ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN C BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG CAO ÁP (HPLC) 1.SƠ LƯỢC VỀ VITAMIN C Vitamin C, sinh tố C hay acid ascorbic chất dinh dưỡng thiết yếu cho loài linh trưởng bậc cao, cho số nhỏ loài khác Acic ascorbic cần thiết loạt phản ứng trao đổi chất tất động vật cối được tạo thể tất thể sinh vật, loại trừ loài người, khỉ, cá heo thiếu enzyme đặc hiệu xúc tác chuyển hóa Glucose thành Vitamin C Nếu thiếu Vitamin C gây bệnh scorbut cho người 2.CẤU TẠO, ĐẶC TÍNH HÓA LÝ Vitamin C dạng tinh thể trắng, dễ tan nước,tan ethanol 96 khó tan rượu,thực tế không tan ether clorofom, không tan dung môi hữu cơ, tồn 100 °C môi trường trung tính acid, bị oxi hóa Oxi không khí bị oxi hóa nhanh có diện Fe Cu • • • CTHH: C8H6O6 Khối lượng phân tử:176,14g/mol Nhiêt độ nóng chảy: 190-192 CÔNG DỤNG CỦA VITAMIN C       Tham gia tạo colagen số thành phân tạo nên mô liên kết cơ,xương, mạch máu Tham gia vào trình chuyển hóa thể protid,lipid,glucid Chống stress, tăng sức đề kháng Chống oxy hóa Giúp hấp thu sắt tốt Tăng tỉ lệ hấp thu canxi vào thể CÁC NGUỒN THỰC PHẨM CHỨA VITAMIN C  Tự nhiên: loại trái ổi,dâu tây, đu đủ….suplo,các loại rau xanh lá…  Tổng hợp: có viên nang vitamin c,các viên sủi,các loại kẹo ngậm giảm đau họng… 3.MỤC ĐÍCH THỰC HÀNH [Type text] Phân tích hàm lượng vitamin C có viên nang vitamin C tổng hợp NGUYÊN TẮC Vitamin C có thực phẩm trích hệ lỏng-lỏng với dung môi hữu (methanol, nước pH 2,1 chuẩn H2SO4) Sau đưa vào máy sắc kí lỏng cao áp (HPLC 1100 Hawlett Packard, đầu dò VWD, Cột Hypersil BDS, 3um C18), để định lượng vitamin C có mẫu DỤNG CỤ VÀ THIẾT BỊ  Viên nang vitamin c tổng hợp  Hệ thống HPLC 1100 Hawlett Packard, đầu dò VWD, Cột Hypersil BDS, 3um      C18 Giấy lọc, phễu Màng lọc 0,2µm Bình tam giác 250ml Cân phân tích Kim bơm 20µl HÓA CHẤT      Chuẩn Vitamin C Methanol Nước khử ion lần H2SO4 Acetonitrile TIẾN HÀNH THỰC HIỆN 7.1 CHUẨN BỊ CHUẨN Nhóm sử dụng đường chuẩn Vitamin C Viện công nghệ sinh học môi trường để phân tích mẫu Chuẩn chuẩn bị với nồng độ: 80ppm, 40ppm, 8ppm Sau tiến hành thu nhận sắc kí đồ dựng đường chuẩn y = f(x) với y diện tích chuẩn, x nồng độ chuẩn (80ppm, 40ppm, 8ppm) 7.2 CHUẨN BỊ MẪU [Type text]  Cân 5g mẫu vào bình tam giác, cho vào 50ml dung môi nước nước pH 2,1 chuẩn     H2SO4 Đánh sóng siêu âm 10 phút Lọc qua giấy lọc Định mức lại cho đủ 50ml Sử dụng xi lanh màng lọc 0,2µm, để lọc 1,5ml vào epfendope 1,5 ml 7.3 ĐIỀU KIỆN CHẠY MÁY SẮC KÍ LỎNG CAO ÁP Cột Hypersil BDS, 3um C18 Inject = 20 µl Hệ dung môi  A: pH=2,1 (H2SO4) 70%  B: ACN 30% • Tốc độ dòng 0,5 ml/phút • Đầu dò VWD, bước sòng 254nm • Thời gian chạy 10 phút • • • • Hàm lượng Vitamin C mẫu tính theo công thức • • • • Trong đó: Cm- nồng độ Vitamin C tính theo đường chuẩn, V- thể tích định mức m- khối lượng mẫu ban đầu [Type text] ... tích hàm lượng vitamin C có viên nang vitamin C tổng hợp NGUYÊN T C Vitamin C có th c phẩm trích hệ lỏng- lỏng với dung môi hữu (methanol, nư c pH 2,1 chuẩn H2SO4) Sau đưa vào máy s c kí lỏng cao. .. phút L c qua giấy l c Định m c lại cho đủ 50ml Sử dụng xi lanh màng l c 0,2µm, để l c 1,5ml vào epfendope 1,5 ml 7.3 ĐIỀU KIỆN CHẠY MÁY S C KÍ LỎNG CAO ÁP C t Hypersil BDS, 3um C1 8 Inject = 20... cao áp (HPLC 1100 Hawlett Packard, đầu dò VWD, C t Hypersil BDS, 3um C1 8), để định lượng vitamin C có mẫu DỤNG C VÀ THIẾT BỊ  Viên nang vitamin c tổng hợp  Hệ thống HPLC 1100 Hawlett Packard,