TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI VIỆN CNSH &CNTP Bộ môn: Quản lí chất lượng BÁO CÁO MÔN HỌC KIỂM ĐỊNH VÀ TRUY XUẤT NGUỒN GỐC THỰC PHẨM Đề tài: Các vấn đề gian lận phương pháp kiểm định Melamine sữa Hà Nội, tháng năm 2017 Mục Lục I MỘT SỐ VỤ GIAN LẬN THƯƠNG MẠI SẢN PHẨM SỮA TRÊN THẾ GIƠI VÀ Ở VIỆT NAM Trên giới 1.1 Sữa Trung Quốc chứa melamine Nhắc đến scandal sữa trẻ em vụ bê bối sữa Trung Quốc năm 2008 lớn lịch sử Khi sữa bột trẻ em bị phát nhiễm melamine loại hóa chất dùng ngành công nghiệp, đưa vào sữa làm tăng hàm lượng đạm giả tạo Theo số liệu ước tính, tới tháng 11/2008, vụ việc ảnh hưởng tới 300.000 người, với 54.000 trẻ phải nhập viện bé tử vong tổn thương thận Tuy nhiên, trình thu hồi sản phẩm sữa nhiễm methamine kéo dài tới cuối năm 2010 kết thúc Vụ việc thực tháng 7/2007 tập đoàn Sanlu nhận nhiều đơn khiếu nại từ người tiêu dùng tình trạng trẻ em mắc bệnh dùng sữa bột Sanlu Nhưng hãng lên tiếng lệnh thu hồi sản phẩm độc hại vào tháng 9/2008 có nhiều trẻ nhỏ phải nhập viện với triệu chứng sỏi thận sỏi tiết niệu gây nôn mửa, bí tiểu đau đớn uống sữa bột nhãn hiệu Sanlu thời gian dài Melanin thực tế dùng rộng rãi trong…sản xuất đồ nhựa, đồi chơi trẻ em, đồ dùng gia đình, sàn gỗ, mặt bàn, mặt sàn gỗ… Các nghiên cứu cho thấy kết hợp melamine với cyanuric a-xit (cũng có sữa bột) tạo thành muối tinh thể đóng ống thận nhỏ gây bít tắc, sỏi thận, ảnh hưởng đến tạo tạo nước tiểu gây suy thận, tử vong Một số nghiên cứu súc vật cho thấy melamine có khả gây ung thư Vào năm 2007, melamine phát thức ăn đóng hộp dành cho thú nuôi Nó làm chết số lượng lớn chó mèo suy thận Các nghiên cứu cho thấy melamine có khả hủy hoại hệ thống miễn dịch người Vụ bê bối ảnh hưởng đến nhiều nước có nhập sản phẩm sữa nhiễm bẩn từ Trung Quốc Hiện tượng sữa nhiễm bẩn bị phát 22 công ty Trung Quốc, có công ty lớn Sanlu (Tam Lộc), Mengniu, Yili, vàYashili Vụ việc dấy lên sóng lo ngại an toàn thực phẩm tham nhũng Trung Quốc, gây thiệt hại cho danh tiếng thực phẩm Trung Quốc sản xuất xuất (ít 11 quốc gia ngừng nhập sản phẩm sữa từ Trung Quốc) Tổ chức Y tế Thế giới coi vụ bê bối kiện an toàn thực phẩm lớn mà họ phải đối phó 1.2 Hong Kong thu hồi sữa Wakodo Morinaga Tháng 8/2012, số sản phẩm sữa Nhật Bản Wakodo Morinaga có hàm lượng iốt thấp mức quy định vừa bị Hồng Kông - Trung Quốc thu hồi khiến bà mẹ nuôi nhỏ Việt Nam hoang mang Ngày 9/8/2012, quyền Đặc khu hành Hong Kong (Trung Quốc) thông báo tiến hành kiểm tra y tế trẻ dùng hai loại sữa bột nhãn hiệu Wakodo Morinaga Nhật Bản sản xuất, sau phát sữa có hàm lượng iốt thấp Người phát ngôn Cục Bảo vệ vệ sinh thực phẩm môi trường Hong Kong (FEHD) kêu gọi bậc phụ huynh mua hai sản phẩm sữa bột đưa đến trung tâm y tế để xét nghiệm máu Ước tính có khoảng 2.000 trẻ bị ảnh hưởng sau dùng sữa Wakodo Morinaga thời gian dài FEHD huy động 10 trung tâm y tế hỗ trợ xét nghiệm, đồng thời yêu cầu thu hồi tất sản phẩm sữa mang hai nhãn hiệu sau đợt kiểm tra ngẫu nhiên 14 nhãn hiệu sữa bột cho trẻ em Kết xét nghiệm cho thấy hàm lượng iốt sảm phẩm sữa Wakodo Morinaga chưa 1/3 mức quy định Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), iốt chất dinh dưỡng cần thiết cho phát triển trẻ Theo Trung tâm An toàn Thực phẩm Hong Kong, thiếu hụt ảnh hưởng đến chức tuyến giáp Nếu chức thông thường tuyến giáp bị ảnh hưởng tác động xấu tới phát triển não trẻ sơ sinh Ở Việt Nam 2.1 Chất lượng thành phần sản phẩm sữa không nhãn mác Trong tháng 10/2007, Thanh tra Bộ Y tế phối hợp với số quan chức kiểm tra công ty sữa thuộc địa bàn tỉnh phía Bắc (văn không nêu danh sách công ty nào) Nội dung kiểm tra đánh giá tiêu vệ sinh an toàn thực phẩm Đối với mặt hàng sữa tươi tiệt trùng Vinamilk, Thanh tra Bộ Y tế cho biết: Trong công bố, Công ty Vinamilk ghi “Sữa tươi tiệt trùng không đường nhãn Vinamilk”, nhiên bao bì lưu hành sản phẩm lại ghi “Sữa tươi tiệt trùng nguyên chất” “Như vậy, tên sản phẩm lưu hành không phù hợp với tên sản phẩm ghi công bố” - Thanh tra Bộ Y tế kết luận Đối với mặt hàng sữa tiệt trùng hãng sản xuất nói chung, công bố tiêu chuẩn sản phẩm bao bì ghi thành phần có sữa tươi thực tế kiểm tra hồ sơ sản xuất công ty cho thấy có 33,3% đến 84,2% số mẻ sản phẩm sữa tươi Trong mẻ sản phẩm có sữa tươi, thành phần sữa tươi nguyên liệu thực tế có sản phẩm chiếm từ 2,2% đến 100% Thanh tra kết luận: “Như vậy, việc ghi nhãn thành phần sữa tươi sản phẩm sữa tiệt trùng hầu hết không phù hợp với thực tế hồ sơ sản xuất” Với sản phẩm sữa tiệt trùng nói chung, kết luận Bộ Y tế rõ ràng, chất lượng sản phẩm không đảm bảo chất lượng cam kết Lâu người tiêu dùng sử dụng loại sữa chế từ sữa bột loại sữa khác, tưởng “trong có sữa tươi”, nhãn hồ sơ cam kết với nhà quản lý ghi Còn có thông tin Vinamilk sử dụng hương liệu tổng hợp lại ghi nhãn hương liệu “tự nhiên”, theo tổng giám đốc Vinamilk - bà Mai Kiều Liên, thật hương liệu “giống tự nhiên” theo tiêu chuẩn quốc tế, thành phần hóa học hương liệu “tự nhiên” tổng hợp Nhưng theo tiêu chuẩn VN, loại hương liệu xác định hương liệu tổng hợp Như vậy, sản phẩm bán sản phẩm đăng ký với nhà quản lý cam kết với khách hàng, lẽ vừa không nguyên chất, vừa không tên gọi công bố Rồi Ducth Lady có thành phần sữa tươi thấp thành phần khác bao bì ghi theo thứ tự thành phần “sữa tươi” 2.2 Ghi thể tích không Chẳng hạn, trường hợp hũ yaout Vinamilk có tới hai nhãn dán chồng lên có thông tin khác nhau, sữa Lothamilk ghi hộp dung tích 200ml thực tế chứa 160ml 180ml Lời giải thích ghi sai nhãn mác tận dụng lại bao bì cũ khó lòng người tiêu dùng chấp nhận Chưa xét đến tính trung thực lời giải thích này, riêng xét trình lưu hành sản phẩm, nhà sản xuất lời thông báo trước với khách hàng Lời giải thích đưa khách hàng báo chí phát sản phẩm có vấn đề Và điều trùng hợp khó lòng xảy ngẫu nhiên tất “sai sót nhãn mác” hầu hết theo chiều hướng có lợi cho nhà sản xuất, với chất lượng hấp dẫn, tốt chất lượng thật sản phẩm chứa bao bì 2.3 Thu mua vỏ hộp sữa làm giả sữa Abbott Phòng Cảnh sát điều tra tội phạm trật tự quản lý kinh tế chức vụ (PC46), Công an TP.HCM thu giữ 33 lon sữa thành phẩm mang thương hiệu Abbott Ensure Golod loại 400gram, lon Ensure Gold loại 840gram, 20 lon sữa loại 400, 850 gram Glucerna 100 vò lon loại Ngoài ra, PC46 thu giữ nhiều vỏ hộp, nắp hộp, dụng cụ chuyên dùng để làm giả sản phẩm máy dập nắp giấy bạc, nắp lon sữa Các sản phẩm sữa giả bị phát người trực tiếp làm giả cách thu gom vỏ lon sữa ngoại vựa ve chai Các sản phẩm sữa giả bị phát người trực tiếp làm giả cách thu gom vỏ lon sữa ngoại vựa ve chai địa bàn thành phố, sau làm sạch, mua loại sữa rẻ tiền, không rõ nguồn gốc xuất xứ thị trường để đóng gói, làm giao cho đại lý bán sữa thu lợi Nguy hiểm kẻ làm sữa giả thường mua nguyên liệu, sữa chất lượng, giá rẻ trôi thị trường đóng vào lon sữa hãng II MELAMINE VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH MELAMINE TRONG SỮA Melamine 1.1 Melamine gì? Melamine chất hữu cơ, màu trắng pha lê, khó hòa tan nước Tên khoa học melamine 1,3,5-triazine-2,4,6-triamine, có gọi cyanuramide hay cyanurotriamine, với cấu trúc hóa học gồm nguyên tử carbone, nguyên tử hydrogen nguyên tử nitrogen Trọng lượng phân tử melamine 126; đó, 66% nitrogen Công thức tổng quát C3H6N6 Công thức khai triển: 1.2 Melamine sử dụng Melamine (CAS No.108-78-1) sử dụng trình sản xuất loại nhựa dẻo melamine, đặc trưng cách cho phản ứng với formaldehyde Rất nhiều ngành công nghiệp sử dụng chất này, kể sản xuất hồ, nhựa ép, giấy dán, hợp chất gắn kết, vật liệu bọc chất chống cháy Tại Hoa Kỳ, melamine chất phụ gia thực phẩm gián tiếp sử dụng thành phần kết dính (21CFR 175.105; Cục Lưu trữ Hồ sơ quốc gia Hoa Kỳ, Administration's Electronic Code of Federal Regulations http://www.gpoaccess.gov/ecfr 18/6/2007) Melamine hình thành (như dẫn chất) từ thuốc trừ sâu cyromazine chất có mặt mô động vật, thực vật (JMPR Báo cáo 2006) Nó sử dụng sản xuất bêtông nhằm làm giảm hàm lượng nước, tăng khả chịu lực, hạn chế tạo xốp tăng độ bền bêtông Do sở hữu hàm lượng nitơ cao nên từ năm 50, melamine sử dụng làm phân bón Tuy nhiên, phản ứng thủy phân melamine nên tác dụng đất trồng hạn chế Melamine có mặt thuốc có gốc asen dùng điều trị xoắn trùng Châu Phi Đã từ lâu người ta dùng melamine nguồn cung cấp nitơ protein cho động vật nhai lại (tuy nhiên, quan điểm ứng dụng chưa quán) Một điều cần lưu tâm nhựa melamine thường sử dụng đóng gói thực phẩm người động vật làm nguyên liệu chế tạo dụng cụ ăn uống thìa, dĩa nên melamine xâm nhập từ dụng cụ bao gói hay đồ dùng ăn uống vào thực phẩm với hàm lượng nhỏ (tính phần triệu) Sản phẩm cuối bao gồm phủ máy tính (coutertops), bảng xoá khô (dry erase board), giàn khung, keo dán, dụng cụ gia đình, chất làm cháy chậm Melamine thành phần chất vàng sắc tố 150 (Pigment Yellow 150), chất màu mực nhựa Trừ cố an toàn thực phẩm nay, người tiêu dùng tiếp xúc với melamine mức coi thấp Ngoài mức dư lượng thấp việc chuyển hoá cyromazine, xuất thông qua thâm nhập melamine từ mối hàn thiết bị thực phẩm có tính axit, chẳng hạn nước chanh, nước cam sữa chua nhiệt độ cao Từ nguồn này, ước tính người ta ăn vào lượng melamine khoảng 0,007mg/kg trọng lượng thể/ngày (OECD 1998) 1.3 Melamine ngành công nghiệp thực phẩm Melamine hay cyanurotriamide (C3H6N6) hợp chất hóa học tan nước, hòa nước với bột tạo thành hỗn dịch sánh, trắng đục sữa Đây chất thường sử dụng để sản xuất thành phần plastic (đồ nhựa, keo dán ) Do công thức có lượng nitơ cao (6N), nên xét nghiệm phương pháp đồng vị phóng xạ kết thu tương tự kết thử nghiệm thực phẩm có nồng độ "protein" cao Thực chất nitơ melamine non-protein nitrogen, tức nitơ chất đạm, tác dụng dinh dưỡng chất đạm Vì hàm lượng nitơ cao nên melamine nhà sản xuất "gian dối" đưa vào thực phẩm Cơ sở để họ thực điều phương pháp kiểm tra phương pháp Kjeldahl phương pháp Dumas đo hàm lượng đạm thực phẩm (một số dinh dưỡng) qua việc xác định hàm lượng nitơ Chính melamine dùng để "lừa" phương pháp kiểm tra, lừa quan kiểm tra tất nhiên lừa người tiêu dùng Vậy nhà sản xuất lại đưa melamine vào thực phẩm mà sữa sản phẩm dùng sữa làm nguyên liệu? Câu trả lời ngắn gọn là: để tăng giá sản phẩm Đơn giản lượng protein sữa nhiều nhà sản xuất có lý để tăng giá sữa từ nâng giá sản phẩm lên Ngoài sữa melamine xuất sản phẩm dùng sữa làm nguyên liệu cà rem, sữa chua, kẹo, bánh biscuit, v.v… Đương nhiên, theo nguyên tắc phòng ngừa, thực phẩm không nên hàm chứa melamine Do đó, việc kiểm tra kiểm nghiệm sản phẩm lưu hành thị trường nước ta không tập trung vào sữa mà xem xét đến thực phẩm vừa kể • 1.4 Ảnh hưởng melamine thể Độc tính melamine: Melamine biết đến chất gây hại nuốt, hít hấp thụ qua da Mắt, da đường hô hấp gây kích thích tiếp xúc với melamine, tiếp xúc lâu dài với melamine gây ung thư ảnh hưởng đến phận sinh sản Liều độc melamine cao với LD 50 gr/kg trọng lượng thể Không có số liệu người liên quan đến độc tính melamine Các liệu có sẵn từ công trình nghiên cứu thức ăn chăn nuôi thực chuột đen, chột bạch chó Ảnh hưởng độc chủ 10 • • • yếu thức ăn có melamine chuột loài gặm nhấm tạo thành sỏi thận, phản ứng viêm nhiễm tăng sinh bàng quang(OECD 1998, Melnick cộng 1984; Bingham cộng 2001, IARC 1986) Sự tạo tinh thể melamine nước tiểu ghi nhận loài chó Đi tiểu máu thấy loài gặm nhấm (IUCLID 2000) Mức thấp không gây ảnh hưởng (NOEL) sỏi bàng quang 63mg/kg/ngày nghiên cứu 13 tuần loài chuột (OECD 1998) Các nghiên cứu loài gặm nhấm cho thấy có khác biệt đực bị ảnh hưởng, đực có nhiều khả phát triển sỏi thận (DHSS/NTP) Cũng có khác loài tạo sỏi bàng quang, cho khác biệt chế nhiễm độc Phân tích sỏi bàng quang cho thấy chúng tạo nên melamine axit uric, melamine chất protein, axit uric phosphat (Ogasawara H cộng 1995; OECD 1999) Nhiễm độc melamine thận Hầu hết nghiên cứu thức ăn chăn nuôi thời gian dài động vật không cho thấy nhiễm độc thận Ở chuột cái, nhiên nghiên cứu 13 tuần tìm thấy lớp vôi hoá tiểu quản có liên quan đến liều lượng, sau nghiên cứu năm cho thấy có viêm mãn tính thận (DHSS/NTP) Trong chuột chó, liều melamine cao có đặc điểm chất lợi tiểu, không gây nhiễm độc thận (Lipschitz Stokey, 1945) Khả gây ung thư Việc tạo biểu mô gây ung thư cho bàng quang xuất chuột đồng đực nuôi thức ăn có melamine mức 4500ppm (tương đương với 225mg/kg trọng lượng thể/ngày) 103 tuần, chuột chuột bạch (JMPR 2006) Các khối u có liên quan đáng kể với phát triển sỏi thận (DHHS/NTP 1983) liên quan đến liều lượng cao Melamine không gây độc cho gen ống nghiệm thể sống Cơ quan quốc tế nghiên cứu ung thư WHO kết luận có chứng đầy đủ thử nghiệm động vật tính gây ung thư melamine điều kiện có gây sỏi thận Đối với người chưa có đầy đủ chứng khả gây ung thư (IARC 1999) Độc tính axit cyanuric: Axit cyanuric có độc tính thấp động vật có vú, với liều cho ăn LD50 chuột đồng khoảng 7.700mg/kg trọng lượng thể (OECD 1999) Một số nghiên cứu độc tính ngắn hạn cho thấy làm hỏng mô thận, kể làm giãn nở ống nhỏ thận, hoại tử tăng 11 • sinh biểu mô mạch, làm tăng tế bào ưa kiềm, tăng tế bào neurophil, lắng cặn khoáng xơ hoá Những thay đổi tinh thể muối cyanurate ống dẫn thận (OECD 1999) Mức ảnh hưởng không quan sát (NOAEL) tác động với liều 150mg/kg/ngày (OECD 1999) Ở người, 98% liều axit cyanuric tiết đặn nước tiểu thời gian 24 (Allen cộng 1982) Cyanurate natri thử nghiệm số nghiên cứu dài hạn ngắn hạn chuột loài gặm nhấm Nó không gây tác động độc tố, ung thư gây dị dạng Những ảnh hưởng quan sát chuột loài gặm nhấm liều cao xuất viên sỏi thận, tăng sinh mô mạch bàng quang nghiên cứu thời gian lâu cho thấy dấu hiệu ảnh hưởng đến ống dẫn thận NOAEL cyanurate natri từ nghiên cứu năm loài gặm nhấm 154mg/kg trọng lượng thể/ngày (WHO 2004) Độc tính kết hợp Trong melamine axit cyanuric chất có độc tính cấp thấp, chứng từ vụ dịch suy thận cấp chó mèo năm 2007 tiêu thụ thức ăn dành cho vật nuôi bị nhiễm cho melamine axit cyanuric tiêu hoá gây ảnh hưởng đến thận Trong cố thức ăn cho vật nuôi, việc phân tích thức ăn cho thấy có lượng chất triazin thức ăn bao gồm melaminee axit cyanuric Một nghiên cứu nhỏ mèo nuôi thức ăn với lượng melaminee axit cyanuric với liều ngày tăng có kết có chứng suy thận xuất sỏi thận (Brown cộng sự, 2007; Puschnerr cộng sự, 2007) Điều khẳng định Dobsson cộng (2008), họ thực nghiên cứu chuột cho ăn melamine, ammelamine ammelide (cả hai chất giống melamine), hỗn hợp melamine axit cyanuric hỗn hợp chất Nếu có ammelamine có ammelide không gây ảnh hưởng đến thận, hỗn hợp nói gây ảnh hưởng có hại đến thận tạo sỏi thận Quá trình phân tích khẳng định có melamine axit cyanuric thận Xét nghiệm hiển vi quang phổ thấp tinh thể lấy từ thận mèo chuột khẳng định chúng tinh thể kết hợp melamine axit cyanuric 1.5 Chỉ tiêu cho phép Cục quản lý thực phẩm dược phẩm Hoa Kỳ Cơ quan an toàn thực phẩm Châu Âu (EFSA) tiến hành đánh giá ban đầu năm 2007 Cục Quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ công bố công trình đánh giá 12 tạm thời nguy an toàn melamine chất tương tự xây dựng mức tiêu thụ hàng ngày cho melamine (TDI) 0,63mg/kg trọng lượng thể/ngày (đối với người lớn ) 0,32 mg/kg trọng lượng thể /ngày (đối với trẻ em) EFSA công bố tuyên bố tạm thời khuyến cáo liều 0,5mg/kg trọng lượng thể/ngày tổng melamine chất đồng dạng (ammelaminee, ammelamide, axit cyanuric) Công bố EFSA nguy sức khoẻ có melamine sữa sản phẩm sữa khác dành cho trẻ nhỏ Trung quốc công bố vào ngày 24/9 Những giá trị số liệu dựa nghiên cứu thử nghiệm độc tính melamine Vì chưa có nghiên cứu điều tra độc tính kết hợp melamine axit cyanuric với để đưa mức tiêu thụ cho chất, nên người ta khuyến cáo nên sử dụng giá trị TDI khuyến cáo Giả sử melamine không thêm vào có chủ định mẫu xét nghiệm có melamine sao? Trường hợp melamine từ bao gói, dụng cụ chứa xâm nhập vào thực phẩm với hàm lượng thấp EU quy định lượng melamine cho phép xâm nhập 30mg/kg-1 (giới hạn cho formaldehyde 15mg/kg-1) Còn loại thực phẩm cho gia súc theo quy định Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (Quyết định số 3762/QĐ-BNNCN), thức ăn chăn nuôi nuôi trồng thủy sản có chất melamine vượt ngưỡng 2,5mg/kg bị cấm nhập khẩu, sản xuất kinh doanh lưu hành sử dụng Ngày 12/12/2008, Bộ Y tế Việt Nam ban hành ngưỡng melamine tối đa mg/kg thực phẩm dành cho trẻ 36 tháng tuổi 2,5 mg với thực phẩm khác Xác định hàm lượng Melamine mẫu sữa phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) Sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS_Gas Chromatography Mass Spectometry) phương pháp sắc kí đại với độ nhạy độ đặc hiệu cao, sử dụng nghiên cứu phân tích kết hợp Thiết bị GC-MS cấu tạo thành phần: phần sắc ký khí 13 (GC) dùng để phân tích hỗn hợp chất tìm chất cần phân tích, phần khối phổ (MS) mô tả hợp phần riêng lẽ cách mô tả số khối Bằng kết hợp kỹ thuật này, nhà hóa học đánh giá, phân tích định tính, định lượng có cách giải số hóa chất Ngày nay, người ta ứng dụng kỹ thuật GC-MS nhiều sử dụng rộng rãi ngành y học, môi trường, nông sản, kiểm nghiệm thực phẩm… 2.1 Nguyên tắc Melamine mẫu chiết nước cất- aceonitril Mẫu làm cột chiết pha rắn SPE amino, sau tạo dẫn xuất cột N,OBIS(trimethylsilyl)trifloracetamid(BSTFA)với 1% trimethylclosilan(TMCS) - dẫn xuất Melamine xác định máy sắc kí ghép khối phổ Giới hạn phát phương pháp 50ppb 2.2 Thiết bị dụng cụ Micropipet Lọ đựng mẫu cho máy GC-MS Giấy lọc thô Phễu lọc Tube thủy tinh nút nhám 50, 100, 150 ml Bình định mức 20, 50, 100, 500 ml 14 - Cột chiết pha rắn SPE amino (Strata-NH2 500mg*3ml- phenomenex) Máy sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) có chế độ tiêm mẫu chia/không chia - dòng Cột sắc kí phân tích DB-5MS, đường kính 0.25 mm, bề dày lớp phim - - 0.25µm Cân phân tích số lẻ (chính xác đến 0.1mg) Bếp cách thủy Bể siêu âm Máy lắc vortex Máy cô quay chân không 2.3 Hóa chất thuốc thử Chuẩn melamine (Mr.Ehrenstoefer GmbH) Pyridine (Merck) Dung dịch N,O-bis (trimethylsilyl) trifluoacetamide (BSTFA) với 1% trimethylclosilan (TMCS) Altech-18089 Acetonitril tinh khiết HPLC (Merck) Nước cất lần 2,6 diamino-4-chlropyrimidine (DACP)-Sigma 2.4 Pha chế dung dịch Dung dịch chuẩn Melamine 600 ppm: cân xác 30mg melamine cho vào bình định mức 50ml, thêm khoảng 20ml pyridine Hòa tan hoàn toàn - định mức đến vạch pyridine Dung dịch chuẩn Melamine ppm: cho vào bình định mức dung tích 100ml - 1ml dung dịch chuẩn melamine 600 ppm, định mức đến vạch pyridine Dung dịch chuẩn Melamine 600 ppb: hút 1ml dung dịch chuẩn melamine - 600 ppm cho vào bình định mức 10ml, định mức đến vạch pyridine Dung dịch nội chuẩn 2,6 diamoni-4-chloropirimidine(DACP) 600 ppm : cân xác 30mg DACP cho vào bình định mức 50ml, thêm khoảng 20ml - pyridine Hòa tan hoàn toàn định mức đến vạch pyridine Dung dịch nội chuẩn 2,6 diamoni-4-chloropirimidine(DACP) ppm: hút 1ml dung dịch nội chuẩn DACP 600 ppm cho vào bình định mức 100ml, định mức đến vạch pyridine 15 - Dung dịch nội chuẩn 2,6 diamoni-4-chloropirimidine(DACP) ppb: hút 1ml dung dịch nội chuẩn DACP ppm cho vào bình định mức 10ml, định mức a - đến vạch pyridine 2.5 Tiến hành phân tích Chuẩn bị mẫu Cân 5g mẫu cho vào cốc thủy tinh 50ml Hòa tan mẫu 15ml nước cất - đánh siêu âm mẫu đồng Cho vào bình định mức 50ml định mức đến vạch acetonitril Lọc qua giấy lọc thô Lấy dịch lọc qua cột SPE amino sau : + Hoạt hoá cột ml ethanol (để chảy từ từ không dùng áp suất) Cho ml dung dịch lọc qua cột (để chảy từ từ không dùng áp suất) Sau mẫu qua cột dùng bơm chân không hút cột cho khô hẳn + Dịch chiết qua cột SPE cho vào bình cô quay 50ml Cô quay 700C khô hoàn toàn Sau cho vào bình cô quay 2ml methanol, siêu âm phút, chuyển lượng methanol vào tube 15ml có nắp vặn, đun khí nito thổi kho hoàn toàn dung dịch methanol có chưa melamine Sau thêm vào tube 100 μm pyridine đậy nắp kĩ tránh bay b - Tạo dẫn xuất cho chuẩn mẫu Lấy 100 μm dung dịch chuẩn Melamine 0.6 ppm cho vào tube thủy tinh có nắp vặn 100 μm dung dịch mẫu kiểm tra, thêm 100 μl dung dịch DACP - 600 ppb 400 μl dd BSTFA với 1% TMCS Đậy kín lọ lắc tạo dẫn xuất 700C – 45 phút Lấy để nguội nhiệt độ phòng cho vào lọ đựng mẫu phân tích c - máy GC/MS Phân tích máy sắc kí khí ghép khối phổ GC/MS Cột phân tích: DB-5MS Chế độ tiêm: không chia dòng(splittless) Mở xả khí sau phút Tốc độ chia - 40ml/phút Nhiệt độ buồng tiêm: 2800C Thể tích tiêm: μl 16 - Khí mang: He Tốc độ khí: 1.5ml/phút Áp suất: 17.5 psi Chế độ chạy: đẳng dòng(constant flow) Nhiệt độ ban đầu: 750C Thời gian giữ: phút Bước tăng nhiệt: 150C/phút Nhiệt độ cuối: 3200C Thời gian giữ : phút Nhiệt độ buồng chuyển: 2000C Điều kiện khối phổ: - Năng lượng electron: 70eV Chế độ chạy: toàn phổ từ 40 – 450 amu lựa chọn ion(SIM) với ion 171, - 197, 327, 342 Thời gian mở Felament: sau phút Nhiệt độ tứ cực: 150 0C Nhiệt độ nguồn ion hóa: 2300C Giá trị khuếch đại: 300-500 V  Sơ đồ hoạt động máy sắc kí khí khối phổ 17  • Nguyên tắc hoạt động: Sắc kí khí (GC): - Cửa tiêm mẫu (injection port): microliter dung môi chứa hỗn hợp chất tiêm vào hệ thống cửa Mẫu sau dẫn qua hệ thống hởi khí trơ, thường Helium Nhiệt độ cửa tiêm mẫu nâng lên 300oC để mẫu trở thành dạng khí - Vỏ (oven): phần vỏ hệ thống GC lò nung đặc biệt Nhiệt độ lò dao động từ 40oC 320oC - Cột (column): bên hệ thống GC cuộn ống nhỏ hình trụ dài 30m với mặt tráng loại polymer đặc biệt Các chất • hốn hợp phân tách cách cho chạy dọc theo cột Khối phổ (MS): - Nguồn ion (ion source): Sau qua cột sắc kí khí, hóa chất tiếp tục vào pha khối phổ Các phân tử phải qua luồng electrons chúng bị chia thành mảnh nhỏ tích điện dương Các mảnh gọi ion Điều quan trọng hạt cần trạng thái tích điện qua lọc - Bộ lọc (Filter): ion di chuyển phận khối phổ, dựa khối lượng mà chúng sàng lọc trường điện từ Bộ lọc có khả lựa chọn, tức cho phép hạt có khối lượng nằm giới hạn định qua 18 - Bộ cảm biến (Detector): Thiết bị cảm biến có nhiệm vụ đếm số lượng hạt có khối lượng Thông tin sau chuyển đến máy tính Tại phép tính thực xuất kết gọi khối phổ (mass spectrum) Khối phổ biểu đồ phản ánh số lượng ion với • khối lượng khác qua lọc Máy tính: Bộ phận chịu trách nhiệm tính toán tín hiệu cảm biến cung cấp đưa kết khối phổ 2.6 Xác định tính kết Xác định diện Melamine mẫu , mẫu coi dương - tính với Melamine nếu: Trong phổ phải có diện ion: 171, 197, 327, 342 Thời gian lưu chất phân tích phải trùng với thời gian lưu chất dẫn - xuất Melamine Tỉ lệ ion: 171/327; 197/327; 324/327 mẫu phân tích phải tương ứng với dẫn xuất Melamine Tính hàm lượng melamine mẫu: - Tiêu chuẩn Melamine Y tế < 0.5 ppm Trong đó: Smẫu : diện tích đo máy Snc(chuẩn): diện tích nội chuẩn chuẩn đo máy Schuẩn: diện tích chuẩn 0.6 ppm đo máy Snc(mẫu): diện tích nội chuẩn mẫu đo máy 0.6 : nồng độ chuẩn Melamine(ppm) 0.1 : thể tích pyridine hòa tan mẫu(ml) : thể tích mẫu qua cột chiết pha rắn(ml) 50 : thể tích dung môi pha loãng mẫu 19        Đánh giá phương pháp Ưu điểm: Là phương pháp phân tích melamine đại Độ nhạy độ đặc hiệu cao Dùng chất nội chuẩn làm tăng tính xác cho phân tích Giới hạn phát phương pháp 50 ppb Nhược điểm: Phương pháp dùng chất nội chuẩn nên ảnh hưởng đến hiệu suất thu hồi Với điều kiện Melamine không phân tích sắc kí khối phổ trực tiếp, phải tạo dẫn xuất để phân tích phí phân tích mẫu cao 20 21 III KẾT LUẬN Sự đa dạng mức độ phức tạp ngày tăng sản phẩm sữa thách thức ngành công nghiệp thực phẩm Hành động không trung thực chất lượng nguồn gốc sản phẩm sữa gây nên ảnh hưởng không nhỏ đến niềm tin lợi ích người tiêu dùng Với lí dó, việc xác định kiểm tra chất lượng/ nguồn gốc sản phẩm xem có bị pha trộn hay giả mạo thay đổi phẩm cấp hay không việc cần thiết Melamine chất độc nguy hiểm bị cấm không phép đưa vào thực phẩm Kiểm định có mặt sữa sản phẩm khác việc cần thiết Ta sử dụng nhiều phương pháp khác để tiến hành việc kiểm định, GC/MS phương pháp nhanh chóng cho kết xác 22 Tài liệu tham khảo 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) Nguyễn Thị Minh Tú (chủ biên), Hoàng Quốc Tuấn, Nguyễn Thị Thảo, Nguyễn Hoàng Dũng, Vũ Hồng Sơn, Đỗ Biên Cương, Trương Quốc Phong, Giáo trình Kiểm định truy xuất nguồn gốc thực phẩm, NXB Bách Khoa Hà Nội, 2016 Quyết định số 38/2008/QĐ-BYT Bộ Y tế : Về việc ban hành “Quy định mức giới hạn tối đa melamine nhiễm chéo thực phẩm” Luận văn: “Xác định hàm lượng melamine thực phẩm”- môn công nghệ thực phẩm, trường đại học Cửu Long (http://luanvan.net.vn/luanvan/tieu-luan-xac-dinh-ham-luong-melamine-trong-thuc-pham-47654/) www.tusach.thuvienkhoahoc.com/Melamine:_Ứng_dụng_và_tác_hại http://tailieu.vn/doc/tieu-luan-xac-dinh-ham-luong-malamine-trong-thucpham-1320572.html http://doc.edu.vn/tai-lieu/tieu-luan-melamine-49443/ http://luanvan.net.vn/luan-van/tieu-luan-phan-tich-khoi-pho-72459/ http://luanvan.net.vn/luan-van/do-an-tim-hieu-ve-sac-ky-khi-ghep-khoi-pho74007/ http://www.nguyeninvestment.com/luan-van/tieu-luan-xac-dinh-ham-luongmelamine-trong-thuc-pham-47654/ 10) http://agro.gov.vn/news/tID1562_Vu-sua-tuoi-Sai-nhan-mac-hay-gianlan-thuong-mai.html 11)http://thuvienso.bvu.edu.vn/bitstream/TVDHBRVT/10573/2/000000CVv 225S102007062.pdf 23 ... lý bán sữa thu lợi Nguy hiểm kẻ làm sữa giả thường mua nguyên liệu, sữa chất lượng, giá rẻ trôi thị trường đóng vào lon sữa hãng II MELAMINE VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH MELAMINE TRONG SỮA Melamine. .. Melamine chất độc nguy hiểm bị cấm không phép đưa vào thực phẩm Kiểm định có mặt sữa sản phẩm khác việc cần thiết Ta sử dụng nhiều phương pháp khác để tiến hành việc kiểm định, GC/MS phương pháp. .. xác định hàm lượng nitơ Chính melamine dùng để "lừa" phương pháp kiểm tra, lừa quan kiểm tra tất nhiên lừa người tiêu dùng Vậy nhà sản xuất lại đưa melamine vào thực phẩm mà sữa sản phẩm dùng sữa