Đang tải... (xem toàn văn)
Histon có hai dạng tồn tại là acetyl hóa hoặc deacetyl hóa được chuyển hóa qua nhau nhờ 2 enzym là histon acetyltransferase (HAT) và histon deacetylase (HDAC). Ở dạng acetyl hóa dưới xúc tác của HAT, điện tích dương nhóm εNH2 của lysin ở đầu N của histon bị trung hòa, NST được tháo xoắn, quá trình phiên mã được xảy ra 16. Ngược lại, ở dạng deacetyl hóa dưới tác dụng của HDAC, histon tích điện dương lớn ở đầu N, tương tác mạnh với ADN, đóng xoắn NST, ngăn cản quá trình phiên mã 15 (xem hình 1.1). 1.1.2. Phân loại các HDACHiện nay, các nhà khoa học đã xác định được 18 loại HDAC có mặt ở con người và chúng được chia thành 4 nhóm 7, 8, 29: Nhóm I: HDAC1, HDAC2, HDAC3, HDAC8. Nhóm II: HDAC4, HDAC5, HDAC6, HDAC7, HDAC9, HDAC10. Nhóm III: Sirtuin 17. Nhóm IV: HDAC11.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BỘ MÔN HÓA DƯỢC TỔNG HỢP MỘT SỐ NHYDROXYBUTANAMID/PENTAN AMID MANG KHUNG 1-(TRIAZOL-4Người hướng dẫn YL)METHYLINDOLIN-2-ON NCS Đỗ Thị Mai Dung PGS.TS Phan Thị Phương HƯỚNG TÁC DỤNG Dung KHÁNG Sinh viên thực1hiện NỘI DUNG CHÍNH Đặt vấn đề tổng quan Nội dung phương pháp nghiên cứu Thực nghiệm, kết bàn luận Kết luận kiến nghị ĐẶT VẤN ĐỀ - TỔNG QUAN Hoạt động enzym HDAC HAT Cấu trúc trung tâm hoạt động enzym HDAC Cấu trúc trung tâm hoạt động HDAC Cấu trúc chung chất ức chế HDAC Tham gia nhận diện bề mặt amino acid enzym Tương tác với kênh, giúp chất cố định kênh enzym Tương tác với Zn2+ trung tâm hoạt động HDAC Phân loại chất ức chế HDAC Các thuốc FDA phê duyệt Belinostat (2014) Panobinostat (2015) Nghiên cứu tổng hợp acid hydroxamic nước giới Oanh D.T.K (2011) Chen (2008) Zhang Z (2016) Thay đổi nhóm nhận diện bề mặt Hoạt tính sinh học dẫn chất mang khung triazol [1] [1] Wim D., Vasiliy A B., (2015) “Chemistry of 1,2,3-triazoles”, Springer Vai trò vòng triazol nghiên cứu phát triển thuốc NC Chen (2008) [2]: Bền mặt hóa học Tăng tương tác với acid amin cổng vào túi thân dầu Momen lưỡng cực lớn Cải thiện dược động học Tăng tính chọn lọc HDAC [2] Chen P.C., et al (2008), “Synthesis and structure-activity relationship of histone deacetylase (HDAC) inhibitors with triazole-linked cap group”, Bioorganic & medicinal chemistry, 16(9), pp.4839-4853 IC50? - Theo FDA, IC50 định nghĩa nồng độ thuốc cần thiết để gây 50% tác dụng ức chế phép thử in vitro - FDA: “IC50 represents the concentration of a drug that is required for 50% inhibition in vitro’’ Nhiệt độ sôi số dung môi thông thường Dung môi DCM MeOH EtOH Nhiệt độ sôi (oC) 39,6 64,7 78,4 MeCN DMF Ethyl acetat 82 153 77,1 Chất chưa công bố tài liệu nào? - Bộ môn nhờ sử dụng SciFinder, database cập nhật chất giới để xác định - Một số khung chất môn đăng ký quyền Thử tác dụng ức chế HDAC-2 + Bước 1: Enzym HDAC-2 ủ với KBH-A42 nhiều nồng độ khác 37oC 30 phút với có mặt chất HDAC có gắn huỳnh quang Thí nghiệm tiến hành lần + Bước 2: Thêm 50 µL HDAC assay developer (tạo chất phát huỳnh quang hỗn hợp phản ứng) (2x) vào lô Để nhiệt độ phòng 15 phút + Bước 3: Đọc kết độ hấp thụ máy đo hấp thụ huỳnh quang, bước sóng kích thích 350-360 nm bước sóng phát quang 440-460 nm (độ hấp thụ đo lần bước sóng) - Kết độ hấp thụ đưa vào phần mềm excel tính toán thu phần trăm trung bình mẫu thử gắn với HDAC Phần trăm chuyển sang phần mềm GraphPad prism (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) để tính toán IC50 Độ lệch chuẩn tương đối không 10% KBH-A42: N-hydroxy-3-(2-oxo-1-(3-phenylpropyl)-1,2,5,6-tetrahydropyridin-3-yl)propanamid Thử tác dụng kháng TB ung thư - Dựa khả gắn thuốc nhuộm với acid amin protein tế bào, sử dụng phương pháp đo màu để tính tổng lượng protein, từ suy số lượng tế bào - Giá trị IC50 nồng độ mẫu thử mà độ hấp thụ giảm 50% so với nhóm chứng (trắng âm tính giếng thêm môi trường nuôi cấy), kết cuối giá trị trung bình lần đo độc lập với độ khác không 5% Dòng TB HeLa - Tế bào HeLa loại tế bào thuộc dòng tế bào bất tử, phân lập từ tế bào ung thư cổ tử cung ngày tháng năm 1951 từ Henrietta Lacks, bệnh nhân qua đời ung thư vào ngày tháng 10 năm 1951 - Dòng tế bào HeLa ổn định tăng sinh mạnh - dòng tế bào “bất tử” theo nghĩa chúng phân chia không giới hạn trình nuôi cấy tế bào phòng thí nghiệm đảm bảo điều kiện cho tế bào sống (tức trì ổn định môi trường nuôi phù hợp) - Các tế bào tăng sinh nhanh chóng lạ thường chí so sánh với dòng tế bào ung thư khác Cũng giống dòng tế bào ung thư khác, tế bào HeLa có dạng hoạt động enzym telomerase trình phân chia tế bào, điều ngăn chặn việc bị làm ngắn lại đầu telomere mà nguyên nhân gây trình lão hóa cuối chết tế bào Bằng cách này, tế bào ung thư tránh giới hạn Hayflick, điểm giới hạn số lần tế bào phân chia mà hầu hết tế bào trải qua trước trở nên lão hóa Cơ chế phản ứng CƠ CHẾ PHẢN ỨNG 1, Chậm δ- δ- Nhanh Trạng thái chuyển tiếp Cơ chế phản ứng CƠ CHẾ PHẢN ỨNG CLICK [5] [5] Hein J.E., Fokin V.V (2010), “Copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAC) and beyond: new reactivity of copper (I) acetylides”, Chemical Society Reviews, 39(4), pp.1302-1315 Cơ chế phản ứng CƠ CHẾ PHẢN ỨNG CLICK[6] [6] Guy B., et al (2015) “Isolation of bis(copper) key intermediates in Cu-catalyzed azide-alkyne “click reaction””, Science Advances, pp 2375-2548 Cơ chế phản ứng CƠ CHẾ PHẢN ỨNG Cơ chế phản ứng CƠ CHẾ PHẢN ỨNG TẠO OXIM Tác dụng chất ức chế HDAC (HDACi) ROS HDAC HDACi Vai trò HDAC HDACi Hoạt tính chống ung thư dẫn chất mang khung triazol NC Reedijk (2002) [3]: Cisplatin (1978) Độc tính tế bào tăng 18 lần so với Cisplatin [3] Reedijk J et al (2002), “Journal of American Chemical Society” 124 (17), pp 4738-4746 86 ...NỘI DUNG CHÍNH Đặt vấn đề tổng quan Nội dung phương pháp nghiên cứu Thực nghiệm, kết bàn luận Kết luận kiến nghị ĐẶT VẤN ĐỀ - TỔNG QUAN Hoạt động... BÀN LUẬN Hóa học - Tổng hợp hóa học Kiểm tra độ tinh khiết Khẳng định cấu trúc Thử tác dụng sinh học - Thử tác dụng ức chế HDAC-2 - Thử hoạt tính kháng tế bào ung thư in vitro 15 Tổng hợp hóa. .. N-hydroxy-4-(4-((3-(hydroxyimino)-2oxoindolin-1-yl)methyl)-1H-1,2,3-triazol-1-yl)butanamid dẫn chất Thử tác dụng ức chế HDAC độc tính tế bào chất tổng hợp 13 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Hóa học - Tổng hợp hóa học Kiểm tra độ tinh khiết Khẳng định cấu trúc Thử tác dụng sinh