HỘI NGHỊ KHOA HỌC QUỐC GIA VỀ PHÒNG, CHỐNG HIV/AIDS LẦN THỨ VI ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA XÉT NGHIỆM COBAS® AmpliPrep / COBAS® TaqMan® HIV-1 v2.0 TRONG VIỆC ĐO TẢI LƯỢNG VI RÚT HIV DS Mang Viên Hoàng Nhật Công Ty TNHH Roche Việt Nam Nội dung Đặt vấn đề Mục tiêu Phương pháp Kết & Bàn Luận Kết luận Khuyến nghị Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Nội dung Đặt vấn đề Mục tiêu Phương pháp Kết & Bàn Luận Kết luận Khuyến nghị Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Hiện mục tiêu tương lai đại dịch HIV 15 triệu người điều trị theo thống kê 3/2015  Mục tiệu chấm dứt đại dịch HIV/AIDS vào năm 2030 UNAIDS reports Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Phát đồ WHO khuyến cáo sử dụng XN TLVR Áp dụng qui mô giới hạn nguồn lực  Xét nghiệm đo tải lượng virut HIV bước quan trọng để theo dõi hiệu điều trị với ARV theo dõi tiến triển bệnh HIV WHO guidelines 2013 Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Tổng quan HIV Theo dõi tiến hóa gen HIV-1 bước nghệ thuật  HIV virut thuộc chi lentiviruses họ retrovirus  Cả hai virut HIV -1 HIV-2 nguyên nhân gây AIDS, HIV -1 nguyên nhân phần lớn ca nhiễm HIV toàn cầu, HIV-2 khả lây nhiễm thấp  HIV-1 chia thành nhóm M, O N CRF_AG CRF_AE other CRFs Subtype K Group O Group N Subtype A Subtype J Subtype H Subtype G Subtype F Subtype D Subtype C Subtype B Roche’s Global Surveillance Program Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Kỹ thuật xét nghiệm đo tải lượng virut kỹ thuật để phát HIV-1 RNA  Kỹ thuật Real time PCR  bDNA (branched-chain DNA)  NASBA (nucleic acid sequence based amplification)  Kỹ thuật Real time PCR phương pháp thông dụng đạt mục tiêu kết xét nghiệm xác tin cậy:  Độ nhạy  Độ đặc hiệu  Khoảng định lượng rộng Garcia-Bujalance S, Ladron de Guevara C, Gonzalez-Garcia J, et al Elevation of viral load by PCR and use of plasma preparartion tubes for quantification of human immunodeficiency virus type J Microbiol Methods 2007:69:384-386 Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Kỹ thuật xét nghiệm đo tải lượng virut Phương pháp xét nghiệm phân tử Real time PCR  Kỹ thuật phát trình tự đích đơn  Kỹ thuật phát trình tự đích kép DUAL TARGET Target SINGLE TARGET DUAL TARGE T Target  Kỹ thuật tối ưu kết tải lượng virut xác ? Sire JM, et al J Acquir Immune Defic Syndr 2011 Mar;56(3):239-43 PubMed PMID: 21164353 Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Nội dung Đặt vấn đề Mục tiêu Phương pháp Kết & Bàn Luận Kết luận Khuyến nghị Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI So sánh định lượng HIV-1 RNA Xét nghiệm CAP/CTM HIV-1 v2.0 Real-Time HIV-1 PCR  Mục tiêu 1: So sánh khả phát xét nghiệm Roche CAP/CTM HIV-1 v2.0 Real-Time HIV-1 PCR việc phát định tính HIV-1 RNA mẫu huyết tương nhóm HIV-1 khác subtype  Mục tiêu 1: Kỹ thuật phát trình tự đích kép tăng cường độ tin cậy giảm thiểu ảnh hưởng đột biến tự nhiên kỹ thuật phát trình tự đích đơn Sire JM, et al J Acquir Immune Defic Syndr 2011 Mar;56(3):239-43 PubMed PMID: 21164353 Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Nội dung Đặt vấn đề Mục tiêu Phương pháp Kết & Bàn Luận Kết luận Khuyến nghị Hội nghị Khoa học Quốc gia Phịng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Kiểm sốt tải lượng virut bệnh nhân XN CAP/CTM HIV-1 v2.0 Real-Time HIV-1 PCR Sử dụng xét nghiệm PCR sau: XN CAP/CTM HIV-1 v2.0: hệ thống COBAS AmpliPrep and COBAS TaqMan XN Real-Time HIV-1 : hệ thống m2000sp/m2000rt  Hệ thống CAP/CTM tự động hoàn toàn, giảm nhiễm chéo, nhanh high-throughput Sire JM, et al J Acquir Immune Defic Syndr 2011 Mar;56(3):239-43 PubMed PMID: 21164353 Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Áp dụng đích kép “Dual target“: XN COBAS® AmpliPrep / COBAS® TaqMan® HIV-1 v2.0 Gag: Cơ sở liệu chuỗi lớn (Chương trình Giám sát tồn cầu Roche) Thu nhận đột biến chuỗi hiếm, ảnh hưởng tới phản ứng PCR Khơng có áp lực trực tiếp từ thuốc LTR: Mục tiêu khuếch đại cho xét nghiệm sàng lọc máu Roche Vùng trình tự có tính bảo tồn cao cao có mặt yếu tố chép cho HIV1 Khơng có áp lực trực tiếp từ thuốc  CAP/CTM HIV-1 v2.0 chọn vùng gen mục tiêu ”đích” vùng gag LTR Arellano, E Virus Genes 2007 34:111-6 LOD : 20 copies/ml Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Áp dụng đích đơn “Single target” XN Real-Time HIV -1 pol : Vùng đích XN Abbott HIV-1 Mục tiêu thuốc 42 đột biến liên quan tới kháng thuốc Integrase Inhibitor  XN Real-Time HIV-1 chọn vùng gen mục tiêu ”đích” vùng pol  LOD : 40 copies /ml Ceccherini-Silberstein F et al Characterization and structural analysis of HIV-1 integrase conservation AIDS Rev 2009 Jan-Mar; 11: 17-29 Latallaide M et al Natural polymorphism of the HIV-1 integrase gene and mutations associated with integrase inhibitor resistance Antivir Ther 2007; 12: 563-570 Reigadas et al J Antimicrob Chemother 2013 Apr;68(4):969-72 Simon et al Lancet 2006 Aug 5;368(9534):489-504 Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Nội dung Đặt vấn đề Mục tiêu Phương pháp Kết & Bàn Luận Kết luận Khuyến nghị Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI So sánh định lượng HIV-1 RNA XN CAP/CTM HIV-1 v2.0 Real-Time HIV-1 PCR 260 mẫu huyết tương HIV-1 nhóm M Giá trị trung vị XN tải lượng virut Roche : 3.08 log10 copies/ml Giá trị trung vị XN tải lượng virut Abbott : 2.81 log10 copies/ml  Cho thấy giá trị tải lượng virut XN CAP/CTM v2.0 cao XN Abbott Sire JM, et al J Acquir Immune Defic Syndr 2011 Mar;56(3):239-43 PubMed PMID: 21164353 Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI So sánh định lượng HIV-1 RNA XN CAP/CTM HIV-1 v2.0 Real-Time HIV-1 PCR Sự khác biệt 0.5 log10 copies/ml có giá trị lâm sàng  20% số lượng mẫu có nồng độ thấp đáng kể XN Abbott so với xét nghiệm CAP/CTM HIV-1, v2.0 Sire JM, et al J Acquir Immune Defic Syndr 2011 Mar;56(3):239-43 PubMed PMID: 21164353 Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI So sánh định lượng HIV-1 RNA XN CAP/CTM HIV-1 v2.0 Real-Time HIV-1 PCR Sứ khác biệt cá thể mẫu với kỹ thuật Âm tính với XN Abbott Âm tính với XN CAP/CTM v2.0 Dương tính với CAP/CTM v2.0 Sire JM, et al J Acquir Immune Defic Syndr 2011 Mar;56(3):239-43 PubMed PMID: 21164353 Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Điều ảnh hưởng đến bệnh nhân? Bệnh nhân kháng HIV điều trị không thành công … Vùng Integrase vùng gen pol*  Một bệnh nhân kháng thuốc HIV điều trị khơng thành cơng khơng phát với xét nghiệm Abbott sử dụng Integrase làm Sire JM, et al J Acquir Immune Defic Syndr 2011 Mar;56(3):239-43 PubMed PMID: 21164353 vùng đích Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI Nhiều báo chứng minh … ngưỡng định lượng …… Janse van Rensbur g Paba Pas Church XN Abbott xuất ước lượng tải lượng virut 40-50% thời gian so với tiêu chí tiêu chuẩn WHO 30 mẫu không định lượng xét nghiệm Abbott sử dụng đích Integrase định lượng xét nghiệm COBAS® AmpliPrep/COBAS TaqMan® HIV-1, v2.0 Ba mẫu (1%) định lượng mức thực xét nghiệm Abbott sử dụng đích Integrase log10 so với xét nghiệm COBAS® AmpliPrep/COBAS TaqMan® HIV-1, v2.0 XN Abbott mức ngưỡng định lượng 10% số mẫu (n=50, >1 log10 (cp/mL) = 5) Hội nghị Khoa học Quốc gia Phòng, chống HIV/AIDS lần thứ VI ... chống HIV/ AIDS lần thứ VI So sánh định lượng HIV- 1 RNA Xét nghiệm CAP/CTM HIV- 1 v2.0 Real-Time HIV- 1 PCR  Mục tiêu 1: So sánh khả phát xét nghiệm Roche CAP/CTM HIV- 1 v2.0 Real-Time HIV- 1 PCR vi? ??c. .. HIV- 1 RNA XN CAP/CTM HIV- 1 v2.0 Real-Time HIV- 1 PCR 260 mẫu huyết tương HIV- 1 nhóm M ? ?Giá trị trung vị XN tải lượng virut Roche : 3.08 log10 copies/ml ? ?Giá trị trung vị XN tải lượng virut Abbott... nhân XN CAP/CTM HIV- 1 v2.0 Real-Time HIV- 1 PCR Sử dụng xét nghiệm PCR sau: XN CAP/CTM HIV- 1 v2.0: hệ thống COBAS AmpliPrep and COBAS TaqMan XN Real-Time HIV- 1 : hệ thống m2000sp/m2000rt  Hệ