BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VN ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ĐAN THỊ THÚY HẰNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ ENZYME α-GLUCOSIDASE CỦA CÁC HỢP CHẤT TỪ QUẢ MƯỚP ĐẮNG (Momordica charantia L.) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: Hà Nội – 11/2015 60420114 BỘ BỘ GIÁO GIÁO DỤC DỤC VÀ VÀ ĐÀO ĐÀO TẠO TẠO VIỆN VIỆN HÀN HÀN LÂM LÂM KHOA KHOA HỌC HỌC VÀ VÀ CÔNG CÔNG NGHỆ NGHỆ VN VN ĐẠI ĐẠI HỌC HỌC THÁI THÁI NGUYÊN NGUYÊN VIỆN VIỆN SINH SINH THÁI THÁI VÀ VÀ TÀI TÀI NGUYÊN NGUYÊN SINH SINH VẬT VẬT ĐAN ĐAN THỊ THỊ THÚY THÚY HẰNG HẰNG NGHIÊN NGHIÊN CỨU CỨU THÀNH THÀNH PHẦN PHẦN HÓA HÓA HỌC HỌC VÀ VÀ HOẠT HOẠT TÍNH TÍNH ỨC ỨC CHẾ CHẾ ENZYME ENZYME αα-GLUCOSIDASE -GLUCOSIDASE CỦA CỦA CÁC CÁC HỢP HỢP CHẤT CHẤT TỪ TỪ QUẢ QUẢ MƯỚP MƯỚP ĐẮNG ĐẮNG ((Momordica Momordica charantia charantia L.) L.) LUẬN LUẬN VĂN VĂN THẠC THẠC SĨ SĨ SINH SINH HỌC HỌC Chuyên Chuyên ngành: ngành: Sinh Sinh học học thực thực nghiệm nghiệm Mã số:số: Mã 60420114 60420114 NGƯỜI NGƯỜI HƯỚNG HƯỚNG DẪN DẪN KHOA KHOA HỌC: HỌC: PGS PGS TS TS PHAN PHAN VĂN VĂN KIỆM KIỆM Hà Hà Nội Nội –– 11/2015 11/2015 LỜI CẢM ƠN Luận văn hồn thành Phịng Nghiên cứu cấu trúc, Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam với hỗ trợ kinh phí đề tài cấp Viện Hàn lâm: “Nghiên cứu xây dựng quy trình phân lập hoạt chất momordicoside A từ Mướp đắng Momordica charantia L tác dụng điều trị tiểu đường động vật thực nghiệm” Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Phan Văn Kiệm, Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, người thầy tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới Lãnh đạo Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện cho học tập phấn đấu để hoàn thành tốt mục tiêu đề luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn quan tâm giúp đỡ tập thể cán Viện Hóa sinh biển tập thể cán Phòng Nghiên cứu cấu trúc động viên, giúp đỡ trình thực luận văn Hà Nội, 11/2015 Đan Thị Thúy Hằng LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng cơng trình khác Tơi xin cam đoan giúp đỡ việc hoàn thành luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm số liệu luận văn Hà Nội, 11/2015 Đan Thị Thúy Hằng MỤC LỤC MỤC LỤC I DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT III DANH MỤC CÁC BẢNG IV DANH MỤC CÁC HÌNH V ĐẶT VẤN ĐỀ Chương Tổng quan 1.1 Một vài nét thực vật mướp đắng 1.1.1 Mô tả thực vật 1.1.2 Phân bố sinh thái 1.1.3 Công dụng mướp đắng y học dân gian 1.2 Thành phần hóa học lồi mướp đắng 1.3 Tác dụng dược lí loài mướp đắng 11 1.3.1 Hoạt tính trị bệnh tiểu đường 11 1.3.2 Hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm 12 1.3.3 Hoạt tính kháng virus 13 1.3.4 Hoạt tính chống ung thư 13 1.3.5 Hoạt tính chống viêm loét 14 1.3.6 Hoạt tính điều hịa miễn dịch 14 1.3.7 Hoạt tính kháng viêm 14 1.4 Bệnh tiểu đường hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase 15 1.4.1 Bệnh tiểu đường 15 1.4.2 Hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase 17 Chương Đối tượng phương pháp nghiên cứu 20 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Phương pháp phân lập hợp chất 20 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hoá học hợp chất 21 2.2.3 Phương pháp đánh giá hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase 22 Chương Thực nghiệm 24 3.1 Phân lập hợp chất 24 3.2 Các thơng số vật lí hợp chất phân lập 25 I 3.2.1 Hợp chất MC1: Charantoside D 25 3.2.2 Hợp chất MC2: Charantoside E 25 3.2.3 Hợp chất MC3: Charantoside F 25 3.2.4 Hợp chất MC4: Charantoside G 26 3.2.5 Hợp chất MC5: Goyaglycoside-c 26 3.2.6 Hợp chất MC6: Goyaglycoside-d 26 3.2.7 Hợp chất MC7: Momordicoside F1 26 3.2.8 Hợp chất MC8: Momordicoside N 27 3.2.9 Hợp chất MC9: Momordicoside M 27 Chương Kết thảo luận 29 4.1 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất 29 4.1.1 Hợp chất MC1: Charantoside D (hợp chất mới) 29 4.1.2 Hợp chất MC2: Charantoside E (hợp chất mới) 34 4.1.3 Hợp chất MC3: Charantoside F (hợp chất mới) 39 4.1.4 Hợp chất MC4: Charantoside G (hợp chất mới) 44 4.1.5 Hợp chất MC5: Goyaglycoside-c 49 4.1.6 Hợp chất MC6: Goyaglycoside-d 54 4.1.7 Hợp chất MC7: Momordicoside F1 58 4.1.8 Hợp chất MC8: Momordicoside N 62 4.1.9 Hợp chất MC9: Momordicoside M 67 4.2 Kết đánh giá hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase 71 KẾT LUẬN 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO 75 CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ PHỤ LỤC PHỔ II DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu 13 C-NMR IC50 Tiếng Anh Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Column chromatography Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer Dimethyl sulfoxide Heteronuclear mutiple Bond Connectivity Heteronuclear Single-Quantum Coherence Inhibitory concentration at 50% NF-B RP-18 SRB TLC TMS WHO Nuclear Factor-kappa B Reserve phase C-18 Sulforhodamine B Thin layer chromatography Tetramethylsilane World Health Organization H-NMR CC DEPT DMSO HMBC HSQC III Diễn giải Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Sắc kí cột Phổ DEPT Dimethyl sulfoxide Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết Nồng độ ức chế 50% đối tượng thử nghiệm Yếu tố nhân kappa B Chất hấp phụ pha đảo RP-18 Sulforhodamine B Sắc ký lớp mỏng Tetramethylsilane Tổ chức Y tế Thế giới DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Số liệu phổ 1H 13C-NMR hợp chất MC1 hợp chất tham khảo 30 Bảng Số liệu phổ 1H 13C-NMR hợp chất MC2 hợp chất tham khảo 36 Bảng Số liệu phổ 1H 13C-NMR hợp chất MC3 hợp chất tham khảo 41 Bảng Số liệu phổ 1H 13C-NMR hợp chất MC4 hợp chất tham khảo 46 Bảng Số liệu phổ 1H 13C-NMR hợp chất MC5 hợp chất tham khảo 51 Bảng Số liệu phổ 13C-NMR hợp chất MC6 hợp chất tham khảo 55 Bảng Số liệu phổ 1H 13C-NMR hợp chất MC7 hợp chất tham khảo 59 Bảng Số liệu phổ 1H 13C-NMR hợp chất MC8 hợp chất tham khảo 63 Bảng Số liệu phổ 13C-NMR hợp chất MC9 hợp chất tham khảo 67 IV DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Hình ảnh loài mướp đắng Hình Sơ đồ phân lập hợp chất từ mươp đắng (M charantia L.) 28 Hình Cấu trúc hóa học MC1, hợp chất tham khảo MC1A tương tác HMBC MC1 29 Hình Phổ HR-ESI-MS hợp chất MC1 31 Hình Phổ 1H-NMR hợp chất MC1 32 Hình Phổ 13C-NMR hợp chất MC1 32 Hình Phổ HSQC chất MC1 33 Hình Phổ HMBC chất MC1 33 Hình Phổ NOESY chất MC1 34 Hình 10 Cấu trúc hóa học MC2, hợp chất tham khảo MC2A tương tác HMBC MC2 34 Hình 11 Phổ HR-ESI-MS chất MC2 37 Hình 12 Phổ 1H-NMR chất MC2 37 Hình 13 Phổ 13C-NMR chất MC2 38 Hình 14 Phổ HSQC hợp chất MC2 38 Hình 15 Phổ HMBC chất MC2 39 Hình 16 Cấu trúc hóa học MC3, hợp chất tham khảo MC3A tương tác HMBC MC3 39 Hình 17 Phổ HR-ESI-MS hợp chất MC3 42 Hình 18 Phổ 1H-NMR hợp chất MC3 42 Hình 19 Phổ 13C-NMR hợp chất MC3 43 Hình 20 Phổ HSQC hợp chất MC3 43 Hình 21 Phổ HMBC hợp chất MC3 44 Hình 22 Cấu trúc hóa học MC4, hợp chất tham khảo MC4A tương tác HMBC MC4 44 Hình 23 Phổ HR-ESI-MS hợp chất MC4 47 V Hình 24 Phổ 1H-NMR hợp chất MC4 47 Hình 25 Phổ 13C-NMR hợp chất MC4 48 Hình 26 Phổ HSQC hợp chất MC4 48 Hình 27 Phổ HMBC hợp chất MC4 49 Hình 28 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC MC5 49 Hình 29 Phổ 1H-NMR hợp chất MC5 52 Hình 30 Phổ 13C-NMR hợp chất MC5 52 Hình 31 Phổ DEPT hợp chất MC5 53 Hình 32 Phổ HSQC hợp chất MC5 53 Hình 33 Phổ HMBC hợp chất MC5 54 Hình 34 Cấu trúc hóa học MC6 54 Hình 35 Phổ 1H-NMR hợp chất MC6 56 Hình 36 Phổ 13C-NMR hợp chất MC6 57 Hình 37 Phổ DEPT hợp chất MC6 57 Hình 38 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC MC7 58 Hình 39 Phổ 1H-NMR hợp chất MC7 60 Hình 40 Phổ 13C-NMR hợp chất MC7 60 Hình 41 Phổ HSQC hợp chất MC7 61 Hình 42 Phổ HMBC hợp chất MC7 61 Hình 43 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC MC8 62 Hình 44 Phổ 1H-NMR hợp chất MC8 64 Hình 45 Phổ 13C-NMR hợp chất MC8 65 Hình 46 Phổ DEPT Hợp chất MC8 65 Hình 47 Phổ HSQC hợp chất MC8 66 Hình 48 Phổ HMBC hợp chất MC8 66 Hình 49 Cấu trúc hóa học hợp chất MC9 67 Hình 50 Phổ 1H-NMR hợp chất MC9 69 Hình 51 Phổ 13C-NMR hợp chất MC9 69 Hình 52 Phổ DEPT hợp chất MC9 70 VI Hình 47 Phổ HSQC hợp chất MC8 Hình 48 Phổ HMBC hợp chất MC8 66 4.1.9 Hợp chất MC9: Momordicoside M Hình 49 Cấu trúc hóa học hợp chất MC9 Bảng Số liệu phổ 13C-NMR hợp chất MC9 hợp chất tham khảo STT Aglycon 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 δCa DEPT C# 18,8 27,5 85,3 39,1 85,9 134,2 130,0 52,2 45,3 40,1 23,8 31,2 45,6 48,5 33,6 28,0 46,6 14,5 80,1 40,7 14,7 76,6 81,2 19,45 28,09 86,99 39,70 87,75 133,92 131,42 53,23 45,96 40,97 24,56 32,03 46,57 48,83* 34,46 28,83 47,53 14,89 80,69 41,87 14,59 77,19 81,38 67 CH2 CH2 CH C C CH CH CH C CH CH2 CH2 C C CH2 CH2 CH CH3 CH2 CH CH3 CH CH 24 25 26 27 28 29 30 3-O-Glc 1′ 2′ 3′ 4′ 5′ 6′ 23-O-All 1′′ 2′′ 3′′ 4′′ 5′′ 6′′ a 124,7 135,4 26,2 18,6 21,1 25,6 20,2 124,44 137,35 26,21 18,92 20,38 26,52 20,77 CH C CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 106,7 75,7 78,3 71,9 78,4 63,0 107,58 75,24 77,51 71,79 77,69 62,86 CH CH CH CH CH CH2 103,7 73,0 73,1 69,4 76,0 63,0 102,41 72,80 72,88 68,66 75,49 62,98 CH CH CH CH CH CH2 đo CD3OD, #C momordicoside M đo pyridine-d5 [28] Phân tích số liệu phổ 1H-, 13C-NMR DEPT MC9 cho thấy cấu trúc MC9 giống với MC8 ngoại trừ khác biệt phân tử đường β-Dglucopyranoside C-3 So sánh tín hiệu phổ MC9 với số liệu hợp chất momordicoside M [28] cho thấy phù hợp vị trí tương ứng Vì vậy, cấu trúc MC9 xác định momordicoside M [28] 68 Hình 50 Phổ 1H-NMR hợp chất MC9 Hình 51 Phổ 13C-NMR hợp chất MC9 69 Hình 52 Phổ DEPT hợp chất MC9 26 21 18 22 20 23 25 24 OMe OH 12 19 OMe OH 27 17 16 14 O HO 4' HO HO 6' 5' 3' O O 30 HO O O HO 29 1' 2' HO O O 28 OMe O HO OH OH OH MC1 OH OH MC2 MC3 OMe OMe OMe OMe OHC O O HO OH O O HO O HO HO OH OH HO O O OH MC4 O HO HO OH MC5 OH OH OH MC6 OMe O O HO HO O O O O HO O HO HO HO HO OH O OH MC7 HO OH MC8 OH OH O O HO HO O HO O HO OH MC9 OH OH Hình 53 Các hợp chất phân lập từ mướp đắng M charantia L 70 O 4.2 Kết đánh giá hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase Tất hợp chất phân lập từ loài mướp đắng Momordica charantia L đánh giá hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase ngoại trừ hợp chất MC4 khơng đánh giá hoạt tính lượng chất Hoạt tính ức chế enzyme αglucosidase hợp chất phân lập từ loài Momordica charantia L đánh giá phòng Hoạt chất sinh học, Viện Hóa sinh biển, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Phép thử tiến hành theo phương pháp trình bày mục 2.2.3 nồng độ thử 100 500 μg/mL với chất đối chứng dương acarbose, chất ức chế enzyme α-glucosidase, giảm trình hấp thụ đường thành dày Kết thử hoạt tính biểu diễn bảng 10 bảng 11 Bảng 10 Kết thử hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase nồng độ 100 μg/mL Stt Hợp chất phân lập từ loài Momordica charantia L % Ức chế enzyme α-glucosidase MC1 23,81 ± 0,99 MC2 11,34 ± 1,53 MC3 4,27 ± 0,87 MC5 34,22 ±0,67 MC6 1,43 ±0 89 MC7 - MC8 12,29 ± 2,32 MC9 22,68 ± 1,86 Pos Acarbose 21,18 ± 0,65 Kết thử hoạt tính cho thấy hợp chất thể hoạt ức chế enzyme αglucosidase từ yếu đến mạnh (1,43 – 34,22%), ngoại trừ hợp chất MC7 hoạt tính nồng độ thử 100 μg/mL Đặc biệt, hợp chất MC1, MC5 MC9 thể hoạt tính mạnh khoảng 22,68 - 34,22% cao chất đối chứng dương acarbose (21,18%) 71 Bảng 11 Kết thử hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase nồng độ 500 μg/mL Stt Hợp chất phân lập từ loài Momordica charantia L % Ức chế enzyme α-glucosidase MC1 56,31 ±2,15 MC2 33,63 ± 1,77 MC3 19,58 ± 1,14 MC5 68,17 ± 3,02 MC6 10,86 ±2,02 MC7 5,44 ±1,06 MC8 29,53 ± 0,58 MC9 22,68 ± 1,86 pos Acarbose 52,47 ±2,09 Ở nồng độ thử nghiệm 500 μg/mL tám hợp chất phân lập từ M charantia L thể hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase từ yếu đến mạnh với giá trị phần trăm ức chế khoảng 5,44 – 68,17% Đáng ý, hợp chất MC1 MC5 thể hoạt tính mạnh với giá trị phần trăm ức chế 56,31% 68,17% so với chất đối chứng dương acarbose (52,47 %) Kết thử nghiệm cho thấy hợp chất thể khả ức chế enzyme α-glucosidase Đặc biệt, ba hợp chất MC1, MC5, MC9 cho thấy khả ức chế mạnh liều lượng thử nghiệm Các hợp chất lựa chọn để xác định giá trị nồng độ ức chế 50% enzyme α-glucosidase Chúng tiến hành khảo sát % ức chế enzyme α-glucosidase liều lượng 5, 15, 50, 150, 500 μg/mL Từ % ức chế hợp chất nồng độ khác nhau, xác định giá trị IC50 hợp chất (xem bảng 12 hình 54) Nồng độ ức chế 50%, IC50 xây dựng dựa nồng độ thử nghiệm Giá trị IC50 xác định theo phương pháp hồi quy phi tuyến tính phần mềm Graphpad Prism 5.0 72 Bảng 12 Giá trị IC50 hợp chất MC1, MC5 MC9 TT Tên mẫu Giá trị IC50 (μg/mL) Giá trị IC50 (μM) MC1 429,58 662,50 MC5 337,71 509,80 MC9 465,79 584,83 pos Acarbose 433,80 671,93 Hình 54 Khả ức chế enzyme α-glucosidase nồng độ khác Theo kết tính tốn, giá trị ức chế 50% enzyme α-glucosidase hợp chất MC1, MC5 MC9 662,50, 509,80, 584,83 μM, nhỏ so với giá trị IC50 chất đối chứng dương acarbose (671,93 μM) Kết cho thấy khả ức chế enzyme α-glucosidase hợp chất MC1, MC5 MC9 mạnh 73 KẾT LUẬN Chín hợp chất thuộc khung cucurbitane glycoside phân lập từ lồi mướp đắng M charantia Trong có bốn hợp chất là: Charantoside D (MC1), charantoside E (MC2), charantoside F (MC3), charantoside G (MC4) năm hợp chất biết: goyaglycoside-c (MC5), goyaglycoside-d (MC6), momordicoside F1 (MC7), momordicoside N (MC8) momordicoside M (MC9) Đã tiến hành thử hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase Kết cho thấy hợp chất charantoside D (MC1), goyaglycoside-C (MC5) momordicoside M (MC9) thể hoạt tính ức chế enzyme α-glucosidase mạnh với giá trị IC50 662,50, 509,80 584,83 µM Các hợp chất thể hoạt tính mạnh chất đối chứng dương acarbose (IC50 671,93 μM) 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] V.V Chi, Từ điển thuốc Việt Nam Nhà Xuất Y học: Hà Nội, 2012 185186 Tiếng Anh [2] T Akihisa, N Higo, H Tokuda, M Ukiya, H Akazawa, Y Tochigi, Y Kimura, T Suzuki, H Nishino, Cucurbitane-type triterpenoids from the fruits of Momordica charantia and their cancer chemopreventive effects Journal of Natural Products, 70, 1233-1239 (2007) [3] L Ali, A.K Khan, M.I Mamun, M Mosihuzzaman, N Nahar, M Nur-e-Alam, B Rokeya, Studies on hypoglycemic effects of fruit pulp, seed, and whole plant of Momordica charantia on normal and diabetic model rats Planta Medica, 59, 408–412 (1993) [4] T.K Au, R.A Collins, T.L Lam, T.B Ng, W.P Fong, D.C.C Wan, The plant ribosome inactivating proteins luffin and saporin are potent inhibitors of HIV-1 integrase FEBS Letters, 471, 169–172 (2000) [5] H Bischoff, Pharmacology of α-glucosidase inhibition European Journal of Clinical Investigation, 24, 3-10 (1994) [6] A.S Bourinbaiar S Lee-Huang, Potentiation of anti-HIV activity of antiinflammatory drugs, dexamethasone and indomethacin, by MAP30, the antiviral agent from bitter melon Biochemical and Biophysical Research, 208, 779–785 (1995) [7] C.I Chang, C.R Chen, Y.W Liao, H.L Cheng, Y.C Chen, C.H Chou, Cucurbitane-type triterpenoids from Momordica charantia Journal of Natural Products, 69, 1168–1171 (2006) [8] C.I Chang, C.R Chen, Y.W Liao, W.L Shih, C Hsueh-Ling, C.Y Tzeng, J.W Li, M.T Kung, Octanorcucurbitane triterpenoids protect against tert-butyl hydroperoxide-induced hepatotoxicity from the stems of Momordica charantia Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 58, 225–229 (2010) [9] J Chen, R Tian, M Qiu, L Lu, Y Zheng, Z Zhang, Trinorcucurbitane and cucurbitane triterpenoids from the roots of Momordica charantia Phytochemistry, 69, 1043–1048 (2008) [10] J.C Chen, W.Q Liu, L Lu, M.H Qiu, Y.T Zheng, L.M Yang, X.M Zhang, L Zhou, Z.R Li, Kuguacins F-S, cucurbitane triterpenoids from Momordica charantia Phytochemistry, 70, 133–140 (2009) 75 [11] Q Chen, L.L Chan, E.T Li, J Nutr, 133, Bitter melon (Momordica charantia) reduces adiposity, lowers serum insulin and normalizes glucose tolerance in rats fed a high fat diet Journal of Nutrition, 133, 1088–1093 (2003) [12] Q Chen E.T Li, Reduced adiposity in bitter melon (Momordica charanita) fed rats is associated with lower tissue triglyceride and higher plasma catecholamines British Journal of Nutrition, 93, 747–754 (2005) [13] J.E Cunnick, K Sakamoto, S.K Chapes, G.W Fortner, D.J Takemoto, Induction of tumor cytotoxic immune cells using a protein from the bitter melon (Momordica charantia) Cellular Immunology, 126, 278–289 (1990) [14] C Day, T Cartwright, J Provost, Hypoglycaemic effect of Momordica charantia extracts Planta Medica, 426–429 (1990) [15] M.O Fatope, Y Takeda, H Yamashita, H Okabe, T Yamauchi, New cucurbitane triterpenoids from Momordica charantia Journal of Natural Products, 53, 1491–1497 (1990) [16] H.H Fonseka, A Chandrasekara, R.M Fonseka, P Wickramasinghe, P.D.R.S.P Kumara, W.N.C Wickramarachchi Determination of anti-amylase and antiglucosidase activity of different genotypes of bitter gourd (Momordica charantia L.) and thumba karavila (Momordica dioica L.) 2007 International Society for Horticultural Science (ISHS), Leuven, Belgium [17] A.D Frame, O.E Rios, L Dejesus, D Ortiz, J Pagan, S Mendez, Plants from Puerto Rico with anti-Mycobacterium tuberculosis properties Puerto Rico Health Sciences Journal, 17, 243–252 (1998) [18] C Ganguly, S De, S Das, Prevention of carcinogen-induced mouse skin papilloma by whole fruit aqueous extract of Momordica charantia European Journal of Cancer Prevention, 9, 283–8 (2000) [19] I Gurbuz, C Akyuz, E Yesilada, B Sener, Anti-ulcerogenic effect of Momordica charantia L fruits on various ulcer models in rats Journal of Ethnopharmacology, 7, 77–82 (2000) [20] C Han, Q Hui, Y Wang, Hypoglycaemic activity of saponin fraction extracted from Momordica charantia in PEG/salt aqueous two-phase systems Natural Product Research, 22, 1112–1119 (2008) [21] L Harinantenaina, M Tanaka, S Takaoka, M Oda, O Mogami, M Uchida, Y Asakawa, Momordica charantia constituents and antidiabetic screening of the isolated major compounds Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 54, 1017–1021 (2006) [22] A.P Jayasooriya, M Sakono, C Yukizaki, M Kawano, K Yamamoto, N Fukuda, Effects of Momordica charantia powder on serum glucose levels and various lipid parameters in rats fed with cholesterol free and cholesterolenriched diets Journal of Ethnopharmacology, 72, 331–336 (2000) 76 [23] W Jiratchariyakul, C Wiwat, M Vongsakul, A Somanabandhu, W Leelamanit, I Fujii, N Suwannaroj, Y Ebizuka, HIV inhibitor from Thai bitter gourd Planta Medica, 67, 350–353 (2001) [24] A.J John, R Cherian, H.S Subhash, Evaluation of the efficacy of bitter gourd (Momordica charantia) as an oral hypoglycemic agent – a randomized controlled clinical trial Indian Journal of Physiology and Pharmacology, 47, 363–365 (2003) [25] M.R Khan A.D Omoloso, Momordica charantia and Allium sativum: broad spectrum antibacterial activity Korean Journal of Pharmacognosy, 29, 155–158 (1998) [26] Y Kimura, T Akihisa, N Yuasa, M Ukiya, T Suzuki, M Toriyama, S Motohashi, H Tokuda, Cucurbitane-type triterpenoids from the fruit of Momordica charantia Journal of Natural Products, 68, 807–809 (2005) [27] S Lee-Huang, P.L Huang, P.L Nara, H.C Chen, H.F Kung, P Huang, H.I Huang, P.L Huang, MAP30: a new inhibitor of HIV-1 infection and replication FEBS Letters, 272, 12–18 (1990) [28] Q.Y Li, H.B Chen, Z.M Liu, B Wang, Y.Y Zhao, Cucurbitane triterpenoids from Momordica charantia Magnetic Resonance in Chemistry, 45, 451–456 (2007) [29] J.Q Liu, J.C Chen, C.F Wang, M.H Qiu, New cucurbitane triterpenoids and steroidal glycoside from Momordica charantia Molecules, 14, 4804–4813 (2009) [30] M.R Loizzo, A.M Saab, R Tundis, F Menichini, M Bonesi, V Piccolo, G.A Statti, B de Cindio, P.J Houghton, F Menichini, In vitro inhibitory activities of plants used in Lebanon traditional medicine against angiotensin converting enzyme (ACE) and digestive enzymes related to diabetes Journal of Ethnopharmacology, 119, 109-116 (2008) [31] M Manabe, R Takenaka, T Nakasa, O Okinaka, Induction of anti-inflammatory responses by dietary Momordica charantia L (Bitter gourd) Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 67, 2512–2517 (2003) [32] H Matsuda, Y Li, T Murakami, N Matsumura, J Yamahara, M Yoshikawa, Antidiabetic principles of natural medicines Part III Structure-related inhibitory activity and action mode of oleanolic acid glycosides on hypoglycemic activity Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 46, 1399–1403 (1998) [33] H Matsuda, Y Li, M Yoshikawa, Roles of capsaicin-sensitive sensory nerves, endogenous nitric oxide, sulfhydryls, and prostaglandins in gastroprotection by momordin Ic, an oleanolic acid oligoglycoside, on ethanol-induced gastric mucosal lesions in rats Life Sciences, 65, PL27–PL32 (1999) [34] H Matsuura, C Asakawa, M Kurimoto, J Mizutani, α-Glucosidase inhibitor from the seeds of Balsam pear (Momordica charantia) and the fruit bodies of 77 Grifola frondosa Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 66, 1576-1578 (2002) [35] T Min-Jia, Y Ji-Ming, T Nigel, H.-B Cordula, K Chang-Qiang, T Chun-Ping, C Tong, W Hans-Christoph, G Ernst-Rudolf, R Alex, J.D E, Y Yang, Antidiabetic activities of triterpenoids isolated from bitter melon associated with activation of the AMPK pathway Chemistry & Biology, 15, 263–273 (2008) [36] Y Miyahara., H Okabe., T Yamauchi., Studies on the constituents of Momordica charantia L II Isolation and characterization of minor seed glycosides, Momordicosides C, D, and E Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 29, 1561– 1566 (1981) [37] T Murakami, A Emoto, H Matsuda, M Yoshikawa, Medicinal foodstuffs XXI Structures of new cucurbitane-type triterpene glycosides, goyaglycosides-a, -b, c, -d, -e, -f, -g, and -h, and new oleanane-type triterpene saponins, goyasaponins I, II, and III, from the fresh fruit of Japanese Momordica charantia L Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 49, 54–63 (2001) [38] K.D Mwambete, The in vitro antimicrobial activity of fruit and leaf crude extracts of Momordica charantia: a Tanzania medicinal plant African health Sci., 9, 34–39 (2009) [39] S Nakamura, T Murakami, J Nakamura, H Kobayashi, H Matsuda, M Yoshikawa, Structures of new cucurbitane-type triterpenes and glycosides, karavilagenins and karavilosides, from the dried fruit of Momordica charantia L in Sri Lanka Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 54, 1545–1550 (2006) [40] N.X Nhiem, P.V Kiem, C.V Minh, N.K Ban, N.X Cuong, N.H Tung, M Ha le, T Ha do, B.H Tai, T.H Quang, T.M Ngoc, Y.I Kwon, H.D Jang, Y.H Kim, α-Glucosidase inhibition properties of cucurbitane-type triterpene glycosides from the fruits of Momordica charantia Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 58, 720-4 (2010) [41] J.A Ojewole, S.O Adewole, G Olayiwola, Hypoglycaemic and hypotensive effects of Momordica charantia Linn (Cucurbitaceae) whole-plant aqueous extract in rats Cardiovascular journal of South Africa, 17, 227–232 (2006) [42] H Okabe, Y Miyahara, T Yamauchi, K Miyahara, T Kawasaki, Studies on the constituents of Momordica charantia L I Isolation and characterization of momordicosides A and B, glycosides of a pentahydroxy-cucurbitane triterpene Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 28, 2753–2762 (1980) [43] H Okabe, Y Miyahara, T Yamauchi, Structures of momordicosides F1, F2, G , I, K, and L, novel cucurbitacins in the fruits of Momordica charantia L Tetrahedron Letters, 23, 77–80 (1982) [44] H Okabe, Y Miyahara, T Yamauchi, Studies on the constituents of Momordica charantia L III Characterization of new cucurbitacin glycosides of the 78 immature fruits Structures of momordicosides G, F1, F2 and I Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 30, 3977–3986 (1982) [45] H Okabe, Y Miyahara, T Yamauchi, Studies on the constituents of momordica charantia L IV Characterization of the new cucurbitacin glycosides of the immature fruits (2) Structures of the bitter glycosides, momordicosides K and L Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 30, 4334–4340 (1982) [46] L Ou, L.Y Kong, X.M Zhang, M Niwa, Oxidation of ferulic acid by Momordica charantia peroxidase and related anti-inflammation activity changes Biological & Pharmaceutical Bulletin, 26, 1511–1516 (2003) [47] L Pari, R Ramakrishnan, S Venkateswaran, Antihyperglycaemic effect of Diamed, a herbal formulation, in experimental diabetes in rats Journal of Pharmacy and Pharmacology, 53, 1139–1143 (2001) [48] S Pongnikorn, D Fongmoon, W Kasinrerk, P.N Limtrakul, Effect of bitter melon (Momordica charantia Linn) on level and function of natural killer cells in cervical cancer patients with radiotherapy Journal of The Medical Association of Thailand, 86, 61–8 (2003) [49] A Samsul, A Mohammed, A.S.M Basheeruddin, P.V Satya, Antiulcer activity of methanolic extract of Momordica charantia L in rats Journal of Ethnopharmacology, 123, 464–469 (2009) [50] B.A Shibib, L.A Khan, R Rahman, Hypoglycaemic activity of Coccinia indica and Momordica charantia in diabetic rats: depression of the hepatic gluconeogenic enzymes glucose-6-phosphatase and fructose-1,6-bisphosphatase and elevation of both liver and red-cell shunt enzyme glucose-6-phosphate dehydrogenase Biochemical Journal, 15, 267–270 (1993) [51] Y Sun, P.L Huang, J.J Li, Y.Q Huang, L Zhang, S Lee-Huang, Anti-HIV agent MAP30 modulates the expression profile of viral and cellular genes for proliferation and apoptosis in AIDS-related lymphoma cells infected with Kaposi's sarcoma-associated virus Biochemical and Biophysical Research Communications, 287, 983–94 (2001) [52] T Uebanso, H Arai, Y Taketani, M Fukaya, H Yamamoto, A Mizuno, K Uryu, K Hada, E Takeda, Extract of Momordica charantia supress postprandial hyperglycemia in rats Journal of Nutritional Science and Vitaminology, 53, 482–488 (2007) [53] J Virdi, S Sivakami, S Shahani, A.C Suthar, M.M Banavalikar, M.K Biyani, Antihyperglycemic effects of three extracts from Momordica charantia Journal of Ethnopharmacology, 88, 107–111 (2003) [54] H.X Wang T.B Ng, Examination of lectins, polysaccharopeptide, polysaccharide, alkaloid, coumarin and trypsin inhibitors for inhibitory activity against human immunodeficiency virus reverse transcriptase and glycohydrolases Planta Medica, 67, 669–672 (2001) 79 [55] M Yadav, A Lavania, R Tomar, G.B.K.S Prasad, S Jain, H Yadav, Complementary and comparative study on hypoglycemic and antihyperglycemic activity of various extracts of Eugenia jambolana seed, Momordica charantia fruits, Gymnema sylvestre, and Trigonella foenum graecum seeds in rats Applied Biochemistry and Biotechnology, 160, 2388–2400 (2010) [56] M Yasuda, M Iwamoto, H Okabe, T Yamauchi, Structures of momordicines I, II and III, the bitter principles in the leaves and vines of Momordica charantia L Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 32, 2044–2047 (1984) [57] X Yuan, X Gu, J Tang, Purification and characterization of a hypoglycemic peptide from Momordica charantia L Var abbreviata Ser Food Chemistry, 111, 415–420 (2008) [58] Y.T Zheng, K.L Ben, S.W Jin, Alpha-momorcharin inhibits HIV-1 replication in acutely but not chronically infected T-lymphocytes Zhongguo Yao Li Xue Bao, 20, 239–243 (1999) 80 ... NGHIÊN NGHIÊN CỨU CỨU THÀNH THÀNH PHẦN PHẦN HĨA HĨA HỌC HỌC VÀ VÀ HOẠT HOẠT TÍNH TÍNH ỨC ỨC CHẾ CHẾ ENZYME ENZYME α? ? -GLUCOSIDASE -GLUCOSIDASE CỦA CỦA CÁC CÁC HỢP HỢP CHẤT CHẤT TỪ TỪ QUẢ QUẢ MƯỚP... tạo tiêu loài mướp đắng  Phân l? ??p hợp chất từ loài mướp đắng  Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân l? ??p từ mướp đắng  Đánh giá hoạt tính ức chế enzyme α- glucosidase hợp chất phân l? ??p CHƯƠNG... mướp đắng Việt Nam sở khoa học việc sử dụng phát triển sản phẩm từ loài mướp đắng Vì vậy, chúng tơi thực đề tài ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính ức chế enzyme α- glucosidase hợp chất từ mướp