BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI ĐÀO VĂN THÔNG NGHIÊN CỨU CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT PHÂN BÓN VI SINH VẬT CHỨC NĂNG SỬ DỤNG CHO KHOAI TÂY LUẬN ÁN TIẾN SỸ CÔNG NGHỆ SINH HỌC HÀ NỘI, 2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - - ĐÀO VĂN THÔNG NGHIÊN CỨU CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT PHÂN BÓN VI SINH VẬT CHỨC NĂNG SỬ DỤNG CHO KHOAI TÂY Chuyên ngành: Công nghệ sinh học thực phẩm Mã số: 62.54.02.05 LUẬN ÁN TIẾN SỸ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Phạm Thu Thủy PGS.TS Phạm Văn Toản HÀ NỘI, 2012 ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: - Đây công trình nghiên cứu số kết cộng tác với cộng khác - Các số liệu trình bày luận án trung thực, phần công bố tập san, tạp chí khoa học chuyên ngành với đồng ý cho phép đồng tác giả - Phần lại chưa công bố công trình khác Tác giả luận án Đào Văn Thông iii LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Phạm Thu Thủy, Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm - Đại học Bách khoa Hà Nội, PGS.TS Phạm Văn Toản, Ban Đào tạo Sau đại học - Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam người thầy tận tình hướng dẫn suốt trình thực luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn: Tập thể thầy cô giáo Viện Công nghệ sinh học Công nghệ Thực phẩm, Viện Đào tạo sau đại học – Đại học Bách khoa Hà Nội, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập thực luận án Ban lãnh đạo Viện Môi trường Nông nghiệp, tập thể cán Bộ môn Sinh học Môi trường, phòng ban chức Viện tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành luận án Ban lãnh đạo Viện Thổ nhưỡng Nông hóa, tập thể cán Bộ môn Vi sinh vật nông nghiệp, phòng ban chức Viện tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành luận án Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè người thân tạo điều kiện, động viên giúp đỡ suốt thời gian thựcc luận án Tác giả luận án Đào Văn Thông iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TĂT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ CĐN : Cố định nitơ CT : Công thức cs : Cộng ĐC : Đối chứng ĐK : Đường kính ĐKVPG : Đường kính vòng phân giải ĐKVƯC : Đường kính vòng ức chế KTSTT : Kích thích sinh trưởng thực vật KN : Khảo nghiệm V HHVSV : Hỗn hợp vi sinh vật TCN : Tiêu chuẩn Ngành TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam VKHX : Vi khuẩn héo xanh VSV : Vi sinh vật CFU : Colony Forming Unit CV : Coefficients of variation IAA : Indol acetic acid v MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết luận án .1 Mục tiêu luận án Cơ sở khoa học luận án Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn luận án Những điểm luận án .3 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sản xuất khoai tây giới Việt Nam 1.1.1 Sản xuất khoai tây giới 1.1.2 Sản xuất khoai tây Việt Nam 1.2 Sinh trưởng phát triển khoai tây .6 1.2.1 Ảnh hưởng điều kiện ngoại cảnh 1.2.2 Ảnh hưởng chế độ dinh dưỡng 1.2.3 Đất trồng 10 1.3 Bệnh héo xanh vi khuẩn khoai tây .10 1.3.1 Triệu chứng bệnh .11 1.3.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa vi khuẩn gây bệnh héo xanh 12 1.3.3 Đặc điểm xâm nhiễm phát triển bệnh 14 1.3.4 Biện pháp phòng trừ 15 1.4 Vi sinh vật đối kháng sản xuất nông nghiệp 16 1.4.1 Giới thiệu chung 16 1.4.2 Vi sinh vật đối kháng vi sinh vật gây bệnh vùng rễ trồng cạn 18 1.4.3 Vi sinh vật kiểm soát sinh học bệnh héo xanh vi khuẩn 21 1.5 Phân bón vi sinh vật 23 1.5.1 Phân vi sinh vật cố định nitơ 24 1.5.2 Phân vi sinh vật phân giải hợp chất phospho khó tan 26 vi 1.5.3 Phân vi sinh vật hỗn hợp 30 1.6 Sản xuất, sử dụng bảo quản phân bón vi sinh vật 32 1.6.1 Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật .32 1.6.2 Nhân sinh khối, xử lý sinh khối, tạo sản phẩm 33 1.6.3 Bao gói sản phẩm 37 1.6.4 Sử dụng bảo quản phân bón vi sinh vật 37 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39 2.1 Vật liệu .39 2.1.1 Chủng vi sinh vật .39 2.1.2 Giống khoai tây sử dụng 39 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất thí nghiệm 39 2.2 Phương pháp nghiên cứu 40 2.2.1 Kiểm tra mật độ vi khuẩn 40 2.2.2 Xác định hoạt tính sinh học vi sinh vật .41 2.2.3 Xác định tiêu hóa sinh 49 2.2.4 Phân loại vi sinh vật 52 2.2.5 Xác định khả tồn vi sinh vật 56 2.2.6 Nghiên cứu điều kiện nhân sinh khối vi khuẩn 56 2.2.7 Điều tra trồng bị bệnh héo xanh vi khuẩn 57 2.2.8 Bố trí thí nghiệm nhà lưới 58 2.2.9 Bố trí thí nghiệm đồng ruộng 60 2.2.10 Tối ưu hóa điều kiện nuôi cấy theo phương pháp bề mặt đáp ứng .61 2.2.11 Xử lý số liệu, phân tích thống kê 62 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 63 3.1 Xác định chủng vi sinh vật phù hợp cho sản xuất phân bón vi sinh vật chức sử dụng cho khoai tây .63 3.1.1 Tuyển chọn chủng vi sinh vật .63 3.1.2 Định tên xác định độ an toàn chủng vi sinh vật nghiên cứu 71 3.1.3 Khả tổ hợp chủng vi sinh vật nghiên cứu 78 3.2 Công nghệ sản xuất phân bón vi sinh vật chức cho khoai tây 81 vii 3.2.1 Nghiên cứu nhân sinh khối vi sinh vật 81 3.2.2 Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất phân bón vi sinh vật chức sử dụng cho khoai tây 96 3.2.3 Đánh giá chất lượng sản phẩm phân bón vi sinh vật chức 101 3.3 Hiệu phân bón VSV chức khoai tây 101 3.3.1 Hiệu phân bón VSV chức khoai tây đồng ruộng diện hẹp 101 3.3.2 Hiệu phân bón VSV chức khoai tây diện rộng 107 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 110 Kết luận 110 Kiến nghị 111 TÀI LIỆU THAM KHẢO 112 viii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Tình hình sản xuất khoai tây giới Bảng 1.2 Diện tích, suất sản lượng khoai tây châu lục năm 2010 Bảng 1.3 Tình hình sản xuất khoai tây Việt Nam Bảng 1.4 Những đặc tính sinh hoá Ralstonia Solanacearum Smith 13 Bảng 2.1 Danh sách chủng VSV sử dụng nghiên cứu 39 Bảng 2.2 Mức độ hoạt tính đối kháng vi sinh vật 49 Bảng 3.1 Hoạt tính sinh học chủng vi khuẩn cố định nitơ nghiên cứu 63 Bảng 3.2 Ảnh hưởng chủng AT73 đến sinh trưởng khoai tây 64 Bảng 3.3 Hoạt tính sinh học số vi khuẩn đối kháng vi khuẩn héo xanh khoai tây 66 Bảng 3.4 Ảnh hưởng chủng B16 đến sinh trưởng khoai tây 68 Bảng 3.5 Khả kiểm soát bệnh héo xanh vi khuẩn chủng B16 68 Bảng 3.6 Hoạt tính sinh học chủng vi khuẩn phân giải hợp chất phospho khó tan 69 Bảng 3.7 Ảnh hưởng chủng B04 đến sinh trưởng khoai tây 71 Bảng 3.8 Đặc điểm hình thái chủng vi sinh vật tuyển chọn 72 Bảng 3.9 Kết kiểm tra đặc tính sinh hóa chủng vi khuẩn Bacillus tuyển chọn kit API 50CHB 73 Bảng 3.10 Kết xác định đặc điểm sinh hóa chủng vi khuẩn Azotobacter 74 Bảng 3.11 Mức độ an toàn sinh học chủng vi sinh vật nghiên cứu 78 Bảng 3.12 Khả tồn riêng lẻ hỗn hợp vi sinh vật than bùn khử trùng 79 Bảng 3.13 Hoạt tính sinh học chủng sau 90 ngày bảo quản điều kiện riêng lẻ tổ hợp 79 Bảng 3.14 Ảnh hưởng hỗn hợp vi sinh vật khoai tây nhà sinh trưởng 80 Bảng 3.15 Ảnh hưởng tỷ lệ giống cấy đến sinh khối chủng vi khuẩn nghiên cứu 84 Bảng 3.16 Ảnh hưởng lượng khí cấp đến sinh khối chủng vi khuẩn nghiên cứu 85 Bảng 3.17 Miền khảo sát điều kiện nhân sinh khối chủng vi sinh vật lựa chọn 90 ix Bảng 3.18 Phân tích phương sai Anova mô hình chủng B.subtilis B16 91 Bảng 3.19 Phân tích phương sai Anova mô hình chủng B.polyfermenticus B04 91 Bảng 3.20 Phân tích phương sai Anova mô hình chủng A.chroococcum AT73 92 Bảng 3.21 Phương án tối ưu điều kiện sinh trưởng chủng vi sinh vật nghiên cứu 94 Bảng 3.22.Các thông số kỹ thuật công đoạn lên men nhân sinh khối 95 Bảng 3.23 Chất lượng vi khuẩn nhận sau lên men nhân sinh khối điều kiện kỹ thuật lựa chọn 95 Bảng 3.24 Ảnh hưởng chất mang đến mật độ vi khuẩn trình bảo quản 96 Bảng 3.25 Ảnh hưởng độ ẩm đến mật độ vi khuẩn trình bảo quản 98 Bảng 3.26 Chất lượng phân bón VSV chức sử dụng cho khoai tây 101 Bảng 3.27 Tính chất đất trồng thí nghiệm khoai tây 102 Bảng 3.28 Ảnh hưởng phân bón VSV chức đến khả sinh trưởng khoai tây đồng ruộng 102 Bảng 3.29 Khả kiểm soát bệnh héo xanh vi khuẩn phân bón VSV chức khoai tây đồng ruộng 103 Bảng 3.30 Ảnh hưởng phân bón VSV chức tới suất khoai tây 105 Bảng 3.31 Ảnh hưởng phân bón VSV chức đến chất lượng khoai tây 106 Bảng 3.32 Biến động quần thể số vi sinh vật trước sau sử dụng phân bón VSV chức 106 Bảng 3.33 Tác dụng phân bón VSV chức khoai tây diện rộng 108 Bảng 3.34 Hiệu kinh tế sử dụng phân bón vi sinh vật chức khoai tây 109 124 Môi trường SX: CĐN03 (g/l) Đậu trắng KH2PO2 MgSO4.7H2O NaCl K2SO4 CaCO3 Glucose Saccharose Nước cất 50,0 0,20 0,20 0,20 0,10 5,0 5,0 5,0 1000 ml Môi trường SX: CĐN04 (g/l) Rỉ đường Bột thủy phân nấm men KH2PO2 MgSO4.7H2O NaCl K2SO4 CaCO3 Nước cất 30,0 5,0 0,20 0,20 0,20 0,10 5,0 1000 ml - Môi trường sản xuất cho vi khuẩn phân giải hợp chất phospho khó tan Môi trường SX: PGL01(g/l) Rỉ đường 20,0 Môi trường SX: PGL02(g/l) Rỉ đường 20,0 Bột thủy phân nấm men 5,0 Nước chiết đậu 50,0 NH4)2SO4 1,0 NH4)2SO4 1,0 MgSO4.7H2O 0,1 MgSO4.7H2O 0,1 Ca3(PO4)2 5,0 Ca3(PO4)2 5,0 Dung dịch vi lượng Nước cất Môi trường SX: PGL03(g/l) Bột thủy phân nấm men 2,0ml 1.000ml Dung dịch vi lượng Nước cất 2,0ml 1.000ml 5,0 Môi trường SX: PGL04(g/l) Nước chiết đậu 50,0 NH4)2SO4 1,0 NH4)2SO4 1,0 MgSO4.7H2O 0,1 MgSO4.7H2O 0,1 Ca3(PO4)2 5,0 Ca3(PO4)2 5,0 Glucose 5,0 Glucose 5,0 Sacchrose 5,0 Sacchrose 5,0 Dung dịch vi lượng Nước cất 2,0ml 1.000ml Dung dịch vi lượng Nước cất 2,0ml 1.000ml 125 - Môi trường sản xuất cho vi khuẩn đối kháng: Môi trường SX: ĐK01(g/l) Môi trường SX: ĐK02(g/l) Pepton 10,0 Đậu 50,0 Rỉ đường 20,0 Rỉ đường 20,0 MgSO4.7H2O 1,5 MgSO4.7H2O 1,5 K2HPO4 1,5 K2HPO4 1,5 Nước cất 1.000ml Nước cất 1.000ml Môi trường SX: ĐK03(g/l) Môi trường SX: ĐK04(g/l) Bột thủy phân nấm men 20,0 Đậu 20,0 Rỉ đường 20,0 Bột thủy phân nấm men 10,0 MgSO4.7H2O 1,5 Rỉ đường 20,0 K2HPO4 1,5 MgSO4.7H2O 1,5 Nước cất 1.000ml K2HPO4 1,5 Nước cất 1.000ml 126 BẢNG SỐ LIỆU NGHIÊN CỨU Bảng 1.Mật độ chủng B subtilic B16 môi trường nghiên cứu Thời gian (h) Mật độ tế bào (CFU/ml) King B (ĐC) ĐK01 ĐK02 ĐK03 ĐK04 5,1 x 104 4,5 x 104 4,6 x 104 4,9 x 104 4,7 x 104 12 7,6 x 105 1,9 x 106 8,2 x 105 6,7 x 106 7,4 x 106 24 3,9 x 107 6,5 x 107 6,9 x 107 8,5 x 107 6,7 x 107 36 2,8 x 108 5,4 x 108 6,8 x 108 7,4 x 108 5,5 x 108 48 3,3 x 109 7,4 x 108 2,3 x 109 7,2 x 109 8,8 x 108 60 8,3 x 108 4,3 x 108 7,0 x 108 7,5 x 108 7,3 x 108 Bảng 2.Mật độ chủng B.polyfermenticus B04 môi trường nghiên cứu Thời gian (h) Mật độ tế bào (CFU/ml) Pikovskaya (ĐC) PGL01 PGL02 PGL03 PGL04 4,5 x 104 5,0 x 104 4,7 x 104 4,2 x 104 5,1 x 104 12 6,2 x 106 7,2 x 106 5,0 x 106 5,2 x 106 5,0 x 106 24 5,7 x 107 6,5 x 107 7,5 x 107 5,0 x 107 6,4 x 107 36 4,5 x 108 7,3 x 108 5,3 x 108 2,1 x 108 5,2 x 108 48 3,8 x 109 7,5 x 109 6,5 x 108 5,5 x108 7,0 x108 60 7,7 x 108 8,7 x 108 4,6 x 108 3,7 x 108 4,5 x 108 127 Bảng Mật độ chủng A chroococcum AT73 môi trường nghiên cứu Mật độ tế bào (CFU/ml) Thời gian (h) Ashby CĐN01 CĐN02 CĐN03 CĐN04 5,2 x 104 5,3 x 104 4,8 x 104 4,7 x 104 5,0 x 104 12 4,5 x 105 3,0 x 105 5,0 x 105 5,5 x 105 5,5 x 105 24 5,6 x 106 5,3 x 106 3,4 x 106 7,3 x 106 7,7 x 106 36 3,2 x 107 1,2 x 107 3,5 x 107 3,5 x 107 5,6 x 107 48 5,7 x 108 4,4 x 108 5,0 x 108 3,0 x 108 8,9 x 108 60 8,9 x 109 7,8 x 108 9,8 x 108 7,9 x 108 6,7 x 109 72 8,2 x 108 2,8 x 108 8,7 x 108 6,7 x 107 7,9 x 108 Bảng Khảo sát thời gian sinh trưởng chủng vi sinh vật lựa chọn Mật độ tế bào (CFU/ml) Thời gian nuôi cấy (h) B.subtilis B16 B.polyfermenticus B04 A.chroococcum AT73 12 18 24 5,00 x105 9,00 x 106 2,50 x 107 8,90 x 107 2,50 x 108 5,0 x 106 9,0 x 106 2,5 x 107 8,9 x 107 3,7 x 108 5,0 x 106 6,0 x 106 9,0 x 106 3,1 x 107 8,8 x 107 30 2,10 x 109 7,5 x 108 5,5 x 108 36 4,10 x 109 5,3 x 109 9,5 x 108 42 6,70 x 109 6,2 x 109 1,1 x 109 48 8,70 x 109 7,1 x 109 4,5 x 109 54 1,20 x 108 1,2 x 108 6,5 x 109 60 66 72 - - 7,8 x 109 9,5 x 109 1,6 x 108 128 Bảng Khảo sát điều kiện pH chủng vi khuẩn lựa chọn Mật độ tế bào (CFU/ml) pH B.subtilis B16 B.polyfermenticus B04 A.chroococcum AT73 5,0 1,50 x 107 3,5 x 107 2,0 x 107 5,5 8,30 x 107 2,5 x 108 2,0 x 108 6,0 8,70 x 108 8,5 x 108 8,5 x 108 6,5 4,50x 109 5,5 x 109 4,6 x 109 7,0 7,60 x 109 6,5 x 109 7,8 x 109 7,5 9,50x 108 7,2 x 109 1,9 x 108 8,0 5,50 x108 6,6 x 107 8,5 x 107 Bảng Khảo sát nhiệt độ nuôi cấy chủng vi sinh vật lựa chọn Mật độ tế bào (CFU/ml) Nhiệt độ (0C) B.subtilisB16 B.polyfermenticus B04 A.chroococcumAT73 20 6,6 x 107 5,7 x 107 1,3 x 107 22 9,5 x 107 6,5 x 107 9,5 x 107 24 4,5 x 108 5,6 x 108 7,3 x 108 26 8,5 x 108 7,3 x 108 1,8 x 109 28 4,6 x 109 3,2 x 109 5,3 x 109 30 7,5 x 109 8,6 x 109 8,4 x 109 32 8,7 x 109 2,2 x 109 1,1 x 109 34 1,1 x 108 9,5 x 108 9,5 x 108 129 Bảng Bảng ma trận thực nghiệm chủng B.subtilis B16 STT Thời gian (h) Nhiệt độ (0C) pH 10 11 12 13 14 15 16 17 24,0 24,0 36,0 36,0 36,0 36,0 24,0 36,0 36,0 36,0 48,0 24,0 48,0 48,0 48,0 36,0 36,0 24,0 28,0 28,0 24,0 32,0 28,0 28,0 28,0 28,0 24,0 32,0 32,0 24,0 28,0 28,0 28,0 32,0 6,5 7,0 6,5 7,0 7,0 6,5 6,0 6,5 6,5 6,0 6,5 6,5 6,5 7,0 6,0 6,5 6,0 Mật độ tế bào (log CFU/ml) 8,80 9,31 9,43 9,38 9,77 9,41 9,24 9,44 9,41 9,31 9,73 9,39 9,42 9,75 9,75 9,42 9,76 Bảng Bảng ma trận thực nghiệm chủng B.polyfermenticus B04 STT Thời gian (h) Nhiệt độ (0C) pH 10 11 12 13 14 15 16 17 36 48 36 36 36 24 24 36 24 48 36 36 48 24 48 36 36 27 30 27 30 30 24 27 24 30 27 27 27 27 27 24 24 27 6,5 6,5 6,5 7,5 5,5 6,5 5,5 5,5 6,5 7,5 6,5 6,5 5,5 7,5 6,5 7,5 6,5 Mật độ tế bào (log CFU/ml) 9,54 9,87 9,53 8,95 9,36 9,01 8,71 8,95 9,41 8,74 9,54 9,54 9,15 8,28 9,44 8,53 9,54 130 Bảng Bảng ma trận thực nghiệm chủng A.chroococcum AT73 STT Thời gian (h) Nhiệt độ (0C) pH 10 11 12 13 14 15 16 17 48 48 66 66 30 48 48 48 66 66 30 30 30 48 48 48 48 27 30 24 27 27 30 27 24 27 30 24 27 30 27 24 27 27 6,25 7,00 6,25 5,50 5,50 5,50 6,25 7,00 7,00 6,25 6,25 7,00 6,25 6,25 5,50 6,25 6,25 Mật độ tế bào (log CFU/ml) 9,40 9,81 9,37 9,25 8,84 9,29 9,39 9,46 9,80 9,76 8,96 9,37 9,32 9,40 8,90 9,40 9,40 131 Số liệu thống kê IRRISTAT BALANCED ANOVA FOR VARIATE NS FILE - :PAGE VARIATE V003 NS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB SQUARES ER LN ========================================================================== CT$ 26.0078 13.0039 17.33 0.013 NL 11.2339 5.61693 7.49 0.046 * RESIDUAL 3.00073 750184 * TOTAL (CORRECTED) 40.2424 5.03030 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE :PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ - CT$ NOS NS CT1 23.6700 CT2 27.5000 CT3 27.0000 SE(N= 5%LSD 3) 0.500061 4DF 1.96013 - MEANS FOR EFFECT NL NL NOS NS 27.5433 24.8500 3 25.7767 132 SE(N= 5%LSD 3) 0.500061 4DF 1.96013 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE NS GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 9) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 2.2428 0.86613 26.057 C OF V |CT$ % |NL | | | | | | | | | 3.3 0.0126 0.0460 133 Kết phân tích phương sai tối ưu hóa điều kiện sinh trưởng chủng vi khuẩn nghiên cứu + Chủng B.subtilis B16 134 + Chủng B.polyfermenticus B04 135 + Chủng Achroococcum AT73 136 Trình tự gen 16S ARN reboxom chủng vi sinh vật + Trình tự gen chủng B 16 CCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTC CCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGA AACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCAC TTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCC GACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCT TCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTA GGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCA GCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAG TCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTG GAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAAC TGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGC TAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAG ACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAAC CTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCAT GGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCAT TCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCA AATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTT AAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAAT CGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACA CCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGGGACAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAA GGTAGCCGTATCGGAAGGTGCGGCTGGATCACCTCCTTT +Trình tự gen chủng B04 CTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCA AACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCAC CAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGG GAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCG GATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAA GCCACG GCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACATAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATT GGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCG GGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTG TAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGA GCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGG GTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCcGcCtGGGGAGTACGGTCGCAaGACTGAAACTCAAAG GAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGtGGAGCATGTGGTTTAATTCgAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGA 137 CATCCTCTGACaATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTC GTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAgcATTCAATTGGGCACTCTA AGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGggGATGACGTcaAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACA CGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGAT CGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCC GGGCCTTGTACACACCGCCCGTCacacCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTaTGGAGCCAG CCGCCGAAGGTGGGACAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGGTGCGGCTGGATCACCT CCTTT + Trình tự gen chủng AT73 >AT73 CAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTCGGGAGGAAGGGCTGTA GGCTAATACCTTGCAGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGG TAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTCAGCAAGTT GGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTACTGGGCTAGAGTACGGTAGAGGG TGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCA CCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCC ACGCCGTAAACGATGTCGACTAGCCGTTGGGCTCCTTGAGAGCTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTC GACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTG GAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGCCTTGACATCCTGCGAACTTGGTAGA GATACCTTGGTGCCTTCGGGAGCGCAGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGAT GTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCAGCACCTCGGGTGGGCACTCTAAG GAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGG GCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAGAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGCGGAGCTAATCCCAGAAAA CCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGAATCA GAATGTCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCTC CAGAAGTAGCTAGTCTAACCTTCGGGAGGACGGTTACCACGGAGTGATTCATGACTGGGGTGAA 138 Kết phân tích mẫu phân bón VSV chức ... xanh vi khuẩn 21 1.5 Phân bón vi sinh vật 23 1.5.1 Phân vi sinh vật cố định nitơ 24 1.5.2 Phân vi sinh vật phân giải hợp chất phospho khó tan 26 vi 1.5.3 Phân vi sinh. .. sinh vật chức cho khoai tây 81 vii 3.2.1 Nghiên cứu nhân sinh khối vi sinh vật 81 3.2.2 Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất phân bón vi sinh vật chức sử dụng cho khoai tây 96... Smith gây bệnh khoai tây • Xác định khả sử dụng phân bón vi sinh vật chức cho khoai tây Cơ sở khoa học luận án Các nghiên cứu công nghệ sản xuất phân bón vi sinh vật (cố định nitơ, phân giải hợp