ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM LIỄU THANH NHÀN ĐINH LƢỢNG ĐỒNG THỜI ACETAMINOPHEN, LORATADIN VÀ ̣ DEXTROMETHOPHAN HYDROBROMIT TRONG THUỐC RHUMENOL FLU 500 BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VÀ PHƢƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ PHÂN TỬ Chuyên ngành : Hóa phân tích Mã số: 60.44.01.18 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC VẬT CHẤT Hƣớng dẫn khoa học : PGS.TS Mai Xuân Trƣờng THÁI NGUYÊN - NĂM 2016 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng bấ t cứ mô ̣t công triǹ h nào Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Thái Nguyên, tháng 04 năm 2016 Xác nhận giảng viên hƣớng dẫn Tác giả luận văn PGS TS Mai Xuân Trƣờng Liễu Thanh Nhàn XÁC NHẬN CỦA KHOA HÓA HỌC i Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập thực luận văn, tác giả nhận nhiều quan tâm, động viên giúp đỡ thầy giáo, cô giáo, bạn bè gia đình Tác giả bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: Khoa Hóa ho ̣c , Phòng đào tạo - Trường Đại học Sư phạm - Đa ̣i ho ̣c Thái Nguyên, thầy cô giáo tham gia giảng dạy cung cấp kiến thức giúp suốt trình học tập nghiên cứu Đặc biệt tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo PGS.TS Mai Xuân Trường người tận tình hướng dẫn bảo giúp đỡ suốt trình nghiên cứu, thực hoàn thành luận văn Cuối xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè người bên tôi, động viên khuyến khích trình thực đề tài nghiên cứu Với khố i lươ ̣ng công viê ̣c lớn , thời gian nghiên cứu có hạn, khả nghiên cứu còn ̣n chế , chắn luận văn tránh khỏi thiếu sót Tác giả mong nhận ý kiến đóng góp chân thành từ thầy giáo, cô giáo bạn đọc Xin chân thành cảm ơn ! Thái Nguyên, tháng 04 năm 2016 Tác giả Liễu Thanh Nhàn ii Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục từ viết tắt luận văn iv Danh mục bảng luận văn v Danh mục hình luận văn vi MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan acetaminophen, loratadin dextromethophan HBr 1.1.1 Acetaminophen 1.1.2 Loratadin 1.1.3 Dextromethophan HBr 1.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 1.2.1 Nguyên tắc phương pháp HPLC 1.2.2 Các đại lượng đặc trưng trình sắc ký 1.2.3 Hệ thống máy HPLC 12 1.3 Kết xác định số chất 12 1.3.1 Kết xác định số chất theo phương pháp HPLC 12 1.3.2 Kết xác định số chất theo phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 22 Chƣơng THỰC NGHIỆM 25 2.1 Nội dung nghiên cứu 25 2.1.1 Phương pháp HPLC 25 2.1.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 25 2.2 Phương pháp nghiên cứu 26 2.2.1 Phương pháp nghiên cứ u lý thuyế t 26 iii Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn 2.2.2 Phương pháp thực nghiê ̣m 26 2.3 Đánh giá độ tin cậy quy trình phân tích 27 2.3.1 Giới hạn phát (LOD) 27 2.3.2 Giới hạn định lượng (LOQ) 27 2.3.3 Đánh giá độ tin cậy phương pháp 27 2.3.4 Đánh giá kết phép phân tích theo thống kê 29 2.4 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 29 2.4.1 Thiết bị 29 2.4.2 Dụng cụ 29 2.4.3 Hóa chất 30 2.4.4 Chế phẩm Rhumenol Flu 500 30 2.5 Chuẩn bị dung môi để hòa tan mẫu 30 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Phương pháp HPLC 32 3.1.1 Xây dựng điều kiện để xác định đồng thời chất ACE, LOR DEX 32 3.1.2 Đánh giá phương pháp định lượng 35 3.1.3 Xác định ACE, LOR DEX thuốc Rhumenol Flu 500 kiểm tra độ phương pháp thêm chuẩn 40 3.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 43 3.2.1 Khảo sát phổ hấp thụ phân tử ACE, LOR DEX 43 3.2.2 Khảo sát phụ thuộc độ hấp thụ quang ACE, LOR DEX vào pH 44 3.2.3 Khảo sát phụ thuộc độ hấp thụ quang ACE, LOR DEX theo thời gian 44 3.2.4 Khảo sát phụ thuộc độ hấp thụ quang ACE, LOR DEX theo nhiệt độ 46 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn 3.2.5 Khảo sát khoảng tuyến tính tuân theo định luật Bughe – Lambe – Bia ACE, LOR DEX Xác định số LOD LOQ 47 3.2.6 Khảo sát đánh giá độ tin cậy phương pháp nghiên cứu mẫu tự pha 54 3.2.7 Xác định hàm lượng ACE , LOR DEX thuốc Rhumenol Flu 500 đánh giá độ của phép phân tích theo phươn g pháp thêm chuẩn 61 KẾT LUẬN 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO 68 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT CỦA LUẬN VĂN Tiếng Việt Tiếng Anh Viết tắt Axetaminophen Acetaminophen ACE Loratadin Loratadine LOR Dextromethophan hydrobromit Dextromethorphan hydrobromide DEX Giới hạn phát Limit Of Detection LOD Giới hạn định lượng Limit Of Quantity LOQ Sai số tương đối Relative Error Độ lệch chuẩn Standard Deviation Phương pháp sắc ký lỏng hiệu High Performance Liquid cao Chromatography iv Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.ltc.tnu.edu.vn RE S hay SD HPLC DANH MỤC CÁC BẢNG CỦA LUẬN VĂN Trang Bảng 3.1 Giá trị đại lượng đặc trưng 36 Bảng 3.2 Kết khảo sát thời gian lưu 36 Bảng 3.3 Kết khảo sát diện tích pic 37 Bảng 3.4 Mối tương quan nồng độ diện tích pic ACE, LOR DEX 38 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ lặp lại 39 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ 42 Bảng 3.7 Kết phân tích thuốc Rhumenol Flu 500 44 Bảng 3.8 Độ hấp thụ quang ACE, LOR DEX ở giá trị pH 44 Bảng 3.9 Sự phu ̣ thuô ̣c độ hấp thụ quang ACE, LOR DEX theo thời gian 45 Bảng3.10 Sự phu ̣ thuô ̣c độ hấp thụ quang ACE, LOR DEX theo nhiệt độ 46 Bảng 3.11 Độ hấp thụ quang dung dịch ACE ở giá trị nồng độ 48 Bảng 3.12 Kết xác đinh ̣ LOD LOQ ACE 50 Bảng 3.13 Sự phu ̣ thuô ̣c đô ̣ hấ p thu ̣ quang của LOR theo nồng độ 51 Bảng 3.14 Kết tính LOD LOQ LOR 52 Bảng 3.15 Sự phu ̣ thuô ̣c đô ̣ hấ p thu ̣ quang của DEX theo nồ ng độ 53 Bảng 3.16 Kết tính LOD LOQ DEX 54 Bảng 3.17 Pha chế các dung dich ̣ hỗn hơ ̣p ACE và LOR 55 Bảng 3.18 Kế t quả tin ́ h nồ ng đô ,̣ sai số của ACE và LOR hỗn hơ ̣p 55 Bảng 3.19 Pha chế các dung dich ̣ hỗn hơ ̣p ACE và DEX 56 Bảng 3.20 Kế t quả tin ́ h nồ ng đô ,̣ sai số của ACE và DEX hỗn hơ ̣p 57 Bảng 3.21 Pha chế các dung dich ̣ hỗn hơ ̣p LOR DEX 58 Bảng 3.22 Kế t quả tin ́ h nồ ng đô ,̣ sai số của LOR DEX hỗn hơ ̣p 58 Bảng 3.23 Pha dung dịch chuẩ n ACE, LOR, DEX và hỗn hơ ̣p 59 Bảng 3.24 Kế t quả tính nồng độ, sai số của ACE, LOR DEX 60 v Bảng 3.25 Kết tính nồng độ, sai số ACE, LOR DEX mẫu thuốc Rhumenol Flu 500 62 Bảng 3.26 Thành phần dung dịch chuẩn ACE, LOR DEX thêm vào dung dịch mẫu thuốc Rhumenol Flu 500 64 Bảng 3.27 Kết xác định độ thu hồi ACE, LOR DEX mẫu thuốc Rhumenol Flu 500 64 DANH MỤC CÁC HÌNH CỦA LUẬN VĂN Trang Hình 3.1 Sắc ký đồ ACE (500 µg/mL) 33 Hình 3.2 Sắc ký đồ LOR (5 µg/mL) 33 Hình 3.3 Sắc ký đồ DEX (15 µg/mL) 34 Hình 3.4 Sắc ký đồ DEX (1), ACE (2) LOR (3) 35 Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic ACE 38 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic LOR 39 Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích pic DEX 39 Hình 3.8 Phổ hấp thụ dung dịch chuẩn ACE, LOR DEX 43 Hình 3.9 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang ACE, LOR DEX theo thời gian 45 Hình 3.10 Sự phu ̣ thuô ̣c đô ̣ hấ p thu ̣ quang của ACE , LOR DEX theo nhiê ̣t đô 47 ̣ Hình 3.11 Phổ hấp thụ quang ACE ở nồng độ 0,1  50,0 g/mL 48 Hình 3.12 Đường hồi quy tuyến tính biểu diễn phụ thuộc độ hấp thụ quang A vào nồ ng đô ̣ ACE 49 Hình 3.13 Phổ hấp thụ quang LOR ở nồng độ 0,1  50,0 g/mL 50 Hình 3.14 Đường hồi quy tuyến tính biểu diễn phụ thuộc độ hấp thụ quang A vào nồng độ LOR 51 Hình 3.15 Phổ hấp thụ quang DEX ở nồng độ 0,1  50,0 g/mL 52 Hình 3.16 Đường hồi quy tuyến tính biểu diễn phụ thuộc độ hấp thụ quang A vào nồ ng đô ̣ DEX 53 vi Bảng 3.21 Pha chế các dung dich ̣ hỗ n hơ ̣p LOR DEX CLOR Mẫu CDEX CLOR CDEX VLOR(1) VLOR(2) VDEX 10,00 100,00 5,00 (g/mL) (g/mL) (g/mL) 1/1 1,00 1,00 1,0 - 2,0 10/1 10,00 1,00 - 1,0 2,0 20/1 20,00 1,00 - 2,0 2,0 30/1 30,00 1,00 - 3,0 2,0 40/1 40,00 1,00 - 4,0 2,0 70/1 35,00 0,50 - 3,5 1,0 80/1 40,00 0,50 - 4,0 1,0 90/1 45,00 0,50 - 4,5 1,0 Thực hiê ̣n phép đo đô ̣ hấ p thu ̣ quang hỗn hợp khoảng bước sóng 200 – 300 nm, 0,5 nm lấy giá trị Từ số liệu đo quang tiến hành tính hàm lượng LOR DEX theo chương trình lọc Kalman Kết trình bày ở bảng 3.22 Bảng 3.22 Kế t quả tính nồ ng đô ̣, sai số của LOR DEX hỗn hơ ̣p Mẫu CLOR RE% RE% CLOR CDEX CDEX CLOR CDEX CLOR CDEX 1/1 1,00 1,00 1,01 1,00 0,90 -0,19 10/1 10,00 1,00 10,45 1,00 4,51 -0,25 20/1 20,00 1,00 20,09 1,00 0,45 -0,32 30/1 30,00 1,00 30,16 1,00 0,53 0,44 40/1 40,00 1,00 40,29 1,01 0,73 0,86 70/1 35,00 0,50 35,82 0,51 2,34 1,2 80/1 40,00 0,50 40,37 0,50 0,93 0,76 90/1 45,00 0,50 45,24 0,51 0,53 2,46 58 Trong đó: C0LOR C0DEX (μg/mL) hàm lượng LOR DEX tự pha hỗn hơ ̣p CLOR CDEX (μg/mL) hàm lượng LOR DEX xác định theo phương pháp lọc kalman RE% CLOR RE% CDEX sai số phép xác định hàm lượng LOR DEX Nhận xét: Kết thu ở bảng 3.22 cho thấy hàm lượng LOR/DEX từ 1/1 đến 90/1 lần phương pháp lọc Kalman mắc sai số nhỏ hơn5% 3.2.6.4 Xác định hàm lượng ACE , LOR DEX các hỗn hợp tự pha Tiế n hành lấ y các thể tić h ACE, LOR DEX bảng 3.23 pha loañ g bằ ng HCl 0,1M và đinh ̣ mức thành DEX có tỷ lê ̣ C ACE/ 25 mL, ta đươ ̣c các hỗn hơ ̣p ACE, LOR, CLOR/CDEX bảng 3.23 Thực hiê ̣n phép đo đô ̣ hấ p thụ quang hỗn hợp khoảng bước sóng 200  300 nm; cứ 0,5 nm lấy giá trị Bảng 3.23 Pha dung dịch chuẩ n ACE , LOR, DEX và hỗn hơ ̣p CACE VACE VLOR VLOR VLOR VDEX VDEX VDEX CLOR 50 50 0,5 50 0,5 CDEX (μg/mL) (μg/mL) (μg/mL) (μg/mL) (μg/mL) (μg/mL) (μg/mL) 1:1:1 1,2 1,2 - - 1,2 - - 10:1:1 1,2 - 1,2 - - 1,2 - 30:1:2 1,2 - - 4,0 - 0,9 - 40:1:2 1,2 - - 3,0 - 0,6 - 90:1:3 0,9 - - 1,0 - - 3,0 100:1:3 1,0 - - 1,0 - - 3,0 Đo đô ̣ hấ p thu ̣ quang hỗn hợp khoảng bước sóng 200 – 300 nm, 0,5 nm lấy giá trị Từ kết đo quang tiến hành tính hàm lượng ACE , LOR DEX theo chương trình lọc Kalman bày ở bảng 3.24 59 Kế t quả trình Bảng 3.24 Kế t quả tính nồ ng đô ̣, sai số của ACE, LOR DEX CACE CLOR C0ACE C0LOR C0DEX CACE CLOR CDEX CDEX RE% RE% RE% CACE CLOR CDEX 1:1:1 6,00 6,00 6,00 6,01 6,00 5,99 0,17 0,07 -0,17 10:1:1 6,00 0,60 0,60 6,01 0,60 0,58 0,19 0,57 -2,9 30:1:2 6,00 0,20 0,40 6,01 0,20 0,384 0,15 0,93 -4,02 40:1:2 6,00 0,15 0.30 6,01 0,24 0,28 0,1 60,22 -6,15 90:1:3 4,50 0,05 0,15 4,51 0,00 0,13 0,13 -90,15 15,31 100:1:3 5,00 0,05 0,15 5,01 0,05 0,13 0,12 6,01 -15,01 Trong đó: C0 nồng độ ACE, LOR DEX (g/mL) pha chế đã biết C nồng độ ACE, LOR DEX (g/mL) tính theo phương pháp lọc kalman RE% sai số phép xác định hàm lượng ACE, LOR DEX Trong khoảng nồ ng đô ̣ C ACE:CLOR:CDEX = 1:1:1 đến 30:1:2 kết đo có sai số nhỏ (5% đố i với cấ u tử có nồng độ nhỏ và dưới 1% với cấ u tử có nồ ng đô ̣ lớn ) Như vâ ̣y, phương pháp lọc Kalman chủ yế u mắ c sai số lớn đố i với cấ u tử có nồ n g đô ̣ nhỏ Như xác định hàm lượng ACE hỗn hợp tương đối xác ACE có hàm lượng lớn Tuy nhiên xác định LOR DEX hỗn hợp hàm lượng LOR DEX nhỏ Do đó, để xác định hàm lượng ACE, LOR DEX mẫu thuốc Rhumenol Flu 500 cần sử dụng phương pháp thêm chuẩn 60 3.2.7 Xác định hàm lƣợng ACE, LOR DEX thuốc Rhumenol Flu 500 đánh giá độ của phép phân tích theo phƣơng pháp thêm chuẩn 3.2.7.1 Xác định hàm lượng ACE, LOR DEX thuốc Rhumenol Flu 500 Tiế n hành đinh ̣ lươ ̣ng đồ ng thời ACE, LOR DEX thuốc viên nén Rhumenol Flu 500 sản xuất bởi CTCP liên doanh dược phẩm medipharco tenamyd số Nguyễn Trường Tộ- P Phước Vinh - TP.Huế- Tỉnh TT.Huế Số lô SX: 080115 Ngày SX: 15/01/2015 Hạn dùng: 14/01/2018 Thành phần theo công bố 500mg ACE; 5mg LOR 15mg DEX viên Xử lý mẫu thuốc: Cân 20 viên thuốc, tính khối lượng trung bình viên ( X = 0,7835g) Đem nghiền nhỏ thành bột mịn lấy xác lượng bột tương đương 1/10 viên (chứa 50 mg ACE, 0,5 mg LOR 1,5 mg DEX) cho vào bình định mức 100 mL, định mức dung dịch HCl 0,1M sau rung siêu âm khoảng 15 phút Đem lọc, bỏ khoảng 40 mL dung dịch đầu, lấy 10 mL dung dịch lọc đem định mức thành 100 mL thu dung dịch gốc chứa hàm lượng tương đương ACE 50 g/mL, LOR 0,5 g/mL DEX 1,5 g/mL gọi dung dịch gốc Sau tiếp tục lấy thể tích dung dịch gốc mL; mL; mL; mL; mL vào bình định mức 10 mL định mức tới vạch dung dịch HCl 0,1M, thu tỉ lệ nồng độ ACE:LOR:DEX bảng 3.25 - Thực hiê ̣n phép đo độ hấp thụ quang máy UV -Vis 1700 SHIMADZU khoảng bước sóng từ 200 - 300 nm; 0,5 nm ghi giá trị - Từ kết đo đô ̣ hấ p thu ̣ quang , sử du ̣ng chương trình lọc Kalman để tính toán chúng thu đươ ̣c kết ở bảng 3.25 61 Bảng 3.25 Kết tính nồng độ, sai số ACE, LOR DEX mẫu thuốc Rhumenol Flu 500 Vdd C0ACE C0LOR C0DEX C ACE mL C LOR C DEX RE% RE% RE% C ACE C LOR C DEX 1,00 5,00 0,05 0,15 5,02 0,00 0,25 0,32 -96,31 69,15 2,00 10,00 0,10 0, 30 10,19 0,03 0,53 1,89 -72,06 76,19 3,00 15,00 0,15 0,45 15,06 0,15 0,66 0,37 -48,35 46,07 4,00 20,00 0,20 0,60 19,88 0,20 0,79 -0,60 -27,72 31,24 5,00 25,00 0,25 0,75 24,62 0,25 0,83 -1,52 -14,24 10,45 Trong đó: C0 nồng độ ACE, LOR DEX (g/mL) mẫu thuốc Rhumenol Flu 500 C nồng độ ACE, LOR DEX (g/mL) tính toán theo phương pháp lọc kalman; RE% sai số phép xác định hàm lượng ACE, LOR DEX Nhận xét: Qua bảng 3.25 nhận thấy xác định ACE hỗn hợp tương đối xác ACE có hàm lượng lớn , sai số mắc phải phép xác định LOR DEX lớn Vì để xác định hàm lươ ̣ng LOR DEX mẫu thuốc Rhumenol Flu 500 cần phải sử dụng phương pháp thêm chuẩn 3.2.7.2 Đánh giá độ của phép phân tích hàm lượng ACE , LOR DEX thuốc Rhumenol Flu 500 theo phương pháp thêm chuẩn Đánh giá độ phương pháp bằ ng cách thêm vào dung dich ̣ mẫu phân tić h mô ̣t lươ ̣ng chin ́ h xác ACE, LOR DEX đã biế t nồ ng đô ̣ Đo phổ và tính độ thu hồi ACE, LOR DEX mẫu qua đó đánh giá đô ̣ tin câ ̣y của phép phân tích Lấy xác lượng bột thuốc Rhumenol Flu 500 tương đương 1/10 viên (chứa 50 mg ACE; 0,5 mg LOR 1,5 mg DEX) sau thêm vào lượng 62 thuốc lượng DEX theo bảng 3.26 hòa tan dung dịch HCl 0,1M sau rung siêu âm khoảng 15 phút, định mức thành 100ml Đem lọc, bỏ khoảng 40 mL dung dịch đầu, lấy 10 mL dung dịch lọc đem định mức dung dịch HCl 0,1M thành 100 mL gọi dung dịch 1; Tiếp tục lấy 10mL dung dịch 1; 2; đem định mức dung dịch HCl 0,1M thành 100mL thu mẫu 1; 2; chứa hàm lượng ACE 5,00 g/mL; LOR 0,05 g/mL DEX 2,15 g/mL; 4,15 g/mL 6,15 g/mL Lấy xác lượng bột thuốc Rhumenol Flu 500 tương đương 1/10 viên (chứa 50 mg ACE; 0,5 mg LOR 1,5 mg DEX) sau thêm vào lượng thuốc lượng LOR theo bảng 3.26 hòa tan dung dịch HCl 0,1M sau rung siêu âm khoảng 15 phút, định mức thành 100ml Đem lọc, bỏ khoảng 40 mL dung dịch đầu, lấy 10 mL dung dịch lọc đem định mức dung dịch HCl 1M thành 100 mL gọi dung dịch 4; Tiếp tục lấy 10mL dung dịch 4; 5; đem định mức dung dịch HCl 1M thành 100mL thu mẫu 4; 5; chứa hàm lượng ACE 5,00 g/mL; DEX 0,15 g/mL LOR 2,05 g/mL; 4,05 g/mL 6,05 g/mL Lấy xác lượng bột thuốc Rhumenol Flu 500 tương đương 1/10 viên (chứa 50 mg ACE; 0,5 mg LOR 1,5 mg DEX) sau thêm vào lượng thuốc lượng ACE theo bảng 3.26 hòa tan dung dịch HCl 0,1M sau rung siêu âm khoảng 15 phút, định mức thành 100ml Đem lọc, bỏ khoảng 40 mL dung dịch đầu, lấy 10 mL dung dịch lọc đem định mức dung dịch HCl 1M thành 100 mL gọi dung dịch Tiếp tục lấy 10mL dung dịch 7; đem định mức dung dịch HCl 1M thành 100mL thu mẫu 7; chứa hàm lượng LOR 0,05 g/mL; DEX 0,15 g/mL ACE 7,00 g/mL 9,00 g/mL 63 Bảng 3.26 Thành phần dung dịch chuẩn ACE, LOR DEX thêm vào dung dịch mẫu thuốc Rhumenol Flu 500 mACE mLOR mDEX (mg) (mg) (mg) - - - Mẫu CACE CLOR CDEX 20 5,00 0,05 2,15 - 40 5,00 0,05 4,15 - - 60 5,00 0,05 6,15 - 20 - 5,00 2,05 0,15 - 40 - 5,00 4,05 0,15 - 60 - 5,00 6,05 0,15 20 - - 7,00 0,05 0,15 40 - - 9,00 0,05 0,15 Bảng 3.27 Kết xác định độ thu hồi ACE, LOR DEX mẫu thuốc Rhumenol Flu 500 Mẫu C0ACE C0LOR C0DEX CACE CLOR CDEX 5,00 0,05 5,00 0,05 5,00 0,15 Rev% Rev% Rev% CACE CLOR CDEX - - 2,14 - - 99,66 0,15 - - 4,15 - - 100,01 0,05 0,15 - - 6,16 - - 100,13 5,00 0,05 0,15 - 2,05 - - 100,01 - 5,00 0,05 0,15 - 4,05 - - 99,99 - 5,00 0,05 0,15 - 6,05 - - 99,98 - 5,00 0,05 0,15 7,01 - - 100,5 - - 5,00 0,05 0,15 8,98 - - 99,6 - - Trong bảng 3.26 thì: mACE; mLOR; mDEX lượng ACE, LOR DEX thêm vào mẫu thuốc Rhumenol Flu 500 CACE, CLOR, CDEX hàm lượng ACE, LOR DEX (g/mL) thuốc sau thêm chuẩn 64 Đo phổ ở bước sóng từ 200-300 nm Từ kế t quả đo đô ̣ hấ p thu ̣ quang , tính toán xác định hàm lượng ACE , LOR DEX theo phương pháp lọc Kalman qua đó tin ́ h đô ̣ thu hồ i Kết thể ở bảng 3.27 Trong bảng 3.27 thì: C0ACE, C0LOR C0DEX (μg/mL) hàm lượng ACE, LOR DEX thuốc Rhumenol Flu 500 trước thêm chuẩn CACE, CLOR CDEX (μg/mL) hàm lượng ACE, LOR DEX xác định sau thêm chuẩn Rev(%) CACE, Rev(%) CLOR, Rev(%) CDEX độ thu hồi ACE, LOR DEX Nhận xét: Qua bảng 3.27 cho thấy độ thu hồi ACE từ 99,6% đến 100,5%, LOR từ 99,98% đến 100,01% DEX từ 99,66% đến 101,13% Vì kết luận dùng phương pháp thêm chuẩn để tính hàm lượng ACE, LOR DEX mẫu thuốc Rhumenol Flu 500 Từ các kế t quả xác đinh ̣ hàm lươ ̣ng ACE , LOR DEX các mẫu tự pha chế cũng mẫu thuố c Rhumenol Flu 500 nhận thấ y , phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử có đô ̣ đúng , đô ̣ lă ̣p la ̣i tố t và đô ̣ thu hồ i cao, điề u đó cho phép ứng du ̣ng phương pháp vào phân tić h kiể m tra chấ t lươ ̣ng , thành phần thuốc cách đơn giản nhanh chóng 65 KẾT LUẬN Sau thời gian thực luận văn Chúng thu số kết sau: + Đã khảo sát điều kiện tối ưu cho phép xác định đồng thời hỗn hợp thành phần ACE, LOR DEX theo phương pháp HPLC - Cột sắc ký: sử dụng cột C18 (250 mm x 4,6 mm ; 0,45 µm) - Pha động: hỗn hợp dung dịch đệm (H3 PO - KH2 PO 0,015M; pH=2,5): axetonitril với tỷ lệ thể tích 65:35 - Detector UV-Vis: λ = 220 nm - Tốc độ dòng: 0,9 mL/phút - Thể tích bơm mẫu: 20 µL - Nhiệt độ phân tích: 35oC Thời gian lưu chất là: DEX 2,53 phút, ACE 3,14 phút LOR 12,34 phút + Đã xác định ACE, LOR DEX thuốc Rhumenol Flu 500 theo phương pháp HPLC với độ xác cao độ thu hồi ACE 99,6÷100,5%, LOR 95,0÷97,0%% DEX 97,6÷100,0% + Đã khảo sát, xác định điều kiện tối ưu cho phép đo quang đố i với các dung dich ̣ hỗn hơ ̣p ACE, LOR DEX gồm có: - Khoảng bước sóng thích hợp để quét phổ từ 200-300 nm, ACE λmax = 243 nm, LOR λmax = 273 nm DEX λmax = 279,5 nm môi trường axit HCl 0,1M - Khoảng thời gian tố i ưu để tiến hành thí nghiệm đo quang là từ 30 đến 90 phút sau pha có thể tiế n hành thí nghiê ̣m ở nhiê ̣t đô ̣ phòng - Khảo sát , xác định khoảng tuyến tính độ hấp thụ quang ACE 0,1 đến 25,0 μg/mL, LOR từ 0,1 đến 50,0 μg/mL DEX từ 0,1 đến 50,0 μg/mL 66 + Đã xác định đồng thời ACE , LOR DEX hỗn hợp cấu tử cho thấy: xác định ACE hỗn hợp tương đối xác , phải sử dụng phương pháp thêm chuẩn để xác định hàm lươ ̣ng LOR DEX mẫu thuốc Rhumenol Flu 500 + Sử dụng phương pháp thêm chuẩn xác định ACE , LOR DEX mẫu thuốc Rhumenol Flu 500 với độ thu hồi ACE từ 99,6% đến 100,5%, LOR từ 99,98% đến 100,01% DEX từ 99,66% đến 101,13% Kết xác định ACE, LOR DEX thuốc Rhumenol Flu 500 theo phương pháp HPLC phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử sử dụng chương trình lọc Kalman gần 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ Y tế (2010), Dược điển Việt Nam IV, NXB Y học Bộ Y tế (2012), Dược thư Việt Nam, NXB Y học Lê Ngọc Anh (2011), Xác định đồng thời acetaminophen, loratadin dextromethorphan hydrobrommit thuốc viên nén hapacol-CF phương pháp trắc quang, luận văn thạc sĩ khoa học hóa học, Trường Đại học Sư phạm- Đại học Thái Nguyên Trầ n Tứ Hiế u (2003), Phân tích trắ c quang phổ hấ p thụ UV -Vis, NXB ĐHQG Hà Nội Đỗ Thị Thu Hường (2011), Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời acetaminophen, dextromethorphan hydrobromid, loratadin chế phẩm HPLC, khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Đại học Dược Hà Nội Phạm Luận (1997), Sổ tay pha chế hóa chất, Trường ĐHKHTN–Đại Học Quốc Gia Hà Nội Vũ Duy Long (2014), Định lượng đồng thời paracetamol , clopheninamin maleat phenylephin hydroclorit thuốc TIFFY phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử (UV-Vis), luận văn thạc sĩ khoa học hóa học, Trường Đại học Sư phạmĐại học Thái Nguyên Nguyễn Thành Lộc (2013), xác định đồng thời acetaminophen ibuprofen chế phẩm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao-HPLC, khóa luận tốt nghiệp, Đại học Sư phạm Hồ Chí Minh Lê Quan Nghiệm (2009), Tên đề tài: Nghiên cứu bào chế viên loratadin rã nhanh, Báo cáo kết nghiên cứu đề tài cấp - Đại học Y dược Tp HCM 10 Bùi Đức Ngọc (2015), Định lượng đồng thời paracetamol, cafein thuốc panadol extra hapacol extra phương pháp HPLC phương 68 pháp quang phổ hấp thụ phân tử, luận văn thạc sĩ khoa học hóa học, Trường đại học Sư phạm- Đại học Thái Nguyên 11 Đào Thị Lan Phương (2013), Định lượng đồng thời dextromethophan HBr, clopheninamin maleat guaifenesin thuốc viên methophan phương pháp trắc quang, luận văn thạc sĩ khoa học hóa học, Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên 12 Nguyễn Minh Trí cộng (2002), “Định lượng đồng thời loratadin pseudoephedrin phương pháp quang phổ tử ngoại đạo hàm”, tạp chí khoa học Y học thành phố Hồ Chí Minh, tập 6, phụ số 4, 2002, tr 169 13 Mai Xuân Trường (2008), Nghiên cứu phương pháp hấp thụ quang phân tử xác định đồng thời chất có phổ hấp thụ xen phủ dựa thuật toán lọc Kalman, Luận án Tiến sĩ hóa học, Đại học KHTN–ĐHQG Hà Nội 14 Mai Xuân Trường (2014), “Xác định dextromethophan HBr, clopheninamin maleat guaifenesin thuốc viên methophan thep phương pháp phổ hấp thụ phân tử UV-Vis sử dụng thuật toán lọc Kalman”, Tạp chí phân tích Hóa, Lý Sinh học, Tập 19, Số 1/2014, tr 32 - 37 15 Thái Duy Thìn cộng (2005), “Nghiên cứu ứng dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao đo quang phổ UV-Vis để định tính, định lượng hoạt chất thành phần số thuốc có từ đến thành phần”, Báo cáo tổng kết đề tài nghiên cứu khoa học cấp - Trường Đại học Dược Hà Nội 16 Viện kiểm nghiệm dược phẩm (1973), Những phương pháp định lượng, NXB Y học TIẾNG ANH 17 Alagar Raja M (2013), Analytical method development and validation of acetaminophen, dextromethorphan hydrobromide and doxylamine succinate in soft gel capsule dosage form by using RP-HPLC, World journal of pharmacy and pharmaceutical sciences Volume 2, Issue 6, pp 5852-5862 18 Dina T El-Sherbinya (2007), Simultaneous determination of loratadine and desloratadine in pharmaceutical preparations using liquid chromatography 69 with a microemulsion as eluent, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis Volume 43, Issue 4, 12 March 2007, pp 1236–1242 19 Fegade(2009), “Development and Validation of Reverse Phase High Performance Liquid Chromatographic Method for Simultaneous Estimation of Acetaminophen and Piroxicam in Tablet”, International Journal of PharmTech Research, Vol.1, No.2, pp 184-190 20 Jain Pritam(2014), UV-AUC method development and validation for estimation of dextromethorphan hydrobromide, Surana Sanjay Department of Pharmaceutical, Chemistry, R C Patel Institute of Pharmaceutical Education and Research, Karwand Naka, Shirpur Maharashtra-425405, pp 57-62 21 Hatice Caglar(2014), HPLC method development and validation: Simultaneous determination of active ingredients in cough and cold pharmaceuticals, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences ISSN- 0975-1491 Vol 6, Issue 10, 2014, pp 421-428 22 Hussen Al-akraa(2013), New rapid RP-HPLC method for simultaneous determination of some decongestants and coygh-sedativex, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences ,vol 5, pp 234-241 23 K.B Shalini(2014), Devvelopment and validation of loratadine in bulk and pharamaceutical dosage form by UV spectroscopc method, International Journal of Pharmaceutical Research & Analysis, Shalini KB, Vol4, Issue1, 2014, pp 39-43 24 Kotaiah.Paidipala(2013), method development and validation of RP-HPLC method for simultaneous estimation of dextromethorphan hydrobromide, phenylephrine hydrochlorit and triprolidine hydrochlorit in bulk and combined dosage forms, Department of Pharmaceutical Analysis, Sri Shivani College Of Pharmacy,Mulugu Road, Warangal, Andra pradesh, India, pp 172-179 70 25 LoharV.R(2011), Simultaneous Estimation of Acetaminophen , Caffeine, Pseudoephedrine Hydrochloride, Dextromethorphan Hydrobromide and Loratadine in Tablet Dosage form by RP-HPLC, Asian Journal of Research in Chemistry Year 2011, Volume Issue, pp 1141-1147 26 M M Mabrouk(2003), Simultaneous determination of loratadine and pseudoephedrine sunfat in pharmaceutical formulation by RP-LC and derivative spectrophotometry, J Pharm Biomed Anal 2003 Nov;33(4), pp 597-604 27 Muhammad Abdul Qadir(2014), HPLC-PDA Method Development and Validation for Simultaneous Determination of Methyl Paraben, Propyl Paraben and Loratadine in Antihistamine Suspension, Analytical & Bioanalytical techniques 28 P Narmada(2012), Simultaneous estimation of Cetrizine hydrochlorit and Dextromethorphan hydrobromide in syrup formulation by Reverse phase high performance liquid chromatography, Novus International Journal of Analytical Innovations 2012, Vol 1, No 29 P.G Bhortake(2014), Simultaneous Determination of Acetaminophen, Phenylephrine Hydrochlorit and Dextromethorphan Hydrobromide in Liquicap Dosage form by RP-HPLC, International Journal of Pharma Research & Review, Sept 2014; 3(9), pp 9-14 30 P.L Sateesh(2013), Method Development and Validation of Ambroxol Hydrochlorit and Loratadine by RP-HPLC in Tablet Dosage Form, International Journal of Pharma Sciences Vol 3, No (2013), pp 370-374 31 Siladitya Behera(2012), UV-Visible Spectrophotometric Method Development and Validation of Assay of Paracetamol Tablet Formulation, Analytical & Bioanalytical Techniques Behera, J Anal Bioanal Techniques 2012, pp 3-6 32 Ulavapalli, Kullai Reddy(2011), Simultaneous determination of psuedoephedrine, fexofenadine and loratadine in pharmaceutical products 71 using high resolution RP-HPLC method, Journal of Pharmacy Research;Apr2011, Vol Issue 4, pp 1219 33 Zahiad A.Chaudhary(2014), RP-HPLC method development and validation for simultaneous estiation of dextromethorphan hydrobromide and quinidine sulphate, International Bulletin of Drug Research, 4(7),pp 66-83 72 ... chọn đề tài : "Đinh ̣ lượng đồ ng thời acetaminophen, loratadin, dextromethophan HBr thuốc Rhumenol Flu 500 phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử Chƣơng TỔNG... giá phương pháp định lượng 35 3.1.3 Xác định ACE, LOR DEX thuốc Rhumenol Flu 500 kiểm tra độ phương pháp thêm chuẩn 40 3.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 43 3.2.1 Khảo sát phổ. .. trường kiềm hấp thụ quang cực đại bước sóng 257 nm Tính kết dựa vào giá trị độ hấp thụ quang đo độ hấp thụ riêng so sánh với chất chuẩn • Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Dựa vào khả phân bố