WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ LUYẾN XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT NHÓM QUINOLON TRONG THỰC PHẨM BẰNG KỸ THUẬT LC-MS/MS LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2014 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ LUYẾN XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT NHÓM QUINOLON TRONG THỰC PHẨM BẰNG KỸ THUẬT LC-MS/MS LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC – ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 60720410 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Tường Vy Ths NCS Cao Công Khánh HÀ NỘI 2014 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn, nhận hướng dẫn giúp đỡ mặt từ thầy cô, đồng nghiệp, gia đình bạn bè Nhân dịp này, xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới: PGS.TS Nguyễn Tường Vy – Phó Trưởng Phòng SĐH- ĐH Dược Hà Nội Th.S NCS Cao Công Khánh – Viện KN ATVSTPQG tận tình giúp đỡ suốt trình thực hoàn thành đề tài Đồng thời xin cảm ơn cán Viện Kiểm Nghiệm An toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia sẵn lòng giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho trình thực nghiệm Cuối xin gửi lời cảm ơn tới người thân gia đình bạn bè động viên nhiệt tình giúp đỡ trình thực đề tài Thái Nguyên, ngày 20 tháng 08 năm 2014 Tác giả Bùi Thị Luyến WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM MỤC LỤC CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH Đặt vấn đề Chương TỔNG QUAN 1.1 Vài nét Quinolon 1.1.1 Cấu tạo chung 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Cơ chế tác dụng 1.1.4 Tác dụng phụ 1.1.5 Đặc tính quinolon nghiên cứu 1.2 Tổng quan sắc ký lỏng hiệu cao chuẩn bị mẫu cho phân tích sắc ký .5 1.3 Nghiên cứu tồn dư quinolon thực phẩm 12 1.3.1 Tình hình sử dụng kháng sinh chăn nuôi 12 1.3.2 Các nghiên cứu tồn dư quinolon thực phẩm nước 13 1.3.3 Các nghiên cứu tồn dư quinolon thực phẩm nước 14 1.3.4 Một số quy định giới hạn tồn dư quinolon thực phẩm 16 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu đề tài .20 2.2 Thiết bị, dụng cụ, hoá chất 20 2.2.1 Thiết bị, dụng cụ .20 2.2.2 Thuốc thử, hóa chất 20 2.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu .20 2.3.1 Nghiên cứu điều kiện LC-MS/MS 20 2.3.2 Nghiên cứu lựa chọn quy trình xử lý mẫu 22 2.3.3 Thẩm định lại phương pháp xây dựng 24 2.3.4 Thực nghiệm xác định quinolon mẫu thịt, cá 24 2.4 Tính toán kết quả, xử lí số liệu 25 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết khảo sát lựa chọn thông số cho LC-MS 27 3.1.1 Xác định thông số detector khối phổ (MS 27 3.1.2 Xác định thông số phần LC để tách chất nhóm Quinolon .28 3.2 Xác định kỹ thuật xử lý mẫu 29 3.2.1 Quy trình tách chiết chất cần phân tích khỏi mẫu 29 3.2.2 Quy trình làm làm giàu mẫu qua SPE 31 3.2.3 Quy trình xử lí mẫu lựa chọn 33 3.3 Thẩm định phương pháp xây dựng .34 3.3.1 Tính thích hợp hệ thống 34 3.3.2 Độ đặc hiệu/độ chọn lọc 35 3.3.3 Khoảng tuyến tính đường chuẩn 35 3.3.4 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) 39 3.3.5 Độ lặp lại độ thu hồi phương pháp .39 3.4 Phân tích mẫu thực nghiệm 44 Chương BÀN LUẬN 4.1 Xây dựng quy trình kỹ thuật 46 4.1.1 Các điều kiện phân tích hệ thống LC-MS/MS 46 4.1.2 Điều kiện xử lý mẫu 47 4.2 Thẩm định quy trình xây dựng 47 Kết luận 50 Kiến nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt HPLC Tiếng Anh Tiếng Việt High Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography LC-MS/MS Liquid Chromatograph Sắc ký lỏng ghép lần khối Tandem Mass Spectrometer phổ LOD Limit of Detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quantitative Giới hạn định lượng SPE CE Solid phase extraction Capillary electrophoresis Chiết pha rắn ESI Electrospray ionization EU European Union APCI AOAC IS Điện di mao quản Ion hóa phun điện tử Liên minh Châu Âu Atmospheric pressure chemical ion hoá hoá học áp suất khí ionization Association of Official Analytical Hiệp hội nhà hoá phân tích Chemists Internal Standard Nội chuẩn Mẫu PT Mẫu phân tích TL Thịt lợn TG Thịt gà C01 Cá 01 RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối Ppb Part per billion Phần tỷ Ppm Part per million Phần triệu WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Giới hạn tồn dư tối đa quinolone theo định số 2377/90/EC Ủy ban Châu Âu……………………………………………………….………… …15 Bảng 1.2 : Danh mục quinolone hạn chế sử dụng sản xuất kinh doanh thủy sản ……………………………… ………………………………… ….………….16 Bảng 3.1 Thông số chung detector khối phổ………… ……… 27 Bảng 3.2 Thông số chi tiết Quinolon……………………… …………………27 Bảng 3.3 Gradient pha động sử dụng cột Symmetry……………….… ……….28 Bảng 3.4 Gradient pha động sử dụng cột Xbridge……… ……………… … 28 Bảng 3.5: Kết thử nghiệm dung môi chiết mẫu phân tích Norfloxacin…… 29 Bảng 3.6: Kết thử nghiệm dung môi chiết mẫu phân tích Ciprofloxacin… 30 Bảng 3.7: Kết thử nghiệm dung môi chiết mẫu phân tích Enrofloxacin …30 Bảng 3.8: Kết thử nghiệm dung môi chiết mẫu phân tích Flumequin.… ….30 Bảng 3.9: Kết thử nghiệm cột SPE phân tích Norfloxacin……… ……….31 Bảng 3.10: Kết thử nghiệm cột SPE phân tích Ciprofloxacin…… ….…… 32 Bảng 3.11: Kết thử nghiệm cột SPE phân tích Enrofloxacin……… ………32 Bảng 3.12: Kết thử nghiệm cột SPE phân tích Flumequin ………… …… 33 Bảng 3.13 Kết phân tích tính thích hợp hệ thống……… ………………… 34 Bảng 3.14: Kết phân tích dãy chuẩn Norfloxacin………………….…………… 36 Bảng 3.15: Kết phân tích dãy chuẩn Ciprofloxacin……………… ……………37 Bảng 3.16: Kết phân tích dãy chuẩn Enrofloxacin……… ………………… …37 Bảng 3.17: Kết phân tích dãy chuẩn Flumequin…………………………….……38 Bảng 3.18: LOD LOQ chất phân tích tính mẫu thịt……… ……39 Bảng 3.19: Độ lặp lại độ thu hồi cột SPE HLB Norfloxacin……… ……40 Bảng 3.20: Độ lặp lại độ thu hồi cột SPE HLB Ciprofloxacin…… …….40 Bảng 3.21: Độ lặp lại độ thu hồi cột SPE HLB Enrofloxacin……… ….41 Bảng 3.22: Độ lặp lại độ thu hồi cột SPE HLB Flumequin ……….…….41 Bảng 3.23: Độ lặp lại độ thu hồi cột SPE C18 Norfloxacin…….……… 42 Bảng 3.24: Độ lặp lại độ thu hồi cột SPE C18-E Ciprofloxacin…………42 Bảng 3.25: Độ lặp lại độ thu hồi cột SPE C18-E Enrofloxacin…….…….41 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Bảng 3.26: Độ lặp lại độ thu hồi cột SPE C18-E Flumequin.…… …….41 Bảng 3.27 : Kết phân tích 20 mẫu thịt gà (đơn vị µg/kg)…… ………… …44 Bảng 3.28: Kết phân tích 20 mẫu thịt lợn (đơn vị µg/kg)……………… … 44 Bảng 3.29: Kết phân tích 20 mẫu cá nước (đơn vị µg/kg)…………… 44 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc nhóm quinolon ………………………………… …….3 Hình 1.2 Công thức cấu tạo Ciprofloxacin ……………… …………………… Hình 1.3 Công thức cấu tạo Enrofloxacin ……….………….…….…… ……….5 Hình 1.4 Công thức cấu tạo Norfloxacin ….…………………………………… Hình 1.5 Công thức cấu tạo Flumequin …….……………………………………5 Hình 3.1: Sắc ký đồ thử nghiệm dung môi chiết mẫu phân tích norfloxacin…… 29 Hình 3.2: Sắc ký đồ thử nghiệm cột SPE phân tích Norfloxacin…………………32 Hình 3.3: Sắc ký đồ phân tích tính thích hợp hệ thống……………… ….35 Hình 3.4: Đồ thị đường chuẩn Norfloxacin (trái) Ciprofloxacin (phải)……….36 Hình 3.5: Sắc ký đồ xây dựng đường chuẩn norfloxacin…………………….37 Hình 3.6: Đồ thị đường chuẩn Enrofloxacin (trái) Flumequin (phải)… …… 38 Hình 3.7: sắc ký đồ norfloxacin xử lí mẫu qua cột SPE HLB …………… 40 Hình 3.8: Sắc ký đồ mẫu thực tế có (hoặc không có) norfloxacin……………… 45 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM ĐẶT VẤN ĐỀ An toàn vệ sinh thực phẩm đặt lên hàng đầu công tác bảo vệ sức khoẻ người Trong chăn nuôi nay, vấn đề sử dụng thuốc kháng sinh (trong thức ăn, điều trị bệnh gia súc, gia cầm) phổ biến coi tiến công nghệ sinh học Tuy nhiên, việc lạm dụng thuốc kháng sinh nói chung nhóm Fluoroquinolon nói riêng làm nguồn thực phẩm cung cấp cho người chứa lượng nhỏ chất kháng sinh, người sử dụng loại thực phẩm thời gian dài gây nguy hại cho sức khoẻ Trong tiến trình gia nhập WTO, thị trường hàng hoá Việt nam mở rộng, đặc biệt lĩnh vực xuất mặt hàng nông sản, thuỷ sản Tuy nhiên, việc kiểm soát dư lượng hoá chất kháng sinh có hại đến sức khoẻ người tiêu dùng chưa thực nghiêm túc nên số lô hàng bị thị trường xuất nhập phát kháng sinh có hại cao Tình trạng không gây thiệt hại lớn kinh tế cho doanh nghiệp mà ảnh hưởng nghiêm trọng đến uy tín chất lượng hàng Việt nam thị trường giới sức khỏe người tiêu dùng Quinolon có phổ tác dụng diệt khuẩn rộng, hiệu cao nên chúng sử dụng rộng rãi để chữa bệnh cho người, gia cầm thủy sản công nghiệp Trong trình nuôi dưỡng, không tuân thủ thời gian dùng thuốc thời gian sản xuất chế biến dẫn đến lượng Quinolon lại thịt gia cầm hay thủy sản Điều gây nhiều mối nguy hiểm Đặc biệt gây tượng kháng thuốc số vi khuẩn như: Salmonella, Campylobacter spp, Escherichia coli, Hậu giảm hiệu Quinolon chủng vi khuẩn trên, gây khó khăn tốn điều trị cho người Để bảo vệ quyền lợi người tiêu dùng, châu Âu, tổ chức EU thiết lập giới hạn lớn (MRLs) dư lượng thuốc nguồn thực phẩm cung cấp cho người vào năm 1990 Theo kiểm tra định hướng chuyên gia phòng thí nghiệm, EU công bố “Council directive 96/23/EC in 1996” [23] , quy định rõ hàm lượng kháng sinh theo loại thực phẩm loại thuốc, ví dụ với enrofloxacin cơ, gan, thận bò, lợn, gia cầm (gà, vịt) 30µg/kg; sữa bò 100 µg/kg; Ở châu Mỹ, Hoa kỳ nước Bắc Mỹ WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM 20 D Barrón, E Jiménez-Lozano, S Bailac, J Barbosa (2003), “Simultaneous determination of flumequine and oxolinic acid in chicken tissues by solid phase extraction and capillary electrophoresis”, Analytica Chimica Acta, 477, pp 21–27 21 E Rodriguez, M.C Moreno-Bondi, M.D Marazuela (2008), “Development and validation of a solid-phase extraction method coupled to liquid chromatography with fluorescence detection for the determination of fluoroquinolone residues in powdered infant formulae Application to the analysis of samples from the Spanish and Latin American market”, Journal of Chromatography A, 1209, pp 136–144 22 European Commission (2002) “Commission decision 2377/90/EC” 23 European Commission (1996) “Council directive 96/23/EC” 24 Ghislain Follet, (1997), Antibiotic resistance in the EU Science, Politics and Policy Number 3&3 2000, p.148-155 25 Fatima Tamtam, Fabien Mercier, Joëlle Eurin, Marc Chevreuil, Barbara Le Bot (2009), “Ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry performance evaluation for analysis of antibiotics in natural waters”, Analytical and Bioanalytical Chemistry, 393, pp 1709-1718 26 Florentina Cañada-Cañada, Anunciacion Espinosa-Mans illa, Ana Jiménez Girón and Arsenio Muñoz de la Peña (2012), “Simultaneous determination of the residues of fourteen quinolones and fluoroquinolones in fish samples using Liquid chromatography with Photometric and Fluorescence detection”, Czech J Food Sci., 30(1), pp 74-82 27 Francisco J Lara (2006), “Multiresidue method for the determination of quinolone antibiotics in bovine raw milk by capillary electrophoresis-tandem massspectrometry”, Analytical Chemistry, 78(22), pp 7665-7673 28 Habib Amjad, Javed Iqbal and Muhammad Naeem (2006), “Estimation of selected residual antibiotics in muscle, kidney, liver, and egg of layer chicken”, Proc Pakistan Acad Sci, 43(1), pp 29-37 29 Jonas Augusto Rizzato Paschoal, Felix Guillermo Reyes Reyes, Susanne Rath (2009), “Quantitation and identity confirmation of residues of quinolones in tilapia WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM fillets by LC-ESI-MS-MS QToF”, Analytical and Bioanalytical Chemistry, 394, pp 2213-2221 30 J.C Yorke, P Froc (2000), “Quantitation of nine quinolones in chicken tissues by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection”, Journal of Chromatography A, 882, pp 63-77 31 Marni S., Mustafa A.M., Marzura M.R (2011), “Analysis of quinolones in poultry muscles using liquid chromatography–tandem mass spectrometry”, Malaysian Journal of Veterinary Research, 2(1), pp 1-15 32 Martin D Rose, John Bygrave, George W F Stubbings (1998), “Extension of multi-residue methodology to include thedetermination of quinolones in food”, The Analyst, 123, pp 2789–2796 33 Muhammad Naeem, Khalida Khanand Samra Rafiq (2006), “Determination of Residues of Quinolones in Poultry Products by High Pressure Liquid Chromatography”, Journal of Applied Science, 6(2), pp 373-379 34 M.K Hassouan, O Ballesteros, J Taoufiki, J.L Vílchez, M Cabrera-Aguilera, A Navalón (2007), “Multiresidue determination of quinolone antibacterials in eggs of laying hens by liquid chromatography with fluorescence detection”, Journal of Chromatography B, 852, pp 625-630 35 Nájla Mohamad Kassab, Anil Kumar Singh, Erika Rosa Maria Kedor-Hackmam, Maria Inês Rocha Miritello Santoro (2005), “Quantitative determination of ciprofloxacin and norfloxacin in pharmaceutical preparations by high performance liquid chromatography”, Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences, 41(4), pp 507-513 36 N Stoilova, M Petkova (2010), “Developing and validation of method for detection of quinolone residues in poultry meat”, Trakia Journal of Sciences, 8(1), pp 64-69 37 O Ballesteros, V Sanz-Nebot, A Navalón, J L Vílchez, J Barbosa (2004), “Determination of a series of quinolone antibiotic using Liquid chromatographyMass-spectrometry”, Chromatographia,59, pp 543-550 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM 38 Sherri B Turnipseed, José E Roybal, Allen P Pfenning (2003), “Confirmation of fluoroquinolone residues in salmon and shrimp tissue by LC/MS: Evaluation of single quadrupole and ion trap instruments”, Food and drug administration, USA 39 Susan B Clark, Joseph M Storey, Sherri B Turnipseed (2008), “Optimization and Validation of Multi-class, Multi-residue LC-MS/MS Screening and Confirmation Method for Drug Residues in Milk”, Food and drug administration, USA 40 US Food and Drug Administration (May 2001), Bionalytical method validation, Guidance for industry 41 Verdon E, Couedor P, Roudaut B, Sanders P (2005) “Multiresidue method for simultaneous determination multimatrix/multispecies of animal ten quinolone tissues by antibacterial liquid residues chromatography in with fluorescence detection: single laboratory validation study” JAOAC Int, 88:11791192 42 Yang Xiao, Hong Chang, Ai Jia, Jianying Hu (2008), “Trace analysis of quinolone and fluoroquinolone antibiotics from wastewaters by liquid chromatography– electrospray tandem mass spectrometry”, Journal of Chromatography A, 1214, pp 100-108 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM PHỤ LỤC Cách pha dung dịch chuẩn - Dung dịch chuẩn gốc: cân xác khoảng 10mg chất chuẩn cho vào bình định mức 100ml, hòa tan định mức Acetonitril thu dung dịch chuẩn gốc 100ppm Bảo quản -40C, tránh ánh sáng - Dung dịch chuẩn trung gian: Lấy xác 1ml dung dịch chuẩn gốc cho vào bình định mức 100ml, định mức Acetonitril, lắc thu dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 1ppm (C01) Với nội chuẩn (IS) Ciprofloxacin d8 pha dung dung nội chuẩn trung gian 1ppm riêng (C0IS) Bảo quản 4-80C - Dung dịch chuẩn hỗn hợp 50ppb: Lấy xác 1ml dung dịch chuẩn trung gian hỗn hợp 1ppm cho vào bình định mức 20ml, định mức Acetonitril thu dung dịch chuẩn hỗn hợp 50ppb (C02) - Pha dãy chuẩn làm việc: Cách pha dãy chuẩn làm việc Chuẩn (ppb) C01 (ml) C02 (ml) C0IS (ml) 500 200 100 50 25 10 5,0 2,0 1,0 0,5 0 0 0 0 5,0 2,0 1,0 0,4 0,2 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 Acetonitril (ml) 4,0 7,0 8,0 8,5 4,0 7,0 8,0 8,6 8,8 Các dung dịch làm việc pha ngày WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Quy trình kỹ thuật xác định dư lượng chất nhóm quinolon WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Intensity, cps 0.0 0.0 1.0e5 2.0e5 3.0e5 4.0e5 5.0e5 6.0e5 7.0e5 8.0e5 9.0e5 1.0e6 1.1e6 1.2e6 1.3e6 1.4e6 1.5e6 1.6e6 1.7e6 1.8e6 1.9e6 0.5 1.0 1.5 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 Time, 5.5 6.0 6.5 6.61 7.0 Sắc đồ phân tích chất nhóm Quinolon cột XBrigde 2.0 5.46 XIC of +MRM (30 pairs): 262.000/244.000 Da from Sample 44 (Std-MixQuinolon-200ppb01) of Data.wiff (Turbo Spray) Acq Time: 18:20 Acq Date: Sunday, May 25, 2014 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 Max 1.7e6 cps WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Intensity, cps 0.00 0.0 5.00e4 1.00e5 1.50e5 2.00e5 2.50e5 3.00e5 3.50e5 4.00e5 4.50e5 5.00e5 5.50e5 6.00e5 6.50e5 7.00e5 7.50e5 8.00e5 8.50e5 9.00e5 9.50e5 1.00e6 1.05e6 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 Time, 7.0 7.5 8.15 8.0 Sắc đồ phân tích chất nhóm Quinolon cột XBrigde 2.5 6.77 XIC of +MRM (30 pairs): 262.000/244.000 Da from Sample 27 (Std-MixQuinolon-200ppb01) of Data.wiff (Turbo Spray) Acq Time: 02:46 Acq Date: Monday, May 26, 2014 8.5 9.0 9.5 10.0 10.5 11.0 11.5 Max 8.3e5 cps WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Intensity, cps 0.0 150 5.0e5 1.0e6 1.5e6 2.0e6 2.5e6 3.0e6 3.5e6 4.0e6 4.5e6 5.0e6 5.5e6 6.0e6 6.3e6 170 180 176.0 190 189.0 200 202.2 210 220 217.2 230 231.0 240 250 260 m/z, Da 270 280 290 300 310 314.2 320 316.2 Phổ đồ Enrofloxacin (Ion mẹ: 360 m/z, ion định lượng: 316 m/z, ion 342 m/z) 160 162.2 203.2 245.2 +MS2 (360.14) CE (47): 26 MCA scans from Sample (TuneSampleName) of ENR_InitProduct_Pos.wiff (Turbo Spray) Acq Time: 13:31 Acq Date: Sunday, August 05, 2012 330 340 342.2 350 360 360.2 Max 6.3e6 cps WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Intensity, cps 0.0 5.0e5 1.0e6 1.5e6 2.0e6 2.5e6 3.0e6 3.5e6 4.0e6 4.5e6 5.0e6 5.5e6 6.0e6 6.5e6 7.0e6 7.5e6 8.0e6 8.5e6 9.2e6 9.0e6 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON 80 90 100 100.0 110 120 119.0 130 126.2 140 150 146.0 160 170 m/z, Da 174.0 180 190 200 202.0 210 220 Phổ đồ Flumequine (Ion mẹ: 262 m/z, ion định lượng: 202 m/z, ion 244 m/z) 70 75.0 98.0 99.0 +MS2 (262.10) CE (47): 26 MCA scans from Sample (TuneSampleName) of FLU_InitProduct_Pos.wiff (Turbo Spray) Acq Time: 10:16 Acq Date: Sunday, August 05, 2012 230 240 244.2 250 260 262.2 Max 9.2e6 cps WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Intensity, cps 0.0 150 1.0e4 2.0e4 3.0e4 4.0e4 5.0e4 6.0e4 7.0e4 8.0e4 9.0e4 1.0e5 1.1e5 1.2e5 1.3e5 1.4e5 1.5e5 1.6e5 1.7e5 1.8e5 1.9e5 2.0e5 2.1e5 2.2e5 2.3e5 2.4e5 151.4 168.0 180 173.4 183.8 176.0 185.0 190 192.2 191.2 200 210 206.0 200.8 198.2 203.2 215.2 220 226.2 230 240 m/z, Da 238.2 231.2 233.0 228.0 225.2 217.0 219.2 250 260 256.2 270 282.0 280 276.4 Phổ đồ Norfloxacin (Ion mẹ: 320 m/z, ion định lượng: 276 m/z, ion 302 m/z) 170 160.2 174.0 160 156.0 164.2 162.0 161.0 205.0 +MS2 (320.15) CE (47): 26 MCA scans from Sample (TuneSampleName) of NOR_InitProduct_Pos.wiff (Turbo Spray) Acq Time: 12:25 Acq Date: Sunday, August 05, 2012 290 300 302.2 310 320 320.0 Max 2.5e5 cps WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Intensity, cps 0.0 150 5.0e4 1.0e5 1.5e5 2.0e5 2.5e5 3.0e5 3.5e5 4.0e5 4.5e5 5.0e5 5.5e5 6.0e5 6.5e5 7.0e5 7.5e5 8.0e5 8.5e5 9.0e5 9.3e5 160 151.0 162.2 180 190 190.0 200 206.2 210 220 207.2 218.4 230 233.0 240 250 m/z, Da 248.4 249.2 260 270 280 290 302.2 300 296.4 310 322.2 320 Phổ đồ Ciprofloxacin-D8 (Ion mẹ: 340 m/z, ion định lượng: 322 m/z, ion 296) 170 180.2 209.2 235.0 +MS2 (340.15) CE (47): 26 MCA scans from Sample (TuneSampleName) of IS-D8_InitProduct_Pos.wiff (Turbo Spray) Acq Time: 14:21 Acq Date: Sunday, August 05, 2012 330 340 340.2 Max 9.3e5 cps WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Sắc ký đồ xây dựng đường chuẩn ciprofloxacin Sắc ký đồ thử nghiệm dung môi chiết mẫu phân tích ciprofloxacin WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Sắc ký đồ thử nghiệm cột SPE phân tích ciprofloxacin Sắc ký đồ phân tích tính thích hợp hệ thống phân tích enrofloxacin WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Sắc ký đồ xử lí mẫu qua cột SPE HLB flumequin Sắc ký đồ xử lí mẫu qua cột SPE C-18 enrofloxacin WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Sắc ký đồ mẫu thực tế ciprofloxacin Sắc ký đồ mẫu thực tế có enrofloxacin WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON ...WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ LUYẾN XÂY DỰNG QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT NHÓM QUINOLON TRONG THỰC PHẨM BẰNG KỸ THUẬT LC- MS/MS... sung nhóm Quinolon vào danh mục cấm sử dụng sản xuất, kinh doanh thủy sản xuất vào thị trường Bắc Mỹ Hoa Kỳ [11] Vì thực đề tài: Xây dựng quy trình xác định dư lượng số chất nhóm Quinolon thực phẩm. .. dựng quy trình kỹ thuật xác định dư lượng kháng sinh nhóm Quinolon thực phẩm phù hợp với điều kiện Việt Nam 1.3 Nghiên cứu tồn dư quinolon thực phẩm 1.3.1 Tình hình sử dụng kháng sinh chăn nuôi Trong