TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Và Kỹ Thuật Môi trường Tiểu luận: TÍNH TỐN, THIẾT KẾ BỂ PHẢN ỨNG SẢN XUẤT PROTEASE KIỀM TỪ BACILLUS LICHENIFORMIC VỚI CÔNG SUẤT (NHÀ MÁY) 200 TẤN/NĂM GVHD: Nguyễn Thị Quỳnh Mai Nhóm thực hiện: 01 Huỳnh Thị Thu Hà 2008140063 Lê Thị Khánh Hồng 2008140097 Nguyễn Hồng Đào 2008140037 Huỳnh Thị Quế Anh 2008140008 Tp Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2017 Mục lục Chương 1.1 TỔNG QUAN Giới thiệu chung Bacillus licheniformic 1.1.1 Hệ thống phân loại: 1.1.2 Đặc điểm sinh hóa Bacillus lichenifomics 1.2 Giới thiệu enzyme protease kiềm 1.2.1 Giới thiệu protease 1.2.2 Phân loại protease 1.2.3 Nguồn gốc 1.2.4 Chức năng: 1.3 Giới thiệu chung nuôi cấy thu nhận enzyme từ vi sinh vật 1.3.1 Môi trường nuôi cấy vi sinh vật tổng hợp enzyme 1.3.2 Nuôi cấy thu nhận chế phẩm enzyme phương pháp ni cấy chìm: Chương PHÂN TÍCH VÀ LỰA CHỌN CÔNG NGHỆ 10 2.1 Nguyên liệu 10 2.2 Quá trình lên men 10 Chương CÂN BẰNG VẬT CHẤT 11 Chương TÍNH TỐN THIẾT BỊ 15 4.1 Thiết bị lên men 15 4.2 Tính thể tích, đường kính chiều cao thiết bị 16 4.3 Thiết kế cánh khuấy 16 4.4 Tính toán kiểm soát nồng độ Oxy: 17 TÀI LIỆU THAM KHẢO 20 Chương 1.1 TỔNG QUAN Giới thiệu chung Bacillus licheniformic 1.1.1 Hệ thống phân loại: Giới: Bacteria Ngành: Firmicutes Lớp: Bacilli Bộ: Bacillales Họ: Bacillaceae Chi: Bacillus Loài: B licheniformis Bacillus licheniformic vi khuẩn gram dương, hình que, ưa nhiệt Nhiệt độ tăng trưởng tối ưu khoảng 30°C, nhiên tồn nhiệt độ cao nhiều Nhiệt độ tối ưu để sản sinh enzyme 37 °C Trong điều kiện môi trường khắc nghiệt, nghèo dinh dưỡng, đặc biệt đất, có khả tạo bào tử Những bào tử chịu nhiệt, lạnh, xạ, áp lực môi trường khác Dưới điều kiện tốt, bào tử nảy mầm trở thành tế bào vi khuẩn Vì người ta sử dụng để sản xuất enzym, kháng sinh, chất chuyển hóa nhỏ công nghiệp Vi khuẩn Bacillus licheniformic 1.1.2 Đặc điểm sinh hóa Bacillus lichenifomics - Khả sinh enzyme B.licheniformis có khả sinh sản nhiều enzyme, đặc biệt amylase protease-2 loại enzyme quan trọng thuộc hệ thống men tiêu hóa, sản sinh loại enzyme coa khả thủy phân glucid, lipid, protid, enzyme cellulase biến đổi chất xơ thành loại đường dễ tiêu hóa, lecitinase thủy phân chất béo phức hợp, enzyme phân giải galatin, enzyme phân giải fibrin - Khả ổn định hệ vi khuẩn có ích cho đường ruột B.licheniformis có khả tổng hợp số chất kháng sinh tự nhiên có tác dụng ức chế sinh trưởng tiêu diệt số vi sinh vật khác, tác dụng lên vi khuẩn gram âm lẫn gram dương, nấm gây bệnh đường ruột người vật nuôi Do đó, B.licheniformis có khả cạnh tranh tốt đốivới vi khuẩn gây hại khác Ngoài B.licheniformis giúp cải thiện trọng lượng, chuyển hóa thức ăn giảm bệnh tiêu chảy, tỉ lệ chết non vật nuôi Làm chất tẩy rửa sinh học Bacillus licheniformic nuôi cấy để có protease sử dụng làm chất tẩy rửa sinh học Vi khuẩn thích hợp phát triển điều kiện kiềm, đó, protease mà tạo chịu mức độ pH cao, thành phần khác chất tẩy tạo độ pH kiềm Protease có độ pH tối ưu từ đến 10 thêm vào chất tẩy rửa để loại bỏ dầu mỡ, bụi bẩn, chất có chất protein 1.2 Giới thiệu enzyme protease kiềm 1.2.1 Giới thiệu protease Proteases (E.C.3.4.21.14) enzyme phá vỡ liên kết peptit axit amin protein Chúng gọi enzyme proteolytic Điều quan trọng việc tiêu hóa enzyme phân hủy protein phức tạp thành axit amin đơn giản 1.2.2 Phân loại protease Proteases có nhóm, protease serine, protease threonine, Protease cysteine, protease aspartate, kỹ thuật tổng hợp kim Trong vi khuẩn, enzym protease sản xuất chủ yếu Bacillus licheniformic, B.horikoshii, B.sphaericus, B furmis, B alcalophilus, B Subtilis 1.2.3 Nguồn gốc Protein kiềm sản xuất loạt vi sinh vật bao gồm vi khuẩn, nấm mốc nấm men, actinomycetes vv Protease từ vi khuẩn ngày trở nên quan trọng so với hóa chất thơng thường để tách peptide chi phí sản xuất rẻ sử dụng nguồn tái tạo Protease vi khuẩn tạo từ vi khuẩn, nấm nấm men Vi khuẩn chi Bacillusare hoạt động sản xuất proteaza kiềm ngoại bào Hiện tại, lượng lớn proteaza kiềm có thương mại có nguồn gốc từ Bacillusstrains 1.2.4 Chức năng: Proteases có nhiều chức có nhiều ứng dụng công nghệ sinh học quan trọng Đây ba nhóm enzyme cơng nghiệp lớn tìm thấy ứng dụng chất tẩy rửa (để loại bỏ protein khỏi vải bẩn máu, sữa, mồ hôi, cỏ ) Trong proteases công nghiệp tơ tằm sử dụng trình tẩy lụa chất tẩy rửa tổng hợp, đưa đến chất hoạt động bề mặt không ion Trong ngành công nghiệp da thuộc (dùng để tẩy da, tẩy dầu mỡ ngâm tẩm da thuộc da xanh) da dehairing enzyme dựa da coi phương pháp thay thân thiện với mơi trường thơng qua quy trình hóa học thông thường Trong ngành công nghiệp thực phẩm, để loại bỏ vị đắng không mong muốn mát chín ví dụ protease sản xuất hương vị thực phẩm Protease sử dụng để phục hồi phần protein động vật cá mà khơng bị lãng phí sau giết mổ Proteases sử dụng chế biến da cá cho ứng dụng công nghiệp Trong ngành dược phẩm, sử dụng để ngăn ngừa nhiều máu đóng băng làm giảm đơng máu xu hướng tiểu cầu hồng cầu Proteases sử dụng sản xuất thuốc, enzym sử dụng chất hỗ trợ tiêu hóa tuyến tụy Ngoài ra, loại thuốc sinh học, protease giúp ngăn ngừa điều trị bệnh thoát khỏi tác dụng thuốc truyền thống, chẳng hạn ung thư bệnh đa dạng phổ biến khác Một ứng dụng khác xử lý nước thải, nơi proteaza kiềm hịa tan protein chất thải thơng qua q trình nhiều bước để thu hồi chất lỏng cô đặc có giá trị dinh dưỡng cao cho cá gia súc 1.3 Giới thiệu chung nuôi cấy thu nhận enzyme từ vi sinh vật Môi trường nuôi cấy vi sinh vật tổng hợp enzyme 1.3.1 Thành phần môi trường dinh dưỡng yếu tố định ảnh hưởng đến hoạt động sống vi sinh vật khả sinh tổng hợp enzyme Để đảm bảo yêu cầu tối thiểu cho sụ sinh trưởng vi sinh vật sinh tổng hợp enzyme mơi trường cần có chất chứa C, H, O, N chất vô khác Mn, Ca, P, S, Fe, K số chất khác Nguồn C hợp chất hữu cơ, trước hết gluxit Khi sử dụng đường làm nguồn C cần ý đến số đường có tác dụng kìm hãm sinh tổng hợp số enzyme thủy phân như: đường glucose…, ngồi gluxit dùng dùng nguồn C khác mỡ, dầu, acid hữu cơ, rượu, acid lactic vi sinh vật hấp thụ dẽ dàng chúng có nước chiết ngơ Nguồn N: hợp chất vô hữu Các hợp chất hữu nuyên liệu giàu đạm cao ngô, bột đậu tương, khô đậu, khô lạc… Nguồn ngun tố khống yếu tố kích thích tăng trưởng Muối khoáng cần thiết cho hoạt động vi sinh vật Ion Mg2+ có khả sinh tổng hợp ổn định enzyme có hoạt tính nhiệt độ cao Nuôi cấy thu nhận enzyme phương pháp bề mặt Là phương pháp tạo môi trường cho vi sinh vật phát triển bề mặt môi trường Có thể mơi trường lỏng đặc Ni cấy thu nhận chế phẩm enzyme phương pháp nuôi cấy bề mặt: Nuôi cấy bề mặt môi trường lỏng: Phương pháp dùng để ni cấy nhóm vi sinh vật hiếu khí Ở đây, VSV sử dụng chất dinh dưỡng từ dung dịch môi trường, O2 từ khơng khí, tiến hành q trình tổng hợp enzyme Enzyme ngoại bào tách từ sinh khối hịa tan vào dung dịch mơi trường Enzyme nội bào nằm sinh khối VSV Nuôi cấy sử dụng bề mặt mơi trường bán rắn: Có thể dùng vi sinh vật hiếu khí, bán hiếu khí kỵ khí phương pháp lên men Nguyên liệu thường sử dùng là: • Các loại hạt: thóc, ngơ, nếp, đậu tương… • Các loại mảnh: mảnh sắn, mảnh bắp… • Các loại phế liệu hữu cơ: bã mía, trấu, cọng rơm rạ, rác thải sinh hoạt… Nuôi cấy thu nhận chế phẩm enzyme phương pháp nuôi cấy 1.3.2 chìm: Ni cấy chìm áp dụng cho tất vi sinh vật, tự hiếu khí đến kỵ khí Vi sinh vật ni cấy mơi trường lỏng Nguyên liệu phổ biến dịch đường (glucose, fructose, maltose, saccharose ), dịch thủy phân cellulose, tinh bột Nguồn nitơ hữu thường dùng nước chiết bắp, chiết malt, dịch tự phân nấm men Phương pháp ni cấy chìm có số ưu điểm trội như:  Hiện đại, dễ khí hố, tự động hoá, suất cao, dễ tổ chức sản xuất  Có thể ni cấy dễ dàng chủng vi sinh vật đột biến có khả sinh tổng hợp enzyme cao lựa chọn tối ưu thành phần môi trường, điều kiện nuôi cấy, enzyme thu tinh khiết hơn, đảm bảo điều kiện vệ sinh, vô trùng Nhược điểm:  Do thu canh trường nồng độ enzyme thấp nên tách thu hồi enzyme có giá thành cao  Phương pháp ni cấy chìm địi hỏi phải vơ trùng tuyệt đối khâu vệ sinh tổng hợp, trùng môi trường dinh dưỡng, thao tác ni cấy, khơng khí cung cấp cho q trình ni cấy  Tốn điện cho khuấy trộn, không bảo đảm vô trùng bị nhiễm hàng loạt, toàn gây tổn thất lớn Có hình thức lên men chìm áp dụng nuôi cấy vi sinh vật là: nuôi cấy gián đoạn , nuôi cấy gián đoạn bổ sung chất nuôi cấy liên tục Lên men gián đoạn (Batch culture): Vi sinh vật ni cố định bình lên men với thể tích mơi trường xác định, ngun liệu dinh dưỡng cho vào bể phản ứng từ đâu không bổ sung thêm nữa, vi sinh vật phát triển theo giai đoạn tạo sản phẩm Kết thúc trình, người ta tiến hành công đoạn cần thiết để thu lấy sản phẩm Phương pháp lên men chu kỳ ứng dụng để sản xuất nhiều hoạt chất quan trọng loại enzyme, amino acid, chất kháng sinh, Lên men theo mẻ có bổ sung chất (Feed - batch culture): Để cao suất mẽ lên men, người ta tiến hành bổ sung thêm chất vào trình lên men:  Bổ sung từ từ chất dinh dưỡng làm tăng thể tích dịch nuôi cấy  Bổ sung môi trường vào Bioreactor đồng thời rút thể tích dịch ni cấy (không chứa tế bào) tương ứng, phương pháp sử dụng nuôi cấy tế bào động vật Lên men liên tục (Continuous culture): Nguyên liệu liên tục vào, sản phẩm lên men liên tục Lên men liên tục q trình ni vi sinh vật thiết bị cấu tạo đặc biệt để cho vật nuôi phát triển đến giai đoạn thích hợp cho việc lấy thể tích mơi trường lên men tế bào sản phẩm trao đổi chất chúng, lại bổ sung thể tích mơi trường dinh dưỡng vào bình ni cấy, lúc ta có trạng thái cân động Vi sinh vật bình nuôi cấy luôn pha lũy thừa Phương pháp lên men liên tục ứng dụng để sản xuất protein đơn bào (nấm men) sản xuất acid acetic, ethanol xử lý nước thải số nhà máy Tuy nhiên nhiều nguyên nhân nên phương pháp lên men chu kỳ hay ứng dụng Chương 2.1 PHÂN TÍCH VÀ LỰA CHỌN CƠNG NGHỆ Nguyên liệu Nguyên liệu cho trình lên men yếu tố quan trọng mang tính định cho thành cơng tồn quy trình sản xuất Nguồn ngun liệu khơng phải đảm bảo chất phù hợp với chủng vi sinh vật mà cịn phải dễ kiếm, chi phí thu mua chế biến thấp, bên cạnh cho suất cao ổn định 2.2 Quá trình lên men Sản xuất protease Bacillus licheniformic NCIM-2042 mua từ NCL, Pune, Ấn Độ Các vi sinh vật nuôi cấy chất dinh dưỡng thạch nghiêng agar 35 ± ◦C pH 7,5 Sản xuất enzyme protease kiềm từ Bacillus licheniformic theo phương pháp nuôi cấy gián đoạn theo mẽ với thời gian 72 mẻ Trong phương pháp nuôi cấy gián đoạn, vi sinh vật sinh trưởng đến thành phần chủ yếu mơi trường dinh dưỡng bị cạn kiệt Khi mật độ vi sinh vật chuyển từ pha lũy thừa sang pha cân Sinh trưởng gắn liền với thay đổi kéo dài kiện nuôi, giảm chất dinh dưỡng tăng khối lượng tế bào thay đổi Lên men gián đoạn theo mẻ có ưu điểm tương đối đơn giản tiết kiệm chi phí cho đầu tư thiết bị, hạn chế vấn đề bị nhiễm trình lên men, dễ xử lý bị tạp nhiễm, phát triển quy mơ lớn,… 10 Chương CÂN BẰNG VẬT CHẤT Nhà máy sản xuất protease kiềm với công suất 200 tấn/năm Thời gian nuôi cấy 72h, 35oC, pH = 7.5 (Potumarthi et al., 2006) Thời gian sản xuất năm: năm 365 ngày  Thời gian bảo trì vệ sinh máy móc, thời gian nghỉ ngày lễ: 35 ngày  Thời gian làm việc công ty năm: 330 ngày Số mẻ sản xuất năm: (330*24)/72 = 110 mẻ Giả sử hiệu suất lên men, lọc, trích ly, đặc 95%, 93%, 92%, 99% Hiệu suất trình sấy 95% (Handbook of Industrial Drying, Fourth Edition (Mujumda, 2014) Hoạt độ Enzyme sau kết thúc trình lên men (Emax): 141,750 U/g (Sathyavrathan P.*, Kavitha M., 2013) Hiệu suất enzyme đơn vị sinh khối (U/gX): YE/X = 102,040 U/gX (Potumarthi et al., 2006) Tốc độ tăng trưởng riêng cực đại Bacillus sp µmax=0.005 h-1 (S Chenikher et al., 2010) Với công suất 200 tấn/năm, sản lượng enzyme tạo thành năm = 1818.18 kg/mẻ Tính tốn cho q trình lên men: Thành phần mơi trường: (Sathyavrathan P.*, Kavitha M., 2013) Thành phần Tỉ lệ (%) Cám lúa mì 11 Dextrose 0.2 Bột đậu nành 0.3 Peptone 0.2 Cám lúa mì chứa khoảng 15.4% protein (Kew M Chee et al., 2005) Khối lượng cám lúa mì lit mơi trường 100g Nồng độ protein ban đầu: S0 = 0.154*100 = 15.4 g/l Nồng độ protein lúc sau: S = S0*(100 – 95)% = 15.4*0.05 = 0.77 g/l Ta có: YE/X = , với (X-X0): lượng sinh khối tạo thành (g/l) (X-X0) = = = 1.389 g/l Hiệu suất tạo thành sinh khối đơn vị chất (g/g): YX/S = = = 0.096 g/g Lượng sinh khối ban đầu: X0 = = = 3.241 g/l Suy nồng độ sinh khối sau kết thúc trình lên men là: X = 1.389 + 3.241 = 4.63 g/l Phương trình cân vật chất có dạng: C6H12O6 + aNH4+ + bO2  CH1,8O0,5N0,2 + cCO2 + dH2O + eH+ Hiệu suất tạo thành sinh khối đơn vị chất YX/S = 0.096 (g/g) 12 YX/S = = 0.702 (mol/mol) => = 1.425 - Ta có: C: =1+c H: + 4a = 1.8 + 2d + e O: + 2b = 0.5 + 2c + d N: a = 0.2 Cân điện tích: a = e = 0.2 => a = 0.2 ; b = 7.5 , c = 7.55, d = 7.95 , e = 0.2 , => Phương trình cân vật chất có dạng: 1.425C6H12O6 + 0.2NH4+ + 7.5O2  CH1,8O0,5N0,2 + 7.55CO2 + 7.95H2O + 0.2H+ Lượng oxi tối thiểu cần cung cấp cho canh trường để đạt nồng độ 4.63 g/l là: [O2] = = 45.17 g/l - Lượng nitơ cần cung cấp cho canh trường để đạt nồng độ 4.63 g/l là: [N] = = 1.05 g/l - Khối lượng enzyme tinh đưa vào thiết bị Sấy: 13 m = 1818.18* = 1913.87 (kg/mẻ) Khối lượng enzyme đưa vào cô đặc siêu lọc: m = 1913.87* = 1933.2 (kg/mẻ) Khối lượng sản phẩm đưa vào Trích ly: m = 1933.2* = 2101.3 (kg/mẻ) Độ ẩm trước lọc 95% độ ẩm sau lọc 70% Khối lượng sản phẩm đưa vào trước Lọc m = 2101.3* = 2259.47 (kg/mẻ) Thể tích dung dịch canh trường cần phải lọc mẻ: V = 2259.47 * = 13556.82 (l/mẻ) Thể tích canh trường cần phải cung cấp cho mẻ lên men: V = 13556.82* = 14270.33 (l/mẻ) = 14.3 (m3/mẻ) 14 Chương 4.1 TÍNH TỐN THIẾT BỊ Thiết bị lên men Hệ thống bể lên men cánh khuấy Tốc độ sinh trưởng cực đại: μmax = 0.005 h-1 - Hiệu suất tạo thành sinh khối đơn vị chất: YX/S = 0.096 (g/g) có thời gian lên men t = 72h - Xt = 4.63 (g/l) - Lượng sinh khối/mẻ = V * Xt = 14.3*4.63 = 66.21 (kg/mẻ) 15 4.2 Tính thể tích, đường kính chiều cao thiết bị - Thể tích canh trường lên men chiếm 2/3 thể tích thiết bị lên men Vbể = * Vlên men = * 14.3 = 21.45 m3 => Vbể = 22 m3 - Gọi: Đường kính bể lên men: Dbể (m) Chiều cao thiết bị : Hbể (m) - Tỉ lệ chiều cao thiết bị đường kính thiết bị thường 2/1 3/1 tức Hbể = 2Dbể Hbể = 3Dbể Chọn Hbể = 2Dbể ta có Vbể = Hbể*( => D2bể = = => Dbể = 2.41 m Từ ta tính giá trị chiều cao bể Hbể = 2*2.41 = 4.82 m 4.3 Thiết kế cánh khuấy - Gọi đường kính cánh khuấy: d (m) Theo lý thuyết, tỷ lệ đường kính cánh khuấy (d) đường kính bể (Dbể): = 0.3 – 0.4 (Charles and Wilson, 2013) nên ta chọn = 0.3 => d = 0.3*2.41 = 0.723 m - Gọi chiều cao cánh khuấy: h (m) 16 Ta có tỷ lệ chiều cao cánh khuấy (h) với đường kính cánh khuấy (d) là: 0.2 Ta tính chiều cao cánh khuấy: 0.2*0.723 = 0.1446 m - Tính khoảng cách cánh khuấy: Gọi khoảng cách cánh khuấy: h (m) Khoảng cách cánh khuấy cuối so với đáy thùng lên men: h3 h3 = Dbể/3 => h3 = 2.41/3 = 0.803 (m) Khoảng cách cánh khuấy đến cánh khuấy thứ (h1) = khoảng cách cánh khuấy thứ đến cánh khuấy cuối (h2) = 1.25* Dbể => h1 = h2 = 1.25*2.41 = 3.0125 (m) Lựa chọn trục khuấy gồm cánh khuấy tuabin 4.4 Tính tốn kiểm sốt nồng độ Oxy: - Hệ số cung cấp khí tính theo cơng suất cánh khuấy có dạng: Với: : Hệ số tốc độ truyền khối Oxy pha lỏng (h-1, s-1) a: Diện tích bề mặt riêng pha khí (m2/m3) : Nồng độ oxy bảo hịa pha lỏng (Độ hòa tan Oxy) (mol/m3) : Nồng độ oxy pha lỏng (mol/m3) - Tốc độ cung cấp khí phụ thuộc vào có mối quan hệ theo công thức sau: 17 = 2.10-3 0.7 * (Bioprocess scale up, 2013) Với: P: Công suất cánh khuấy (W) NP:Tốc độ cánh khuấy (= 200 rpm) (Potumarthi et al., 2006) vs: Tốc độ thơng khí bề mặt 0.012 m/s (Oscara, et al., 2007) Ta có: Với: N: vận tốc cánh khuấy (m/s) D: đường kính cánh khuấy (m) : Khối lương riêng (kg/m3) = 3812.05*103 kg/(s3.m) => => = 33.4 s-1 = 120240 h-1 - Tốc độ truyền khối bể phản ứng tính theo cơng thức: Nồng độ oxy bão hòa canh trường là: = mg/l = 0.008 g/l (Riet and Tramper, 1991) 18 Giả sử khả khuếch tán oxy canh trường 15% so với nồng độ oxy bảo hòa (Doran, 1995).Do đó, nồng độ Oxy pha lỏng = 6,8 mg/l => OTR = ro = 120240*(0.008-0.0068) = 144.3 gam O2/ h - Ta có: OUR = X* Với: YX/O: hiệu suất tạo thành sinh khối đơn vị khối lượng Oxy Theo phương trình cân vật chất, ta có: YX/O = = 0.1025g sinh khối/ gam O2 => OUR = 4.63* = 0.226 gam O2/ h So sánh OTR = 144.3 g O2/ h > OUR = 0.226 g O2/h nên hệ thống cung cấp khí phù hợp với bể phản ứng thể tích lên men Kết luận: Thiết bị lên men có đường kính: Dbể = 2.41 m chiều cao: Hbể = 4.82m Lựa chọn trục khuấy gồm cánh cánh khuấy tuabin, có đường kính chiều cao là: 0.723m 0.15m; khoảng cách cánh khuấy cuối với đáy thùng 0.803m, khoảng cách cánh khuấy cách 3.0125m 19 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Potumarthi, R., Ch, S., & Jetty, A (2007) Alkaline protease production by submerged fermentation in stirred tank reactor using Bacillus licheniformic NCIM-2042: effect of aeration and agitation regimes Biochemical Engineering Journal, 34(2), 185-192 [2] Sathyavrathan, P., & Kavitha, M (2013) Production of Alkaline Protease from Bacillus licheniformic (NCIM 2044) and Media Optimisation for Enhanced Enzyme Production Int J Chem Tech Res, 5(1), 550-553 [3] Bhunia, B., Basak, B., & Dey, A (2012) A review on production of serine alkaline protease by Bacillus spp Journal of Biochemical Technology, 3(4), 448-457 [4] Salah Chenikher, 2010, Control of the specific growth rate of Bacillus subtilis [5] for the production of biosurfactant lipopeptides in bioreactors with foam overflow [6] Process Biochemistry Elsevier, 45 (11), pp.1800-1807 [7] Chee, K M., Chun, K S., Huh, B D., Choi, J H., Chung, M K., Lee, H S., & Whang, K Y (2005) Comparative feeding values of soybean hulls and wheat bran for growing and finishing swine AsianAust J Anim Sci., Melborne, 18(6), 861-867 [8] Charles, M., Wilson, J., (2013), Upstream Industrial Biotechnology Fermenter/Bioreactor design, 50 [9] Doran, P M., (1995), Bioprocess Engineering Principles Elsevier Science & Technology Books 20 ... men: Dbể (m) Chiều cao thiết bị : Hbể (m) - Tỉ lệ chiều cao thiết bị đường kính thiết bị thường 2/1 3/1 tức Hbể = 2Dbể Hbể = 3Dbể Chọn Hbể = 2Dbể ta có Vbể = Hbể*( => D 2bể = = => Dbể = 2.41 m Từ. .. men Sản xuất protease Bacillus licheniformic NCIM-2042 mua từ NCL, Pune, Ấn Độ Các vi sinh vật nuôi cấy chất dinh dưỡng thạch nghiêng agar 35 ± ◦C pH 7,5 Sản xuất enzyme protease kiềm từ Bacillus. .. đầu tư thiết bị, hạn chế vấn đề bị nhiễm trình lên men, dễ xử lý bị tạp nhiễm, phát triển quy mô lớn,… 10 Chương CÂN BẰNG VẬT CHẤT Nhà máy sản xuất protease kiềm với công suất 200 tấn/ năm Thời