BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU N NT Ư N NGHIÊN CỨU T ÀN VÀ T C DỤN N N CC C C ẠC (Leea rubra ) LUẬN ÁN TIẾN Ĩ DƯỢC H C HÀ NỘI - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU N NT Ư N NGHIÊN CỨ T ÀN N T C DỤN N CC C VÀ C ẠC (Leea rubra ) LUẬN ÁN TIẾN Ĩ DƯỢC H C Chuyên ngành: Dược h c cổ truyền Mã số: 62 72 04 06 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TSKH Nguyễn Minh Khởi PGS.TS HÀ NỘI - 2017 T T LỜ C M ĐO N Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng hướng dẫn khoa học PGS.TSKH Nguyễn Minh Khởi PGS.T hư ng Thi n Thư ng Các số li u, kết nêu luận án trung thực chưa công bố công trình khác Tôi xin chịu trách nhi m nghiên cứu Tác giả N ễ T LỜI CẢM N Luận án tiến sĩ thực hi n Vi n Dược li u hướng dẫn khoa học PGS.TSKH Nguyễn Minh Khởi T hư ng Thi n Thư ng Tôi xin bày tỏ lòng biết n sâu sắc tới thầy định hướng nghiên cứu, tận tình hỗ trợ, bảo, giúp đỡ, tạo điều ki n thuận lợi cho hoàn thành luận án Tôi xin trân trọng cảm n nhà khoa học, tác giả công trình khoa học trích dẫn luận án cung cấp nguồn tư li u quý báu, kiến thức liên quan trình nghiên cứu hoàn thành luận án Tôi xin trân trọng cảm n Ban lãnh đạo, Khoa, hòng đồng nghi p Vi n Dược li u, Trường Đại học Dược Hà Nội, Vi n Hàn lâm Khoa học Công ngh Vi t Nam, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên-Đại học Quốc gia Hà Nội nhi t tình giúp đỡ, tạo điều ki n cộng tác để giúp hoàn thành công trình Tôi xin bày tỏ lòng cảm n tới G T Nguyễn Thị Bích Thu, TS Nguyễn Thùy Dư ng, Ths Vũ Văn Tuấn có ý kiến đóng góp quý báu giúp hoàn thi n luận án Cuối xin cảm n người thân yêu gia đình, cảm n bạn bè thân thiết dành cho tình cảm, động viên chí tình suốt thời gian qua N ễ T MỤC LỤC Mục lục Danh mục ký hi u, chữ viết tắt Danh mục hình, bảng Trang TÀI LIỆU THAM KHẢO Đ T V N Đ C Ư N T N N 1.1 TH C V T HỌC Leea Royen ex L Vị trí phân loại chi Leea Đ c điểm thực vật chi Leea hân bố chi Leea ác loài thuộc chi Leea phân bố Vi t Nam 10 1.1.2 V trí phân lo m th c v t, phân b sinh thái c rubra Blume ex Spreng 12 1.1.2.1 Vị trí phân loại Gối hạc 12 Đ c điểm thực vật Gối hạc 12 1.1.2.3 Phân bố sinh thái Gối hạc 13 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 13 1.2.1 Thành phần hóa học c a chi Leea 13 1.2.1.1 Các hợp chất triterpenoid 14 1.2.1.2 Các hợp chất flavonoid 17 1.2.1.3 Các acid phenolic 20 1.2.1.4 Tinh dầu 22 1.2.1.5 Các nhóm hợp chất khác 23 1.3 CÔNG DỤNG VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI LEEA 24 1.3.1 Công dụng c a loài thuộc chi Leea y học cổ truyền 24 1.3.2 Tác dụng sinh học c a cao chiết s hợp chất phân l ược từ loài thuộc chi Leea 26 1.3.2.1 Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm, trừ giun sán 26 1.3.2.2 Tác dụng chống oxy hóa 27 1.3.2.3 Tác dụng độc tế bào chống ung thư 28 1.3.2.4 Tác dụng chống tạo sỏi 29 1.3.2.5 Tác dụng chống viêm, giảm đau 29 1.3.3 Một s công dụng tác dụng sinh học c a G i h c Leea rubra Blume ex Spreng 30 1.3.3.1 Tính vị, tác dụng 30 1.3.3.2 Công dụng 30 1.3.3.3 Tác dụng sinh học 31 C Ư N Đ TƯỢN VÀ 2.1 ĐỐI TƯ NG NGHIÊN Ư N N N CỨ 33 U 33 33 ộ 33 ấ , dung môi 33 2.2 HƯƠNG H P NGHIÊN 2.2.1 Nghiên c U 34 ề ọ 34 ề ọ 34 hư ng pháp định tính 34 hư ng pháp phân lập hợp chất 35 hư ng pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất 35 Định lượng số hợp chất phân lập từ Gối hạc 36 ụ ượ 38 2.2.3.1 Mẫu nghiên cứu 38 Thiết bị s dụng nghiên cứu tác dụng sinh học 39 Đánh giá tác dụng chống oxy hóa 39 Đánh giá tác dụng ức chế hoạt động enzym xanthin oxidase 41 Đánh giá tác dụng chống viêm 41 Đánh giá tác dụng giảm đau 46 Th hoạt tính ức chế n ym prot as HIV- cao chiết số hợp chất trit rp n phân lập từ dược li u Gối hạc 48 CHƯ N 49 ẾT ẢN N CỨ 50 3.1 TH C V T HỌC 50 ọ 3.1.1 Thẩ 50 50 ọ 53 Đ c điểm vi phẫu thân 53 3.1 Đ c điểm vi phẫu 54 Đ c điểm giải phẫu rễ 55 m ược li u 56 3.1.4.1 Đ c điểm bột thân 56 3.1.4.2 Đ c điểm bột 57 Đ c điểm bột rễ 58 3.2 TH NH HẦN H A HỌC 58 nh tính nhóm chất hữ 58 3.2.2 Chiết xuất phân l p hợp chất 60 3.2.2.1 Chiết xuất phân lập hợp chất từ Gối hạc 60 3.2.2.2 Chiết xuất phân lập hợp chất từ thân Gối hạc 64 X nh cấu trúc hóa học c a hợp chất phân l p từ G i h c 65 ượng hợp chất phân l ược từ ược li u G i h c 106 3.2.4.1 Khoảng tuyến tính phư ng trình đường chuẩn 106 Đánh giá phư ng pháp phân tích 107 Định lượng acid gallic europetin-3-O-α-L-rhamnopyranosid mẫu dược li u Gối hạc 108 3.3 T C DỤNG SINH HỌC 110 3.3.1 Tác dụng ch ng oxy hóa 110 3.3.2 Tác dụng c chế ho ộng c a enzym xanthin oxidase 111 3.3.3 Tác dụng ch ng viêm 111 3.3.3.1 Tác dụng chống viêm in vitro 111 3.3.3.2 Tác dụng chống viêm in vivo 113 3.3.4 Tác dụng giả a cao G i h c 116 3.3.4.1 Tác dụng giảm đau trung ng cao Gối hạc mô hình mâm nóng 116 3.3.4.2 Tác dụng giảm đau ngoại vi cao Gối hạc mô hình gây đau qu n acid acetic 117 ụ ế - ế ột s hợp chấ ượ ược li u G i h c 119 C Ư N ÀN ẬN 121 4.1 VỀ TH C V T HỌC 121 4.2 VỀ HÓA HỌC 122 4.2.1 Kết nh tính 123 4.2.2 Kết phân l 4.2.3 Kết nh cấu trúc c a hợp chất 123 ượng hợp chất phân l ược từ ược li u G i h c 134 4.3 VỀ TÁC DỤNG SINH HỌC 134 4.3.1 Về tác dụng ch ng oxy hóa 135 4.3.2 Về ho t tính c chế ho ộng enzym xanthine oxidase 136 4.3.3 Về ho t tính c chế ho ộng enzym 5-lipoxygenase 137 4.3.4 Về ho t tính c chế ho ộng COX 138 4.3.5 Về tác dụng giả 140 4.3.6 Về tác dụng ch ng viêm in vivo 142 4.3.7 Về ho t tính c chế protease HIV-1 146 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGH 149 KẾT LU N 149 Về th c v t học 149 Về hóa học 149 Về tác dụng sinh học 150 KIẾN NGHỊ 151 TÀ Ệ T M ẢO CÁC CÔNG TRÌNH CÔNG B PHỤ LỤC N N ĐẾN LUẬN ÁN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, TỪ VIẾT TẮT ARV: Anti retroviral drug therapy ABTS: 2,2’- azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) APCI-MS: Atmospheric Pressure Chemical Ionization Mas Spectrometry (Phổ khối lượng ion hóa hóa học áp suất khí quyển) BuOH: Butanol CD: Circular Dichroism (Phổ lưỡng sắc tròn) COSY: Correlation Spectroscopy COX: Cyclooxygenase (COX-1; COX-2) DEPT: Distortionless Enhancement by Polarization Transfer DMSO: Dimethylsulfoxid DPPH: 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl ESI-MS: Electron Spray Ionization Mass Spectrometry (Phổ khối lượng ion hóa phun n t ) EtOAc: Ethyl acetat EtOH: Ethanol GHL: Cao ethanol chiết từ Gối hạc GHR: Cao ethanol chiết từ rễ Gối hạc GHT: Cao ethanol chiết từ thân Gối hạc HIV: Human Immunodeficiency Virus HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Correlation HPLC: High Perfomance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hi u cao) HSQC: Heteronuclear Single Quantum Coherence Hx: n-Hexan IC50: Inhibitory Concentration 50% (Nồng độ ức chế 50%) IL: Interleukin 72 PH COSY 73 74 PH MS 75 PHỤ LỤC 11 CÁC PH C A CH T S ông thức cấu tạo chất số 20 (stigmast-4-en-3,6-dion) 76 20 PH PH IR H-NMR 77 PH 13 C-NMR 78 PH DEPT 79 PH MS 80 PHỤ LỤC 12 CÁC PH C A CH T S ông thức cấu tạo chất số 21 (goniothalamin) 81 21 PH IR PH CD 82 PH H-NMR 83 PH 13 C-NMR 84 PH DEPT 85 PH MS 86 ... hình thái vi học Gối hạc Nghiên cứu thành phần hóa học : Định tính, phân lập, xác định cấu trúc hóa học số hợp chất từ Gối hạc Nghiên cứu tác dụng sinh học: Đánh giá số tác dụng sinh học cao chiết... nhiên, vi c s dụng chủ yếu dựa theo kinh nghi m dân gian Rất nhiều thuốc chưa nghiên cứu thực vật, thành phần hóa học chứng minh tác dụng sinh học Cây Gối hạc có tên khoa học Leea rubra Blume ex Spreng. ,. .. nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học thuốc Gối hạc nước ta giới Nhằm tạo c sở khoa học cho vi c giải thích công dụng Gối hạc y học cổ truyền góp phần làm phong phú thêm tri thức khoa học