BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI  NGUYỄN THỊ HẢI PHƢỢNG MÃ SINH VIÊN: 1201471 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ TIỂU PHÂN NANO FENOFIBRAT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2017 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI  NGUYỄN THỊ HẢI PHƢỢNG MÃ SINH VIÊN: 1201471 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ TIỂU PHÂN NANO FENOFIBRAT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: ThS Trần Ngọc Bảo Nơi thực hiện: Viện Công nghệ Dƣợc phẩm Quốc Gia Bộ môn Công nghiệp Dƣợc HÀ NỘI – 2017 LỜI CẢM ƠN Với kính trọng lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến ThS Trần Ngọc Bảo - người thầy trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình, truyền đạt kinh nghiệm quý báu động viên em suốt thời gian thực khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Ngọc Chiến – người thầy định hướng tạo điều kiện thuận lợi giúp em hoàn thành khóa luận Em xin trân trọng cảm ơn toàn thể thầy cô giáo, anh chị nghiên cứu viên, kĩ thuật viên, bạn sinh viên nghiên cứu khoa học thực khóa luận tốt nghiệp Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia, Bộ môn Công Nghiệp Dược, Bộ môn Bào Chế, Bộ môn Vật Lý – Hóa Lý giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Nhân dịp này, em xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu Nhà trường phòng Đào tạo toàn thể thầy cô giáo Trường Đại học Dược Hà Nội dạy dỗ, giúp đỡ tạo điều kiện cho em suốt thời gian học tập trường Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình bạn bè thân thiết động viên, khích lệ nhắc nhở, nguồn động lực lớn giúp em vượt qua khó khăn Do thời gian làm thực nghiệm kiến thức thân có hạn, khóa luận nhiều thiếu sót Em mong nhận góp ý thầy cô, bạn bè để khóa luận hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2017 Sinh viên Nguyễn Thị Hải Phượng MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG 1.1 Tổn qu n U N no r t 1.1.1 Công thức cấu tạo .2 1.1.2 T nh chất lý hóa 1.1.3 Độ n định 1.1.4 Đ c điểm dược động học 1.1.5 Chỉ định, chống định 1.1.6 Liều lượng cách dùng 1.2 Vài nét công nghệ n no tron Dƣợc phẩm 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Phân loại nano polyme mang thuốc 1.2.3 Một số phương pháp bào chế tiểu phân nano polyme 1.2.4 Tính chất số tiêu đánh giá hệ tiểu phân nano 1.2.5 Nhược điểm độ n định tiểu phân nano polyme dạng hỗn dịch .8 1.3 Một số phƣơn pháp rắn hóa hệ tiểu phân nano 1.3.1 Đông khô 1.3.2 Phun sấy 1.3.3 Tạo hạt tầng sôi 1.3.4 Phun hỗn dịch nano lên hạt 10 1.3.5 Tạo pellet sử dụng thiết bị đùn – tạo cầu 11 1.3.6 Nạp nano thuốc vào nhựa trao đ i ion 12 1.4 Một số n h n ứu t n ộ hòa tan fenofibrat 12 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đố tƣợn 15 2.1.1 Nguyên vật liệu .15 2.1.2 Thiết bị 15 2.2 Nộ un n h n ứu .16 2.3 Phƣơn pháp n h n ứu .16 2.3.1 Phương pháp bào chế tiểu phân nano fenofibrat 16 2.3.2 Phương pháp rắn hóa nano fenofibrat 17 2.3.3 Các phương pháp đánh giá .20 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 Kết khảo sát phƣơn pháp ịnh lƣợng fenofibrat .24 3.1.1 Phương pháp đo quang ph hấp thụ tử ngoại 24 3.1.2 Phương pháp HPLC 24 3.2 Xây dựng công thức bào chế khảo sát số ảnh hƣởng tớ ặc tính tiểu phân nano fenofibrat 25 3.2.1 Lựa chọn phương pháp bào chế .25 3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng số yếu tố công thức 26 3.2.3 Khảo sát ảnh hưởng số yếu tố quy trình .30 3.3 Kết nghiên cứu bào chế rắn hóa từ hỗn dịch nano fenofibrat 32 3.3.1 Kết nghiên cứu phương pháp tạo hạt tầng sôi 32 3.3.2 Kết nghiên cứu tạo hạt ướt – tạo hạt tầng sôi 36 3.3.3 Sơ đánh giá KTTP hệ nano sau phân tán lại hạt tầng sôi .38 3.3.4 Đánh giá số tiêu chất lượng hạt tầng sôi .38 3.4 Kết tạo hạt m n ƣợc chất nhự tr o ổi ion 39 3.4.1 Bước đầu chọn nhựa phù hợp 39 3.4.2 Ảnh hưởng thời gian khuấy đến khả nạp thuốc 39 3.4.3 Đánh giá khả giải phóng nhựa mang thuốc .39 3.5 Quang phổ hồng ngoại 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT CT Công thức DC Dược chất DD (dd) Dung dịch DĐVN IV Dược điển Việt Nam IV D/N Dầu/nước EA Ethyl acetat EE Hiệu tạo nang (Encapsulation efficiency) EPO Eudragit EPO FA Acid fenofibric FB Fenofibrat FT–IR Quang ph hồng ngoại GLP – PLGA/CS Hệ tiểu phân nano glipizid – poly (lactic-coglycolic) acid/chitosan HPLC High performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) HD Hỗn dịch KTTP K ch thước tiểu phân LC Khả nạp thuốc hệ (Loading capacity) MeOH Methanol NaLS Natri lauryl sulfat NT Nhũ tương PDI Chỉ số đa phân tán (Polydiversity index) PP Phương pháp PVA Polyvinyl alcohol RSD Độ lệch chuẩn tương đối SD Độ lệch chuẩn TB Trung bình TCCS Tiêu chuẩn sở USP Dược điển Mỹ DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Phân loại nano polyme mang thuốc Bảng 2.1 Nguyên liệu sử dụng trình thực nghiệm 15 Bảng 2.2 Công thức bào chế tiểu phân nano FB .16 Bảng 2.3 Thành phần bột kép 18 Bảng 3.1 Kết đo KTTP, PDI, zeta phương pháp (n = 3) 26 Bảng 3.2 Kết đo KTTP, PDI, zeta CT N1-N5 27 Bảng 3.3 Kết đánh giá số đ c tính tiểu phân nano CT M1-M9 28 Bảng 3.4 Kết đo KTTP PDI công thức N6-N12 (n = 3) 31 Bảng 3.5 Kết thử độ hòa tan khảo sát ảnh hưởng dịch phun (n = 3) 34 Bảng 3.6 Kết thử độ hòa tan khảo sát ảnh hưởng NaLS 35 Bảng 3.7 Kết thử độ hòa tan C6, C7, C8, C9 .36 Bảng 3.8 Kết đánh giá t nh chất hạt ống ly tâm công thức C8 38 Bảng 3.9 Mối quan hệ thời gian phản ứng với khả nạp thuốc 39 Bảng 3.10 Kết thử hòa tan nhựa Anhui nguyên liệu .40 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cấu trúc hóa học fenofibrat Hình 1.2 Hình ảnh siêu vi cầu siêu vi nang Hình 1.3 Hệ màng bao số nano polyme mang thuốc Hình 1.4 Hệ liên kết nano polyme hình thành qua cầu liên kết hóa học Hình 1.5 Thiết bị tầng sôi thường dùng 10 Hình 2.1 Sơ đồ quy trình bào chế tiểu phân nano 17 Hình 2.2 Sơ đồ quy trình tạo hạt kép .18 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn mối tương quan độ hấp thụ nồng độ FB 24 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích pic nồng độ FB 25 Hình 3.3 Mối quan hệ tỷ lệ dược chất : polyme với KTTP, PDI zeta 27 Hình 3.4 Ảnh hưởng thể tích pha pha loãng tỷ lệ FB : EPO 29 Hình 3.5 Ảnh hưởng thời gian khuếch tán bốc dung môi .30 Hình 3.6 Phần trăm giải phóng FB từ hạt có công thức C1, C3, C4, C5 35 Hình 3.7 Phần trăm FB giải phóng từ hạt có công thức C6, C7, C8, C9 37 Hình 3.8 Ph hồng ngoại nguyên liệu FB, EPO, tiểu phân nano đông khô, hỗn hợp vật lý, hạt công thức C8 .40 ĐẶT VẤN ĐỀ Những năm gần đây, công nghệ nano thu hút quan tâm cộng đồng khoa học công nghệ phạm vi toàn cầu Với k ch thước siêu nhỏ, nano tạo nhiều tính chất so với nguyên liệu ban đầu ứng dụng nhiều lĩnh vực đời sống Trong dược phẩm, công nghệ nano đón nhận công cụ để nghiên cứu phát triển hệ đưa thuốc mới, nhằm cải thiện sinh khả dụng, đưa thuốc tới đ ch tác dụng, làm tăng hiệu điều trị thuốc [13] Fenofibrat thuốc hạ lipid máu sử dụng ph biến nhiều quốc gia So với dẫn chất nhóm, hoạt chất có nhiều ưu điểm tác dụng dược lý cao, tác dụng phụ có khả phối hợp với thuốc hạ lipid máu khác [18] Tuy nhiên, sinh khả dụng FB thường thấp không n định độ hòa tan Nắm bắt hạn chế đó, nghiên cứu bào chế tiểu phân nano polyme FB với mục đ ch ch nh cải thiện độ hòa tan làm tăng sinh khả dụng đề tài ứng dụng Hệ nano sau bào chế thường g p nhiều nhược điểm độ n định khả hút ẩm lớn, độ trơn chảy kém, dễ kết tụ hay nhiễm vi sinh vật, đ c biệt dạng lỏng Chính thế, việc rắn hóa hệ tiểu phân nano bước quan trọng để cải thiện độ n định, kết hợp ưu điểm tiểu phân nano (tăng khả hòa tan sinh khả dụng [13]) với dạng bào chế rắn (tính n định cao, tăng khả tuân thủ điều trị bệnh nhân [7]) Do đó, tiến hành đề tài “Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano fenofibrat” với mục tiêu sau: Xây dựng công thức, quy trình bào chế tiểu phân nano fenofibrat đánh giá số đặc tính tiểu phân nano Bước đầu nghiên cứu bào chế rắn hóa hệ tiểu phân nano fenofibrat Đông khô phương pháp thường sử dụng để loại nước tăng độ n định cho hệ nano Ngoài ra, bột đông khô sử dụng để xác định hiệu suất trình chuẩn bị mẫu dùng phương pháp phân t ch DSC, FT–IR, nhiễu xạ tia X hay quan sát hình thái (chụp SEM) Tuy vậy, thân trình đông khô sinh điều kiện khắc nghiệt gây n định thay đ i đ c tính hệ nano Do vậy, thành công trình đông khô phụ thuộc nhiều vào thành phần công thức thông số kỹ thuật trình đông khô [16] Tại đại học Dược Hà Nội, phương pháp đông khô sử dụng nhiều nghiên cứu hệ tiểu phân nano, kể đến hệ nano GLP – PLGA/CS [11] hay hệ nano piroxicam [9] Hỗn dịch sau phân tán lại có KTTP nhỏ đồng [11] 1.3.2 Phun s y Nhiều nghiên cứu thành công việc sử dụng phương pháp phun sấy để tăng độ n định tiểu phân nano So với đông khô, phun sấy có số ưu điểm thao tác nhanh, chi ph tương đối thấp, phù hợp với quy mô công nghiệp, bột phun sấy dùng dạng hỗn dịch ho c đưa vào viên nén, viên nang Bên cạnh đó, số phương pháp phun sấy cải tiến xuất hiện, góp phần cải thiện hạn chế phun sấy cần gia nhiệt, tác động lên tính toàn vẹn tiểu phân nano dược chất [61] Nghiên cứu Dengning Xia cộng (2016) nhận định phun sấy phương pháp khả thi để củng cố độ n định hệ nano lipid FB cho dạng bột Các tiểu phân nano lipid giữ dược chất thời gian giải phóng thuốc kéo dài sau phun sấy [64] Theo khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học Nguyễn Cảnh Hưng: bột phun sấy nano azithromycin phân tán trở lại vào nước máy lắc xoáy tạo hỗn dịch đục nhẹ đo KTTP công cụ ph tương quan photon cho kết quả: KTTP trung bình hệ tăng lên (từ 200nm đến 400nm) chứng tỏ có kết tụ tiểu phân nano [12] 1.3.3 o h t tầng s i Các thiết bị tạo hạt kiểu tầng sôi phát triển ứng dụng công nghiệp dược từ năm 1960 Phương pháp có nhiều ưu điểm hạn chế bụi, tạo hạt nhanh, hao phí chi phí lao động thấp, thuận lợi để tự động hóa trình [3] Trong trình tạo hạt tầng sôi, kết tập tiểu phân chất rắn trình sấy khô hạt tiến hành đồng thời thiết bị Khối bột tạo hạt đảo trộn khí nóng Dịch tạo hạt phun vào khối bột, làm ẩm tạo cầu nối lỏng tiểu phân chất rắn Dưới tác dụng kh nóng, dung môi bay hơi, tá dược dính tạo thành cầu nối rắn liên kết tiểu phân chất rắn lại với nhau, tạo thành hạt [52] 1.3.4 Phun hỗn d ch nano ên h t  C chế bao tầng sôi: Trong trình bao tầng sôi, kh nóng th i từ lên qua phân phối kh đ t đáy, nhân bao luồng kh đảo trộn th i từ lên qua vùng phun dịch, dung dịch ho c hỗn dịch bao phân tán thành giọt chất lỏng nhỏ súng phun bám vào nhân bao Các giọt phun thấm ướt lan rộng bề m t nhân bao, hợp thành lớp màng lỏng Nhân bao tiếp tục bị đẩy lên phía rơi xuống buồng khí nóng, dung môi bay nhanh, tiểu phân chất bao hợp lại thành lớp màng liên tục phủ bề m t nhân bao [3] Hình 1.5 Thiết bị tầ g sôi th ờng dùng [8]  Một số nghiên cứu dù g h g h bao tầng sôi: Tác giả Zhiqiang Tian cộng (2013) nghiên cứu phun hệ nano lipid FB lên pellet nhân sử dụng máy bao tầng sôi Kết cho thấy phương pháp phù 10 hợp để rắn hóa hệ nano lipid: hạt thu có đ c tính vật lý tốt, không tồn FB dạng tinh thể pellet (theo kết phân tích nhiệt vi sai nhiễu xạ tia X) Pellet tạo thành có KTTP nano lipid trung bình 227,5 nm, lớn 94,1 nm so với tiểu phân nano lipid ban đầu Tuy nhiên, kết thử giải phóng nano lipid ban đầu pellet cho kết tương đương [55] Tác giả Yang Lei cộng (2011) tiến hành nghiên cứu phun hệ tự nhũ hóa lỏng lên pellet nhân kết luận phương pháp tiềm để rắn hóa hệ tự nhũ hóa [36] 1.3.5 o pe et sử dụng thiết b đùn – t o cầu Hỗn dịch nano lỏng phối hợp với tá dược rắn (có thể thêm tá dược dính thích hợp) thu khối ẩm Khối ẩm đem đùn tạo sợi vo tạo cầu thu pellet [58], [63] Dạng bào chế pellet có nhiều ưu điểm như: phân tán rộng đường tiêu hóa, giảm kích ứng, thời gian lưu dày định Đ c điểm giúp tối đa hóa hấp thu thuốc, đồng thời giảm biến đ i bất thường nồng độ đỉnh thuốc huyết tương Kết làm giảm tác dụng phụ tiềm ẩn mà không giảm sinh khả dụng thuốc Thêm vào đó, phương pháp đùn tạo cầu dễ dàng sản xuất với quy mô lớn mang lại hiệu cao [15] Tác giả Shashank Tummala cộng (2015) nghiên cứu thành công pellet phương pháp đùn – tạo cầu từ nano 5-FU bao chitosan (bào chế phương pháp nhũ hóa bốc dung môi) Pellet tạo thành bền giải phóng kéo dài 24 Điều dẫn đến giảm độc tính cho tế bào khỏe phần lớn thuốc định vị vùng đại tràng, nên giảm liều dùng cho bệnh nhân [58] Tại Đại học Dược Hà Nội, tác giả Ngô Thị Hằng nghiên cứu bào chế thành công pellet chứa hệ tự nhũ hóa artesunat phương pháp đùn tạo cầu đánh giá số đ c tính pellet bào chế được: hình thức cầu, đều, bề m t nhẵn; hiệu suất tạo pellet cao 85%; hàm lượng dược chất k ch thước tiểu phân gần không thay đ i nhiều độ hòa tan sau 20 phút đạt gần 95% [10] 11 1.3.6 N p nano thuốc vào nhựa trao đ i ion Nhựa trao đ i ion polyme liên kết chéo, không tan nước, mang nhiều nhóm chức tạo muối vị trí liên tiếp chuỗi polyme [50], [51] Nhựa trao đ i ion chia thành loại bản: nhựa trao đ i cation anion [49], [50], [51] Ở mức độ phân tử, cấu trúc nhựa trao đ i ion có nhóm liên kết phân bố dọc theo chuỗi polyme vị tr xác định Do đó, chế hấp phụ giữ vai trò định việc hình thành phức hợp nhựa trao đ i ion – dược chất Có kỹ thuật để để nạp thuốc vào nhựa: - Kỹ thuật mẻ: nhựa sau xử lý khuấy trộn với hỗn dịch nano điều kiện cụ thể đến trình trao đ i đạt trạng thái cân [49], [51] - Kỹ thuật cột: không thường ứng dụng bào chế, thường sử dụng tinh chế, phân tích kiểm nghiệm Tác giả Fatima S.D., Komal S1 cộng thực nghiên cứu bào chế viên nhai che vị đắng Clarithromycin từ phức hợp nhựa – dược chất Kết thử hòa tan cho thấy sau dược chất giải phóng tối đa gần không gây đắng (do phức hợp tạo thành ức chế giải phóng thuốc nước bọt) [23] 1.4 Một số n h n ứu t n ộ hòa tan fenofibrat Fenofibrat hoạt chất thuộc nhóm acid fibric, đời vào năm 1975 đưa vào sử dụng từ năm 90 kỷ XX FB có nhiều ưu điểm hẳn dẫn chất khác nhóm tần suất cường độ gây tác dụng phụ, đ c biệt không gây tương tác dược động học với dẫn chất thuộc nhóm statin [20], [24] Điều thuận lợi sử dụng kết hợp loại thuốc điều trị rối loạn tăng mỡ máu theo chế riêng biệt làm tăng hiệu điều trị mà lại an toàn cho người sử dụng [18], [59] Ngoài tác dụng làm giảm triglycerid, LDL – C (cholesterol xấu), cholesterol toàn phần (TC) apolipoprotein B, FB tăng đáng kể HDL – C (cholesterol tốt) apolipoprotein A [42], [56] Vì ưu điểm vượt trội đó, 12 FB dùng ph biến thuốc hạ mỡ máu kê đơn nhiều Tuy nhiên, FB có độ tan thấp, tốc độ hòa tan chậm, hấp thu phụ thuộc vào thể, chế độ ăn tình trạng tháo rỗng dày Nồng độ tối đa FA máu dao động từ 0,5 đến 10 g/ml Sự dao động lớn nồng độ thuốc máu làm sinh khả dụng không n định, hiệu điều trị không n định mà gây tăng tần suất xuất cường độ tác dụng phụ thuốc [9] Do vậy, tăng sinh khả dụng cách tăng độ hòa tan FB đề tài nhiều nhà khoa học quan tâm Để cải thiện khả hòa tan nâng cao sinh khả dụng FB, có nghiên cứu bào chế theo phương pháp khác nhằm tạo dạng bột siêu mịn FB Tác giả Vogt M cộng (2008) thực nghiên cứu biện pháp làm tăng độ tan FB phương pháp tạo vi hạt, nghiền có phối hợp chất diện hoạt phun sấy Bằng phương pháp phân t ch nhiệt vi sai nhiễu xạ tia X xác định có chuyển từ dạng kết tinh sang dạng vô định hình FB áp dụng phương pháp phun sấy [62] Để giảm liều dùng FB loại bỏ phụ thuộc vào tình trạng tháo rỗng dày (không phụ thuộc có m t thức ăn) nghiên cứu bào chế FB dạng nano công bố Một số dạng thuốc bào chế sở tiểu phân nano FB xuất như: TriCor® hãng Abbott FDA chứng nhận vào 11/2004 với phương pháp chế tạo xay nghiền, dạng bào chế viên nén hàm lượng 48 mg 145 mg Các chế phẩm có SKD không phụ thuộc vào thức ăn [1] Bằng kỹ thuật tạo hệ phân phối dược chất không tan dạng vi cầu, viên nén fenofibrat 160 mg có sinh khả dụng không phụ thuộc vào tình trạng tháo rỗng dày Các tác giả Guivarc’ch PH., Vachon MG Najib J nghiên cứu ảnh hưởng thức ăn đến sinh khả dụng viên bào chế từ vi cầu fenofibrat, kết cho thấy hai nhóm dùng thuốc đói no có thông số dược động học tương đương [30], [42] Tác giả Hanafy cộng (2007) nghiên cứu dạng hỗn dịch nano DissoCubes với cỡ hạt khoảng 338 nm dạng nano lipid rắn cỡ hạt < 58 nm 13 tương đương sinh khả dụng Cả hai dạng có sinh khả dụng cao dạng hỗn dịch vi hạt có k ch thước hạt < mm [33] Theo tác giả Yaping Chen cộng sự, kết mẫu liposome sử dụng lecithin cho sinh khả dụng lớn gấp lần so với viên nang bào chế từ bột siêu mịn FB [21] Tác giả Gogotsi cộng nghiên cứu phương pháp nghiền bi tạo nano FB với muối ăn mịn k ch thước 300 m tạo siêu vi hạt FB k ch thước giảm xuống 100 nm [38] Tác giả Tran Tuan Hiep nghiên cứu bào chế nano lipid fenofibrat làm tăng khả thẩm thấu thuốc qua hàng rào tiêu hóa Và chọn công thức tối ưu hóa để đạt kích thước hạt nhỏ (~ 150 nm), PDI nhỏ (< 0,4), giải phóng tốt (khoảng 60% thuốc giải phóng khỏi công thức đầu tiên, giải phóng tương đối chậm đến 24 giờ), độ n định vật lý tốt, hiệu suất nạp thuốc cao Hơn chứng minh có tăng cường rõ rệt tỷ lệ mức độ sinh khả dụng thuốc [57] Tác giả Võ Quốc Ánh, Hoàng Kiều Vân (2010) nghiên cứu thành công viên nén FB 160 mg từ hỗn dịch đ c vi hạt fenofibrat có độ hòa tan môi trường SLS 1% sau 20 phút đạt khoảng 98%, tương đương viên Lypanthyl supra 160 mg; cao dạng bột siêu mịn fenofibrat (đạt khoảng 33%) dạng bột nguyên liệu fenofibrat (đạt khoảng 8%) [1], [14] Hiện nay, Việt Nam có nghiên cứu làm tăng độ hòa tan sinh khả dụng FB sử dụng công nghệ nano Tuy nhiên, chưa thấy nghiên cứu rắn hóa hệ tiểu phân nano sử dụng phương pháp tạo hạt tầng sôi Do vậy, sau xây dựng công thức, quy trình bào chế hệ tiểu phân nano FB đánh giá số đ c tính hệ, khóa luận bước đầu nghiên cứu bào chế rắn hóa hệ tiểu phân nano FB theo phương pháp đề cập 14 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đố tƣợn 2.1 2.1.1 Nguyên v t iệu Bảng 2.1 Nguyên liệu đ ợc sử dụng trình thực nghiệm STT Tên nguyên liệu Nguồn gốc Tiêu chuẩn Fenofibrat Trung Quốc DĐVN IV Aerosil Bỉ USP 36 – NF 31 Avicel PH 102 Đức USP 36 – NF 31 Eudragit EPO Đức USP 36 – NF 31 Natri lauryl sulfat Trung Quốc USP 36 – NF 31 Natri starch glycolat Trung Quốc USP 36 – NF 31 Polyvinyl alcol (205) Singapore USP 36 – NF 31 Ethyl acetat Trung Quốc Tinh khiết hóa học Methanol Trung Quốc Tinh khiết hóa học 10 Acid phosphoric Đức Tinh khiết phân tích 11 Kali dihydro phosphat Đức Tinh khiết phân tích 12 Acid phosphoric Đức Tinh khiết phân tích 13 Nhựa Anhui HPD 826 Trung Quốc TCCS 2.1.2 hiết b - Máy đo Zeta xác định phân bố KTTP Zetasizer NanoZS90 (Anh) - Máy sắc ký lỏng hiệu cao HPLC Agilent 1260 (Mỹ) - Máy siêu âm cầm tay Vibra Cell, Sonics & Materials, INC (Mỹ) - Ống ly tâm chứa màng siêu lọc 10000Da, Millipore, Billerica, MA (Mỹ) - Tủ lạnh sâu Unicryo (Mỹ) - Máy tầng sôi Mini – Glatt (Đức) - Máy đông khô Alpha 1-2 LDplus, Martin Christ G GmnH (Đức) - Máy quang ph hồng ngoại FT-IR 6700 JASCO (Nhật Bản) - Máy quang ph UV-VIS Optima SP-3000 nano (Nhật Bản) - Máy thử độ hòa tan PHARMATEST (Đức) 15 - Máy lắc Vortex Mixter VM300 (Đức) - Máy lọc nước PURELAB classic UV, ELGA (Anh) - Máy đo pH SATORIUS TE 412 (Đức) - Máy đo độ trơn chảy ERWEKA GWF (Đức) - Máy đo tỷ trọng biểu kiến ERWEKA SMV (Đức) 2.2 - Nộ un n h n ứu Xây dựng quy trình bào chế tiểu phân nano FB Đánh giá ảnh hưởng số yếu tố tới đ c tính tiểu phân nano - Bước đầu bào chế rắn hóa hệ tiểu phân nano FB theo phương pháp: (i) Tạo hạt tầng sôi (ii) Tạo hạt kép: tạo hạt ướt – tạo hạt tầng sôi (iii) Tạo hạt mang dược chất nhựa trao đ i ion Đánh giá số đ c tính hạt: định lượng, khả giải phóng, KTTP nano sau phân tán lại, tương tác dược chất tá dược 2.3 Phƣơn pháp n h n ứu 2.3.1 Phương pháp bào chế tiểu phân nano fenofibrat Qua tham khảo đề tài “Nghiên cứu bào chế nano azithromycin phương pháp nhũ hóa khuếch tán dung môi” dược sĩ Nguyễn Cảnh Hưng [12], xây dựng phương pháp bào chế tiểu phân nano FB sau: 2.3.1.1 Cô g thức Bảng 2.2 Công thức bào chế tiểu phân nano FB Thành phần Số lƣợng Eudragit EPO + FB 1,5 g Ethyl acetat 10 ml Dung dịch PVA 0,5% (bão hoà với ml ethyl acetat) 50 ml Dung dịch PVA 0,1% (pha pha loãng) Thay đ i 2.3.1.2 Quy trình bào chế: - Chuẩn bị pha dầu: hoà tan FB polyme Eudragit EPO vào ethyl acetat - Chuẩn bị pha nước: dd polyvinyl alcol (PVA) nồng độ 0,5% Trong đó: 16 -  Phương pháp 1: dd PVA EA  Phương pháp 2: dd PVA bão hòa EA Giai đoạn nhũ hoá: pha dầu nhỏ từ từ vào pha nước (dung dịch PVA 0,5%) Thiết bị đồng máy siêu âm cầm tay Trong trình đồng trì nhiệt độ – 10oC nước đá kết hợp khuấy từ - Khuếch tán dung môi: phối hợp nhanh nhũ tương thu với pha pha loãng (dung dịch PVA 0,1%) khuấy trộn khuấy từ - Bốc dung môi: tiếp tục khuấy từ nhẹ nhàng để bốc dung môi hữu - Sản phẩm đánh giá tiêu rắn hóa 2.3.1.3 S đồ quy trình bào chế: Hình 2.1 S đồ quy trình bào chế tiểu phân nano 2.3.2 Phương pháp rắn h a nano fenofibrat 2.3.2.1 Tạo hạt tầng sôi  Thiết bị: Máy tầng sôi Mini – Glatt  Quy trình tiến hành: - Chuẩn bị tá dược dính: hỗn dịch nano tương ứng 0,75 g FB bào chế trình bày mục 2.3.1 (không sử dụng pha pha loãng) Phân tán 0,15 g Aerosil vào hỗn dịch nano Lọc hỗn dịch qua rây 0,125 mm 17 - Chuẩn bị bột kép: Rây, cân, trộn bột kép với thành phần bảng 2.3 Đưa hỗn hợp vào buồng bao Bảng 2.3 Thành phần bột kép Khố lƣợng (g) Avicel PH 102 10 NaLS Khảo sát Natri starch glycolat 0,4 Phun tá dược dính chuẩn bị vào buồng bao với thông số sau: - - Thành phần  Lưu lượng khí vào: 9,0 – 20,0 m3/giờ  Nhiệt độ khí vào: 65 – 70oC  Nhiệt độ thực buồng bao  Áp suất khí phun: 1,3 bar  Tốc độ phun dịch: 1,0 – 1,2 ml/phút 45oC  Đường kính vòi phun: 0,5 mm  Thời gian giũ: giây/lần Sau phun hết tá dược dính, sấy hạt thêm 10 phút lấy để bảo quản túi nilon kín 2.3.2.2 Tạo hạt ớt – tạo hạt tầng sôi  Thiết bị: Máy tầng sôi Mini – Glatt lắp đ t với súng phun từ xuống  Sơ đồ quy trình: Hình 2.2 S đồ quy trình tạo hạt kép 18  Mô tả cách tiến hành: - Bước 1: Tạo hạt ướt  Chuẩn bị tá dược dính: với PP dd PVP K30 10% nước, PP HD nano tương ứng 0,75 g FB bào chế trình bày mục 2.3.1  Chuẩn bị bột kép: Nghiền, rây ( = 0,355 mm), cân, trộn bột kép với thành phần bảng 2.3  Tạo hạt: Nhào ẩm khối bột với lượng tá dược dính vừa đủ, ủ khối bột ẩm 15 – 30 phút Xát hạt ướt qua rây 1,0 mm, sấy 50oC/2 Sửa hạt chọn hạt khoảng k ch thước từ 0,8 – 1,0 mm  Bảo quản túi nilon k n có nút kéo, để nơi khô thoáng đến sử dụng - Bước 2: Tạo hạt tầng sôi  Chuẩn bị dịch phun: với PP hỗn dịch nano tương ứng với 0,75 g FB; với PP phần hỗn dịch nano lại sau tạo hạt ướt Phân tán 0,15 g Aerosil vào hỗn dịch nano Rây hỗn dịch qua rây 0,125 mm  Chuẩn bị nhân bồi: hạt ướt tạo thành bước  Tạo hạt tầng sôi: phun dịch với thông số mục 2.3.2.1 Sau hết dịch, sấy hạt thêm 10 phút  Bảo quản túi nilon k n có nút kéo, để nơi khô thoáng đến đánh giá tiêu chất lượng hạt 2.3.2.3 Tạo hạt ma g d ợc chất nhựa trao đổi ion - Chuẩn bị hỗn dịch nano: Như trình bày mục 2.3.1 không sử dụng pha pha loãng (tương ứng 150 mg FB) - Chuẩn bị nhựa: Cân g nhựa (thay đ i) Rửa với nước cất nhiều lần để loại chất bẩn bụi nhiễm vào trình sản xuất bảo quản [49] - Hoạt hóa nhựa dd NaOH 4% Sau nhựa trung tính lại nước [49] - Nạp nano vào nhựa: Nhựa phối hợp với hỗn dịch nano: khuấy tỷ lệ khối lượng khoảng thời gian (khảo sát) 19 Thu sản phẩm: Rửa sản phẩm lần với nước RO Sấy nhiệt độ 50oC đến - hàm ẩm – 4% Chọn hạt có k ch thước lớn 0,8 mm Bảo quản túi nilon kín ác phương pháp đánh giá 2.3.3 2.3.3.1 h g h đị h ợ g fe ofibrat  Phương pháp đo quang: Định lượng bước sóng 291 nm Dung dịch chuẩn: Cân xác khoảng 10,0 mg FB cho vào bình định mức - 100,0 ml; thêm 10 ml MeOH, lắc ho c siêu âm cho tan hết; b sung đủ thể tích dd NaLS 0,72% Pha loãng 10 lần NaLS 0,72% Đo độ hấp thụ dung dịch chuẩn bước sóng 291 nm Dung dịch thử: Cân ch nh xác lượng hạt chứa khoảng 10 mg FB vào bình - định mức 100,0 ml; tiến hành tương tự dd chuẩn thu dd có nồng độ FB khoảng 10 g/ml Đo độ hấp thụ dung dịch thử - Tính toán, xử lý kết  Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPL ) Fenofibrat mẫu thử định lượng phương pháp HPLC với điều kiện sắc ký cụ thể tham khảo theo USP 36 sau [60]: - Pha động: hỗn hợp methanol: dd KH2PO4 10-3 M pH 2,9 (80:20) - Dung dịch chuẩn: dd có nồng độ 60 µg/ml FB pha động - Dung dịch thử: mẫu thử định lượng, mẫu thử để đánh giá EE LC, mẫu thử hòa tan hạt mục 2.3.2.3, mẫu thử đánh giá lượng nano sau phân tán lại hạt tầng sôi với nước Mẫu chuẩn mẫu thử lọc qua màng lọc 0,45 µm - Điều kiện sắc ký:  Cột sắc ký: Cột Agilent XDB – C18 (150 mm x 4,6 mm, hạt nhồi µm)  Bước sóng phát hiện: 291 nm, detector DAD  Thể tích tiêm mẫu: 20 µl  Tốc độ dòng: ml/phút  Nhiệt độ: 20 – 30oC 20  Chế độ tiêm mẫu: tiêm mẫu tự động Tính toán xử lý kết dựa vào nồng độ diện t ch pic tương ứng 2.3.3.2 a Đ h h gi g h đ h gi đặc tính hệ tiểu phân nano fenofibrat hâ bố kích th ớc tiểu phân zeta  Thiết bị: máy phân t ch k ch thước tiểu phân Zetasizer Nano ZS90  Quy trình: Tiến hành pha loãng hỗn dịch nước cất để số “Cou t Rate” nằm khoảng 200 – 400 kcps Mẫu pha loãng đưa vào buồng đo điều kiện nhiệt độ đo 25oC b Đ h gi hiệu suất mang thuốc tiểu phân nano Qua tham khảo khóa luận tốt nghiệp dược sĩ Vũ Thị An Hòa (2016) [11], tiến hành đánh giá hiệu suất mang thuốc tiểu phân nano sau: Xác định lượng dược chất tự do: Lấy xác thể tích hỗn dịch chứa tiểu phân nano FB đưa vào ống ly tâm có màng siêu lọc 10 kDa Tiến hành ly tâm 5000 vòng/phút thời gian 30 phút nhiệt độ phòng, lấy phần dịch lọc phía màng siêu lọc tiêm vào hệ sắc ký lỏng hiệu cao để định lượng FB tự Xác định lượng dược chất toàn phần: Lấy xác thể tích hỗn dịch nano FB pha loãng bình định mức thích hợp để thu nồng độ dược chất khoảng g/ml đến 100 g/ml, cho pha động vào siêu âm cho tan hết, b sung thể tích pha động Lọc dịch toàn phần qua màng 0,45 µm tiêm vào hệ sắc ký lỏng hiệu cao để định lượng FB toàn phần Hiệu suất tạo nano d ợc chất đ ợc tính theo công thức sau: EE (%) = Ctp - Ctd Ctp x 100% Trong đó: + Ctp: Là nồng độ toàn phần dược chất hỗn dịch nano (µg/ml) + Ctd: Là nồng độ tự dược chất hỗn dịch nano (µg/ml) Hiệu suất mang thuốc hệ tiểu phân nano: LC (%) = mNano mHệ 21 x 100% Trong đó: + mNano: Khối lượng FB tạo thành nano (mg) + mHệ: T ng khối lượng hệ nano bao gồm dược chất tá dược sử dụng bào chế nano (mg) 2.3.3.3 h a h g h g h đ h gi số tiêu hạt rắn hóa thử hòa tan Thử độ hòa tan tiến hành thiết bị thử độ hòa tan PHARMATEST với thông số thử độ hòa tan [60]:  Môi trường thử hòa tan: dd NaLS 0,72%  Nhiệt độ: 37 ± 0,5oC  Thể t ch môi trường hòa tan: 900 ml  Tốc độ cánh khuấy: 75 ± vòng/phút  Khối lượng mẫu thử: Lượng mẫu tương ứng 48 mg fenofibrat  Thời gian thử: 30 phút Lấy mẫu thời diểm 5, 10, 15, 20, 30 phút lọc qua màng 0,45 µm Xác định lượng dược chất giải phóng thời điểm phương pháp đo quang ho c HPLC b Đo hổ FT-IR  Thiết bị: Máy đông khô Martin Christ Alpha 1-2 LDplus máy quang ph hồng ngoại FT-IR 6700  Quy trình tiến hành: Mẫu hỗn dịch nano sau bào chế tiến hành đông khô với trình:  Tiền đông: hỗn dịch đưa vào tủ âm sâu (-70oC)  Đông khô: áp suất 0,1 mbar, nhiệt độ -50oC thời gian 24 Nghiên cứu đo ph hồng ngoại nguyên liệu FB, Eudragit EPO, hỗn hợp vật lý, tiểu phân nano đông khô, hạt rắn hóa thực máy quang ph hồng ngoại JASCO Mẫu trộn với bột KBr tỷ lệ khối lượng khoảng 1:20 ép thành viên Quét ph khoảng 4000 – 400 cm-1 Quá trình diễn điều kiện độ ẩm 60% 22 c Đ h gi tiêu chất ợng hạt  Tỷ trọng hạt: - Tỷ trọng thô (dt): Là khối lượng đơn vị thể tích bột, đo cách đong thể tích bột sau cân khối lượng tính dt - Tỷ trọng biểu kiến (dbk): Là tỷ trọng khối bột đo điều kiện rung lắc để tiểu phân xếp đ c khít thành thể tích tối thiểu Đo cách sau đong bột, gõ theo chương trình định, đọc thể t ch xếp đ c khít Cân khối lượng bột tính dbk - Thông qua việc xác định loại tỷ trọng hạt, đánh giá gián tiếp khả trơn chảy hạt cách xác định số Carr (C) theo công thức: C= (Chỉ số Carr từ 21 – 22 khả ă g tr (dbk – dt) x 100 dbk chảy tốt, từ 34 – 43 khả ă g tr C > 45 hạt khả ă g tr chảy kém, chảy) [3]  Đánh giá độ trơn chảy hạt - Đ lượng bột (khoảng 20 gam) lên phễu máy đo độ trơn chảy ERWEKA dùng phễu có đường kính 15 mm - Gạt khối hạt phễu khởi động máy Kết quả: Đọc tốc độ trơn chảy (gam/giây – g/s) d S đánh giá KTTP tiểu phân nano sau phân tán lại hạt tầng sôi - Chuẩn bị: Cân ch nh xác lượng hạt tương ứng với 2,5 mg DC cho vào ống ly tâm, phân tán với xác ml nước cất Dùng máy lắc votex phút - Ly tâm 5000 vòng/phút phút - Phân tích: + 4ml phần dịch đo KTTP định lượng HPLC Định lượng hàm lượng dược chất hạt tầng sôi T nh toán lượng dược chất có 4ml dịch so với t ng lượng hạt đưa vào (%kl/kl) 23 ... Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano fenofibrat với mục tiêu sau: Xây dựng công thức, quy trình bào chế tiểu phân nano fenofibrat đánh giá số đặc tính tiểu phân nano Bước đầu nghiên cứu bào chế. .. Phân loại nano polyme mang thuốc 1.2.3 Một số phương pháp bào chế tiểu phân nano polyme 1.2.4 Tính chất số tiêu đánh giá hệ tiểu phân nano 1.2.5 Nhược điểm độ n định tiểu phân nano. .. hướng tiểu phân, xác định vị trí tiểu phân tế bào [13] Ph cộng hưởng từ hạt nhân ghi hình ảnh ba chiều tiểu phân, chụp tiểu phân nm [13] 1.2.4.2 Phân bố kích th ớc tiểu phân Yêu cầu hệ có phân