BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI LƢU HỒNG QUÝ Mã sinh viên: 1201507 XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI SILDENAFIL, TADALAFIL VÀ VARDENAFIL TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG BẰNG LC-MS/MS KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2017 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI LƢU HỒNG QUÝ Mã sinh viên: 1201507 XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI SILDENAFIL, TADALAFIL VÀ VARDENAFIL TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG BẰNG LC-MS/MS KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: ThS Nguyễn Lâm Hồng ThS Lê Hồng Dũng Nơi thực hiện: Viện Dinh dưỡng HÀ NỘI – 2017 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực hiện, khóa luận “Xây dựng phƣơng pháp phân tích đồng thời Sildenafil, Tadalafil Vardenafil thực phẩm chức LCMS/MS” đƣợc hoàn thành Để có đƣợc kết này, nỗ lực thân, em nhận đƣợc nhiều động viên, giúp đỡ từ phía nhà trƣờng, môn, nơi em thực đề tài- viện dinh dƣỡng gia đình, bạn bè Trƣớc tiên, em xin bày tỏ kính trọng biết ơn sâu sắc tới ThS Nguyễn Lâm Hồng, cô tận tình định hƣớng, bảo, đóng góp ý kiến động viên em suốt trình thực khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ThS Lê Hồng Dũng , ngƣời trực tiếp hƣớng dẫn, hỗ trợ tạo điều kiện cho em suốt trình nghiên cứu, thực khóa luận Bên cạnh em xin gửi lời cám ơn đến anh chị khoa Hóa thực phẩm giúp đỡ tạo điều kiện nhiều cho em thực khóa luận Trong trình thực hiện, nỗ lực cố gắng nhƣng không tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận đƣợc ý kiến bảo, góp ý từ thầy cô để khóa luận em tiếp tục đƣợc hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn ! Hà Nội, ngày 11 tháng năm 2017 Sinh viên Lƣu Hồng Quý i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ viii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN .3 1.1 Tổng quan đối tƣợng nghiên cứu 1.1.1 Chất ức chế PDE-5 1.1.2 Sildenafil 1.1.3 Tadalafil 1.1.4 Vardenafil 1.1.5 Các chất ức chế PDE-5 khác 1.1.6 Một số phƣơng pháp phân tích sildenafil, tadalafil vardenafil .8 1.2 Tổng quan sắc ký lỏng khối phổ .12 1.2.1 Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 12 1.2.2 Khối phổ (Mass spectrometry) .13 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 17 2.2 Nguyên vật liệu 17 2.2.1.Chất chuẩn .17 ii 2.2.2 Chuẩn bị dung dịch chuẩn 17 2.2.3 Chuẩn bị dung dịch mẫu placebo .17 2.2.4 Dung môi, hóa chất 18 2.2.5 Thiết bị, dụng cụ .18 2.2.6 Nội dung nghiên cứu 19 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu .19 2.3.1 Khảo sát điều kiện phân tích sildenafil, tadalafil vardenafil LC-MS/MS 19 2.3.1.1 Khảo sát điều kiện khối phổ 19 2.3.1.2 Khảo sát điều kiện LC 19 2.3.2 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu 20 2.3.3 Thẩm định quy trình .20 2.3.4 Áp dụng phƣơng pháp xây dựng để kiểm tra mẫu thực phẩm chức lƣu hành thị trƣờng 22 2.4 Xử lý kết .22 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23 3.1 Xây dựng quy trình phân tích 23 3.1.1 Tối ƣu điều kiện khối phổ 23 3.1.2 Lựa chọn điều kiện sắc ký 26 3.1.2.1 Cột sắc ký .26 3.1.2.2 Khảo sát chƣơng trình pha động 26 3.1.3 Xây dựng quy trình xử lý mẫu 29 3.1.3.1 Khảo sát dung môi chiết 29 3.1.3.2 Khảo sát tỷ lệ dung môi chiết 30 iii 3.1.3.3 Khảo sát số lần chiết .31 3.1.3.4 Khảo sát thời gian siêu âm .32 3.1.4 Quy trình phân tích đồng thời sildenafil, tadalafil vardenafil thực phẩm chức 33 3.2 Thẩm định phƣơng pháp 36 3.2.1 Độ ổn định hệ thống LC-MS/MS 36 3.2.2 Tính chọn lọc 36 3.2.3 Khoảng tuyến tính 39 3.2.4 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng 42 3.2.5 Độ lặp lại phƣơng pháp 44 3.2.6 Độ thu hồi 46 3.3.Ứng đụng phƣơng pháp phân tích xây dựng số mẫu thực tế thị trƣờng 50 BÀN LUẬN 56 KẾT LUẬN .567 ĐỀ XUẤT 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng Anh Tiếng Việt Association of Official Hiệp hội nhà hóa phân tích Analytical communities thức ACN Acetonitrile Acetonitril CAD Collision Gas Pressure Áp suất khí bắn phá CE Collision Energy Năng lƣợng bắn phá CUR Curtain Gas Khí CV Coefficient of Variation Hệ số biến thiên CXP Collision cell Exit Potential Thế đầu DP Declustering Potential Thế đầu vào ESI Electrospray ionization Ion hóa phun điện tử GS1 Ion Source Gas Áp suất khí bên đầu phun GS2 Ion Source Gas Áp suất luồng khí nóng (GS2) HPLC High performance Sắc ký lỏng hiệu cao AOAC Liquidchromatography IS Ionspray Voltage Thế ion hóa LC-MS/MS Liquid chromatography Sắc ký lỏng ghép hai lần khối phổ tandem mass spectrometry LOD Limit of detection Giới hạn định tính LOQ Limit of quantification Giới hạn định lƣợng MeOH Methanol MS Mass Spectrometry Khối phổ NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hƣởng từ hạt nhân PDE-5 Phosphodiesterase - RSD% Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tƣơng đối SD Standard deviation Độ lệch chuẩn Sil Sildenafil Tad Tadalafil v TEM Ion source Temperature Nhiệt độ mao quản UV Ultraviolet Tử ngoại Var Vardenafil vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số phương pháp phân tích đồng thời chất ức chế PDE-5 .11 Bảng 3.1 Điều kiện hoạt động nguồn ion hóa ESI 23 Bảng 3.2 Các thông số tối ưu hóa điều kiện phân mảnh chất 25 Bảng 3.3 Chương trình Gardient theo pha động .28 Bảng 3.4 Nồng độ chất tìm thấy với dung môi chiết khác (ng/ml) .30 Bảng 3.5 Nồng độ chất tìm thấy với tỷ lệ dung môi chiết khác (ng/ml) .31 Bảng 3.6 Nồng độ chất tìm thấy với số lần chiết xuất khác (ng/ml) .32 Bảng 3.7 Nồng độ chất tìm thấy với mức thời gian siêu âm (ng/ml) .33 Bảng 3.8 Kết khảo sát độ lặp lại hệ thống 36 Bảng 3.9 Kết khảo sát khoảng tuyến tính sildenafil, tadalafil vardenafil 40 Bảng 3.10 Giá trị S/N pic nạp chuẩn kết LOQ, LOD 42 Bảng 3.11 Kết xác định độ lặp lại sildenafil, tadalafil , vardenafil 44 Bảng 3.12 Kết xác định độ thu hồi với mức nạp chuẩn nồng độ thấp 46 Bảng 3.13 Kết xác định độ thu hồi với mức nạp chuẩn nồng độ trung bình 47 Bảng 3.14 Kết xác định độ thu hồi với mức nạp chuẩn nồng độ cao 49 Bảng 3.15 Kết phân tích số mẫu thực tế thị trường 53 vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Sơ đồ minh họa chế hoạt động chất ức chế phosphodiesterase-5 (PDE-5) .3 Hình 1.2 Cấu trúc hóa học sildenafil .4 Hình 1.3 Cấu trúc hóa học tadalafil Hình 1.4 Cấu trúc hóa học vardenafil .7 Hình 1.5 Sơ đồ khối máy LC-MS/MS .14 Hình 1.6 Bộ nguồn ion hóa ESI 15 Hình 1.7 Bộ phân tích tứ cực chập ba 15 Hình 3.1 Phổ khảo sát ion sildenafil, tadalafil vardenafil 24 Hình 3.2 Sắc ký đồ chuẩn hỗn hợp với pha động 27 Hình 3.3 Sắc ký đồ chuẩn hỗn hợp với pha động 27 Hình 3.4 Sắc ký đồ chuẩn hỗn hợp với pha động 27 Hình 3.5 Sắc ký đồ chuẩn hỗn hợp 100 ppb 37 Hình 3.6 Sắc ký đồ mẫu Placebo (không pha loãng) 38 Hình 3.7 Sắc ký đồ mẫu placebo nạp chuẩn hỗn hợp nồng độ 40ppb 38 Hình 3.8 Sắc ký đồ mảnh chất 39 Hình 3.9 Đồ thị biểu diễn mối tương quan tuyến tính diện tích pic nồng độ chất vardenafil, sildenafil tadalafil 41 Hình 3.10 Giá trị S/N vardenafil, sildenafil tadalafil mẫu nạp chuẩn 43 Hình 3.11 Sắc ký đồ mẫu X5 51 Hình 3.12 Sắc ký đồ mẫu X12 .51 Hình 3.13 Sắc ký đồ mẫu X18 .52 viii Đã thẩm định quy trình định lượng theo yêu cầu AOAC 2016 Kết thẩm định: - Phƣơng pháp có tính chọn lọc tốt với sildenafil, tadalafil vardenafil - Có tƣơng quan tuyến tính chặt chẽ diện tích pic sắc ký nồng độ chất Sildenafil: khoảng nồng độ từ 10,6 ppb tới 530,0 ppb, r = 0,999 Tadalafil: khoảng nồng độ từ 10,0 ppb tới 500,0 ppb, r = 0,999 Vardenafil: khoảng nồng độ từ 10,4 ppb tới 520,0 ppb, r = 0,999 - Phƣơng pháp có độ nhạy tốt để sàng lọc chất, LOQ từ 50-80 ng/g, LOD từ 16,7-26,7 ng/g - Phƣơng pháp có độ lặp lại mức nồng độ thấp, trung bình cao đáp ứng yêu cầu AOAC 2016 - Phƣơng pháp có độ thu hồi tốt (86-99%) chất, đáp ứng yêu cầu AOAC 2016 Đã xác định đồng thời có mặt chất sildenafil, tadalafil vardenafil 18 mẫu thực phẩm chức thị trường Kết phân tích thực tế cho thấy có mẫu phát có mẫu có sildenafil vardenafil với hàm lƣợng cao Hàm lƣợng mẫu phát là: - X5: phát chứa sildenafil với hàm lƣợng 77,25 mg/g, tƣơng ứng với 30,57 mg/viên tadalafil với hàm lƣợng 24,43 mg/g, tƣơng ứng với 9,67 mg/viên - X12 : phát chứa sildenafil với hàm lƣợng 141,68 mg/g, tƣơng ứng với 73,67 mg/viên - X18: phát vardenafil với hàm lƣợng 168,42 mg/g, tƣơng ứng với 37,84 mg/viên tadalafil với hàm lƣợng 2,89 mg/g, tƣơng ứng với 0,65 mg/viên - X7: phát vardenafil với hàm lƣợng 0,15 mg/g, tƣơng ứng với 0,09 mg/viên tadalafil với hàm lƣợng 0,09 mg/g, tƣơng ứng với 0,05 mg/viên 59 ĐỀ XUẤT Dựa vào kết đạt đƣợc từ khóa luận, xin đƣa vài đề xuất nhƣ sau: Tiếp tục khảo sát phát sildenafil, tadalafil vardenafil bị trộn trái phép mẫu thuốc đông dược thực phẩm chức thị trường Nghiên cứu phát sildenafil, tadalafil vardenafil nhóm chất ức chế PDE-5, nhiều chất khác nhóm Vì vậy, cần tiếp tục nghiên cứu phát triển phương pháp để phát chất khác nhóm chất ức chế PDE-5 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ Y tế (2007), Hóa phân tích, Tập 2, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr 123200 Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học, Hà Nội Bộ Y tế (2013), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr 84-105 Phan Thanh Mậu (2011), Nghiên cứu định tính định lượng Sildenafil trộn trái phép thực phẩm chức LC - MS , HPLC, Khóa luận tốt nghiệp, Trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội, Hà Nội Trần Cao Sơn-Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 10-59 Trần Văn Chính (2016), Xây dựng phương pháp phân tích đồng thời Sildenafil, Tadalafil Vardenafil thực phẩm chức HPLC, Khóa luận tốt nghiệp, Trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội, Hà Nội TIẾNG ANH AOAC Official methods of Analysis (2016), Appendix F: Guidelines for standard method performance requirements AOAC Official methods of Analysis (2015), “Screening and Identification of Phosphodiesterase Type Inhibitors in Dietary Ingredients and Supplements Liquid Chromatography/Quadrupole Orbital Ion Trap Mass Spectrometry“, AOAC Official Method 2015.12 B.J Venhuis, D de Kaste (2012), "Towards a decade of detecting new analogues of sildenafil, tadalafil and vardenafil in food supplements: A history, analytical aspects and health risks", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 69, pp 196- 208 10 Che Nin Man, Noorjuliana Md Nor, Razak Lajis, Gam Lay Harn (2009), "Identification of sildenafil, tadalafil and vardenafil by gas chromatographymass spectrometry on short capillary column", Journal of Chromatography A 1216, pp 8426-8430 11 Eiichi Mikami, Tsutomu Ohno, Hiroshi Matsumoto (2002), "Simultaneous identification/determination system for phentolamine and sildenafil as adulterants in soft drinks advertising roborant nutrition", Forensic Science International 130, pp 140-146 61 12 Eung-Sun Lee, Ji Hyun Lee, Kyoung Moon Han, Ji Won Kim, In Sun Hwang, Sooyeul Cho, Soon Young Han, Jinho Kim (2013), "Simultaneous determination of 38 phosphodiestrase-5 inhibitors in illicit erectile dysfunction products by liquid chromatography-electrospray ionizationtandem mass spectrometry", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 83, pp 171-178 13 Gratz, S R., et al (2004), "Analysis of undeclared synthetic phosphodiesterase-5 inhibitors in dietary supplements and herbal matrices by LC-ESI-MS and LC-UV." J Pharm Biomed Anal 36, pp 525-533 14 Ida Fej˝os, Gábor Neumajer, Szabolcs Béni, Péter Jankovics (2014), "Qualitative and quantitative analysis of PDE-5 inhibitors incounterfeit medicines and dietary supplements by HPLC-UV using sildenafil as a sole reference", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 98, pp 327333 15 Lee, J H., et al (2013), "Monitoring by LC-MS/MS of 48 compounds of sildenafil, tadalafil, vardenafil and their analogues in illicit health food products in the Korean market advertised as enhancing male sexual performance." Food Addit Contam Part A Chem Anal Control Expo Risk Assess 30(11), pp 1849-1857 16 Marian Twohig, A A., Michael Jones, and Robert S Plumb (2009), "Detection and Identification of Synthetic Phosphodiesterase Type-5 Inhibitors in Adulterated Herbal Supplements using UPLC and DataDirected Analysis by Mass Spectrometry" 17 Merck & Co JNC (2006), The Merck index, 14th edition, pp 8558-8567, pp.9935, pp.9027 18 N Daraghmeh, M Al-Omari, A.A Badwan, A.M.Y Jaber (2001), "Determinaton of sildenafil citrate and related substances in the commercial products and tablet dosage form using HPLC", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 25, pp 483-492 19 N.D Dinesh, B.K Vishukumar, P Nagaraja, N.M Made Gowda, K.S Rangappa (2002), "Stability indicating RP-LC determination of sildenafil citrate (Viagra) in pure form and in pharmaceutical samples", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 29, pp 743 - 748 20 Peng Zoua, Sharon Sze-Yin Ohb, Peiling Houa, Min-Yong Lowa, Hwee-Ling Koha (2006), "Simultaneous determination of synthetic phosphodiesterase-5 inhibitors found in a dietary supplement and pre-mixed bulk powders for dietary supplements using high-performance liquid chromatography with diode array detection and liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry", Journal of Chromatography A 1104, pp 113122 62 21 Pierre-Yves Sacré, Eric Deconinck, Patrice Chiap, Jacques Crommen, Francois Mansion, Eric Rozet, Patricia Courselle, Jacques O De Beer (2011), "Development and validation of a ultra-high-performance liquid chromatography-UV method for the detection and quantification of erectile dysfunction drugs and some of their analogues found in counterfeit medicines", Journal of Chromatography A 1218, pp 6439- 6447 22 Samuel R Gratz, Cheryl L Flurer, Karen A Wolnik (2004), "Analysis of undeclared synthetic phosphodiesterase-5 inhibitors in dietary supplements and herbal matrices by LC-ESI-MS and LC-UV", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 36, pp 525-533 23 Sean C Sweetman, BPharm, FRPharmS (2009), Martindale - the complete drug reference Thirty-sixth edition, vol 2, pp 2193-2200 24 Valerie M Toomey, Jonathan J Litzau, Cheryl L Flurer (2012), "Isolation and structural characterization of two tadalafil analogs found in dietary supplements", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 59, pp 50-57 25 Wenhui Gao, Zhefeng Zhang, Zhiwei Li, and Guijian Liang (2007), "Chiral Separation of Two Pairs of Enantiomers of Tadalafil by High-Performance Liquid Chromatography", Journal of Chromatographic Science 45, pp 540543 26 Xiaolan Zhua, Song Xiaoa, Bo Chena, Fei Zhanga, Shouzhuo Yaoa, Zutian Wanb, Dajin Yangb, Hongwei Hanb (2005), "Simultaneous determination of sildenafil, vardenafil and tadalafil as forbidden components in natural dietary supplements for male sexual potency by high-performance liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry", Journal of Chromatography A 1066, pp 89-95 27 Ying-Hoo Lam, Wing-Tat Poon, Chi-Kong Lai, Albert Yan-Wo Chan, Tony Wing-Lai Mak (2008), "Identification of a novel vardenafil analogue in herbal product", Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 46, pp 804-807 28 Zhu, X., et al (2005), "Simultaneous determination of sildenafil, vardenafil and tadalafil as forbidden components in natural dietary supplements for male sexual potency by high-performance liquid chromatography– electrospray ionization mass spectrometry." Journal of Chromatography A 1066, pp 89-95 63 PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: MỘT SỐ SẮC KÝ ĐỒ KHẢO SÁT QUY TRÌNH CHIẾT MẪU KHẢO SÁT SỐ LẦN CHIẾT tR= 3,13 Vardenafil tR= 3,28 Sildenafil tR= 4,26 Tadalafil Chiết lần với 20,0 ml Methanol tR= 3,14 Vardenafil tR= 3,27 Sildenafil tR= 4,27 Tadalafil Chiết lần, lần với 10,0 ml Methanol 64 KHẢO SÁT THỜI GIAN SIÊU ÂM tR= 3,11 tR= 3,26 tR= 4,22 Vardenafil Sildenafil Tadalafil Siêu âm thời gian 15„ tR= 3,12 Vardenafil tR= 3,26 Sildenafil tR= 4,26 Tadalafil Siêu âm thời gian 30„ tR= 3,11 Vardenafil tR= 3,25 Sildenafil tR= 4,24 Tadalafil tR= 3,11 Siêu âm thời gian 45„ tR= 3,26 65 tR= 4,22 PHỤ LỤC 2: MỘT SỐ SẮC KÝ ĐỒ THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP ĐỘ ỔN ĐỊNH HỆ THỐNG LC-MS/MS Tỷ lệ mảnh định tính/ định lƣợng chất chuẩn hỗn hợp (%) Mẫu chuẩn Vardenafil Sildenafil Tadalafil 312,0/151,1 299,0/151,1 283,2/100,1 311,1/100,1 135,0/268,0 169,1/268,0 Lần 31,2 16 40,5 28,2 17,2 31,0 Lần 31,8 16,3 40,9 28,3 16,4 31,0 Lần 32,0 15,8 41,6 29,1 17,8 32,5 Lần 32,0 16,6 40,4 28,9 17,4 31,8 Lần 31,6 15,7 40,2 29,4 16,6 32,9 Lần 31,4 15,5 41,0 28,7 17,6 31,6 TB 31,7 16,0 40,8 28,8 17,2 31,8 SD 0,30 0,37 0,46 0,42 0,51 0,71 RSD(%) 0,94 2,32 1,14 1,47 2,96 2,23 42,5 28,4 15,9 31,4 16,5 31,6 15,2 30,7 Mẫu thị trƣờng X5 X7 31,9 15,9 X12 X18 X10 43,0 33,0 28,8 16,2 306,2 462,5 66 KHOẢNG TUYẾN TÍNH tR= 3,15 Vardenafil tR= 3,28 Sildenafil tR= 4,33 Tadalafil Chuẩn hỗn hợp nồng độ 10 ppb tR= 3,15 Vardenafil tR= 3,30 Sildenafil tR= 4,33 Tadalafil Chuẩn hỗn hợp nồng độ 50 ppb tR= 3,16 tR= 3,31 tR= 4,33 Chuẩn hỗn hợp nồng độ 100 ppb 67 Vardenafil Sildenafil Tadalafil tR= 3,17 Vardenafil tR= 3,30 Sildenafil tR= 4,29 Tadalafil Chuẩn hỗn hợp nồng độ 125 ppb tR= 3,17 Vardenafil tR= 3,30 Sildenafil tR= 4,30 Tadalafil Chuẩn hỗn hợp nồng độ 250 ppb tR= 3,16 Vardenafil tR= 3,30 Sildenafil tR= 4,30 Tadalafil Chuẩn hỗn hợp nồng độ 500 ppb 68 PHỤ LỤC 3: MỘT SỐ SẮC KÝ ĐỒ MẪU THỊ TRƢỜNG Vardenafil Sildenafil Tadalafil Sắc ký đồ mẫu X1 Vardenafil Sildenafil Tadalafil Sắc ký đồ mẫu X3 69 Vardenafil Sildenafil Tadalafil Sắc ký đồ mẫu X4 Vardenafil Sildenafil Tadalafil Sắc ký đồ mẫu X15 70 Thành phần viên mẫu Placebo (X4) Nhân sâm 120 mg Lộc nhung 100 mg Dâm dƣơng hoắc 200 mg Bạch tật lê 120 mg Câu kỳ tử 200 mg Bá bệnh 200 mg Ba kích 100 mg Nhục thung dung 100 mg Trâu cô 100 mg L-Arginin HCL 50 mg Kẽm Lactate 10 mg Vitamin E 10 mg Thành phần khác đủ viên 71 Dạng bào chế mẫu STT Mã mẫu Dạng bào chế X1 Viên nang cứng X2 Viên nang cứng X3 Viên nang cứng X4 Viên nang cứng X5 Viên nang cứng X6 Viên nang cứng X7 Viên nang cứng X8 Viên nén X9 Viên hoàn cứng 10 X10 Viên nang cứng 11 X11 Viên hoàn mềm 12 X12 Viên nang cứng 13 X13 Viên nang cứng 14 X14 Viên nang cứng 15 X15 Viên nang cứng 16 X16 Viên nang cứng 17 X17 Viên nang cứng 18 X18 Viên nang cứng 72 PHỤ LỤC Độ lặp lại tối đa chấp nhận nồng độ khác theo AOAC 2016 TT Hàm lƣợng (%) Tỷ lệ chất Đơn vị RSD (%) phân tích 100 100% 1,3 ≥ 10 10-1 10% 1,9 ≥1 10-2 1% 2,7 ≥ 0,1 10-3 0,1% 3,7 0,01 10-4 100 ppm 5,3 0,001 10-5 10 ppm 7,3 0,0001 10-6 ppm 11 0,00001 10-7 100 ppb 15 0,000001 10-8 10ppb 21 10 0,0000001 10-9 ppb 30 Độ thu hồi chấp nhận nồng độ khác theo AOAC 2016 TT Hàm lƣợng (%) Tỷ lệ chất Đơn vị Độ thu hồi (%) phân tích 100 100% 98-102 ≥ 10 10-1 10% 98-102 ≥1 10-2 1% 97-103 ≥ 0,1 10-3 0,1% 95-105 0,01 10-4 100 ppm 90-107 0,001 10-5 10 ppm 80-110 0,0001 10-6 ppm 80-110 0,00001 10-7 100 ppb 80-110 0,000001 10-8 10ppb 60-115 10 0,0000001 10-9 ppb 40-120 73 ... NỘI LƢU HỒNG QUÝ Mã sinh viên: 1201507 XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỒNG THỜI SILDENAFIL, TADALAFIL VÀ VARDENAFIL TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG BẰNG LC- MS/ MS KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng... tài: Xây dựng phương pháp phân tích đồng thời Sildenafil, Tadalafil Vardenafil thực phẩm chức LC- MS/ MS” với mục tiêu chính: Xây dựng quy trình chiết xuất, điều kiện sắc ký, điều kiện MS phù... Nơi thực hiện: Viện Dinh dưỡng HÀ NỘI – 2017 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực hiện, khóa luận Xây dựng phƣơng pháp phân tích đồng thời Sildenafil, Tadalafil Vardenafil thực phẩm chức LCMS /MS đƣợc