Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Công trình ñược hoàn thành HUỲNH XUÂN ĐÀO NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN VÀ CẤU TẠO MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG CỦ NGHỆ ĐEN Ở HUYỆN VĨNH THẠNH, TỈNH BÌNH ĐỊNH Chuyên ngành: Hoá hữu ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: GS.TS ĐÀO HÙNG CƯỜNG Phản biện 1: PGS TS PHẠM VĂN HAI Phản biện 2: GS TSKH TRẦN VĂN SUNG Mã số: 60 44 27 Luận văn ñược bảo vệ Hội ñồng chấm luận văn tốt nghiệp TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC thạc sĩ khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 25 tháng 08 năm 2011 Người hướng dẫn khoa học: GS.TS.ĐÀO HÙNG CƯỜNG * Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thông tin - Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Thư viện trường Đại học sư phạm, Đại học Đà Nẵng Đà Nẵng - Năm 2011 Footer Page of 126 Header Page of 126 bụng, gan lách sưng to, kinh bế ăn uống không tiêu Ở Inñonesia, MỞ ĐẦU Malayxia dùng sắc nước cho phụ nữ uống sau sinh, trị ho, hen suyễn, trị vảy da trị gàu Curcuma aromatica có công dụng giá trị Lý chọn ñề tài thiết lập ổn ñịnh tuần hoàn máu ñiều trị ung thư y học ñại Curcuma xanthorrhiza ñược dân gian sử dụng Ngày nay, giới ñang hướng tới sản xuất xanh, bền ñiều trị bệnh dày, rối loạn tiêu hóa, táo bón, tiêu chảy, kiết lị, sốt vững thân thiện với môi trường Việc nghiên cứu chất có tính rét, trĩ, ói mửa Đặc biệt có giá trị ñược nghiên cứu nhiều kháng khuẩn, kháng sinh, mang hoạt tính sinh học có loài hợp chất Curcumin củ nghệ với tác dụng hữu ích, mở cỏ ñã ñang vấn ñề quan tâm toàn xã hội ñặc biệt hứa hẹn tốt ñẹp việc ñiều trị bệnh hiểm nghèo ngành khoa học nước giới Ở nước ta Trên giới công trình nghiên cứu củ nghệ ñen ñã có nhiều công trình nghiên cứu thành phần cấu tạo (Curcuma zedoaria Rosc.) cho thấy hợp chất tecpen tinh hợp chất cỏ, thảo mộc ñã xác ñịnh ñược chất có dầu có tính kháng khuẩn, chống lại phát triển tế bào gây ung hoạt tính sinh học cao, ứng dụng tích cực ñến ngành công nghiệp thư người dược phẩm, thực phẩm mỹ phẩm, song chưa ñáp ứng ñủ nhu cầu sử dụng thực tế Theo Tây y, nghệ ñen có tác dụng kích thích tiết mạch, thông mạch giảm cholesterol huyết, chống viêm, giảm huyết áp Chi nghệ (Curcuma) thuộc họ Zingiberaceae loài thảo Ở huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định, nghệ ñen mọc hoang phân bố rừng hầu khắp Việt Nam nhiều nước giới, nhiều rừng, với nạn phá rừng làm nương rẫy thảo dược ñộc tính, gia vị lại ñộc ñáo mang tính truyền ngày có nhiều hồ thủy lợi, thủy ñiện ñược xây dựng ñã tàn phá thống nên nghệ ñã trở thành thuốc quý, gần gũi ñời sống ñáng kể diện tích phân bố thuốc quý Hiện ñã có hàng ngày số người dân ñem nghệ ñen trồng ñể làm thuốc gia ñình Các công trình nghiên cứu gần ñây cho thấy nghệ tác dụng tốt xay thành bột bán quy mô nhỏ lẻ Trong ñó tới nhiều hệ thống quan thể chống oxy hóa, ñiều trị nghệ ñen phát triển tốt ñây, thị trường nghệ ñen có giá khối u, ung thư, HIV, chống dị ứng, chống thụ thai, có tác dụng trị kinh tế Vì “Nghiên cứu thành phần cấu tạo số hợp kháng khuẩn, kháng nấm, trị vết thương chống viêm nhiễm, chữa chất củ nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định" viêm loét dày, hành tá tràng, ăn không tiêu, nôn mửa, ho Công cần thiết, nhằm bảo vệ, khai thác sử dụng loài dụng nghệ ñược người dân phát ngày nhiều gia cách khoa học, có hiệu vị hay thuốc chữa bệnh truyền thống Thân rễ rễ Curcuma Đối tượng nghiên cứu aeruginosa Trung Quốc, người ta dùng thân rễ ñể trị ứ huyết ñau Footer Page of 126 Thân rễ (củ) nghệ ñen (Curcuma zedoaria Rosc.) huyện Vĩnh Header Page of 126 Thạnh, tỉnh Bình Định chiết phương pháp sắc kí khí - khối phổ liên hợp (GC/MS) Mục ñích nội dung nghiên cứu - Tách curcumin từ nghệ ñen phương pháp kiềm hóa - Xác ñịnh tên khoa học loài nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định - Tách curcumin từ củ nghệ ñen phương pháp kiềm hóa - Chiết soxhlet thân rễ dung môi n-hexan xác ñịnh thành phần hóa học dịch chiết phương pháp sắc kí khí - khối phổ liên hợp (GC/MS) - Xác ñịnh thành phần hóa học, hàm lượng chất có tinh dầu dịch chiết dung môi n-hexan từ thân rễ loài - Thăm dò hoạt tính sinh học tinh dầu, dịch chiết n-hexan Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định a Ý nghĩa khoa học Cung cấp số tư liệu nghiên cứu loài nghệ ñen huyện - So sánh thành phần hóa học, hàm lượng chất có tinh dầu loại dịch chiết từ thân rễ nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, Vĩnh Thạnh: tỉnh Bình Định với nghiên cứu nghệ ñen nước - Xác ñịnh tên khoa học loài nghệ ñen (Curcuma zedoaria Rosc.) giới ñã công bố - Xác ñịnh hàm lượng, thành phần hóa hoc số axit, - Thăm dò hoạt tính sinh học tinh dầu dịch chiết n- este tinh dầu thân rễ hexan loài nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định Phương pháp nghiên cứu - Xác ñịnh thành phần hóa học dịch chiết từ thân rễ dung môi n-hexan a Nghiên cứu lý thuyết Phương pháp nghiên cứu hợp chất tự nhiên, tổng quan tài liệu ñặc ñiểm hình thái thực vật, thành phần hóa học, ứng dụng - Thăm dò hoạt tính sinh học tinh dầu dịch chiết dung môi n-hexan thân rễ từ ñó thấy ñược hoạt tính sinh học công dụng chúng thuộc chi Curcuma gần giống với ñối tượng nghiên cứu b Ý nghĩa thực tiễn Dùng kết nghiên cứu ñể giải thích số ứng dụng chữa b Nghiên cứu thực nghiệm - Xác ñịnh tên khoa học cây: Đối chiếu với tài liệu, so bệnh nghệ ñen dân gian Từ ñó khuyến khích sánh với mẫu tiêu bản, nhờ chuyên gia thực vật ñịnh tên khoa học người dân trồng rộng rãi ñể làm nguyên liệu dùng làm thuốc chữa loài nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định bệnh - Phương pháp lấy mẫu xử lý mẫu Bố cục luận văn - Xác ñịnh thông số vật lý bột củ nghệ ñen Luận văn gồm phần: Phần mở ñầu, chương 1.Tổng quan tài - Tách tinh dầu phương pháp chưng cất lôi nước liệu, chương Thực nghiệm, chương Kết nghiên cứu thảo - Xác ñịnh số vật lý: số khúc xạ, tỉ khối tinh dầu luận - Phân tích, ñịnh danh thành phần hóa học có loại dịch Footer Page of 126 Header Page of 126 kham (Thái Lan); Nghệ rừng, Nghệ trắng (Việt Nam) CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 SƠ LƯỢC VỀ PHÂN LOẠI THỰC VẬT CHI CURCUMA VÀ TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU CHI CURCUMA 1.1.1 Sơ lược phân loại thực vật chi Curcuma Họ Gừng (Zingiberaceae) họ thực vật lớn, 1.1.2.4 Curcuma elata Roxb Tên gọi khác: Giant plume ginger (Anh); Mì tinh rừng (Việt Nam) 1.1.2.5 Curcuma domestica Valet (Curcuma longga L) Tên gọi khác: Common turmeric, Long turmeric (Anh); Safran des Indes (Pháp); Nghệ vàng, Khương hoàng, Uất kim, (Việt Nam) gồm 45 chi, 1300 loài, ñó có nhiều loài ñược dùng làm 1.1.2.6 Curcuma harmandii Gagnep thuốc gia vị [2], [5], [10], [14],[15] 1.1.2.7 Curcuma pierreana Gagnep 1.1.2 Tình hình nghiên cứu chi Curcuma 1.1.2.8 Curcuma rubens Roxb Theo ñược biết ñã có nhiều công trình nghiên cứu nhiều tác giả nước giới thành phần hóa học công dụng loài nghệ Các công trình nghiên cứu cho thấy thành phần hóa học tinh dầu loại nghệ chủ yếu sesquiterpen dẫn xuất chúng, monoterpen chiếm phần nhỏ nhiều, thành phần hóa học thường có khác loài nghệ, phận thực vật, khu vực phân bố, thời ñiểm nghiên cứu hay phương pháp nghiên cứu [2] 1.1.2.1 Curcuma aeruginosa Roxb Tên gọi khác: pink and blue ginger (Anh); Kha dam (Thái Lan); Nghệ xanh, Nghệ ten ñồng (Việt Nam) Tên gọi khác: Nghệ tím 1.1.2.9 Curcuma trichosantha Gagnep 1.1.2.10 Curcuma xanthorhiza Roxb Tên gọi khác: Nghệ rễ vàng 1.2 CÔNG DỤNG CỦA MỘT SỐ CHẤT CHIẾT TÁCH TỪ NGHỆ [2], [8], [33], [37] Theo nghiên cứu ñây, curcumin có hoạt tính chống viêm chất có khả ức chế phản ứng oxi hóa enzym sinh Curcumin triệt tiêu phát triển khối u việc ngăn chặn ñường truyền tính trạng tế bào Các nhà khoa học thuộc Đại học Haward (Mỹ) cho thấy curcumin có tác dụng kháng virus HIV hai thể cấp mãn tính 1.1.2.2 Curcuma angustifolia Roxb tế bào Curcumin dự phòng cải thiện tổn thương Tên gọi khác: Nghệ hẹp dày kích thích sản sinh chất nhầy.Curcumin I có tác dụng ức chế 1.1.2.3 Curcuma aromatica Salisb Tên gọi khác: Yujin (Trung Quốc); Aromatic turmeric, Zellow zeodary, Wildturneric (Anh); Safran des indes (Pháp); Wan nang Footer Page of 126 in vitro phát triển trực khuẩn lao nồng ñô tối thiểu 25µg/ml, có tác dung ức chế salmonella paratyphi 50 µg/ml, trụ cầu vàng 50 µg/ml [2] Header Page of 126 10 Chất (4S,5S)-(+)gemeron-4,6-epoxid trích ly từ nghệ trắng Trong nghệ ñen có từ 1-1,5% tinh dầu, tinh dầu thành (Curcuma aromatica) ñã ñược ñăng ký sáng chế Nhật Bản ñể phần chủ yếu sesquiterpen, sesquiterpen tinh dầu nghệ ñen trị bệnh tiểu ñường Tinh dầu nghệ Curcuma aromatica ñã dùng vào thuộc nhiều nhóm: ñiều trị khối u não ñược phát sớm Các nghiên cứu ñây cho thấy curdion có khả kháng vi nấm Aspergillus niger (MIC 50= µ g/ml) vi khuẩn Staphyococcus aureus (MIC 50 µ g/ml) zederon lại thể hoạt tính kháng Candida albicans (MIC 50 µ g/ml) Cả hai hợp chất ñều ức chế Fusariumoxysporum (MIC 25 µ g/ml) [8] Curzerenon ñồng phân epicurzerenon, furanodienon, isofuradienon ñều chất có tính kháng khuẩn ñã ñược nghiên cứu Nhật Bản qua chiết xuất nghệ xanh (C aeruginosa - Germacram: furanogermenon, curdion, dehydrocurdion, germacron, furanodienon, furanodien, isofuranodienon - Eleman: Zendoaron, curzerenon, epicurzerenon, curzeren - Cadinan: curzeon - Eudesman: curcolon - Guaian: procurcumenol, isocurcumenol, zendoarondiol, zendoarol số thuộc nhóm khác: curcumenon, curcumanolid A, curcumanolid B Tinh dầu sánh, có mùi ñặc biệt, giống mùi thơm dầu Roxb.) Furanodien furanodienon có hoạt tính chống viêm chứng long não, có màu nâu ñen [2] phù tai Đây phát ñầu tiên sesquiterpenoic 1.3.2 Curcumin khung germacron có hoạt tính chống viêm [37] curcumadiol, Curcumin hỗn hợp chất (curcumin I, II, III) Tổng lượng Vanillin xuất làm tăng thêm ức chế phát sinh ñột biến chất có màu (curcumin I, II, III) không lớn 90% Năm 1953, vi khuẩn tế bào loài ñộng vật có vú Nó ñóng Srinivasan K R ñã chứng minh sắc ký cột silic vai chất kháng ñột biến việc sửa ñổi chép ADN curcumin hỗn hợp Trong ñó : curcumin I chiếm 60%, phục hồi hệ thống ADN sau thiệt hại tế bào ADN gây curcumin II chiếm 24% curcumin III chiếm 14% [2] ñột biến xuất Vanillin chất thu dọn gốc Curcumin dạng tinh thể có màu vàng cam Nhiệt ñộ nóng superoxide hidroxyl [33] chảy khoảng 1790C - 1820C curcumin không tan nước 1.3 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CỦ NGHỆ ĐEN [2], [26], ete, tan etanol, axit axetic ñậm ñặc, kiềm, axeton, [28] etylaxetat Thành phần hóa học củ nghệ ñen chứa 82,6%, tinh dầu 1- 1,5%, chất màu, có kim loại Sr, Zn, Cu, Ni, Fe, Mn, Ti, Cr, Pb, Ca, K 1.3.1 Thành phần hoá học tinh dầu loại dịch chiết từ nghệ ñen Footer Page of 126 Header Page of 126 11 12 CHƯƠNG : THỰC NGHIỆM dưới, bầu có lông nhị lép hình giùi (hình 2.2, hình 2.3) Mùa hoa tháng -5 [2] 2.1 NGUYÊN LIỆU 2.1.1 Nguyên liệu Nguyên liệu thân rễ (củ) nghệ ñen (Nga Truật, Bông Truật, Tam Nại) huyện Vĩnh Thạnh tỉnh Bình Định thu hoạch vào tháng 12 năm 2010 Tên khoa học loài nghệ ñã ñược tiến sĩ Nguyễn Văn Tập, thạc sĩ Nguyễn Quỳnh Nga viện dược liệu giám ñịnh Curcuma zedoaria Rosc., thuộc họ gừng (Zinglberaceae) 2.1.2 Đặc ñiểm thực vật khu vực phân bố Nghệ ñen loại thảo cao chừng 1–1,5m Thân rễ hình nón, có vân ngang khía chạy dọc, mang củ hình trụ tỏa theo hình chân vịt, dày nạc, có màu vàng nhạt có vòng màu xám củ già Ngoài củ ra, thân rễ có Hình 2.1 Thân rễ rễ nghệ ñen (Curcuma zedoaria Rosc.) củ phụ hình trứng hay hình lê, màu trắng, có cuống dài mảnh (hình 2.1) Lá hình mũi mác dài 30–60cm rộng 7–8cm dọc theo gân có vệt màu ñỏ kéo dài theo gân lá, mép nghiêng uốn lượn, cuống ngắn hay không có, bẹ dài ôm vào thân phía Sau năm củ cho hoa, cụm hoa hình trụ, dài 20cm, rộng 5cm, mọc từ thân rễ cán bên cạnh thân có lá, thường xuất trước Lá bắc phía màu lục nhạt viền ñỏ mép, hình trứng hay hình mác tù, bắc phía không mang hoa sinh sản màu vàng nhạt, pha hồng ñầu Hoa nhiều màu vàng, ñài hình ống có lông, không ñều, tràng có ống dài gấp lần ñài, thuỳ hình mác, bao phấn kéo dài thành cựa chẽ ngang, trung ñới dạng bảng tròn, ngắn, nhị ñính với nhị lép, cánh môi thắt lại gốc, lõm ñầu, màu vàng, nhị lép dính Footer Page of 126 Hình 2.2 Thân, lá, hoa nghệ ñen (Curcuma zedoaria Rosc.) Header Page of 126 13 14 nước - Chiết cấu tử phân cực dung môi n-hexan soxlet - Tách curcumin phương pháp kiềm hóa 2.2.2 Phương pháp phân tích trọng lượng Áp dụng phương pháp chiết, tách phân tích trọng lượng ñể khảo sát số yếu tố sau: - Khảo sát thời gian chiết tốt cho trình chiết tách cấu tử phân cực dung môi n-hexan - Khảo sát tỷ lệ rắn (gam)/ lỏng (ml) tốt cho trình chiết Hình 2.3 Cụm hoa hoa nghệ ñen (Curcuma zedoaria Rosc.) Nghệ ñen thuộc họ gừng mọc hoang dại, ñược trồng phổ biến Việt Nam ñể làm thuốc Còn mọc Trung Quốc (Phúc Kiến, Quảng Đông, Quảng Tây, Hải Nam, Đài Loan, Vân Nam tức vùng gần Việt Nam), Campuchia, Lào số nước nhiệt ñới khác Ở huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định mọc hoang nhiều rừng Đã có nhiều người dân trồng nghệ ñen ñể làm thuốc gia ñình kinh doanh Cây ñược trồng chủ yếu vào tháng 3, ñược thu hoạch vào cuối tháng 11 ñến ñầu tháng Sau thu hoạch cắt bỏ rễ con, ñồ chín phơi khô, có ñem củ ngâm nước tiểu, hay nước cơm khoảng ngày, sau ñó thái mỏng, phơi khô, cất ñể làm thuốc gia ñình xay thành bột dùng làm thuốc tách cấu tử phân cực dung môi n-hexan - Xác ñịnh hàm lượng tinh dầu, cấu tử phân cực dung môi n-hexan curcumin nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định 2.2.3 Phương pháp vật lý Áp dụng phương pháp vật lý ñể khảo sát số yếu tố sau: - Sắc kí khí khối phổ (GC/MS) ñể xác ñịnh thành phần, cấu tạo hàm lượng số chất tinh dầu cao n- hexan - Xác ñịnh số số vật lý số khúc xạ, tỷ khối, màu sắc, mùi, nhiệt ñộ nóng chảy 2.2.4 Phương pháp chuẩn ñộ thể tích Áp dụng phương pháp chuẩn ñộ thể tích ñể xác ñịnh số số: số axit, số xà phòng, số este 2.2.5 Thăm dò hoạt tính sinh học Tinh dầu thân rễ nghệ ñen cao chiết từ dung môi n-hexan 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM ñược thăm dò hoạt tính sinh học viện Hóa học Việt Nam 2.2.1 Phương pháp chiết tách 2.3 THỰC NGHIỆM - Chiết tinh dầu nghệ ñen phương pháp chưng cất lôi Footer Page of 126 Chúng tiến hành nghiên cứu theo sơ ñồ thực nghiệm hình 2.4 Header Page of 126 15 16 2.3.2.2 Tạo mẫu khô 2.3.3 Xác ñịnh hàm lượng nước củ nghệ tươi ñộ ẩm bột nghệ 2.3.3.1 Xác ñịnh hàm lượng nước củ nghệ tươi 2.3.3.2 Xác ñịnh ñộ ẩm bột nghệ 2.3.4 Hàm lượng tro 2.3.5 Thu, ñịnh lượng tinh dầu, xác ñịnh số vật lý, hóa học, thành phần chất tinh dầu 2.3.5.1 Thu tinh dầu 2.3.5.2 Định lượng tinh dầu 2.3.6 Xác ñịnh số số vật lý tinh dầu nghệ ñen 2.3.6.1 Tỷ khối tinh dầu 2.3.6.2 Chỉ số khúc xạ 2.3.7 Xác ñịnh số hoá học 2.3.7.1 Chỉ số axit 2.3.7.2 Chỉ số este 2.3.8 Định danh cấu tử tinh dầu 2.3.9 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng ñến trình chiết tách chất từ củ nghệ ñen phương pháp chiết soxhlet 2.3.9.1 Khảo sát thời gian chiết cho trình chiết tách chất dung môi n- hexan 2.39.2 Khảo sát tỷ lệ rắn(g)/lỏng(ml) ñến hàm lượng cao n-hexan 2.3.10 Định danh cấu tử cao n-hexan 2.3.11 Tách curcumin kiểm tra sản phẩm Hình 2.4 Sơ ñồ thực nghiệm 2.3.11.1 Tách curcumin 2.3.1 Làm nguyên liệu 2.2.11.2 Thử curcumin phương pháp phân tích ñịnh tính 2.3.2 Tạo mẫu nguyên liệu 2.3.12 Thăm dò hoạt tính kháng sinh 2.3.2.1 Tạo mẫu tươi 2.3.13 Thăm dò hoạt tính chống oxi hóa Footer Page of 126 Header Page of 126 17 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 HÀM LƯỢNG NƯỚC TRONG CỦ NGHỆ TƯƠI VÀ ĐỘ ẨM BỘT NGHỆ Hàm lượng nước củ nghệ tươi 90,125, ñộ ẩm nghệ ñen bột 6,0709 Hàm lượng nước củ nghệ tươi tương ñối lớn nên dễ phân hủy nấm mốc vi khuẩn, muốn ñể lâu cần phải sấy khô 3.2 HÀM LƯỢNG TRO TRONG CỦ NGHỆ ĐEN Hàm lượng tro 0,4035% 3.3 HÀM LƯỢNG TINH DẦU NGHỆ ĐEN, CÁC CHỈ SỐ VẬT LÍ, HÓA HỌC VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA TINH DẦU NGHỆ ĐEN Ở HUYỆN VĨNH THẠNH TỈNH BÌNH ĐỊNH 3.3.1 Hàm lượng tinh dầu thân rễ nghệ ñen Hàm lượng tinh dầu thân rễ nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định 0,41% 3.3.2 Tỷ khối tinh dầu nghệ ñen Tỷ khối tinh dầu thân rễ nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định 0,9605 3.3.3 Chỉ số khúc xạ tinh dầu nghệ ñen Chỉ số khúc xạ tinh dầu thân rễ nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định 1,51027 3.3.4 Chỉ số axit tinh dầu nghệ ñen Chỉ số axit tinh dầu thân rễ nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định 1,9503 3.3.5 Chỉ số este tinh dầu nghệ ñen Chỉ số este tinh dầu thân rễ nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định 16,4384 Footer Page of 126 18 3.3.6 Thành phần hóa học tinh dầu nghệ ñen Tinh dầu nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định ñược ñịnh danh xác ñịnh thành phần hóa học sắc kí khí khối phổ (GC/MS) Bảng 3.9 Thành phần hoá học tinh dầu thân rễ nghệ ñen Header Page 10 of 126 19 20 Vĩnh Thạnh cấu tử Nhìn chung tinh dầu ñịa danh có nhiều cấu tử giống nhau, nhiên nơi ñiều kiện khí hậu, thổ nhưỡng khác thời gian thu hái khác mà thành phần hóa học chúng có khác 3.4 CHIẾT CÁC CHẤT TRONG DUNG MÔI HEXAN VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CAO HEXAN 3.4.1 Hàm lượng cao hexan theo thời gian chiết Kết khảo sát hàm lượng cao n-hexan theo thời gian chiết Kết luận: Thành phần tinh dầu thân rễ nghệ ñen ñược trình bày bảng 3.11 Thời gian tốt cho trình chiết Thujopsene 19,24% Ngoài có cấu tử: Velleral 10,05%; chất dung môi n-hexan Elemen 9%; Camphor 4,85%; Germacran-3,7(11),9-trien-6-one 3.4.2 Hàm lượng cao n-hexan chiết với tỷ lệ rắn (g) /lỏng (ml) 6,55%; isocaryophyllene 5,06%; Germacren B 4,26%; (+)-Ledene Kết khảo sát hàm lượng cao n-hexan theo theo tỉ lệ 2,28%; 3,7-Cycodecadien-1-one,10-(1-methylethenyl)-(EE)- 2,32%; rắn/lỏng ñược trình bày bảng 3.12 Tỉ lệ rắn lỏng tốt cho (-) Globulol 2,05%… trình chiết 30g/160 ml Nhận xét: So sánh với tài liệu [1] tinh dầu thân rễ loài Curcuma zedoaria Rosc huyện Đô Lương tỉnh - Nghệ An huyện Hương Sơn - tỉnh Hà Tĩnh ñược chưng cất phương pháp 3.4.3 Thành phần hóa học cao n -hexan chiết từ nghệ ñen Kết GC/MS Thành phần hoá học hóa học cao n -hexan chiết từ nghệ ñen ñược trình bày bảng 3.13 lôi nước Các mẫu ñược phân tích phương pháp GC Kết luận: Thành phần cao n -hexan thân rễ nghệ ñen GC/MS 50 cấu tử ñược xác ñịnh Hàm lượng tinh dầu nghệ Velleral 16,43% Ngoài có cấu tử: Thujopsene 13,59%; ñen huyện Vĩnh Thạnh - Bình Định hàm lượng 0,41% ñó Elemen theo tài liệu [1] hàm lượng 0,22% Số lượng cấu tử ñược Camphor 2,67%; Germacren B 2,47%; isocaryophyllene 2,72%; ñịnh danh nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh 36 cấu tử Các cấu tử 6,10,14-hexadecatrienoic,3,7,11,15-tetramethyl-,methylester 2,8%… tinh dầu nghệ ñen Vĩnh Thạnh Thujopsene tinh 3.5 TÁCH CURCUMIN BẰNG PHƯƠNG KIỀM HÓA dầu nghệ hai huyện lại Cấu tử tinh dầu 3.5.1 Hàm lượng curcumin bột nghệ nghệ ñen Đô Lương Germacran-3,7(11),9-trien-6-one, hàm lượng cấu tử tinh dầu Vĩnh Thạnh thấp Cấu tử tinh dầu nghệ ñen Hương Sơn Epicurzerenone ñó tinh dầu Footer Page 10 of 126 6,01%; Germacran-3,7(11),9-trien-6-one,(EE)- 4,38%; Hàm lượng curcumin bột nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh tỉnh Bình Định tách phương pháp kiềm hóa 0,7228% Header Page 11 of 126 21 22 Bảng 3.13 Thành phần hoá học cao n-hexan thân rễ nghệ ñen 3.5.2 Kiểm tra sản phẩm 3.5.2.1 Phương pháp phân tích ñịnh tính curcumin Phương pháp nhận biết thuốc thử 3.5.2.2 Phương pháp cảm quan 3.6 THĂM DÒ HOẠT TÍNH KHÁNG SINH VÀ TÍNH KHÁNG OXI HÓA 3.6.1 Thăm dò hoạt tính kháng sinh Kết thăm dò hoạt tính kháng sinh cao n-hexan tinh dầu nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định trình bày bảng 3.15 Bảng 3.15 Kết thăm dò hoạt tính kháng sinh cao nhexan tinh dầu nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định Footer Page 11 of 126 Header Page 12 of 126 23 24 - Tinh dầu nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định có Bảng 3.16 Kết thăm dò hoạt tính chống oxi hóa IC50 khả kháng chủng vi khuẩn Lactobacillus fermentum nồng cao n-hexan tinh dầu nghệ ñen 27,83µg/ml - Cao n-hexan nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định STT Ký hiệu mẫu IC50( µg/ml) M1 – tinh dầu nghệ ñen > 256 có khả kháng chủng vi khuẩn kiểm ñịnh Gram (+): Staphylococcus aureus, Lactobacillus fermentum, Bacillus subtilis - Cả tinh dầu nghệ ñen cao n-hexan ñều khả M2 – dịch chiết n-hexan > 256 nghệ ñen kháng chủng vi khuẩn kiểm ñịnh Gram (-) nấm Kết ñã nghiên cứu cho thấy tinh dầu nghệ ñen huyện Kết thử nghiệm hoạt tính chống oxi hóa nồng ñộ 5mg/ml Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định có tính kháng khuẩn tài liệu cao n-hexan tinh dầu nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình nghiên cứu [26] Trong tài liệu nghiên cứu [26] cho thấy tinh dầu Định ñược thể bảng 3.17 nghệ ñen có khả chống lại chủng vi khuẩn chủng Gram Bảng 3.17 Hoạt tính chống oxi hóa nồng ñộ 5mg/ml dương (S aureus B.cereus ) chủng Gram âm ( E.coli, P cao n-hexan tinh dầu nghệ ñen aeruginosa, V parahaemolyticus S typhimurium) Nghệ ñen (Curcuma zedoaria Rosc.) có chứa sesquiterpen có hàm lượng cao: Camphor, Thujopsene, Germacren B, Elemene, STT Ký hiệu mẫu M1 – tinh dầu nghệ ñen Velleral, Germacron, Isocaryophyllene…, ñã ñịnh tính kháng sinh loài nghệ Ngoài curcumin chất có hoạt tính ñộc ñáo kháng nấm, kháng khuẩn, làm lành vết thương, thông mật, chống viêm loét dày, hành tá tràng, ñại tràng, ñường tiết niệu…curcumin chất chống oxy hoá mạnh Nó có khả tiêu diệt gốc tự loại men ñộc hại gây ung thư có thức ăn ngày [2] 3.6.2 Thăm dò hoạt tính chống oxi hóa M2 – dịch chiết n-hexan nghệ ñen % gốc tự bị bẫy nồng ñộ mg/ml 39,54 Nhận xét: Kết cho thấy IC50 hai mẫu tinh dầu nghệ ñen cao n-hexan ñều chưa thể hoạt tính chống oxi hóa Ở nồng ñộ 5mg/ml cao n-hexan có khả bẫy ñược 39,54% gốc tự do, tinh dầu Theo tài liệu [11], nồng ñộ 5mg/ml khả bẫy gốc tự tinh dầu cao n-hexan nghệ ñen Việt Nam Kết thử nghiệm hoạt tính chống oxi hóa IC50 cao n-hexan 45,8% 61,4%, huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định 0% tinh dầu nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định ñược thể 39,54% Như hoạt tính chống oxi hóa tinh dầu cao n- bảng 3.16 hexan nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh Footer Page 12 of 126 Header Page 13 of 126 25 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận 26 - Tinh dầu nghệ ñen có khả kháng chủng vi khuẩn Lactobacillus fermentum Qua kết nghiên cứu thành phần hóa học nghệ ñen - Cao n-hexan nghệ ñen có khả kháng chủng vi khuẩn (Curcuma zedoaria Rosc.) huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định, kiểm ñịnh Gram (+): Staphylococcus aureus, Lactobacillus thu ñược số kết sau: fermentum, Bacillus subtilis; Đã xác ñịnh tên khoa học loài nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định Curcuma zedoaria Rosc Đã xác ñịnh ñược số tiêu nguyên liệu: - Hàm lượng nước củ nghệ tươi: 90,125%; - Độ ẩm nghệ bột: 6,0709%; - Hàm lượng tro 0,4035% Đã xác ñịnh ñược hàm lượng tinh dầu thân rễ nghệ ñen 0,41%, số khúc xạ 1.51027, tỷ khối 0,9605, số axit 1,9503, số este 16,4384 số xà phòng hoá 18,3887 Đã xác ñịnh ñược số ñiều kiện ñể chiết chất từ bột nghệ ñen dung môi n-hexan: - Thời gian chiết tốt với dung môi n-hexan giờ; - Tỉ lệ rắn lỏng tốt cho trình chiết 30g bột nghệ/160ml n-hexan; - Hàm lượng cao n-hexan bột nghệ: 16,4044% Bằng phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC/MS) ñã xác ñịnh ñược cấu tử tinh dầu nghệ ñen Thujopsene, cao n-hexan Velleral Đã xác ñịnh hàm lượng curcumin bột nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định 0,7228% Đã thăm dò ñược hoạt tính sinh học: a Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm ñịnh Footer Page 13 of 126 b Đã thăm dò ñược hoạt tính hoạt tính chống oxi hóa: - Cả hai mẫu tinh dầu nghệ ñen cao n-hexan ñều chưa thể hoạt tính chống oxi hóa nồng ñộ bé 256µg/ml; - Ở nồng ñộ 5mg/ml cao n-hexan có khả bẫy ñược 39,54% gốc tự do, tinh dầu Kiến nghị Cây nghệ ñen (curcuma zedoaria Rosc.) thích hợp với ñiều kiện khí hậu, thổ nhưỡng huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định Cây phát triển tốt, hàm lượng tinh dầu cao vùng khác, thành phần tinh dầu lại chứa số cấu tử có hàm lượng cao nghệ ñen vùng khác cấu tử Vì cần quy hoạch vùng trồng trọt khai thác có hiệu thuốc quý ñể làm nguyên liệu góp phần xóa ñói giảm nghèo cho ñịa phương  ... LƯỢNG TRO TRONG CỦ NGHỆ ĐEN Hàm lượng tro 0,4035% 3.3 HÀM LƯỢNG TINH DẦU NGHỆ ĐEN, CÁC CHỈ SỐ VẬT LÍ, HÓA HỌC VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA TINH DẦU NGHỆ ĐEN Ở HUYỆN VĨNH THẠNH TỈNH BÌNH ĐỊNH 3.3.1... tác dụng trị kinh tế Vì Nghiên cứu thành phần cấu tạo số hợp kháng khuẩn, kháng nấm, trị vết thương chống viêm nhiễm, chữa chất củ nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định" viêm loét dày, hành... huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định 1,9503 3.3.5 Chỉ số este tinh dầu nghệ ñen Chỉ số este tinh dầu thân rễ nghệ ñen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định 16,4384 Footer Page of 126 18 3.3.6 Thành phần