TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC HUẾ KHOA DƯỢC THỰC TẬP HÓA DƯỢC (Dành cho sinh viên Đại học Dược) LƯU HÀNH NỘI BỘ Huế - 2015 PHẦN I MỘT SỐ QUY ĐỊNH CHUNG NỘI QUY PHỊNG THÍ NGHIỆM HÓA DƯỢC Sinh viên phải tuân thủ tuyệt đối nội quy, quy định an tồn phịng thí nghiệm Sinh viên làm thí nghiệm sau chuẩn bị bài, nắm mục tiêu cách tiến hành thí nghiệm Kiểm tra thiết bị, dụng cụ hóa chất trước tiến hành thí nghiệm Nếu có hư, vỡ dụng cụ, thiết bị… cẩu thả, không làm kỹ thuật phải bồi thường Đọc kỹ hướng dẫn sử dụng thiết bị trước sử dụng Mang kính bảo hộ làm thí nghiệm Mỗi sinh viên có chỗ làm việc riêng phịng thí nghiệm suốt thực hành môn học Sinh viên làm việc khu vực qui định cho mình, tránh lại lộn xộn Khơng đùa giỡn, ăn uống phịng thí nghiệm Để vật dụng, trang thiết bị phịng thí nghiệm (chổi quét nhà, lau nhà, ghế ngồi, sổ nhật ký, túi, sách vở, hóa chất, sản phẩm…) nơi quy định Chỉ sử dụng hóa chất, dụng cụ giáo viên hướng dẫn Bộ dụng cụ, hóa chất dùng chung cho tổ khơng mang chỗ cá nhân Không di dời chai hóa chất, thiết bị từ chỗ sang chỗ khác mà khơng có cho phép giáo viên hướng dẫn Trong trường hợp phép di dời giáo viên hướng dẫn sau sử dụng xong phải trả lại chỗ ban đầu 10 Sinh viên phải tự làm lấy thí nghiệm Trong q trình làm phải theo dõi, quan sát tượng ghi lấy kiện thực nghiệm vào 11 Làm xong thực tập, sinh viên phải xếp lại dụng cụ, hóa chất, rửa ống nghiệm, dụng cụ, làm vệ sinh bàn thí nghiệm, khóa điện, nước Mỗi tổ cử trực nhật làm phịng thí nghiệm, phải kiểm tra tất thiết bị, dụng cụ hóa chất phịng thí nghiệm sau bàn giao cho giáo viên hướng dẫn 12 Sau thực hành, sinh viên phải làm báo cáo kết cho giáo viên hướng dẫn Báo cáo thí nghiệm phải mơ tả đầy đủ thao tác tiến hành thí nghiệm, giải thích tượng xảy ra, viết cân đầy đủ phương trình phản ứng xảy q trình làm thí nghiệm Thời hạn nộp chậm ngày sau buổi thực tập 13 Kết hồn thành mơn thực hành đánh giá theo qui chế chung môn thi QUY TẮC AN TỒN TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM HĨA DƯỢC Các phản ứng có chất độc bay phải làm tủ hút trời Các chất dễ cháy, nổ phải đặt xa lửa Khi đun nóng dung dịch phải nghiêng ống nghiệm hướng miệng ống nghiệm phía khơng có người Khơng cúi mặt vào dung dịch sôi chất nóng chảy để tránh hóa chất bắn nổ vào mắt Đối với chất dễ nổ, dễ bắn tách, muốn quan sát phải ĐEO KÍNH BẢO HIỂM Khi pha lỗng acid sulfuric đặc phải RĨT TỪ TỪ ACID VÀO NƯỚC mà không làm ngược lại; không cầm tay dung dịch pha có tỏa nhiệt mạnh Khơng tự động di chuyển bình lớn chứa acid pha lỗng acid từ bình lớn Nếu làm rơi vãi thủy ngân phải hót lại máy hút bụi pipet có bóp cao su, đồng thời rắc vào chỗ thủy ngân rơi lưu huỳnh bột tưới vào dung dịch FeCl3 20% báo cáo cho cán hướng dẫn biết để xử lý Muốn thử mùi chất không ngửi trực tiếp mà phải dùng tay vẩy chất đến mũi lượng nhỏ Sau làm việc với chất độc Hg, As, muối cyanide… dung dịch kim loại quý, cần phải thu vào bình chứa định Khi có hỏa hoạn: - Nếu đám cháy nhỏ dùng bao tải ướt để dập tắt - Nếu có đám chảy lớn lan rộng báo cứu hỏa (gọi điện thoại số 114); dùng cát bình cứu hỏa sinh CO2 để làm tắt hạn chế đám cháy Trong phải cách ly chất dễ cháy dễ nổ (như ether, loại cồn, bình acid đặc ) 10 Nếu bị acid đặc kiềm đặc rơi da phải rửa vòi nước chảy vài phút Sau báo cho cán quản lý xử lý vết bỏng, chống nhiễm khuẩn Nếu acid đặc, kiềm đặc bắn vào mắt phải rửa nước nhiều lần báo cho cấp cứu bệnh viện (gọi điện thoại số 115) 11 Nếu bị bỏng vật nóng với vết bỏng khơng lớn để vịi nước lạnh 5-10 phút, sau thấm khơ bơi thuốc mỡ dược dụng, dầu cá 12 Nếu vết thương có chảy máu phải sát khuẩn cồn iodine, cồn 70 - 90o, dung dịch KMnO4 5%, sau cầm máu dung dịch FeCl3 5% bơng gạc, băng dính y tế 13 Nếu cảm thấy khó thở phịng thí nghiệm có nhiều độc phải nhanh chóng ngồi hành lang CÁC QUY ĐỊNH VỀ SỬ DỤNG HÓA CHẤT Trước sử dụng hóa chất phải đọc kỹ nhãn hóa chất phân nhiều loại có độ tính khiết khác nhau: - Loại kỹ thuật - Loại tinh khiết - Loại tinh khiết phân tích - Loại tinh khiết hóa học - Loại tinh khiết quang học hay tinh khiết đặc biệt Dựa vào yêu cầu độ xác thí nghiệm mà lựa chọn hóa chất thích hợp hóa chất tinh khiết giá thành cao Nếu yêu cầu xác thí nghiệm lấy lượng hóa chất hướng dẫn Nếu thí nghiệm u cầu mặt định tính lấy lượng hóa chất tối thiểu đủ quan sát phản ứng (chất rắn lấy đủ lớp mỏng đáy ống nghiệm; chất lỏng khơng lấy q 1/5 thể tích ống nghiệm) Khi xúc, đong hóa chất phải dùng dụng cụ chuyên dụng thìa thủy tinh, thìa sứ, thìa nhựa, khơng dùng tay để bốc Thìa xúc hóa chất khơng dùng để xúc hóa chất khác Nếu thiếu phải dùng chung thìa, trước lấy sang hóa chất khác phải rửa thìa Chỉ sử dụng lọ hóa chất có nhãn ghi rõ ràng có nút, nắp đậy kín Khi lấy hóa chất, cần để nút lên bàn phải để ngửa, tránh để phần có dính hóa chất tiếp xúc với mặt bàn thí nghiệm Sau lấy xong hóa chất phải đậy nút, nắp cho lọ hóa chất Khi lấy hóa chất, bắt buộc phải đổ becher, khơng nhúng pipet trực tiếp vào bình đựng hóa chất Khi rót chất lỏng phải quay nhãn vào lịng bàn tay để hóa chất khơng dây nhãn Nếu rót thừa khơng đổ trở lại lọ mà tập trung vào cốc đựng hóa chất bẩn Tuyệt đối khơng dùng pipet để hút mồm dung dịch kiềm đặc, acid đặc, chất độc dễ bay hơi, thủy ngân, dung dịch đun nóng, chất nóng chảy nhiệt độ cao, hỗn hợp rửa Phải rửa dụng cụ trước sau tiến hành thí nghiệm Khơng ngửi hóa chất mũi 10 Khi sử dụng hóa chất có mùi sốc, khó chịu (ether, ester, ammonia, acid hydrochloride đậm đặc …) phải sử dụng tủ hút 11 Lấy hóa chất xong phải vặn chặt nút chai lại trả vị trí ban đầu 12 Không mồi lửa đèn cồn đèn cồn cháy 13 Khi lấy hóa chất pha hóa chất phải đeo trang găng tay cao su DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT SỬ DỤNG TRONG THỰC HÀNH HĨA DƯỢC I DỤNG CỤ ĐO THỂ TÍCH - Nhìn chung, dụng cụ đo thể tích sử dụng phịng thí nghiệm đuợc chế tạo từ loại thủy tinh khác Loại dụng cụ làm từ chất dẻo có độ xác va thường đuợc sử dụng truờng (on-site) - Các dụng cụ đo thể tích đuợc chia loại: TC (To contain) hay In TD (To deliver) hay Ex + Loại TC hay In (ký hiệu thuờng đuợc ghi thân dụng cụ): dụng cụ có ghi “TC 20oC' có nghĩa dụng cụ đuợc định chuẩn (calibration) để chứa xác thể tích ứng với tồn phần chứa dụng cụ 20oC Thể tích mà dụng cụ có khả chứa đuợc bao gồm luợng hóa chất dính bám lên dụng cụ trút luợng hóa chất dụng cụ sang dụng cụ khác Các loại dụng cụ TC thuờng áp dụng với bình định mức, cốc có mỏ bình nón + Loại TD hay Ex (ký hiệu thường đuợc ghi thân dụng cụ): dụng cụ có ghi “TD 20oC' có nghĩa dụng cụ đuợc định chuẩn (calibration) để dung tích dụng cụ ứng với phần dung dịch chảy khơng kể giọt cuối Luợng hóa chất cịn dính bám lên dụng cụ sau trút hóa chất trừ khơng tính vào thể tích trút bỏ Các loại dụng cụ TD thường áp dụng với buret, pipet va ống đong Pipet Dùng để lấy lượng nhỏ chất lỏng gồm loại pipet điện tử (autopipet, micropipet), pipette định mức (pipet bầu, pipet xác) loại có vạch vạch, pipet chia vạch (pipet thẳng), pipet Pasteur (pipet nhỏ giọt) Hình Các loại micropipet Hình Các loại pipet định mức Hình Các loại pipet chia vạch Hình Giải thích ký hiệu pipet định mức Các loại giá đỡ pipet Hình Các loại giá đỡ pipet Quả bóp cao su dùng để nối với pipet Hình Các loại bóp cao su *Cách sử dụng bóp cao su van Quả bóp cao su sử dụng để hút chất lỏng sử dụng pipet Có nhiều loại bóp cao su (hình 6), bóp cao su van hay sử dụng phịng thí nghiệm hóa học Sau kỹ thuật sử dụng dụng cụ Hình Kỹ thuật sử dụng bóp cao su van *Cách sử dụng pipet: Cầm phần pipet ngón tay ngón tay giữa, cắm sâu đầu pipet vào dung dịch (khơng để dầu pipet chạm đáy hút phải cặn dung dịch để nơng q dung dịch xộc lên miệng) hút từ từ (bằng miệng sử dụng bóp cao su) mặt khum dung dịch dâng lên vạch gần cm, bịt nhanh miệng pipet ngón tay trỏ khơ, lau đầu pipet bơng giấy (nếu cần)và mở ngịn trỏ để dung dịch chảy xuống chậm phần mặt khum đến ngang vạch (vạch thứ pipet có vạch) Đưa pipet vào bình nón chuẩn bị trước, tựa đầu pipet vào thành bình, cầm thẳng đứng pipet chất lỏng chảy từ từ vạch thứ loại pipet vạch hay đến hết loại pipet vạch; nhấc pipet Đối với loại pipet chia vạch thao tác tương tự Hình Kỹ thuật sử dụng pipet Chú ý: - KHÔNG BAO GIỜ “thổi” hay dùng lực tác động ngoai trọng lực nhằm đưa giọt cuối đầu pipet bầu ngoai, thể tích pipet bầu định chuẩn không bao gồm giọt cuối Do pipet bầu bị nứt đầu hay mẻ đầu, phải loại bỏ pipet bị sai số Do đặc thù pipet bầu nên cần lấy thể tích mẫu thử xác pipet bầu, thiết phải tráng mẫu thử tối thiểu lần - Đối với pipet chia vạch, cổ pipet có chữ BLOWOUT hay có viền kính nhám rộng khoảng 3-5mm hay có viền màu xung quanh cổ thao tác, cần ‘thổi” giọt cuối Chú ý khơng lẫn lộn viền kính nhám (frosted band) với dải màu rộng (cũng cổ pipet) dải màu ký hiệu nhà sản xuất dụng cụ Các pipet khơng có đặc điểm thao tác, khơng dùng tác động ngồi trọng lực Thơng thường, pipet chia vạch dùng để hút hóa chất phản ứng phân tích Trước hút hóa chất, việc tráng pipet chia vạch nước cất (là đủ) hay phải hóa chất đem hút tùy thuộc vào phương pháp phân tích cụ thể Nguyên tắc chung cần lượng thể tích xác (ví dụ phản ứng chuẩn độ ngược hay chuẩn độ thế) cần tráng pipet hóa chất đem hút Ngược lại, lượng hóa chất khơng cần xác cao (ví dụ để tạo mơi trường hay tạo phức màu) tráng pipet nước cất đủ - Để tránh làm hỏng thuốc thử khơng nên nhúng thẳng pipet vào chai mà rót thuốc thử cốc có mỏ hút pipet - Tuyệt đối không dùng pipet để hút dung dịch acid đặc, kiềm đặc, chất độc, chất bay hơi, trường hợp phải dùng buret để lấy thể tích xác dùng bóp cao su nối với pipet để hút dung dịch lên Ống đong Hình Các loại ống đong định mức Hình 10 Kỹ thuật sử dụng ống đong định mức 10 Bài ĐIỀU CHẾ NATRI CLORID DƯỢC DỤNG Mục tiêu: - Điều chế chế phẩm natri clorid dược dụng từ muối bếp - Thông qua nhận thức tạp chất chế phẩm nguyên liệu dược dụng Nội dung: I Nguyên liệu: Muối bếp lấy từ biển Thành phần muối bếp: - NaCl chiếm khoảng 96-99% - Các tạp chất kèm: Ca2+, Mg2+, Fe2+ kim loại khác, SO 42- , Br, I- anion khác dạng muối hòa tan, chất hữu cơ, tạp không tan II Điều chế: A Nguyên tắc: - Loại tạp hữu cách rang muối bếp nhiệt độ 500-6000C - Loại tạp khơng tan hịa tan muối rang vào nước lọc - Loại ion kim loại kết tủa dạng carbonat với Na2CO3, lọc - Trung tính hóa dịch lọc pH 6,8 -7,1 HCl 10% - Cô đuổi nước thu NaCl kết tinh; để lại lượng nước ót khoảng 1/5 thể tích ban đầu 2- Loại tạp SO4 cách rửa tinh thể NaCl máy hút chân không - Sấy khơ sản phẩm 1000C; cân tính hiệu suất B Tiến hành điều chế: Theo bước sau: Cân 40g muối bếp rang kỹ, hòa tan vào lượng nước vừa đủ để dung dịch gần bão hòa Lọc sơ qua giấy lọc, lọc Kết tủa kim loại từ dịch dung dịch Na2CO3 10% a Thăm dò lượng dd Na2CO3: Đổ 20ml dịch lọc vào cốc dung tích 50ml, đun nóng Thêm từ từ dung dịch Na2CO3 10% (dùng ống đong buret) vào dịch nóng, khuấy đều, đến không thấy kết tủa tiếp (lọc giấy vài giọt dịch trong, nhỏ dd Na2CO3 không thấy kết tủa nữa) đọc thể tích dung dịch Na2CO3 10% tiêu thụ cho 20ml dịch lọc muối b Tiến hành loại tạp: - Căn vào thể tích dung dịch Na2CO3 10% dùng cho 20ml dịch lọc ước lượng trên, tính cho tổng thể tích dịch lọc muối lại - Đun dịch lọc muối đến nhiệt độ 50-600C thêm từ từ, đồng thời khuấy đều, thể tích dung dịch Na2CO3 10% tính vào dịch muối nóng Đun hỗn hợp đến tủa keo, lọc chân không lấy dịch trong, bỏ tủa Trung hòa dịch lọc loại kim loại: 48 - Để dịch lọc nguội thêm từ từ dung dịch HCl 10% đến pH 6,8-7,1 (thử cách nhỏ giọt dd giấy thử pH vạn Chú ý: Nếu thừa acid HCl điều chỉnh pH dung dịch Na2CO3 10% Cô kết tinh NaCl thô: - Cơ nhiệt độ sơi dịch muối trung tính hóa trên, khuấy để kết tinh NaCl có tinh thể mịn; vớt dần tinh thể NaCl vào phễu lọc chân khơng Khi lượng nước ót cịn khoảng 1/5 thể tích ban đầu ngừng lấy muối 25 Loại tạp SO4 tạp hòa tan khác: 2- Hút chân không làm khô bột NaCl thô, kết hợp rửa loại SO4 cách phun nước cất (tốt dung dịch NaCl tinh khiết dược dụng gần bão hòa) thử nước rửa dung dịch BaCl2 5% đến kết tủa trắng - Hút nước sản phẩm NaCl tinh khiết, sấy 1000C giờ, cân, bảo quản lọ kín Tính hiệu suất theo nguyên liệu rang khô 49 Bài KIỂM NGHIỆM NGUYÊN LIỆU NATRI CLORID DƯỢC DỤNG Mục tiêu - Nắm vững nguyên tắc thực phép thử định tính thử tinh khiết kiểm nghiệm NaCl - Thực phép định lượng Cl- phương pháp đo Ag I YÊU CẦU KIỂM NGHIỆM 1.1 Tính chất: Bột kết tinh màu trắng, không mùi, vị mặn Độ tan: Rất dễ tan nước, tan ethanol 960, không tan dung môi hữu 1.2 Định tính: Phải có phản ứng đặc trưng Na+ Cl1.3 Thử tinh khiết: Phải đạt giới hạn cho phép tạp chất liên quan 1.4 Định lượng: Hàm lượng natri clorid (NaCl) phải từ 99,0-100,5% so với hàm lượng ghi nhãn II PHƯƠNG PHÁP THỬ NaCl P.t.l: 58,44 A Tính chất Nguyên liệu phải đạt yêu cầu nêu B Định tính: Ion Na+: Ion Na+ kết tủa màu vàng nhạt với thuốc thử Streng (Magnesi kẽm uranyl acetat), tinh thể có hình dạng đặc trưng Tiến hành: Trên phiến kính hiển vi, đặt 1-2 giọt dung dịch natri clorid lỗng (khoảng 0,2-0,5%) làm bay nóng đến khơ để nguội, thêm giọt thuốc thử Streng: xuất tủa vàng nhạt, lấp lánh Khi soi kính hiển vi thấy thể hình mặt nhẫn đặc hiệu Ion clorid (Cl-): Kết tủa AgCl màu trắng xám với ion Ag+; tủa tan amoniac Tiến hành: Lấy 4ml dung dịch thử vào ống nghiệm, thêm 0,2ml HNO3 10% 0,5ml AgNO3 5%: xuất tủa trắng xám, vón Lọc lấy tủa, rửa nước cất, thêm 1ml amoniac đặc, tủa tan hết C Thử tinh khiết: Tiến hành số phép thử sau: Pha dung dịch S (d.d.S): 20,0g natri clorid thử pha bình định mức 100ml với nước khơng có CO2 thành 100ml, dùng d.d.S tiến hành phép thử sau: Độ trong: d.d.S màu sắc dung dịch: a- Độ trong: d.d.S phải suốt b- Màu sắc: d.d.S không màu (so với nước cất) Độ acid- kiềm: 57 Lấy 20ml d.d.S vào ống nghiệm, thêm 0,1ml thị xanh bromothymol, trộn Dung dịch thu phải chuyển màu dùng không 0,5ml HCl 0,01M NaOH 0,01M Nitrit (NO2-): Lấy 10ml d.d.S, thêm 10ml nước Đo độ hấp thu dung dịch thu bước sóng 354nm Giá trị mật độ quang đo  0,01 Sunlfat (SO42-): Lấy 7,5ml d.d.S, pha loãng nước thành 30ml Lấy 15ml dung dịch thu làm dung dịch thử Tiến hành thử giới hạn tạp sulfat sau: Chọn hai ống nghiệm qui cách theo qui định; làm ống đối chiếu, ống làm ống thử Tiến hành đồng thời hai ống + Ống thử: Lấy 15ml dung dịch thử cho vào hỗn hợp chuẩn trước gồm ml BaCl2 25%; 1,5 ml dung dịch mẫu sulfat 10 ppm 0,5 ml acid acetic 5M; trộn đều, để yên 10 phút So sánh độ đục với ống đối chiếu sulfat + Ống đối chiều: Tiến hành tương tự, thay 15ml dung dịch thử 15ml dung dịch mẫu sulfat 10 ppm Bari (Ba2+): Lấy vào ống nghiệm 5ml d.d.S, thêm 5ml lít nước 2ml H2SO4 10% trộn Sau 15 phút độ đục hỗn hợp thu không đậm hỗn hợp gồm 5ml d.d.S 7ml nước Magnesi Calci (Mg+ Ca2+): Hai ion tồn tại, không tách riêng, tiến hành thử kép thuốc thử amoni oxalat dinatriphosphat ống nghiệm Tiến hành thử: Lấy 20ml dung dịch NaCl 1% vào ống nghiệm; thêm 2ml amoniac 10%, 2ml amoni oxalat 2,5% 2ml dinatriphosphat 4% trộn đều, sau phút dung dịch D Định lượng Bằng phương pháp đo bạc, thị kalicromat (K2CrO4) pH môi trường định lượng: trung tính Tiến hành: Cân xác khoảng 0,12g natri clorid thử cho vào bình nón dung tích 100ml hòa tan 30ml nước cất Thêm 0,5ml dung dịch kalicromat 5% Chuẩn độ AgNO3 0,1M đến hỗn hợp xuất màu hồng nhạt đồng 1ml AgNO3 0,1M tương ứng 5,844mg NaCl Hàm lượng NaCl phải đạt 99,0-100,5% chế phẩm thử 57 Bài KIỂM NGHIỆM NGUYÊN LIỆU BARBITAL Mục tiêu - Nắm vững nguyên tắc thực phép thử định tính thử tinh khiết kiểm nghiệm barbital - Thực phép định lượng barbital phương pháp chuẩn độ acid-base I YÊU CẦU KIỂM NGHIỆM 1.1 Tính chất: Bột kết tinh màu trắng, không mùi, vị đắng nhẹ, bền khơng khí, khó tan nước, khơng trong acid; tan dung dịch kiềm (do tạo muối) dễ tan ethnol 1.2 Định tính: Phải có phản ứng đặc trưng barbital 1.3 Thử tinh khiết: Phải đạt giới hạn cho phép tạp chất liên quan 1.4 Định lượng: Hàm lượng barbital (C8H12N2O3) phải từ 99,0-101,0% so với hàm lượng ghi nhãn II PHƯƠNG PHÁP THỬ C8H12N2O3 P.t.l: 184,19 Acid 5,5-diethylbarbituric A Tính chất Nguyên liệu phải đạt yêu cầu nêu B Định tính Phản ứng với NaOH đặc đun nóng: giải phóng amoniac Tiến hành: Lấy 0,1g chất thử ống nghiệm, thêm 3-5ml NaOH 15%, miệng ống nghiệm kẹp mẩu giấy quỳ đỏ, đun sôi hỗn hợp bình, bốc lên làm quỳ đỏ chuyển sang xanh Tạo muối với ion kim loại: Tạo muối natri hịa tan vào NaOH lỗng, cho muối natri phản ứng với muối kim loại khác cho tủa màu tùy theo kim loại, ví dụ với AgNO3 cho tủa màu trắng Tiến hành: Hòa tan bảo hòa chất thử vào 4ml NaOH 0,1M, lọc thu dịch lọc Thêm 35 giọt AgNO3 5% vào dịch lọc: xuất tủa màu trắng Phản ứng màu đặc trưng: Thuốc thử (1): Dung dịch Cobalt (II) nitrat 10% + Calci clorid 10% Thuốc thử (2): Dung dịch NaOH 2M 57 Tiến hành thử: Hòa tan khoảng 5mg Barbital vào 2ml methanol, thêm 2-3 giọt thuốc thử (1), trộn Thêm, vừa lắc 2-3 giọt thuốc thử (2): xuất màu tủa xanh tím C Thử tinh khiết Độ acid – kiềm: Đun sôi hỗn hợp gồm 1,0g chất thử 50ml nước phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, lọc lấy dịch lọc, lấy 10ml dịch lọc, thêm 0,15ml thị đỏ methyl, dung dịch có màu vàng cam muốn chuyển sang màu vàng thể tích NaOH 0,1M sử dụng khơng > 0,1ml D Định lượng: Định lượng dung dịch NaOH, môi trường ethanol-nước, Chỉ thị màu thymolphtalein Phát điểm kết thúc sử dụng màu đối chiếu, điểm kết thúc định lượng màu bình thử có độ đậm bình đối chiếu Tiến hành: + Bước 1: Trung hòa dung mơi theo thị: Lấy 25ml ethanol 960 vào bình nón dung tích 50ml, thêm giọt thị thymolphtalein Thêm giọt NaOH 0,1M đến có màu xanh lơ rõ Hỗn hợp thu dùng làm dung môi cho định lượng + Bước 2: Tiến hành định lượng: Chọn bình nón dung tích 100ml giống nhau, ghi số số 2, cho vào bình 10ml dung mơi trung hịa Bình 1: cho vào 0,3g chất thử (Pg) cân xác, lắc đến tan hết Bình 2: thêm thể tích nước (ml) tỷ số P/0,0184 Bình dùng làm bình đối chiếu Chuẩn độ bình NaOH 0,1M đến xuất màu xanh lơ có độ đậm tương đương màu bình 1ml dung dịch NaOH 0,1M tương đương 0,01842g C12H12N2O3 Hàm lượng chất chế phẩm thử phải đạt 99,0-101,0% 57 Bài KIỂM NGHIỆM NGUYÊN LIỆU PROCAINE HYDROCHLORIDE Mục tiêu - Hiểu rõ nguyên tắc thực hành phép thử định tính nguyên liệu - Hiểu rõ nguyên tắc định lượng đo nitrite thực hành định lượng procain hydrochloride - Thực hành thành thạo đo pH dung dịch thử máy đo pH I YÊU CẦU KIỂM NGHIỆM 1.1 Tính chất: Bột kết tinh màu trắng gần trắng, không mùi Rất dễ tan nước, tan ethanol 96o, tan vừa cloroform Hầu không tan ether 1.2 Định tính: Phải có phản ứng đặc trưng procain hydrochloride 1.3 Thử tinh khiết: Phải đạt giới hạn cho phép tạp chất liên quan 1.4 Định lượng: Hàm lượng procain hydrochloride (C13H20N2O2.HCl) phải từ 99,0101,0% so với hàm lượng ghi nhãn II PHƯƠNG PHÁP THỬ Công thức: C13H20N2O2.HCl Ptl: 272,80 TKH: 4-Aminobenzoic acid 2-(diethylamino)ethyl ester hydrochloride Tính chất: Bột kết tinh màu trắng gần trắng, không mùi Rất dễ tan nước, tan ethanol 96o, tan vừa cloroform Hầu khơng tan ether A Hóa tính định tính: Tính khử procain: làm màu thuốc tím Tiến hành: - Pha dung dịch chất thử 1% nước - Lấy 3ml dung dịch thử, acid hóa 0,5ml H2SO4 10%, trộn Nhỏ giọt dung dịch kalipermanganate 0,1%, lắc nhẹ: màu tím Phản ứng ion Cl- (phần HCl kết hợp): tạo tủa AgCl với AgNO3 Tiến hành: Acid hóa 2ml dung dịch thử 1% (đã pha trên) vài giọt HNO3 10%, thêm 57 0,5ml dung dịch AgNO3 5%: xuất tủa màu trắng xám, tan ammonia Phản ứng đặc trưng nhóm amin thơm 1: tạo phẩm màu nitrogen Tiến hành: - Ống nghiệm 1: Hòa tan 50mg chất thử vào 3ml dung dịch HCl 10% Thêm 4-5 giọt dung dịch NaNO2 0,1M - Ống nghiệm 2: Lấy 10mg 2-naphtol, hòa tan vào 2ml NaOH 10% Đổ từ từ dịch ống nghiệm vào ống nghiệm 1: xuất tủa màu đỏ cam B Thử tinh khiết Pha dung dịch A: 2,50g chất thử 50ml nước cất (không có khí CO2 hịa tan) tiến hành phép thử sau: - Đo độ acid: Pha loãng 40ml dung dịch A thành 100ml nước cất Đo pH dung dịch thu máy đo pH vùng acid: pH nằm 5,00-6,50 C Định lượng Định lượng phần HCl dung dịch NaOH, thị đo điện Tiến hành: Cân xác khoảng 0,4g chất thử, hịa tan vào 40ml ethanol 96o cốc có mỏ 250ml Thêm 5ml dung dịch HCl 0,05M Chuẩn độ dung dịch NaOH 0,1M Xác định bước nhảy ứng với V1 V2 dung dịch NaOH 0,1M sử dụng Hiệu số V2 – V1 thể tích dung dịch NaOH 0,1M sử dụng cho chất thử Hàm lượng chế phẩm thử phải đạt 99,0-101,0% 57 Bài KIỂM NGHIỆM NGUYÊN LIỆU VITAMIN C Mục tiêu - Nắm vững nguyên tắc thực phép thử định tính thử tinh khiết kiểm nghiệm vitamin C - Thực phép định lượng vitamin C phương pháp chuẩn độ Iod I YÊU CẦU KIỂM NGHIỆM 1.1 Tính chất: Bột kết tinh màu trắng tinh thể không màu, vị chua, dễ bị biến màu tiếp xúc lâu với ánh sáng ẩm Độ tan: Rất dễ tan nước, dung dịch có pH acid, tan ethanol, khó tan số dung mơi hữu cơ: ether, cloroform 1.2 Định tính: Phải có phản ứng đặc trưng vitamin C 1.3 Thử tinh khiết: Phải đạt giới hạn cho phép tạp chất liên quan 1.4 Định lượng: Hàm lượng vitamin C (C6H8O6) phải từ 99,0-100,0%.so với hàm lượng ghi nhãn II PHƯƠNG PHÁP THỬ C6H8O6 P.t.l: 176,10 Acid ascorbic A Tính chất Nguyên liệu phải đạt yêu cầu nêu B Định tính: Chuẩn bị dung dịch S: pha 1g chất thử 10ml nước đun sôi để nguội Các phép thử: Dung dịch S làm đỏ giấy quỳ xanh Lấy 1ml d.d.S, thêm 10mg NaHCO3 1ml nước lắc cho tan, thả 1-2 hạt tinh thể sắt (II) sunfat: xuất màu tím Lấy 1ml d.d.S thêm vài giọt dung dịch AgNO3 5%: xuất tủa bạc nguyên tố màu đen Lấy 1ml dung dịch S, acid hóa vài giọt acid sulfuric loãng; thêm vài giọt dung dịch iod 0,1N: màu nâu iod 57 Đo độ hấp thụ riêng: (cân xác dùng bình định mức) - D.d.1: 100mg chất thử pha nước thành 100ml - D.d.2: lấy 1ml d.d.1, thêm 10ml HCl 0,1M thêm nước đủ 100ml Đo độ hấp thụ d.d.2 bước sóng 243nm Độ hấp thụ riêng khoảng 545-585 C Định lượng: Phép đo Iod: Tiến hành: cân xác khoảng 0,15g chất thử hòa tan vào hỗn hợp gồm 10ml acid sulfuric lỗng 80ml nước đun sơi để nguội Thêm 1ml thị hồ tinh bột, chuẩn độ dung dịch Iod 0,05M đến màu xanh lơ bền 1ml dung dịch iod 0,05M tương đương 8,81mg C6H8O6 Hàm lượng chất mẫu thử phải đạt 99,0-100,0% 57 PHỤ LỤC I XÁC ĐỊNH GIỚI HẠN MỘT SỐ TẠP CHẤT VÔ CƠ Ammonium NH4+ (theo phụ lục 7.4.1 PL – 125 DĐVN III) Nguyên tắc Ammonia ammonium tác dụng với thuốc thử Nessler tạo phức chất có màu từ vàng nhạt đến đậm, tùy nồng độ: NH4Cl + 2K[HgI4] + KOH [O = Hg2 = NH2+] I-+ KCl + KI + H2O t/t Nessler Phức màu vàng Tiến hành Chọn hai ống nghiệm qui cách theo qui định; làm ống đối chiếu, ống làm ống thử Tiến hành đồng thời hai ống - Ống thử: Hòa tan P(g) chất thử (theo qui định chuyên luận) vào 14ml nước; kiềm hóa dung dịch KOH 2M thêm nước vừa đủ 15ml Thêm 0,3ml thuốc thử Nessler, trộn để yên 15 phút So màu với đối chiếu trắng, ánh sáng khuếch tán ban ngày - Ống đối chiếu: Lấy 1ml dung dịch mẫu ammonium 10 ppm; thêm nước vừa đủ 15ml Thêm 0,3ml thuốc thử Nessler, trộn đều, để yên 15 phút Pha dung dịch mẫu ammonium theo DĐVN III Calci (Ca2+) (Theo phụ lục 7.4.3 PL – 126 DĐVN III) Nguyên tắc Ion oxalate phản ứng với ion Ca2+ cho kết tủa calcium oxalate màu trắng, tạo độ đục cho dung dịch thử So sánh độ đục với ống đối chiếu calcium : Ca2+ + (NH4)2C2O4 CaC2O4+ 2NH4+ Tiến hành Chọn ống nghiệm qui cách theo qui định; ống đối chiếu, ống làm ống thử Tiến hành đồng thời hai ống - Ống thử: Trộn 1ml dung dịch ammonium oxalate 4% với 0,2ml dung dịch mẫu calcium 100 ppm pha ethanol 96% Sau phút, thêm hỗn hợp gồm 15ml dung dịch thử (pha theo qui định chuyên luận) 1ml acid acetic 2M, trộn - Ống đối chiếu: Tiến hành đồng thời tương tự ống thử, thay 15ml dung dịch thử 10ml dung dịch mẫu acid 10 ppm + 5ml nước So sánh độ đục ống thử ống đối chiếu tối, nhìn dọc theo trục ống, ánh sáng khuếch tán ban ngày 58 Chloride (Cl-) (Theo phụ lục 7.4.5 PL – 126 DĐVN III) Nguyên tắc Ion Ag+ phản ứng với ion Cl- tạo kết tủa AgCl, gây đục dung dịch thử So sánh độ đục với dung dịch đối chiếu ion chloride: AgNO3 + Cl- AgCl+ NO3Phản ứng tiến hành môi trường acid nitric Tiến hành Chọn hai ống nghiệm qui cách theo qui định; làm ống đối chiếu, ông làm ống thử Tiến hành đồng thời hai ống - Ống thử: Hòa tan P(g) chất thử (theo qui định chuyên luận) vào 15ml nước; acid hóa 1ml dung dịch HNO3 2M Thêm 1ml dung dịch bạc nitrate 2%, trộn đều, để yên phút So sánh độ đục với ống đối chiếu tối, nhìn dọc theo trục ống ánh sáng khuếch tán ban ngày - Ống đối chiếu: Tiến hành đồng thời tường tự ống thử, thay 15ml dung dịch thử 10 ml dung dịch mẫu Cl- 5ppm + 5ml nước Kim loại nặng (Theo phụ lục 7.4.7 PL – 126 DĐVN III) Nguyên tắc Nhóm tạp kim loại nặng gồm nhiều nguyên tố Pb, Hg… Trong phép thử lấy ion Pb2+ làm đại diện, chế tạo dung dịch mẫu Phản ứng Pb2+ với thuốc thử thioacetamide cho màu vàng nâu: Tiến hành Chọn hai ống nghiệm qui cách theo qui định; làm ống đối chiếu, ống làm ống thử Tiến hành thử theo phương pháp: Phương pháp Dung môi dùng phép thử nước cất Tiến hành: Đồng thời ống thử ống đối chiếu - Ống thử: Lấy 12ml dung dịch thử (pha theo chuyên luận); thêm 2ml dung dịch đệm acetate pH 3,5 ; trộn Thêm 1,2 ml thuốc thử thioacetamide (pha theo PL – 65 DĐVN III), trộn Để yên phút, so sánh màu với ống đối chiếu trắng, ánh sáng khuếch tán ban ngày - Ống đối chiếu: Tiến hành tương tự ống thử, thay 12ml dung dịch thử 10ml dung dịch chì mẫu ppm (hoặc ppm, tùy theo chuyên luận qui định) 2ml dung dịch thử Dung dịch chì mẫu pheo theo phụ lục 7.4.7 PL – 126 DĐVN III 59 Chú ý: Ống đối chiếu có màu nâu nhạt so với ống trắng chuẩn bị từ 10ml nước cất 2ml dung dịch thử, với thuốc thử tương tự Phương pháp Dung môi dùng phép thử dung mơi hữu thích hợp trộn lẫn với nước theo tỷ lệ qui định Tiến hành: Hòa tan P(g) chất thử (theo qui định chuyên luận) vào dung mơi hữu có trộn lẫn tỷ lệ nước tối thiểu; ví dụ 1,4 – dioxan aceton có chứa 15% nước Các bước tiến hành thử miêu tả phương pháp Chuận bị dung dịch ion chì mẫu ppm cách pha lỗng dung dịch chì mẫu 100 ppm dung mơi có thành phần phép thử Phương pháp 3, Tham khảo DĐVN III – Phụ lục 7.4.7 Sulfate SO42- (Theo phụ lục 7.4.12 PL – 128 DĐVN III) Nguyên 2-tắc 2+ Ion SO4 phản ứng với ion Ba cho kết tủa BaSO4 màu trắng, tạo độ đục cho dung dịch thử So sánh độ đục với ống đối chiếu ion sulfate: 2Ba2+ + SO4 BaSO4 Phản ứng dùng thuốc thử BaCl2, môi trường acid acetic Tiến hành Chọn hai ống nghiệm qui cách theo qui định; làm ống đối chiếu, ống làm ống thử Tiến hành đồng thời hai ống - Ống thử: Lấy 15ml dung dịch thử (chuẩn bị theo chuyên luận) cho vào hỗn hợp chuẩn trước gồm ml BaCl2 25%; 1,5 ml dung dịch mẫu sulfat 10 ppm 0,5 ml acid acetic 5M; trộn đều, để yên 10 phút So sánh độ đục với ống đối chiếu sulfate; nhìn theo trục ống tối, ánh sáng khuếch tán ban ngày - Ống đối chiếu: Tiến hành tương tự, thay 15ml dung dịch thử 15ml dung dịch mẫu sulfate 10 ppm Sắt Fe3+ (Theo phụ lục 7.4.11 PL – 128 DĐVN III) Nguyên tắc Ion Fe3+ tạo màu hồng với acid mercaptoacetic môi trường ammonia: HS – CH2 – COOH + FeCl3 (HS – CH2 - COO)3 Fe + HCl Acid mercaptoacetic Tiến hành Chọn hai ống nghiệm qui cách theo qui định; làm ống đối chiếu, ống làm ống thử Tiến hành đồng thời hai ống - Ống thử: Lấy 10ml dung dịch thử vào ống thử, thêm ml dung dịch acid citric 20% 0,1 ml acid mercaptoacetic, trộn Kiềm hóa ammonia 10M thêm nước thành 20 ml, trộn đều, để yên phút So sánh màu với ống đối chiếu ion sắt, trắng, ánh sáng khuếch tán ban ngày - Ống đối chiếu: Tiến hành tương tự ống thử, thay 10 ml dung dịch 10 ml dung dịch mẫu Fe3+ ppm 60 Arsenic (Theo phụ lục 7.4.2 PL – 125 DĐVN III) Phương pháp A Nguyên tắc Khí hydrogen sinh khử As3+ thành khí asin AsH3 (hydroarsenide); khí bay lên gặp muối Hg (II) tạo hỗn hợp màu vàng đến vàng nâu: Zn + 2HCl 2H + ZnCl2 3AsO + 9H AsH3+ 3H2O 3(AsO3 = ion arsenide) AsH3 + HgBr2 Hỗn hợp màu nâu 5+ 2+ Nếu có As , dùng Sn (SnCl2) I- (KI) khử As3+: AsO43- + Sn2+ AsO33- + Sn4+ 3+ 3+ 2I + 2H AsO4 AsO3 + I2 + H2O 3(AsO4 = ion arsenate) Đề phịng trường hợp mẫu thử có S2-, tạo khí H2S bay lên khí gặp Hg2+ cho kết tủa màu nâu đen HgS, làm sai lạc kết thử arsen; đường luồng khí AsH3 đặt nút bơng tẩm chì acetate mỏng, Pb(CH3COO)2 giữ H2S để khí AsH3 qua Dụng cụ thử arsen gồm: xem hình vẽ Cấu trúc dụng cụ thử arsen gồm: (1) Bình phản ứng tạo khí asin: Bình nón nút mài dung tích 100 – 150 ml (2) Nút đón khí tạo màu: ống dẫn khí; bơng tẩm chì acetate; cửa đón khí asin đặt giấy lọc tẩm HgBr2 Nút đón khí phải có cổ mài nhám khớp với cổ bình nón Tiến hành: Dùng hai dụng cụ, đối chiếu - Chuẩn bị trước nút đón khí (nút bơng chì acetate, kẹp giấy tẩm HgBr2); - Bình phản ứng thử: Cân P(g) chất thử (hoặc thể tích dung dịch thử) theo qui định chuyên luận; hòa vào 25 ml nước Thêm 15 ml HCl đậm đặc; ml dung dịch KI 2%; 0,1 ml dung dịch SnCl2 4%; trộn để yên 15 phút - Bình phản ứng đối chiếu: Tương tự bình phản ứng mẫu thử, thay mẫu thử ml dung dịch arsen mẫu ppm, pha loãng nước thành 25ml Để yên 15 phút - Chuẩn bị Zn hạt (khơng As): Mỗi bình phản ứng dùng 5g kẽm hạt Ngâm kẽm vào dung dịch HCl – 10% đến mặt hạt kẽm sáng; vớt ra, rửa ngâm vào nước cất - Lần lượt thả vào bình phản ứng 5g kẽm hạt xử lý mặt, đậy bình nút đón khí chuẩn bị trước Để n cho phản ứng; lắc để giải phóng H vị trí Sau tháo nút đón khí lấy miếng giấy tẩm HgBr2, so sánh màu hai mảnh giấy: thử đối chiếu 61 Yêu cầu: Màu mẩu giấy thử, có, khơng đậm màu mẩu giấy đối chiếu Ghi Bộ dụng cụ thử arsen A: Bình phản ứng B: Ống dẫn khí asin C: Vị trí đặt mẩu giấy tẩm HgBr2 Phương pháp B Nguyên tắc Dùng natri hypophosphite NaH2PO2 để khử As3+ thành arsen nguyên tố, màu nâu: 33NaH2PO2 + 2AsO3 + 3HCl 2As + 3H3PO4 + 3NaCl Cũng dùng KI để chuyển As5+ As3+ Tiến hành Chọn hai ống nghiệm theo qui định: ống thử ống đối chiếu Tiến hành đồng thời - Ống thử: Cân P(g) chất thử (theo qui định chuyên luận), cho vào ống có sẵn ml HCl đậm đặc 5mg KI Thêm ml dung dịch natri hypophosphite (thuốc thử Tilé, PL – 58 DĐVN III) Đun cách thủy hỗn hợp 15 phút, lắc nhẹ Lấy ra, so sánh màu với ống đối chiếu - Ống đối chiếu: Tương tự ống thử, thay mẫu thử 0,5 ml dung dịch mẫu arsen 10 ppm Yêu cầu: Màu nâu ống thử, có, khơng đậm màu ống đối chiếu 62 ... tra tất thiết bị, dụng cụ hóa chất phịng thí nghiệm sau bàn giao cho giáo viên hướng dẫn 12 Sau thực hành, sinh viên phải làm báo cáo kết cho giáo viên hướng dẫn Báo cáo thí nghiệm phải mô tả... Khơng mồi lửa đèn cồn đèn cồn cháy 13 Khi lấy hóa chất pha hóa chất phải đeo trang găng tay cao su DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT SỬ DỤNG TRONG THỰC HÀNH HÓA DƯỢC I DỤNG CỤ ĐO THỂ TÍCH - Nhìn chung, dụng... lượng (X) Hóa chất kỹ thuật X ≤ 99.0% Hóa chất tinh khiết (P) 99.0% ≤ X ≤ 99.9% Hóa chất tinh khiết phân tích (PA) 99.90% ≤ X ≤ 99.99% Hóa chất tinh khiết hóa học 99.990% ≤ X ≤ 99.999% Hóa chất