bovin NV (2009) Influenza Neuraminidase: Structure and Function Acta Naturae 1(2): 26-32 Virus 150 Smirnov YA, Gitelman AK, Govorkova EA, Lipatov AS, Kaverin NV (2004) Influenza H5 virus escape mutants: immune protection and antibody production in mice Virus Res 99(2): 205-208 151 Lê Văn Sơn, Chu Hoàng Hà, Lê Trần Bình (2009) Nghiên cứu phát triển vaccine thực vật dùng qua đường miệng cho gia cầm phòng chống bệnh H5N1 Việt Nam Báo cáo kết nghiên cứu Khoa học Công nghệ Viện Công nghệ Sinh học, Viện Hàn lâm khoa học Công nghệ Việt Nam 152 Spitsin S, Andrianov V, Pogrebnyak N, Smirnov Y, Borisjuk N, Portocarrero C (2009) Immunological assessment of plant-derived avian flu H5/HA1 variants Vaccine 27: 1289-1292 153 Sriwilaijaroen N, Suzuki Y (2012) Molecular basis of the structure and function of H1 hemagglutinin of influenza virus Proc Jpn Acad Ser B Phys Biol Sci 88(6): 226-249 154 Steinhauer DA (1999) Role of hemagglutinin cleavage for the pathogenicity of influenza virus Virology 258(1): 1-20 155 Subathra M, Santhakumar P, Naidu SS, Narasu LM, Senthilkumar TA, Sunil KL (2014) Expression of Avian Influenza Virus (H5N1) Hemagglutinin and Matrix Protein in Pichia pastoris and Evaluation of their Immunogenicity in Mice Appl Biochem Biotechnol 172: 3635-3645 156 Suguitan AL, Cheng X, Wang W, Wang S, Jin H, Lu S (2011) Influenza H5 hemagglutinin DNA primes the antibody response elicited by the live 127 attenuated influenza A/Vietnam/1203/2004 vaccine in ferrets PLoS One 6(7): 10.1371/journal.pone.0021942 157 Swayne DE, Garcia M, Beck JR, Kinney N, Suarez DL (2000a) Protection against diverse highly pathogenic H5 avian influenza viruses in chickens immunized with a recombinant fowlpox vaccine containing an H5 avian influenza hemagglutinin gene insert Vaccine 18: 1088-1095 158 Swayne DE, Beck JR, Kinney N (2000b) Failure of a recombinant fowlpox virus vaccine containing an avian influenza hemagglutinin gene to provide consistent protection against influenza in chickens preimmunizedwith a fowl pox vaccine Avian Dis 44: 132-137 159 Swayne DE, Lee CW, Spackman E (2006) Inactivated North American and European H5N2 avian influenza virus vaccines protect chickens from Asian H5N1 high pathogenicity avian influenza virus Avian Pathol 35(2): 141-146 160 Tate MD, Job ER, Deng YM, Gunalan V, Maurer-Stroh S, Reading PC (2014) Playing hide and seek: how glycosylation of the influenza virus hemagglutinin can modulate the immune response to infection Viruses 6(3): 1294-1316 161 Dương Hữu Thái, Lê Văn Bé, Nguyễn Thị Lan Phương, Lê Kim Hòa (2013) Ứng dụng quy trình lõi sản xuất vaccine cúm A/H5N1 theo cơng nghệ ni cấy trứng gà có phơi quy mơ cơng nghiệp Tạp chí Y học dự phòng 9(145): 13-18 162 Nguyễn Nam Thắng (2012) Đặc điểm phân tử gen HA, NA M virus cúm gia cầm H5N1 lưu hành miền Bắc Việt Nam 2008-2009 Luận án Tiến sĩ Sinh học Viện Công nghệ sinh học 163 Tian G, Zhang S, Li Y, Bu Z, Liu P, Zhou J, Li C, Shi J, Yu K, Chen H (2005) Protective efficacy in chickens, geese and ducks of an H5N1-inactivated vaccine developed by reverse genetics Virology 341(1): 153-162 164 Nguyễn Ngọc Tiến, Hoàng Văn Năm; Văn Đăng Kỳ; Nguyễn Tùng; Ken Inui (2011) Lưu hành virut cúm gia cầm độc lực cao H5N1 Việt Nam vacxin phòng bệnh cúm gia cầm Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y 6: 76-78 165 Nguyễn Ngọc Tiến (2013) Tình hình dịch cúm gia cầm giai đoạn 2009-2012 giải pháp phòng chống Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y 1: 82-90 166 Tolner B, Smith L, Begent RH, Chester KA (2006) Production of recombinant protein in Pichia pastoris by fermentation Nature Protocols 1(2): 1006-1021 128 167 Tompkins SM, Zhao ZS, Lo CY, Misplon JA, Liu T, Ye Z, Hogan RJ, Wu Z, Benton KA, Tumpey TM (2007) Matrix protein vaccination and protection against influenza viruses, including subtype H5N1 Emerg Infect Dis 13: 426 -435 168 Tong S, Zhu X, Li Y, Shi M, Zhang J, Bourgeois M, Yang H, Chen X, Recuenco S, Gomez J, Chen LM, Johnson A, Tao Y, Dreyfus C, Yu W, McBride R, CRNAey PJ, Gilbert AT, Chang J, Guo Z, Davis CT, Paulson JC, Stevens J, Rupprecht CE, Holmes EC, Wilson IA, Donis RO (2013) New world bats harbor diverse influenza A viruses PLoS Pathog 9(10): 10.1371/journal.ppat.1003657 169 Treanor JJ, Wilkinson BE, Masseoud F, Hu-Primmer J, Battaglia R, O'Brien D, Wolff M, Rabinovich G, Blackwelder W, Katz JM (2001) Safety and immunogenicity of a recombinant hemagglutinin vaccine for H5 influenza in humans Vaccine 19(14): 1732-1737 170 Đậu Huy Tùng, Đồng Văn Quyền, Nguyễn Tùng, Nguyễn Nam Thắng, Trần Xuân Hạnh, Kim Young Bong, Đinh Duy Kháng (2012) Đánh giá hiệu lực vacxin cúm gia cầm H5N1 (chủng Nibrg14) số Clade lưu hành Việt Nam năm 2011 phân tích đặc tính di truyền virut H5N1 clade 2.3.2.1b Tạp chí Khoa học Kỹ thuật thú y 6: 5-16 171 Cao Thị Bảo Vân, Nguyễn Văn Khoa (2012) Biểu protein hemagglutinin virus cúm A/H5N1 hệ thống baculovirus/tế bào côn trùng Tạp chí Y học dự phòng 4: 28-34 172 Nguyễn Thị Thu Vân (2007) Nghiên cứu thành cơng quy trình công nghệ sản xuất vaccine cúm A/H5N1 tế bào thận khỉ tiên phát quy mơ phòng thí nghiệm Báo cáo tổng kết Khoa học Kỹ thuật đề tài Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương 173 Veits J, Wiesner D, Fuchs W, Hoffmann B, Granzow H, Starick E, Mundt E, Schirrmeier H, Mebatsion T, Mettenleiter TC, Oberdorfer AR (2006) Newcastle disease virus expressing H5 hemagglutinin gene protects chickens against Newcastle disease and avian influenza Proc Natl Acad Sci USA 103: 8197-8202 174 Velkov T, Ong C, Baker MA, Kim H, Li J, Nation RL, Huang JX, Cooper MA, Rockman S (2013) The antigenic architecture of the hemagglutinin of influenza H5N1 viruses Mol Immunol 56(4): 705-719 129 175 Wagner R, Matrosovich M, Klenk H (2002) Functional balance between haemagglutinin and neuraminidase in influenza virus infections Med Virol 12(3): 159-166 176 Wagner S, Klepsch MM, Schlegel S, Appel A, Draheim R, Tarry M, Högbom M, van Wijk KJ, Slotboom DJ, Persson JO, de Gier JW (2008) Tuning Escherichia coli for membrane protein overexpression Proc Natl Acad Sci USA 105(38): 14371-14376 177 Wang J, Qiu JX, Soto C, DeGrado WF (2011) Structural and dynamic mechanisms for the function and inhibition of the M2 proton channel from influenza A virus Curr Opin Struct Biol 21: 68-80 178 Wang J, Ma C, Wang J, Jo H, Canturk B, Fiorin G, Pinto LH, Lamb RA, Klein ML, DeGrado WF (2013) Discovery of novel dual inhibitors of the wild-type and the most prevalent drug-resistant mutant, S31N, of the M2 proton channel from influenza A virus J Med Chem 56(7): 2804-2812 179 Wanga CC, Chena RJ, Tsenga YC, Hsua CH, Hunga YF, Chena SW, Chenf CM, Khoof, Chenga TJ, Chenga YS, Jana JT, Wua CY, Maa C, Wonga CH (2009) Glycans on influenza hemagglutinin affect receptor binding and immune response Proc Natl Acad Sci USA 106 (43): 18137-18142 180 Watanabe Y, Ibrahim MS, Suzuki Y, Ikuta K (2012) The changing nature of avian influenza A virus (H5N1) Trends Microbiol 20(1): 11-20 181 Webster RG (1998) Influenza: an emerging disease Emerg Infect Dis 4: 436- 441 182 Webster RG, Guan Y, Peiris M, Walker D, Krauss S, Zhou NN, Govorkova EA, Ellis TM, Dyrting KC, Sit T, Perez DR, Shortridge KF (2002) Characterization of H5N1 influenza viruses that continue to circulate in geese in southeastern China J Virol 76(1): 118-126 183 Webster RG, Govorkova EA (2014) Continuing challenges in influenza Ann N Y Acad Sci 1323: 115-139 184 Weinacker D, Rabert C, Zepeda AB, Figueroa CA, Pessoa A, Farías JG (2014) Applications of recombinant Pichia pastoris in the healthcare industry Braz J Microbiol 44(4): 1043-1048 185 Weli SC, Tryland M (2011) Avipoxviruses: infection biology and their use as vaccine vectors Virol J 8(49): 10.1186/1743-422X-8-49 130 186 Werten MW, van den Bosch TJ, Wind RD, Mooibroek H, de Wolf FA (1999) High-yield secretion of recombinant gelatins by Pichia pastoris Yeast 15(11): 1087-1096 187 Wildt S, Gerngross TU (2005) The humanization of N-glycosylation pathways in yeast Nat Rev Microbiol 3(2): 119-128 188 Wilson I A, Skehel J J, Wiley D C (1981) Structure of the haemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus at Å resolution Nature 289: 366373 189 Wong SS, Webby RJ (2013) Traditional and new influenza vaccines Clin Microbiol Rev 26(3): 476-492 190 Xie QM, Ji J, Du LQ, Cao YC, Wei L, Xue CY, Qin JP, Ma JY, Bi YZ (2009) Preparation and immune activity analysis of H5N1 subtype avian influenza virus recombinant protein-based vaccine Poult Sci 88 (8): 1608-1615 191 Xiong C, Liu Q, Chen Q, Chen J (2013) Genome Sequence of a Reassortant H5N1 Avian Influenza Virus Isolated from Domestic Green-Winged Teal Genome Announc 1(4): 10.1128/genomeA.00639-13 192 Yang JL, Wang HL, Wang SX, Yang P, Liu K and Jiang Cheng-yu (2010) High-level expression, purification and characterization of codon-optimized recombinant hemagglutinin proteins in mammalian cells Chinese Medical Journal 123(8): 1073-1077 193 Yang P, Ma C, Cui S, Zhang D, Shi W, Pan Y, Sun Y, Lu G, Peng X, Zhao J, Liu Y, Wang Q (2016) Avian influenza A(H7N9) and (H5N1) infections among poultry and swine workers and the general population in Beijing, China, 2013-2015 Sci Rep 6(33877): 10.1038/srep33877 194 Zhang N, Zheng BJ, Lu L, Zhou Y, Jiang S, Du L (2015) Advancements in the development of subunit influenza vaccines Microbes Infect 17(2): 123-134 195 Zhang R, Wang X, Su J, Zhao J, Zhang G (2010) Isolation and analysis of two naturally-occurring multi-recombination Newcastle disease viruses in China Virus Res 151(1): 45-53 196 Zhang W, Inan M, Meagher MM (2000) Fermentation Strategies for Recombinant Protein Expression in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris Biotechnol Bioprocess Eng 5: 275-287 197 Zhang WH, Potter KJH, Plantz BA, Schlegel VL, Smith LA, Meagher MM (2003) Pichia pastoris fermentation with mixed-feeds of glycerol and 131 methanol: growth kinetics and production improvement J Ind Microbiol Biotechnol 30: 210-215 198 Zou W, Ke J, Zhu J, Zhou H, Jin M (2012) The antigenic property of the H5N1 avian influenza viruses isolated in central China Virol J 9(148): 10.1186/1743-422X-9-148 199 Invitrogen (2010a) Pichia Expression Kit, Instruction Manual Catalog no K1710-01 200 Invitrogen (2010b) pPICZA, B, and C, Instruction Manual Catalog no V195 -20 201 Invitrogen (2010c) EasySelect Pichia Expression Kit For Expression of Recombinant Proteins Using pPICZ and pPICZα in Pichia pastoris Cat no K1740-01 202 OIE (2008) Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 203 http://www.cucthuy.gov.vn 204 www.genscript.com/tools/rare-codon-analysis 205 www.wpro.who.int/emerging_diseases/AvianInfluenza/e ... hemagglutinin (HA) tái tổ hợp virus cúm A/H5N1 đánh giá tính sinh miễn dịch gà với mục tiêu: - Biểu kháng nguyên HA tái tổ hợp virus cúm A/H5N1 - Đánh giá tính sinh miễn dịch gà protein HA tái tổ hợp, ... biểu protein HA tái tổ hợp; lên men thu hồi protein HA tái tổ hợp (4) Đánh giá tính sinh miễn dịch gà protein HA tái tổ hợp 3 Đóng góp mới ḷn án Luận án cơng trình Việt Nam nghiên cứu biểu. .. đến biểu gen - Tinh chế kiểm tra tính kháng nguyên protein tái tổ hợp (2) Nghiên cứu biểu kháng nguyên HA tế bào nấm men P pastoris - Nghiên cứu biểu kháng nguyên HA dạng dung hợp với Trx có