Các phương pháp định lượng vi sinh vật Các phương pháp định lượng vi sinh vật - Phương pháp định lượng trực tiếp buồng đếm - Phương pháp định lượng gián tiếp cách đếm khuẩn lạc - Phương pháp MPN - Phương pháp xác định sinh khối - Phương pháp đo độ đục -Plaque assay 4.1 Phương pháp đếm trực tiếp buồng đếm Vi sinh vật xác định số lượng cách đếm trực tiếp kính hiển vi  Phương pháp cho phép xác định nhanh số lượng vi sinh vật thường ứng dụng với loại vi sinh vật có kích thước lớn nấm men, tảo, protozoa…  Hạn chế phương pháp không phân biệt tế bào sống hay chết, dễ nhầm lẫn tế bào với mảnh vỡ, tạp chất vật mẫu  Có nhiều loại buống đếm sử dụng việc xác định số lượng tế bào vi sinh vật 4.1 Phương pháp đếm trực tiếp buồng đếm 4.1 Phương pháp đếm trực tiếp buồng đếm Ví dụ: Đếm 16 ô nhỏ Số lượng tế bào : 200 tế bào Xác định số lượng tế bào ban đầu (OCD)? 4.1 Phương pháp đếm trực tiếp buồng đếm OCD: original cell density 4.2 Phương pháp đếm khuẩn lạc (standard plate countviable count) Phương pháp xác định số lượng vi sinh vật phương pháp đếm khuẩn lạc cho phép đánh giá mật độ vi sinh vật mẫu lỏng cách trãi mẫu đĩa Petri độ pha loãng khác với thể tích xác định Các khuẩn lạc xuất sau thời gian nuôi ủ ghi nhận dùng để xác định mật độ vi sinh vật ban đầu Phương pháp dùng để đánh giá mật độ tế bào sống mẫu 7.1 Phương pháp phát quang sinh học ATP ATP (adenosine triphosphosphate) diện tất tế bào sống (eukaryote, prokaryote) nên phát ATP nhận biết vật chất sống tồn ATP phát cách nhanh chóng lượng ánh sáng phát thông qua kết hợp với enzyme luciferase nhờ máy đo ánh sáng 7.1 Phương pháp phát quang sinh học ATP Luciferase thuật ngữ để nhóm enzyme oxy hoá sản sinh bioluminescence Luciferase sử dụng phòng thí nghiệm thường tái tổ hợp từ loại đom đóm (Photinus pyralis) Photinus pyralis Cấu trúc luciferase từ Photinus pyralis 7.1 Phương pháp phát quang sinh học ATP Sơ đồ phản ứng phát quang sinh học ATP nhờ luciferase 7.1 Phương pháp phát quang sinh học ATP Phương pháp phát quang sinh học ATP phát pg ATP (10-12g), tương ứng 1000 tế bào vi khuẩn (10-15ATP/tế bào) Phương pháp sử dụng rộng rãi để đánh giá chất lượng vệ sinh bề mặt thiết bị sử dụng chế biến, sản xuất, đánh giá chất lượng mỹ phẩm, thực phẩm Qui trình thực đơn giản, cho kết nhanh vài phút dễ dàng tự động hoá 7.1 Phương pháp phát quang sinh học ATP Câu hỏi: kỹ thuật phát quang sinh học ATP, vấn đề chưa đề cập mà dẫn đến thu kết sai? 7.2 Phương pháp ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) Nguyên tắc phương pháp ELISA sử dụng kháng thể đơn dòng phủ lên bề mặt giếng microplate Nếu có diện kháng nguyên mục tiêu mẫu, kháng nguyên giữ lại bề mặt giếng Các kháng nguyên phát kháng thể thứ cấp có gắn với enzyme horseradish peroxidase (HRP), mà xúc tác phản ứng thuỷ phân chất (TMB) tạo sản phẩm phát sáng hay có màu Theo dõi phát sáng hay đổi màu, phát diện hay định lượng kháng nguyên 7.2 Phương pháp ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) 7.2 Phương pháp ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) ELISA sử dụng rộng rãi dạng hoá chất thương mại dùng để phát Salmonella, E coli gây bệnh, Listeria, độc tố Staphylococcus, thuốc trừ sâu 7.2 Phương pháp ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) Câu hỏi: theo bạn, yếu tố quan trọng kỹ thuật ELISA dùng để phân tích nhận diện vi sinh vật gì? 7.3 Phương pháp lai phân tử Phương pháp sử dụng mẫu dò để phát vi sinh vật dựa phát đoạn gene đặc trưng vi sinh vật 7.3 Phương pháp lai phân tử Câu hỏi: theo bạn, yếu tố mấu chốt cho kỹ thuật nhận diện vi sinh vật gì? 7.4 Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) Phản ứng PCR kỹ thuật sinh học phân tử dùng để khuếch đại trình tự DNA lên hàng ngàn, hay hàng triệu lần nhờ hoạt động enzyme polymerase cặp mồi đặc hiệu cho trình tự DNA Các ứng dụng PCR: tạo dòng DNA cho việc giải trình tự, phân loại học dựa trình tự DNA, phân tích hoạt động gene, chẩn đoán bệnh di truyền, dò tìm chẩn đoán bệnh truyền nhiễm 7.4 Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) Ứng dụng PCR nhận diện vi sinh vật mạch khuôn trình tự DNA đặc trưng vi sinh vật mục tiêu 7.4 Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) Câu hỏi: Khuyết điểm phương pháp phát vi sinh vật? Câu hỏi: thiết kế bước phát vi khuẩn gây bệnh lạ cách ứng dụng kỹ thuật học? ... trình định lượng tổng vi sinh vật hiếu khí Tổng vi sinh vật hiếu khí?  Các vi sinh vật sống môi trường có O2 Tại phải phân tích tổng vi sinh vật hiếu khí thực phẩm?  Xác định mức độ vệ sinh thực. .. trực tiếp buồng đếm Vi sinh vật xác định số lượng cách đếm trực tiếp kính hiển vi  Phương pháp cho phép xác định nhanh số lượng vi sinh vật thường ứng dụng với loại vi sinh vật có kích thước lớn... mật độ tế bào ước đoán xác định 4.5 Phương pháp xác định sinh khối vi sinh vật  Trong số trường hợp, trọng lượng khô tế bào xác định để tính toán mật độ tế bào vi sinh vật (dry weight/ml)  Tuy