Đang tải... (xem toàn văn)
Nấm mốc là nguyên nhân chủ yếu gây thiệt hại nghiêm trọng đối với hoa quả sau thu hoạch, với giả thiết mức độ gây thối có liên quan tới hoạt động hệ enzyme ngoại bào của nấm mốc, tôi đã tiến hành đề tài “ Nghiên cứu đa dạng di truyền và đặc điểm hệ enzyme ngoại bào các chủng nấm mốc gây thối quả cà chua, đu đủ, thanh long sau thu hoạch”.Những công việc chính trong đề tài bao gồm phân lập các chủng nấm từ ba loại quả cà chua, đu đủ, thanh long thối hỏng, thử lây nhiêm nhân tạo đánh giá mức độ gây thối trên ba loại quả cà chua, đu đủ, thanh long. Định danh các chủng nấm mốc phân lập được dựa vào đặc điểm hình thái và phương pháp sinh học phân tử, khảo sát đặc điểm của hệ enzyme ngoại bào của các chủng nấm mốc.Trong phạm vi đề tài, từ 14 mẫu quả bị thối hỏng, 25 chủng nấm mốc đã được phân lập. Kết quả định danh dựa trên các đặc điểm hình thái và giải trịnh tự cho thấy các chủng nấm mốc thuộc các chi: Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Collectitrichum, Rhizopus, Phoma, Cladosporium, Acremonium, Mucor, Lasiodiplodia. Đồng thời, kết quả lây nhiễm ngược của các chủng nấm mốc với quả đu đủ và cà chua, thanh long cho thấy, tất cả các chủng nấm mốc phân lập được đều gây thối quả đu đủ và cà chua, thanh long không bị bệnh với mức độ gây thối khác nhau. Kết quả có chín chủng gây bệnh mạnh trên ba loại quả đu đủ, thanh long và cà chua thuộc chi Aspergillus, Fusarium, Penicillium, Mucor.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “Nghiên cứu đa dạng di truyền đặc điểm hệ enzyme ngoại bào chủng nấm mốc gây thối cà chua, đu đủ, long sau thu hoạch” Sinh viên thực : Dương Thị Thiện Ngành : Công nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn : TS Đặng Xuân Nghiêm “Khóa luận đệ trình khoa CNSH, Trường ĐH Nông nghiệp Hà Nội phần yêu cầu trình độ đại học ngành Công nghệ sinh học” HÀ NỘI - 2013 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng với giúp đỡ tận tình thầy giáo hướng dẫn Các số liệu, kết trình bày khóa luận trung thực, chưa sử dụng Các thông tin, trích dẫn rõ nguồn gốc xin chịu trách nhiệm số liệu khóa luận Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Sinh viên Dương Thị Thiện i LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực tập Bộ môn Công nghệ vi sinh, quan tâm, giúp đỡ dìu dắt tận tình thầy cô giáo, cán phòng thí nghiệm Bộ môn, cố gắng nỗ lực thân, hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo khoa Công nghệ sinh học truyền đạt cho kiến thức vô quan trọng quý báu suốt thời gian học tập, rèn luyện trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Tôi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Đặng Xuân Nghiêm tận tình hướng dẫn dạy dỗ suốt trình học tập nghiên cứu Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới TS Nguyễn Văn Giang thầy cô tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình nghiên cứu Bộ môn Công nghệ vi sinh Tôi xin cảm ơn KS Đỗ Hải Quỳnh, KS Nguyễn Khắc Hải , KS Nguyễn Thu Hương giúp đỡ bảo tận tình cho suốt thời gian thực tập Qua xin gửi lời cảm ơn đến toàn thể Phòng, Ban khoa Công nghệ sinh học toàn thể bạn bè giúp đỡ, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập thực tập tốt nghiệp Và cuối cùng, với tất lòng kính trọng biết ơn vô hạn, xin gửi lời cảm ơn tới Bố, Mẹ, Ông, Bà người thân nuôi nấng, động viên tạo động lực cho suốt trình học tập, nghiên cứu TÔI XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN! Sinh viên Dương Thị Thiện ii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT AS : Axit Sorbic Cs : Cộng DNA Deoxyribonucleic acid ĐH : Đại học Internal Transcribed Spacer – vùng đệm bên ITS : phiên mã Rdna KS : Kỹ sư PCR : Polymerase chain reaction PDA : Potato dextrose agar ppm : Parts per million (w/v) Sbi : Sodium Bisulphite TS : Tiến sĩ iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iii MỤC LỤC .iv DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH .viii TÓM TẮT viii PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Khái quát nấm mốc hại 2.2 Nấm mốc ba loại 2.2.1 Nấm mốc hại cà chua 2.2.2 Nấm mốc hại đu đủ 2.2.3 Nấm mốc hại long 2.3.Đặc điểm hệ enzyme ngoại bào nấm mốc 2.3.1 Các loại enzyme có nấm mốc .8 2.3.2 Mối tương quan hoạt động hệ enzyme ngoại bào khả gây thối 10 PHẦN III: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 12 3.1 Vật liệu 12 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 12 3.1.2 Hóa chất môi trường 12 3.1.3 Máy móc thiết bị 13 3.2 Phương pháp nghiên cứu 14 3.2.1 Phân lập lây nhiễm nhân tạo 14 3.2.1.3 Phương pháp lây nhiễm nhân tạo 15 3.2.3 Nghiên cứu đa dạng di truyền quần thể nấm mốc phương pháp giải trình tự vùng ITS - rDNA 16 3.2.4 Phương pháp tách chiết enzyme ngoại bào nấm mốc 17 3.2.5 Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng hoạt động, độ bền enzyme ngoại bào phương pháp khuếch tán đĩa thạch 18 3.2.6 Thử khả sinh trưởng nấm mốc môi trường bổ sung hóa chất 19 iv PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .20 4.1 Phân lập 20 4.2 Lây nhiễm nhân tạo 20 4.2.1 Trên đu đủ 21 4.2.2 Trên cà chua 22 4.2.3 Trên long 24 4.3 Định danh phương pháp quan sát quan sát đặc tính hình thái giải trình tự vùng ITS – rDNA chủng nấm mốc 27 4.3.1 Định danh quan sát đặc tính hình thái chủng nấm mốc 27 4.3.2 Định danh phương pháp sinh học phân tử 29 Cây phát sinh chủng loại chủng TH17 cho thấy chủng có hệ số tin cậy với giá trị Bootstrap 37 54 với loài Fusarium verticillioides Fusarium oxysporum Đối chiếu với đặc điểm hình thái chủng TH17 kết luận chủng TH17 thuộc loài Fusarium verticillioides .32 4.4 Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng hoạt động, độ bền enzyme 32 4.4.1 Ảnh hưởng pH .32 4.5.2 Ảnh hưởng nhiệt độ .37 4.5 Tốc độ sinh trưởng chủng nấm mốc môi trường bổ sung hóa chất chống nấm 41 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 5.1 Kết luận 44 5.2 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO .45 Tài liệu Tiếng Việt 45 Tài liệu Tiếng Anh 45 v DANH MỤC CÁC BẢNG LỜI CAM ĐOAN i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iii MỤC LỤC .iv DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH .viii TÓM TẮT viii PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Khái quát nấm mốc hại 2.2 Nấm mốc ba loại 2.2.1 Nấm mốc hại cà chua 2.2.2 Nấm mốc hại đu đủ 2.2.3 Nấm mốc hại long 2.3.Đặc điểm hệ enzyme ngoại bào nấm mốc 2.3.1 Các loại enzyme có nấm mốc .8 2.3.2 Mối tương quan hoạt động hệ enzyme ngoại bào khả gây thối 10 PHẦN III: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 12 3.1 Vật liệu 12 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 12 3.1.2 Hóa chất môi trường 12 3.1.3 Máy móc thiết bị 13 3.2 Phương pháp nghiên cứu 14 3.2.1 Phân lập lây nhiễm nhân tạo 14 3.2.1.3 Phương pháp lây nhiễm nhân tạo 15 3.2.3 Nghiên cứu đa dạng di truyền quần thể nấm mốc phương pháp giải trình tự vùng ITS - rDNA 16 3.2.4 Phương pháp tách chiết enzyme ngoại bào nấm mốc 17 3.2.5 Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng hoạt động, độ bền enzyme ngoại bào phương pháp khuếch tán đĩa thạch 18 3.2.6 Thử khả sinh trưởng nấm mốc môi trường bổ sung hóa chất 19 vi PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .20 4.1 Phân lập 20 4.2 Lây nhiễm nhân tạo 20 4.2.1 Trên đu đủ 21 4.2.2 Trên cà chua 22 4.2.3 Trên long 24 4.3 Định danh phương pháp quan sát quan sát đặc tính hình thái giải trình tự vùng ITS – rDNA chủng nấm mốc 27 4.3.1 Định danh quan sát đặc tính hình thái chủng nấm mốc 27 4.3.2 Định danh phương pháp sinh học phân tử 29 Cây phát sinh chủng loại chủng TH17 cho thấy chủng có hệ số tin cậy với giá trị Bootstrap 37 54 với loài Fusarium verticillioides Fusarium oxysporum Đối chiếu với đặc điểm hình thái chủng TH17 kết luận chủng TH17 thuộc loài Fusarium verticillioides .32 4.4 Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng hoạt động, độ bền enzyme 32 4.4.1 Ảnh hưởng pH .32 4.5.2 Ảnh hưởng nhiệt độ .37 4.5 Tốc độ sinh trưởng chủng nấm mốc môi trường bổ sung hóa chất chống nấm 41 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 5.1 Kết luận 44 5.2 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO .45 Tài liệu Tiếng Việt 45 Tài liệu Tiếng Anh 45 vii DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Vị trí gắn mồi ITS1 ITS4 cụm gene rDNA 17 Hình 4.1: Nấm mốc TH25 gây thối miếng đu đủ: (a) xanh, (b) ương, (c) chín 22 Hình 4.2: Nấm mốc TH17 gây thối miếng đu đủ: (a) xanh, (b) ương, (c) chín 22 Hình 4.3: Nấm mốc TH12 gây thối cà chua: (a) ương, (b) chín .24 Hình 4.4: Nấm mốc TH25 gây thối cà chua: (a) ương, (b) chín .24 Hình 4.5: Nấm mốc TH3 gây thối cà chua: (a) ương, (b) chín 24 Hình 4.6 Nấm mốc TH3 gây thối long vị trí: (a) đầu, (b) giữa, (c) cuối 27 Hình 4.7 Nấm mốc TH23 gây thối long vị trí: (a) đầu, (b) giữa, (c) cuối27 Hình 4.8 Cây phát sinh chủng loại chủng TH9( số gốc nhánh giá trị bootstrap) 31 Hình 4.9 Cây phát sinh chủng loại chủng TH17 (số gốc nhánh giá trị bootstrap) 32 Hình 4.10 Hoạt tính amylase ngoại bào chủng nấm mốc pH khác 33 Hình 4.11 Hoạt tính cellulase ngoại bào chủng nấm mốc pH khác 34 Hình 4.12 Hoạt tính lipase ngoại bào chủng nấm mốc pH khác .35 Hình 4.13 Hoạt tính pectinase ngoại bào chủng nấm mốc pH khác .36 Hình 4.14.Hoạt tính protease ngoại bào chủng nấm mốc pH khác 37 Hình 4.15 Hoạt tính amylase ngoại bào chủng nấm mốc nhiệt độ khác 38 Hình 4.16 Hoạt tính cellulase ngoại bào chủng nấm mốc nhiệt độ khác 38 Hình 4.17 Hoạt tính lipase ngoại bào nhiệt độ khác 39 Hình 4.18 Hoạt tính pectinase ngoại bào chủng nấm mốc nhiệt độ khác 40 Hình 4.19 Hoạt tính protease ngoại bào chủng nấm mốc nhiệt độ khác 40 Hình 4.20 khả phát triển nấm mốc loại môi trường 43 TÓM TẮT Nấm mốc nguyên nhân chủ yếu gây thiệt hại nghiêm trọng hoa sau thu hoạch, với giả thiết mức độ gây thối có liên quan tới hoạt động hệ enzyme ngoại bào nấm mốc, tiến hành đề tài “ Nghiên cứu đa dạng di truyền đặc điểm hệ enzyme ngoại bào chủng nấm mốc gây thối cà chua, đu đủ, long sau thu hoạch” Những công việc đề tài bao gồm phân lập chủng nấm từ ba loại cà chua, đu đủ, long thối hỏng, thử lây nhiêm nhân tạo đánh giá mức độ gây viii thối ba loại cà chua, đu đủ, long Định danh chủng nấm mốc phân lập dựa vào đặc điểm hình thái phương pháp sinh học phân tử, khảo sát đặc điểm hệ enzyme ngoại bào chủng nấm mốc Trong phạm vi đề tài, từ 14 mẫu bị thối hỏng, 25 chủng nấm mốc phân lập Kết định danh dựa đặc điểm hình thái giải trịnh tự cho thấy chủng nấm mốc thuộc chi: Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Collectitrichum, Rhizopus, Phoma, Cladosporium, Acremonium, Mucor, Lasiodiplodia Đồng thời, kết lây nhiễm ngược chủng nấm mốc với đu đủ cà chua, long cho thấy, tất chủng nấm mốc phân lập gây thối đu đủ cà chua, long không bị bệnh với mức độ gây thối khác Kết có chín chủng gây bệnh mạnh ba loại đu đủ, long cà chua thuộc chi Aspergillus, Fusarium, Penicillium, Mucor Kết khảo sát hoạt tính enzyme ngoại bào chủng nấm mốc cho thấy 21/25 chủng nấm mốc có hoạt tính pectinase; 17/25 chủng có hoạt tính cellulase lipase; 16/25 chủng có hoạt tính protease; 15/25 chủng có hoạt tính amylase Chủng TH9 gây thối mạnh đu đủ ương chín có hoạt tính cellulase, pectinase, amylase lipase mạnh Các chủng TH3, TH20, TH23, TH25 gây thối mạnh loại hoạt tính cellulose hoạt tính pectinase, amylase, lipase, protease yếu ix PHỤ LỤC Phụ lục 1: Hình ảnh khuẩn lạc, hình thái chủng nấm mốc Phụ lục 1.1 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH12 Aspergillus Phụ lục 1.2 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH8 Aspergillus Phụ lục 1.3 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH11 Phụ lục 1.4 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH21 Aspergillus Phụ lục 1.5 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH13 Lasiodiplodia 49 Phụ lục 1.6 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH9 Aspergillus Phụ lục 1.7 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH14 Penicillium Phụ lục 1.8 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH15 Aspergillus Phụ lục 1.9 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH5.Penicillium Phụ lục 1.10 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH1.Penicillium 50 Phụ lục 1.11 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH4 Fusarium Phụ lục 1.12 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH22 Lasiodiplodia Phụ lục 1.13 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH16 Penicillium Phụ lục 1.14 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH6 Aspergillus Phụ lục 1.15 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH7 51 Phụ lục 1.16 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng D14.5 Phoma Phụ lục 1.17 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng D4.6 Cladosporium Phụ lục 1.18 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH17 Fusarium Phụ lục 1.19 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH10 Penicillium Phụ lục 1.20 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH23 Collectotrichum 52 Phụ lục 1.21 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH20 Collectotrichum Phụ lục 1.22 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH3 Mucor Phụ lục 1.23 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH24 Acremonium Phụ lục 1.24 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH18 Acremonium Phụ lục 1.25 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng TH25Collectotrichum 53 Phụ lục 2: Cây phát sinh chủng loại chủng nấm mốc - Chủng TH1: 98 gi|118495540|dbj|AB277210.1| gi|372123161|gb|JN617705.1| 85 gi|477541829|gb|KC797636.1| 97 97 gi|477541828|gb|KC797635.1| 84 gi|532810502|gb|KF358720.1| gi|452056299|ref|NR 077155.1| 49 gi|452056303|ref|NR 077159.1| 47 100 gi|452056302|ref|NR 077158.1| gi|511801487|ref|NR 103659.1| 87 87 gi|511801488|ref|NR 103660.1| gi|452056297|ref|NR 077153.1| 93 100 54 42 80 gi|452056289|ref|NR 077145.1| gi|511801531|ref|NR 103694.1| gi|511801446|ref|NR 103621.1| gi|452056304|ref|NR 077160.1| TH1 64 100 gi|511801503|ref|NR 103674.1| gi|511801541|ref|NR 103703.1| 38 gi|452056283|ref|NR 077139.1| gi|511801404|ref|NR 103579.1| gi|511801539|ref|NR 103702.1| 0.05 Chủng TH3 Mucor hiemalis f hiemalis|JN206143.1| 100 Mucor racemosus|AF176659.2| Mucor hiemalis f hiemalis |JN206144.1| 68 Mucor hiemalis|KC009061.1| Mucor hiemalis |DQ118992.1| 96 100 Mucor hiemalis f hiemalis|JN206129.1| Mucor fusiformis|JN206157.1| 59 Mucor irregularis|JX976247.1| Mucor irregularis|JN206154.1| 100 92 69 Mucor irregularis|JF299220.1| Mucor irregularis|JX976255.1| Mucor irregularis|JX976256.1| Mucor irregularis|JX976250.1| Mucor hiemalis|JF299220.1| 100 Mucor nidicola|JF299215.1| TH3 100 Mucor luteus|JN206149.1| Mucor luteus|NR_103614.1| Mucor zonatus|JN206105.1| Mucor moelleri|KF156337.1| 100 100 0.02 54 Mucor moelleri |JN206115.1| Mucor moelleri|JN206114.1| - Chủng TH4 gi|1122878|emb|X94166.1| gi|3320354|gb|U61680.1|FDU6168 58 gi|1808951|gb|U34555.1|FVU3455 36 gi|3320350|gb|U61676.1|FBU6167 46 gi|3320355|gb|U61681.1|FLU6168 95 gi|3320356|gb|U61682.1|FNU6168 gi|1808932|gb|U34566.1|FOU3456 gi|90436913|gb|DQ452453.1| 88 99 gi|343161767|dbj|AB587001.1| 100 gi|91719250|gb|DQ459868.1| gi|559783702|gb|KF607063.1| 80 gi|393804113|gb|JX045848.1| 100 TH4 33 34 gi|37786616|gb|AY213655.1| gi|37786614|gb|AY213653.1| gi|343161781|dbj|AB587015.1| 87 60 gi|343161777|dbj|AB587011.1| gi|218455079|gb|EU860056.1| gi|74100985|gb|DQ094322.1| 94 100 gi|74101046|gb|DQ094383.1| 98 gi|399892876|gb|JX435219.1| 0.01 - Chủng TH5 78 98 78 98 TH5 Penicillium sp |AB277210.1| Penicillium rolfsii |JN617705.1| Penicillium |KC797636.1| 92 Penicillium |KC797635.1| 42 Penicillium ochrochloron |KF358720.1| Penicillium melinii |NR 077155.1| 53 Penicillium thomii |NR 077159.1| 55 100 Penicillium spinulosum |NR 077158.1| 40 Penicillium implicatum |NR 077160.1| Penicillium crustosum |NR 077153.1| Penicillium chrysogenum |NR 077145.1| 99 100 Penicillium nalgiovense |NR 103694.1| 55 47 74 83 52 Penicillium roqueforti |NR 103621.1| Penicillium herquei |NR 103659.1| Penicillium adametzioides |NR 103660.1| Penicillium nodositatum |NR 103703.1| Penicillium oblatum |NR 103674.1| Arthroderma multifidum |NR 077139.1| Aspergillus puniceus |NR 103579.1| 72 Diaporthe viticola |NR 103702.1| 0.05 55 - Chủng TH6 74 Aspergillus piperis |NR 077191.1| 42 93 Aspergillus costaricaensis |NR 103604.1| Aspergillus awamori |NR 077143.1| 47 Aspergillus ellipticus |NR 103605.1| 73 Aspergillus homomorphus |NR 077189.1| Aspergillus sclerotioniger |NR 077192.1| 68 98 Aspergillus lacticoffeatus |NR 077190.1| Aspergillus flavus |JX535495.1| 40 100 Aspergillus oryzae |AF459735.1| TH6 52 16 Aspergillus candidus |NR 077149.1| 18 Aspergillus wentii |NR 077152.1| 41 Aspergillus elegans |NR 077196.1| Penicillium herquei |NR 103659.1| Penicillium nalgiovense |NR 103694.1| 87 Penicillium flavigenum |NR 103695.1| Penicillium kewense |NR 103693.1| Penicillium tricolor |NR 077206.1| 100 88 Penicillium polonicum |NR 103687.1| Penicillium paneum |NR 103620.1| Talaromyces siamensis |NR 103683.1| 0.01 - Chủng TH8 99 Aspergillus sclerotioniger |NR 077192.1| Aspergillus lacticoffeatus |NR 077190.1| 93 Aspergillus awamori |NR 077143.1| 100 95 Aspergillus costaricaensis |NR 103604.1| Aspergillus heteromorphus |NR 103606.1| 28 88 Aspergillus ellipticus |NR 103605.1| Aspergillus flavus |JX535495.1| 100 Aspergillus oryzae|AF459735.1| TH8 Aspergillus elegans |NR 077196.1| 22 100 Aspergillus steynii |NR 077197.1| Penicillium herquei |NR 103659.1| 52 54 Aspergillus wentii |NR 077152.1| 75 Penicillium paneum |NR 103620.1| Penicillium roqueforti |NR 103621.1| 100 36 42 Penicillium crustosum |NR 077153.1| Penicillium tricolor |NR 077206.1| Penicillium flavigenum |NR 103695.1| 52 Penicillium nalgiovense |NR 103694.1| Aspergillus candidus |NR 077149.1| Talaromyces loliensis |NR 103680.1| 0.02 56 - Chủng TH10 78 98 Penicillium rolfsii |JN617705.1| 78 98 TH10 Penicillium sp |AB277210.1| Penicillium subrubescens |KC797636.1| 92 Penicillium subrubescens |KC797635.1| 42 Penicillium ochrochloron |KF358720.1| Penicillium melinii |NR 077155.1| 53 Penicillium thomii |NR 077159.1| 55 100 Penicillium spinulosum |NR 077158.1| 40 Penicillium implicatum |NR 077160.1| Penicillium crustosum |NR 077153.1| Penicillium chrysogenum |NR 077145.1| 99 100 Penicillium nalgiovense |NR 103694.1| 55 Penicillium roqueforti |NR 103621.1| 47 74 Penicillium herquei |NR 103659.1| 83 52 Penicillium adametzioides |NR 103660.1| Penicillium nodositatum |NR 103703.1| Penicillium oblatum |NR 103674.1| Arthroderma multifidum |NR 077139.1| Aspergillus puniceus |NR 103579.1| Diaporthe viticola |NR 103702.1| 72 0.05 Chủng TH11 60 39 87 gi|511801531|ref|NR 103694.1| TH11 gi|452056289|ref|NR 077145.1| 100 gi|452056297|ref|NR 077153.1| gi|511801446|ref|NR 103621.1| 20 99 gi|118495540|dbj|AB277210.1| gi|372123161|gb|JN617705.1| gi|532810502|gb|KF358720.1| 100 33 86 gi|477541829|gb|KC797636.1| 98 gi|477541828|gb|KC797635.1| 97 gi|511801488|ref|NR 103660.1| 55 gi|452056299|ref|NR 077155.1| 38 53 gi|511801487|ref|NR 103659.1| 98 gi|452056303|ref|NR 077159.1| 99 gi|452056302|ref|NR 077158.1| gi|452056304|ref|NR 077160.1| 36 gi|511801404|ref|NR 103579.1| 55 gi|511801541|ref|NR 103703.1| gi|511801503|ref|NR 103674.1| gi|511801539|ref|NR 103702.1| gi|452056283|ref|NR 077139.1| 0.02 57 - Chủng TH12 75 83 95 gi|452056335|ref|NR 077191.1| gi|511801429|ref|NR 103604.1| gi|452056287|ref|NR 077143.1| 57 gi|511801430|ref|NR 103605.1| gi|452056336|ref|NR 077192.1| 83 99 gi|452056334|ref|NR 077190.1| 81 gi|452056333|ref|NR 077189.1| gi|409179961|gb|JX535495.1| TH12 100 32 51 gi|18252603|gb|AF459735.1| gi|452056340|ref|NR 077196.1| gi|452056296|ref|NR 077152.1| 21 gi|511801487|ref|NR 103659.1| 43 gi|511801529|ref|NR 103693.1| 61 77 60 gi|511801531|ref|NR 103694.1| gi|511801532|ref|NR 103695.1| gi|511801445|ref|NR 103620.1| 99 gi|452056350|ref|NR 077206.1| 74 79 gi|511801523|ref|NR 103687.1| gi|452056293|ref|NR 077149.1| gi|511801519|ref|NR 103683.1| 0.01 - Chủng TH14 81 99 81 TH14 gi|118495540|dbj|AB277210.1| gi|372123161|gb|JN617705.1| gi|477541829|gb|KC797636.1| 98 93 gi|477541828|gb|KC797635.1| 44 gi|532810502|gb|KF358720.1| gi|452056299|ref|NR 077155.1| 50 gi|452056303|ref|NR 077159.1| 55 100 gi|452056302|ref|NR 077158.1| 42 gi|452056304|ref|NR 077160.1| gi|452056297|ref|NR 077153.1| gi|452056289|ref|NR 077145.1| 100 100 52 47 90 gi|511801446|ref|NR 103621.1| gi|511801487|ref|NR 103659.1| 80 76 gi|511801531|ref|NR 103694.1| gi|511801488|ref|NR 103660.1| gi|511801541|ref|NR 103703.1| 70 gi|511801503|ref|NR 103674.1| gi|452056283|ref|NR 077139.1| gi|511801404|ref|NR 103579.1| gi|511801539|ref|NR 103702.1| 0.05 58 - Chủng TH15 73 gi|452056335|ref|NR 077191.1| 52 95 gi|511801429|ref|NR 103604.1| gi|452056287|ref|NR 077143.1| 50 gi|511801430|ref|NR 103605.1| 60 gi|452056333|ref|NR 077189.1| gi|452056336|ref|NR 077192.1| 86 99 gi|452056334|ref|NR 077190.1| gi|409179961|gb|JX535495.1| 36 100 gi|18252603|gb|AF459735.1| TH15 46 42 gi|452056293|ref|NR 077149.1| gi|452056340|ref|NR 077196.1| gi|511801487|ref|NR 103659.1| 67 gi|452056296|ref|NR 077152.1| gi|511801519|ref|NR 103683.1| gi|511801445|ref|NR 103620.1| 32 53 gi|452056350|ref|NR 077206.1| 100 gi|511801523|ref|NR 103687.1| gi|511801529|ref|NR 103693.1| 44 65 gi|511801531|ref|NR 103694.1| gi|511801532|ref|NR 103695.1| 0.01 - Chủng TH16 79 98 TH16 gi|118495540|dbj|AB277210.1| gi|372123161|gb|JN617705.1| 80 gi|477541829|gb|KC797636.1| 98 92 55 gi|477541828|gb|KC797635.1| gi|532810502|gb|KF358720.1| gi|452056299|ref|NR 077155.1| 59 gi|452056303|ref|NR 077159.1| 68 100 54 gi|452056302|ref|NR 077158.1| gi|452056304|ref|NR 077160.1| gi|452056297|ref|NR 077153.1| 99 gi|452056289|ref|NR 077145.1| 100 gi|511801531|ref|NR 103694.1| 54 44 88 gi|511801446|ref|NR 103621.1| gi|511801487|ref|NR 103659.1| 84 67 gi|511801488|ref|NR 103660.1| gi|511801541|ref|NR 103703.1| gi|511801503|ref|NR 103674.1| gi|452056283|ref|NR 077139.1| gi|511801404|ref|NR 103579.1| 80 59 gi|511801539|ref|NR 103702.1| - Chủng TH21 28 67 gi|511801429|ref|NR 103604.1| gi|452056287|ref|NR 077143.1| 92 gi|452056335|ref|NR 077191.1| 33 gi|511801430|ref|NR 103605.1| 41 gi|452056333|ref|NR 077189.1| gi|452056336|ref|NR 077192.1| 73 97 gi|452056334|ref|NR 077190.1| TH21 71 gi|409179961|gb|JX535495.1| 100 86 gi|18252603|gb|AF459735.1| gi|452056293|ref|NR 077149.1| gi|452056340|ref|NR 077196.1| 26 gi|511801487|ref|NR 103659.1| gi|452056296|ref|NR 077152.1| gi|511801519|ref|NR 103683.1| 46 32 87 43 gi|511801531|ref|NR 103694.1| gi|511801532|ref|NR 103695.1| gi|511801529|ref|NR 103693.1| 99 gi|511801445|ref|NR 103620.1| gi|452056350|ref|NR 077206.1| 76 67 60 gi|511801523|ref|NR 103687.1| Phụ lục 3: hoạt tính enzyme ngoại bào chủng nấm mốc Sơ đồ thử hoạt tính enzyme ngoại bào chủng nấm mốc 12 721 17 225 6: TH9 7: TH14 8: TH15 9: TH5 10: TH1 11: TH4 12: TH22 13: TH16 14: TH6 15: TH7 16: TH19 17: TH2 18: TH17 19: TH10 20: TH23 21: TH20 22: TH25 23: TH3 24: TH24 25: TH18 20 11 16 24 61 13 83 19 23 15 10 1: TH12 2: TH8 3: TH11 4: TH21 5: TH13 22 1894 14 61 Amylase Pectinase Lypase Cellulase 62 Protease 63 ... liệu, kết trình bày khóa luận trung thực, chưa sử dụng Các thông tin, trích dẫn rõ nguồn gốc xin chịu trách nhiệm số liệu khóa luận Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Sinh viên Dương Thị Thiện i LỜI CẢM... đỡ dìu dắt tận tình thầy cô giáo, cán phòng thí nghiệm Bộ môn, cố gắng nỗ lực thân, hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo khoa Công nghệ sinh học truyền đạt cho... viên tạo động lực cho suốt trình học tập, nghiên cứu TÔI XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN! Sinh viên Dương Thị Thiện ii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT AS : Axit Sorbic Cs : Cộng DNA Deoxyribonucleic acid ĐH :