BÁO CÁO THÍ NGHIỆM CÁC PHƯƠNG PHÁP HÓA SINH HIỆN ĐẠI Bài 1: GIỚI THIỆU VỀ HỢP CHẤT TỰ NHIÊN VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA HỢP CHẤT TỪ LÁ TRÀ KHÔ Kết thí nghiệm STT Tên thí nghiệm Polyphenol FeCl3 Pb(CH3COO)2 Gelatin Stiasny + Formol Catechin + Vanillin + H2O Ankaloid + HCl + Dragendorff Saponin + H2O + Olive Kết + + − ↓ + − − Biện luận kết 2.1 Định tính Polyphenol Tannin Ống 1: Polyphenol + FeCl3 Kết quả: dịch chiết sau nhỏ FeCl chuyển sang màu xanh rêu → có diện polyphenol • Tanin (hay acid tanic), hợp chất polyphenol gặp muối kim loại ( sắt, chì, nhôm, …) tạo phức màu khó tan, nhiều nhóm –OH cho màu • đậm Trong ống 1, nhóm phenol (-OH) tanin tạo phức màu xanh với muối FeCl tạo Fe2+ bị oxit cho màu xanh đen (khi có ánh sáng) • Ống 2: Polyphenol + Pb(CH3COO)2 Kết quả: dịch chiết sau nhỏ Pb(CH3COO)2 → có xuất tủa • Tanin hợp chất polyphenol → có chứa nhiều nhóm –OH gặp Pb 2+ tạo kết tủa Pb(OH)2 Ống 3: Polyphenol + gelatin Kết quả: dịch chiết sau nhỏ vài giọt gelatin → xuất tủa trắng lượng tannin chiết từ trà nên kết thí nghiệm thu tượng tannin tác dụng với gelatin • • 2.2 Phản Gelatin có chất protein (vì sản xuất chủ yếu từ da động vật) Do tanin chứa nhiều nhóm phenol (-OH) → tạo nhiều dây nối hydro với mạch polypeptid protein ứng Stiasny (phân biệt tannin pyrogallic pyrocatechic) Kết quả: xuất kết tủa → tannin pyrogallic • Tanin pyrogallic: Là este glucid, thường glucozơ với hay nhiều axit • trihiđroxibenzencacboxylic Tanin pyrocatechic: Tanin nhóm hình thành ngưng tụ từ đơn vị • flavan-3-ol flavan 3,4-diol Tanin pyrocatechic phản ứng tạo tủa với phức chất formol HCL có cấu tạo từ đơn vị flavan-3-ol flavan 3,4-diol tác dụng acid enzyme không bị thủy phân mà tạo thành chất đỏ tannin phlobaphen Phlobaphen tan • nước nên Tanin pyrocatechic tạo tủa cho HCL vào Tanin pyrogallic bị thủy phân enzyme acid giải phóng phần đường nên tannin pyrogallic tan acid 2.3 Phản ứng Catechin Kết quả: dịch chiết sau bổ sung vanillin HCl đậm đặc xuất màu đỏ đậm → có tannin catechic • • Do chất catechin đun nóng với acid tạo thành phloroglucinol Công thức cấu tạo phloroglucinol 2.4 Định tính alkaloid Kết quả: dịch chiết sau nhỏ thuốc thử Dragendorff xuất màu nâu đỏ → mặt alkaloid dịch chiết • • Alcaloid hợp chất có mặt nguyên tử nito nên có tính base yếu Tính base alcaloid khác tùy theo diện nhóm R Các alcaloid có tính base yếu phải cần môi trường có tính acid mạnh để tạo muối tan • nước Thuốc thử Dragendorff: thuốc thử không phản ứng với hợp chất amino acid, có • thể cho kết dương tính với hợp chất có carbonyl tiếp cách pyron, cinamaldehyd 2.5 Định tính saponin Kết quả: không xuất tủa màu trắng sữa cho dầu oliu vào lượng saponin dịch chiết Tuy nhiên tượng tạo bọt xuất cho nước cất vào ống nghiệm lắc • • Do phân tử saponin lớn có lúc đầu ưa nước đầu kỵ nước Khả tạo phức với cholesterol (thường dùng để định lượng cholesterol kết hợp với cholesterol) gần hoàn toàn TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Nguyễn Văn Đàn, Ngô Ngọc Khuyến, Hợp chất thiên nhiên dùng làm thuốc, NXB Y học Hà Nội, 1999 [2] Nguyễn Hoàng Lộc, Viện Tài nguyên, Môi trường Công nghệ sinh học, Đại học Huế, Sản xuất hợp chất thứ cấp từ nuôi cấy tế bào thực vật [3] https://issuu.com/daykemquynhon/docs/gtchctnchtsh_pqkinh [4] http://doc.edu.vn/tai-lieu/de-tai-nghien-cuu-alkaloid-va-quy-trinh-tach-chiet-mot-sochat-co-ban-chat-la-alkaloid-10223/ [5] https://en.wikipedia.org/wiki/Phloroglucinol ... Dragendorff: thuốc thử không phản ứng với hợp chất amino acid, có • thể cho kết dương tính với hợp chất có carbonyl tiếp cách pyron, cinamaldehyd 2.5 Định tính saponin Kết quả: không xuất tủa màu... không bị thủy phân mà tạo thành chất đỏ tannin phlobaphen Phlobaphen tan • nước nên Tanin pyrocatechic tạo tủa cho HCL vào Tanin pyrogallic bị thủy phân enzyme acid giải phóng phần đường nên... hình thành ngưng tụ từ đơn vị • flavan-3-ol flavan 3,4-diol Tanin pyrocatechic phản ứng tạo tủa với phức chất formol HCL có cấu tạo từ đơn vị flavan-3-ol flavan 3,4-diol tác dụng acid enzyme không