Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Công trình ñược hoàn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG - - ĐẬU THỊ TỈNH Người hướng dẫn khoa học: TS Đỗ Thu Hà Phản biện 1: PGS TS Võ Thị Mai Hương NGHIÊN CỨU SỰ PHÂN BỐ VÀ VAI TRÒ CỦA HỆ VI SINH VẬT ĐẤT TẠI THÔN – RỪNG NGẬP MẶN Phản biện 2: TS Nguyễn Tấn Lê XÃ CẨM THANH - HỘI AN - QUẢNG NAM Luận văn ñược bảo vệ trước hội ñồng chấm Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 26 Chuyên ngành: SINH THÁI HỌC tháng 11 năm 2011 Mã số: 60.42.60 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Có thể tìm hiểu Luận văn tại: - Trung tâm Thông tin – Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng Đà Nẵng – Năm 2011 Footer Page of 126 Header Page of 126 MỞ ĐẦU khuẩn, xạ khuẩn, nấm mốc có hoạt tính sinh học mạnh trình phân hủy thảm mục chứa xenluloza thôn - RNM xã Cẩm Thanh Hội An - Quảng Nam Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài - Cung cấp số liệu ban ñầu phân bố vai trò hệ vi sinh vật ñất thôn – RNM xã Cẩm Thanh - Hội An - Quảng Nam - Cung cấp số chủng vi sinh vật có khả sinh enzim xenlulaza, proteaza chất kháng sinh mạnh ñể nghiên cứu ứng dụng ñịa phương cách hợp lý, góp phần làm môi trường RNM xã Cẩm Thanh - Hội An - Quảng Nam Cấu trúc luận văn Luận văn gồm phần chính: mở ñầu, chương, kết luận kiến nghị CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 KHÁI QUÁT VỀ HỆ SINH THÁI RỪNG NGẬP MẶN 1.1.1 Vai trò hệ sinh thái RNM Rừng ngập mặn hệ sinh thái ñặc biệt, ñặc trưng vùng biển nhiệt ñới cận nhiệt ñới Nằm khu vực giao thoa ñất liền biển, RNM có khả thích nghi ña dạng sinh học cao Lý chọn ñề tài Rừng ngập mặn (RNM) hệ sinh thái quan trọng, có suất sinh học cao vùng ven biển nhiệt ñới Với vai trò phân hủy hợp chất, khép kín chu trình biến ñổi vật chất lượng, vi sinh vật thành viên tích cực ñảm bảo cho tồn tại, tính ổn ñịnh hệ sinh thái Rừng ngập mặn xã Cẩm Thanh – Hội An – Quảng Nam ñịa ñiểm phân bố chủ yếu RNM Hội An, Quảng Nam với diện tích gần 65 Song nghiên cứu hệ vi sinh vật nơi ñây mang tính sơ lược, riêng lẻ Với mong muốn tìm hiểu phân bố vai trò hệ vi sinh vật RNM ñịa phương, nhằm cung cấp liệu nghiên cứu cho ña dạng sinh học RNM xã Cẩm Thanh, tìm nguồn gen quý ñể ứng dụng phù hợp thực tiễn ñiều kiện sinh thái ñịa phương, chọn ñề tài: “Nghiên cứu phân bố vai trò hệ vi sinh vật ñất thôn - rừng ngập mặn xã Cẩm Thanh – Hội An Quảng Nam” Mục ñích nghiên cứu Nghiên cứu phân bố vai trò ứng dụng số chủng vi khuẩn, xạ khuẩn, nấm mốc ñất thôn - RNM xã Cẩm Thanh Hội An - Quảng Nam, làm sở khoa học cho việc ñề xuất biện pháp sử dụng chủng VSV có hoạt tính sinh học mạnh ñịa phương cách hợp lí Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu phân bố số chủng vi khuẩn, xạ khuẩn, nấm mốc ñất ñiều kiện sinh thái khác (loại ñất, ñộ pH, ñộ mặn) thôn - RNM xã Cẩm Thanh - Hội An - Quảng Nam - Phân lập tuyển chọn số chủng vi khuẩn, xạ khuẩn, nấm mốc có hoạt tính sinh học mạnh: sinh loại enzim ngoại bào (xenlulaza, proteaza) chất kháng sinh - Nghiên cứu khả sử dụng dịch nuôi cấy số chủng vi Footer Page of 126 Rừng ngập mặn có ý nghĩa mặt khoa học, kinh tế môi trường Bên cạnh giá trị lâm sản than, gỗ, củi, thức ăn, thuốc, RNM ñóng vai trò quan trọng việc cung cấp chất hữu cơ, mùn bã ñể tăng suất cho vùng biển; nơi sinh sản ươm nuôi loài thủy sinh chỗ hay loài sống vùng cửa sông ven biển kế cận [16] Bên cạnh lợi ích kinh tế, RNM có nhiều tác dụng bảo vệ môi trường, ñặc biệt việc ứng phó với biến ñổi khí hậu nước biển dâng Đồng thời, ñất RNM môi trường giàu chất dinh dưỡng tạo ñiều kiện tốt cho vi sinh vật phát triển phong phú RNM ñược ví nhà máy lọc sinh học khổng lồ Nó Header Page of 126 không hấp thụ khí CO2 hoạt ñộng công nghiệp sinh hoạt thải mà sinh lượng khí oxy lớn làm cho bầu không khí lành [30] 1.1.2 Đặc ñiểm hệ sinh thái RNM Hệ sinh thái RNM mang ñặc trưng hệ sinh thái khác, ñó là: dòng lượng, chuỗi thức ăn, ñặc trưng phân hóa theo không gian thời gian, vòng tuần hoàn vật chất phân tử dinh dưỡng, phát triển tiến hóa Hệ sinh thái RNM phân bố sát ven biển chịu ảnh hưởng nhân tố sinh thái như: ñộ mặn, thủy triều, ñất, khí hậu… Các nhân tố mang tính ñặc trưng cao như: ñộ ẩm cao, pH kiềm, ñộ mặn cao, dao ñộng thủy triều, nhiệt ñộ lớp nước bề mặt thường 34 – 35oC nên nhiệt ñộ lớp bùn phía thường xuyên nóng ấm, Bên cạnh ñó, ñất RNM môi trường giàu chất dinh dưỡng, hợp phần phù sa nước sông mang trầm tích biển thủy triều ñưa vào, chất thô lắng ñọng trước, sau ñược phủ bùn sét Thể RNM thường ñất cát pha sét bùn, sét bùn, cát bùn, cát, cát thô lẫn sỏi ñá, bùn cửa sông, bờ biển, ñất than bùn, san hô [16], [28] 1.2 GIỚI THIỆU VỀ RỪNG NGẬP MẶN XÃ CẨM THANH HỘI AN - QUẢNG NAM 1.2.1 Giới thiệu sơ lược xã Cẩm Thanh - Hội An - Quảng Nam Cẩm Thanh xã nông nghiệp nằm cách km phía Đông thành phố Hội An Xã Cẩm Thanh có tổng diện tích tự nhiên 895,43 (diện tích mặt nước 348,69ha), chia thành thôn có ñịa hình ñịa mạo phức tạp, bị chia cắt hệ thống sông rạch chằng chịt 1.2.2 Giới thiệu rừng ngập mặn xã Cẩm Thanh - Hội An - Quảng Nam Hệ sinh thái RNM xã Cẩm Thanh - Hội An có hệ ñộng thực vật phong phú ña dạng Dừa nước (Nyppa fructicans) loài ngập mặn phân bố chủ yếu nơi ñây Hệ VSV nơi ñây ñã có nghiên cứu bước ñầu 1.3 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VÀ VAI TRÒ CỦA VSV TRONG HỆ SINH THÁI RNM 1.3.1 Vai trò VSV hệ sinh thái RNM VSV có ý nghĩa to lớn việc phân hủy chất hữu xác ñộng vật, thực vật nhờ vào hệ enzim ngoại bào Các hoạt ñộng VSV ñã khiến chúng trở thành mắt xích quan trọng, thiếu trình phân hủy chất hữu cơ, khép kín chu trình tuần hoàn vật chất 1.3.2 Một số nghiên cứu VSV hệ sinh thái RNM Năm 2002, Hội thảo khoa học Đánh giá vai trò vi sinh vật hệ sinh thái rừng ngập mặn ñã diễn Hà Nội với nhiều ñề tài nghiên cứu nhiều tác giả Gần ñây, ñã có nghiên cứu số chủng VSV RNM Cẩm Thanh – Hội An – Quảng Nam Thái Vạn Hạnh (2010) [12] Bùi Thị Kim Cúc (2011) [3] 1.4 SỰ PHÂN BỐ CỦA VI SINH VẬT TRONG ĐẤT 1.4.1 Phân bố theo ñặc ñiểm tính chất ñất Các loại ñất khác có ñiều kiện dinh dưỡng, ñộ ẩm, ñộ thoáng khí, pH khác Bởi phân bố vi sinh vật khác 1.4.2 Phân bố theo chiều sâu Số lượng thành phần VSV ñất thay ñổi theo ñộ sâu tầng ñất 1.4.3 Phân bố theo ñộ pH ñất Đa số VK phát triển phạm vi pH từ ñến 9, ñiểm tối ưu VK từ pH 6,5 ñến 8,5 NM lại thích nghi với môi trường axit, XK phù hợp với ñiều kiện pH trung tính 1.4.4 Phân bố theo ñộ mặn ñất Đối với ñất RNM, ñộ mặn yếu tố sinh thái quan trọng ảnh hưởng ñến sinh trưởng phát triển VSV Đa số VSV phát triển khoảng hàm lượng muối hẹp: 1-5 ‰ Ở nước mặn, VSV sinh trưởng tốt hàm lượng muối 15- 20 ‰; số VSV ưu mặn biển thích nghi với hàm lượng muối cao 25- 40 ‰ Footer Page of 126 Header Page of 126 1.4.5 Phân bố theo ñộ ẩm nhiệt ñộ Đại ña số loại vi khuẩn có ích ñều phát triển mạnh mẽ ñộ ẩm 60-80% Chỉ có nấm mốc xạ khuẩn phát triển ñược ñiều kiện khô.Nhiệt ñộ hoạt ñộng thích hợp VSV 22 - 300C 1.4.6 Phân bố theo cấu trồng chế ñộ canh tác Đối với tất loại trồng, vùng rễ vùng vi sinh vật phát triển mạnh so với vùng rễ Đối với ñất canh tác phân bố VSV ñất phụ thuộc vào tác ñộng cày, xới, ñào trộn ñất; chế ñộ phân bón canh tác 1.5 MỘT SỐ ENZIM TỪ VSV VÀ ỨNG DỤNG 1.5.1 Enzim xenlulaza 1.5.1.1 Ứng dụng enzim xenlulaza - Dùng enzim xenlulaza thuỷ phân dịch ñường ñể làm môi trường nuôi cấy nấm men - Xenlulaza xúc tác trình mục nát thành phần xenluloza có rác thải công nghiệp, nông nghiệp - Xenlulaza thúc ñẩy trình phân hủy chất chứa xenluloza có nước thải, góp phần làm môi trường nước,… 1.5.1.2 Cơ chế phân giải xenluloza Sự thủy phân xenluloza bao gồn nhiều giai ñoạn, chế chung trình là: xenluloza → disacarit → monosacarit (glucoza) 1.5.1.3 VSV phân giải xenluloza + Vi khuẩn phân giải xenluloza + Xạ khuẩn phân giải xenluloza + Nấm mốc phân giải xenluloza 1.5.2 Enzim proteaza [26], [27] 1.5.2.1 Ứng dụng enzim proteaza VSV Các proteaza nói chung proteaza VSV nói riêng ñược ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực khác như: công nghiệp, nông nghiệp, y học, môi trường, 1.5.2.2 VSV phân giải protein + Vi khuẩn phân giải protein + Nấm mốc phân giải protein + Xạ khuẩn phân giải protein 1.6 CHẤT KHÁNG SINH 1.6.1 Định nghĩa chất kháng sinh (CKS) 1.6.2 Xạ khuẩn sinh chất kháng sinh Cho tới nay, có 10.000 CKS ñược biết giới có tới 80% xạ khuẩn sinh Trong ñó có 15% CKS có nguồn gốc từ loại xạ khuẩn 1.6.3 Ứng dụng CKS CKS bảo vệ thực vật chống bệnh ñạo ôn, khô vằn, CKS diệt số VSV gây bệnh nấm, vi khuẩn trưởng thành, bảo vệ môi trường, … 1.7 CÁC PHƯƠNG PHÁP XỬ LÍ RÁC THẢI BẰNG VSV VÀ MỘT SỐ CHẾ PHẨM DÙNG ĐỂ XỬ LÝ RÁC THẢI CHỨA XENLULOZA [20] 1.7.1 Các phương pháp xử lý rác thải VSV Phương pháp chôn lấp; Phương pháp sản xuất khí sinh học; Phương pháp ủ rác hiếu khí 1.7.2 Một số chế phẩm dùng ñể xử lý rác thải chứa xenluloza Chế phẩm EM; Chế phẩm “xenlolignorin” ñã ñược sử dụng rộng rãi; Chế phẩm “BIO-NOVA” “pancellaza”; Chế phẩm xenlulaza “Onozuka”; Chế phẩm “Emuni; Chế phẩm VSV “Micromix 3” Footer Page of 126 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG Các chủng VSV hiếu khí phân lập ñất thôn – RNM xã Cẩm Thanh – Hội AN – Quảng Nam, bao gồm vi khuẩn, xạ khuẩn, nấm mốc 2.2 ĐỊA ĐIỂM, PHẠM VI VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 2.2.1 Địa ñiểm thu mẫu thực ñịa Một số khu vực ñại diện thôn RNM xã Cẩm Thanh -Hội An - Quảng Nam Header Page of 126 10 2.2.2 Địa ñiểm tiến hành thí nghiệm - Phòng thí nghiệm Sinh lý - Hóa sinh - Vi sinh, Khoa Sinh- Môi trường, Trường ĐH Sư Phạm - ĐH Đà Nẵng - Trung tâm kỹ thuật môi trường - Đà Nẵng - Phòng Hóa Vi sinh - Trung tâm kỹ thuật ño lường chất lượng 2Đà Nẵng - Thí nghiệm ñược bố trí số nhà K3/17 Dũng sĩ Thanh Khê Thanh Khê - Đà Nẵng 2.2.3 Phạm vi nghiên cứu Do thời gian ñiều kiện phòng thí nghiệm có hạn, giới hạn nghiên cứu phạm vi sau: - Lấy mẫu ñất số vị trí khác nhân tố: ñộ mặn, ñộ pH, loại ñất thôn – RNM xã Cẩm Thanh từ tháng 9/2010 ñến 3/2011 Các ñiểm lấy mẫu gần bờ ngập nước 50cm - Nghiên cứu thành phần số lượng VSV, chọn ñối tượng vi khuẩn, nấm mốc xạ khuẩn - Nghiên cứu vai trò chủng VSV thông qua việc nghiên cứu khả phân giải xenluloza, protein, sinh kháng sinh nghiên cứu khả sử dụng chủng có hoạt tính xenluloza trình phân hủy thảm mục chứa xenluloza + Sơ tuyển tuyển chọn chủng VSV có hoạt tính xenlulaza protein theo phương pháp cấy ñiểm ñục lỗ, chủng XK có hoạt tính kháng sinh theo phương pháp khối thạch ñục lỗ + Nghiên cứu khả sử dụng dịch nuôi cấy chủng vi khuẩn, nấm mốc xạ khuẩn có hoạt tính xenlulaza mạnh trình phân hủy thảm mục chứa xenluloza Riêng chủng vi khuẩn, nấm mốc có hoạt tính proteaza xạ khuẩn sinh kháng sinh, không nghiên cứu ứng dụng thời gian có hạn 2.2.4 Thời gian nghiên cứu Từ tháng 07/ 2010 – 08/ 2011 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3.1 Phương pháp thu mẫu thực ñịa [10], [25] Do ñịa hình ñất RNM không ñồng ñều thẳng góc mà phụ thuộc phân bố ngập mặn lắng ñọng nguồn nước nên việc lấy mẫu lấy mẫu vùng ngập nước tối ña 50cm, gần bờ Mẫu ñược lấy theo khoảng cách ñịnh, ñặc trưng ñộ ngập nước, loại ñất, vị trí Đất ñược lấy tầng mặt từ - 20cm vị trí khác vùng 100 m2 Sau ñó mẫu ñất ñược ñem trộn ñều ñựng túi ni lon ñã khử trùng, ghi ngày lấy mẫu ñất, loại ñất 2.3.2 Phương pháp phân lập - Phân lập mẫu dựa phương pháp phân lập Egorow [10], [25] + Phân lập vi khuẩn môi trường Nước mắm - Pepton + Phân lập xạ khuẩn môi trường Gause I + Phân lập nấm mốc môi trường Czapek 2.3.3 Phương pháp ñếm số lượng tế bào CFU/ml [10], [25] Phương pháp ñếm gián tiếp số lượng VSV môi trường ñặc (phương pháp Koch), ñếm số lượng khuẩn lạc phát triển môi trường dinh dưỡng ñặc ñộ pha loãng khác mẫu nghiên cứu Footer Page of 126 Tính kết theo công thức: Ni = 10.Ai Di W Trong ñó: Ni: tổng số CFU 1g mẫu ñất; Ai: số khuẩn lạc trung bình hộp petri; 10 Ai : số lượng VSV 1ml dịch mẫu ; Di : ñộ pha loãng; W : trọng lượng khô 1g mẫu ñất Mật ñộ tế bào trung bình N mẫu ban ñầu trung bình cộng Ni nồng ñộ pha loãng khác 2.3.4 Phương pháp giữ giống vi sinh vật [10], [25] Theo phương pháp Egorov, ñể bảo quản chủng giống vi sinh vật cho nghiên cứu tiếp theo, tiến hành cấy lại ñịnh kì môi trường thạch nghiêng Nước mắm – pepton ñối với vi khuẩn, Gause I ñối với xạ khuẩn, Czapek ñối với nấm mốc ñể tủ ấm 28 – 300C Thời gian nuôi cấy vi khuẩn: – ngày, xạ khuẩn: – ngày, nấm mốc: – ngày Sau ñó bảo quản tủ lạnh 40C, tháng cấy lại lần Header Page of 126 11 12 2.3.5 Phương pháp xác ñịnh ñộ pH, ñộ mặn - Độ pH: Đo giấy nơi lấy mẫu máy ño pH phòng thí nghiệm - Độ mặn: Gửi mẫu ño trung tâm kỹ thuật môi trường - Đà Nẵng, mẫu ñược ño phương pháp thử - thiết bị HACH SENSION 2.3.6 Phương pháp nghiên cứu khả sinh tổng hợp enzim xenlulaza proteaza vi khuẩn, xạ khuẩn, nấm mốc 2.3.6.1 Theo phương pháp cấy ñiểm [10], [25] Để sơ tuyển chủng VSV có hoạt tính xenlulaza proteaza, dùng phương pháp cấy ñiểm môi trường ñặc, nuôi cấy tủ ấm nhiệt ñộ 28 – 300C, sau thời gian từ – ngày ñối với vi khuẩn, – ngày ñối với xạ khuẩn – ngày ñối với nấm mốc Sau ñó, ñem hộp lồng quan sát khả sinh trưởng VSV xác ñịnh hoạt tính cách ñổ ml thuốc thử lên bề mặt, tráng ñều Để 15 phút ño vòng thủy phân biểu thị hiệu số ñường kính vòng phân giải ñường kính khuẩn lạc: D – d; mm - Đối với VSV sinh tổng hợp enzim xenlulaza: Môi trường sở có bổ sung CMC 1%; Thuốc thử hoạt tính xenlulaza lugol - Đối với VSV sinh tổng hợp enzim proteaza: Cả vi khuẩn nấm mốc ñều cấy ñiểm môi trường thạch sữa Thuốc thử hoạt tính proteaza HgCl2 2.3.6.2.Theo phương pháp ñục lỗ [10], [25] Phương pháp dựa nguyên tắc: Khi enzim xenlulaza thủy phân CMC có thạch tạo vòng thủy phân màu vàng quanh lỗ thạch Dựa vào hiệu số ñường kính vòng thủy phân ñường kính lỗ thạch mà ta xác ñịnh ñược hoạt tính enzim xenlulaza chủng VSV Chọn môi trường nuôi cấy phù hợp, vô trùng 1amt 45 phút Đối với VSV sinh tổng hợp enzim xenlulaza: Môi trường sở có bổ sung CMC 1% Đối với VSV sinh tổng hợp enzim proteaza: Môi trường Czapek- gelatin Đổ môi trường ñĩa petri cho bề dày lớp thạch ñông mm Dùng khoan nút chai ñục lỗ với ñường kính 10 mm Nhỏ vào lỗ 0,2 ml dịch nuôi cấy ñã ly tâm, lỗ ñối chứng nhỏ nước cất ñể tủ lạnh 2- cho enzim khuếch tán với chất Sau ñó, nuôi cấy tủ ấm nhiệt ñộ 400C ñể enzim tác dụng với chất Lấy ñĩa petri ra, ñổ ml thuốc thử (lugol ñối với hoạt tính xenlulaza, HgCl2 ñối với hoạt tính proteaza), tráng ñều bề mặt thach Để 15 phút sau, gạn bỏ nước ño vòng thủy phân quanh lỗ thạch Đo vòng phân giải tương tự 2.3.6.1 2.3.7 Phương pháp xác ñịnh hoạt tính sinh kháng sinh 2.3.7.1 Phương pháp khối thạch Cấy xạ khuẩn môi trường Gause I, hộp petri – ngày, xạ khuẩn mọc tốt, dùng khoan nút chai khoan thỏi thạch ñặt vào hộp petri ñã cấy nấm vi khuẩn kiểm ñịnh Để vào tủ lạnh – 10 cho kháng sinh kịp khuếch tán nuôi cấy nhiệt ñộ 28 – 300C Đọc kết sau – ngày ñối với NM kiểm ñịnh, – ñối với VK kiểm ñịnh Hoạt tính kháng sinh ñược xác ñịnh theo kích thước vòng vô khuẩn: D – d; mm Trong ñó: D ñường kính vòng vô khuẩn (mm); d ñường kính thỏi thạch (mm) 2.3.7.2 Phương pháp ñục lỗ Dùng khoan nút chai, khoan lỗ bề mặt môi trường ñã trộn VSV kiểm ñịnh hộp petri Nhỏ vào lỗ khoan dung dịch cần thử kháng sinh Các bước tiến hành giống phương pháp khối thạch 2.3.8 Phương pháp nghiên cứu loại ñất Sau lắng bùn, sử dụng phương pháp N.A.Katrinski (1965) áp dụng cho ñất Việt Nam phân loại ñất dựa theo hàm lượng sét vật lí (cấp hạt < 0,002mm) [23] 2.3.9 Phương pháp nghiên cứu ñặc ñiểm nuôi cấy ñặc ñiểm hình thái chủng tuyển chọn 2.3.9.1 Phương pháp nghiên cứu ñặc ñiểm nuôi cấy ñặc ñiểm hình thái chủng VK tuyển chọn Đặc ñiểm nuôi cấy; Đặc ñiểm hình thái; Phương pháp nhuộm Gram Footer Page of 126 Header Page of 126 13 14 2.3.9.2 Phương pháp nghiên cứu ñặc ñiểm nuôi cấy ñặc ñiểm hình thái chủng NM tuyển chọn Đặc ñiểm nuôi cấy; Đặc ñiểm hình thái; Quan sát màu sắc hệ sợi khí sinh, hệ sợi chất; Quan sát quan sinh sản: 2.3.9.3 Phương pháp nghiên cứu ñặc ñiểm nuôi cấy ñặc ñiểm hình thái chủng XK tuyển chọn Đặc ñiểm nuôi cấy; Đặc ñiểm hình thái + Quan sát màu sắc hệ sợi khí sinh, hệ sợi chất + Quan sát cuống sinh bào tử: 2.3.10 Phương pháp phân tích hàm lượng chất xơ ñã phân hủy (theo phương pháp Keinebeg Stouma) [3] Cân xác 2g mẫu cho vào cốc ñốt dung tích 300ml Sau ñó, ñổ tiếp H2SO4 1,25% ngang vạch ñịnh mức 200ml ñun sôi 30 phút (kể từ bắt ñầu sôi), sau ñó ñể nguội rửa nước cất cho ñến môi trường trung tính Tiếp tục ñổ KOH 1,25 % cho ñến môi trường trung tính Chuyển toàn mẫu sang chén sứ, sau ñó rửa cồn 900 (khoảng 2-3 lần) sấy ñến khối lượng không ñổi Kết ñược tính theo công thức: Chất xơ (%) = [(W1-W2)/W].100 Trong ñó: W1: trọng lượng cốc mẫu sau sấy (g); W2: trọng lượng cốc (g); W: trọng lượng mẫu (g) 2.3.11 Phương pháp nghiên cứu ứng dụng dịch nuôi cấy chủng VSV tuyển chọn trình phân hủy thảm mục chứa xenluloza + Các loại cây, thân dừa nước ñang mục sau thu gom loại bỏ nilon, vật cứng ñem chặt nhỏ kích thước - cm; cân mẫu, mẫu kg rác cho vào rổ nhựa lớn Rổ ñựng rác ñược ñựng thùng xốp có nắp ñậy ñược xử lý theo công thức: - CT1: xử lí 300ml dịch môi trường nuôi cấy không bổ sung VSV tuyển chọn (ñối chứng) - CT2: xử lí 300ml dịch EM thứ cấp với nồng ñộ 1/100 - CT 3: xử lí 300ml dịch thể chủng VK, NM XK tuyển chọn có khả phân giải xenluloza mạnh Sau ñó bổ sung nước ñể ñộ ẩm ñạt 50 - 55% sọt Hàng tuần có bổ sung dịch thể VSV tuyển chọn ñảo trộn tạo ñiều kiện hiếu khí cho VSV sinh trưởng phân hủy rác ñược nhanh, ủ rác thời gian 1,5 tháng Sau ñó 15 ngày;1 tháng; 1,5 tháng: phân tích hàm lượng chất xơ CT 2.3.12 Phương pháp xử lí số liệu Các kết phân tích ñược tính toán xử lí toán thống kê sinh học Footer Page of 126 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1 SỰ PHÂN BỐ CỦA HỆ VSV TRONG ĐẤT TẠI THÔN RNM -XÃ CẨM THANH - HỘI AN - QN 3.1.1 Sự phân bố VSV theo loại ñất Từ 60 mẫu ñất RNM thôn - xã Cẩm Thanh - Hội An - QN, ñã tiến hành phân lập vi khuẩn môi trường Nước mắm Pepton, xạ khuẩn môi trường Gause I nấm mốc môi trường Czapek Kết phân bố chủng VK, XK, NM theo loại ñất ñược trình bày qua bảng 3.1: Bảng 3.1: Thành phần số lượng VSV số mẫu ñất thôn 2- RNM xã Cẩm Thanh - Hội An - Quảng Nam NMTS VKTSHK XKTS STT Loại ñất Bề mặt (x105 (x105 CFU/g) (x105CFU/g) CFU/g) Thảm mục 96,2 14,5 2,7 Cát pha Ngập nước 50,3 9,4 1,2 sét bùn Dừa nước 68,0 11,6 2,3 Trống trơn 61,0 10,9 1,6 Trung bình 78,5 11,6 2,0 Thảm mục 88,6 7,3 2,1 Ngập nước 41,9 5,5 0,9 Header Page of 126 15 Sét bùn Dừa nước 54,0 6,7 1,6 Trống trơn 48,5 5,9 1,5 Trung bình 52,7 6,4 1,5 Thảm mục 36,6 4,1 0,9 Cát bùn Ngập nước 18,5 1,6 0,08 Dừa nước 30,7 3,4 0,5 Trống trơn 23,9 2,7 0,2 Trung bình 27,4 3,0 0,4 Thảm mục 21,2 1,2 0,3 Ngập nước 6,5 0,09 0,08 Cát Dừa nước 14,7 0,7 0,29 Trống trơn 6,8 0,4 0,13 Trung bình 12,3 0,6 0,2 Từ kết bảng 3.1 cho thấy: Thành phần số lượng VSV loại ñất khác khác nhau: - Đất cát pha sét bùn: số lượng tế bào trung bình gam ñất cao nhóm VK, NM, XK Trong ñó, VKHKTS TB: 78,5 x 105 CFU/g, NMTS TB: 11,6 x 105 CFU/g XKTS TB: 2,0 x 105 CFU/g - Đất sét bùn: số lượng VSV gam ñất thấp ñất cát pha bùn sét VKHKTS TB: 52,7 x 105 CFU/g, NMTS TB: 6,4 x 105 CFU/g XKTS TB: 1,5 x 105 CFU/g - Đất cát bùn: VSV ñất cát bùn cao ñất cát thấp ñất cát pha sét bùn sét bùn Số VKHKTS TB: 27,4 x 105 CFU/g, NMTS TB: 3,0 x 105 CFU/g XKTS TB: 0,4 x 105 CFU/g - Đất cát: số lượng VSV phân bố gam ñất thấp VKHKTS TB: 12,3 x 105 CFU/g, NMTS TB: 0,6 x 105 CFU/g, XKTS TB: 0,2 x 105 CFU/g + Sự phân bố chủng VSV hiếu khí ñất (VKHKTS, NMTS, XKTS) không phụ thuộc vào loại ñất mà phụ thuộc vào bề mặt mặt ñất 3.1.2 Sự phân bố VSV ñất theo ñộ mặn Footer Page of 126 16 Đồng thời với việc nghiên cứu phân bố theo loại ñất, sau lần thu mẫu, tiến hành ño ñộ mặn tìm hiều ảnh hưởng tới phân bố VSV Kết ñược thể qua bảng 3.2” Bảng 3.2: Thành phần số lượng VSV theo ñộ mặn số mẫu ñất thôn 2- RNM xã Cẩm Thanh - Hội An - Quảng Nam Độ mặn VKHKTS NMTS XKTS 5 ñất (‰) (x 10 CFU/g) (x 10 CFU/g) (x 105CFU/g) 0,5 – 5,0 98,3 12,5 9,6 5,1- 15 36,4 5,6 1,7 15,1- 19,2 18,3 0,08 0,01 Từ bảng 3.2 cho thấy: VSV phân bố nhiều ñộ mặn 0,5 - 5,0 ‰, tiếp ñến ñộ mặn 5,115,0 ‰ ñộ mặn 15,1- 19,2 ‰ Cụ thể là: + Độ mặn 0,5 - 5,0 ‰: số lượng tế bào gam ñất lớn VKHKTS TB: 98,3 x 105 CFU/g, NMTS TB: 12,5 x 105 CFU/g XKTS TB: 9,6 x 105 CFU/g, + Ở ñộ mặn 5,1- 15,0 ‰: VKHKTS TB: 36,4 x 105 CFU/g, NMTS TB: 5,6 x 105 CFU/g XKTS TB: 1,7 x 105 CFU/g + Ở ñộ mặn 15,1- 19,2 ‰ : số lượng VSV gam ñất ñộ mặn nhất: VKHKTS TB: 18,3 x 105 CFU/g, NMTS TB: 0,08 x 105 CFU/g XKTS TB: 0,01 x 105 CFU/g) 3.1.3 Sự phân bố VSV theo ñộ pH ñất Sự phân bố chủng VSV không phụ thuộc vào loại ñất, ñộ mặn mà phụ thuộc nhiều vào ñộ pH ñất Kết ảnh hưởng ñộ pH ñất tới phân bố chủng VSV ñất RNM ñược thể qua bảng 3.3 sau: Bảng 3.3: Thành phần số lượng VSV theo ñộ pH số mẫu ñất thôn 2- RNM xã Cẩm Thanh - Hội An - Quảng Nam Độ pH VKHKTS NMTS XKTS 5 (x 10 CFU/g) (x 10 CFU/g) (x 105 CFU/g) 78,7 15,1 10,3 7,1-7,5 Header Page of 126 18 17 7,6- 8,4 72,4 4,7 2,5 8,5-8,7 25,6 0,03 0,02 Từ kết bảng 3.3 biểu ñồ 3.3 cho thấy: Ở ñộ pH khác VSV phân bố không giống nhau, ñồng thời dao ñộng số lượng ñối với nhân tố khác nhóm VSV + Độ pH từ 7,1 - 7,5: phân bố VK, XK nhiều VKHKTS TB: 78,7 x 105 CFU/g, XKTS TB: 10,3 x 105 CFU/g Đối với NM, chúng thích nghi với môi trường axit ñây khoảng pH thấp nghiên cứu nên số lượng NM gam ñất ñạt cao (15,1 x 105 CFU/g) + Độ pH 7,6 – 8,4: ñây khoảng pH tối ưu VK nên số lượng VKHKTS TB cao (72,4 x 105 CFU/g) Riêng số lượng NM XK ñều giảm (NMTS TB: 3,8 x 105 CFU/g, XKTS TB: 2,5 x 105 CFU/g) + Độ pH 8,5 – 8,7: phân bố chủng VSV nhất: VKHKTS TB 25,6 x 105 CFU/g, NMTS TB: 0,03 x 105 CFU/g XKTS TB: 0,02 x 105 CFU/g) Như vậy, phân bố chủng VSVHK (gồm VKHKTS, NMTS, XKTS) ñất RNM loại ñất, ñộ pH, ñộ mặn khác không giống Các nhân tố tác ñộng ñồng thời ảnh hưởng lẫn tác ñộng tổng hợp lên hệ VSV Đối với ñất RNM thôn – xã Cẩm Thanh - Hội An – QN, chủng VSVHK ñất phân bố nhiều ñất cát pha sét bùn, ñộ mặn trung bình từ 0,5- 5,0 %o; pH từ 7,1 – 7,5 phân bố ñất cát, ñộ mặn trung bình từ 15,1- 19,2 %o; pH từ 8,5 – 8,7 Footer Page of 126 Hình 3.1: Một số chủng VK phân lập ñược từ ñất thôn 2- RNM xã Cẩm Thanh Hình 3.2: Một số củng XK phân lập ñược từ ñất thôn 2- RNM xã Cẩm Thanh Hình 3.3: Một số chủng NM phân lập ñược từ ñất thôn 2- RNM xã Cẩm Thanh 3.2 PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN CÁC CHỦNG VSV CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP CÁC CHẤT CÓ HOẠT TÍNH SINH HỌC 3.2.1 Phân lập tuyển chọn chủng VSV có khả phân giải xenluloza Để phân lập sơ tuyển chủng VK, NM có khả phân giải xenluloza, ñã tiến hành thí nghiệm môi trường chứa chất CMC ñối với chủng phân lập ñược theo phương pháp cấy ñiểm Dựa vào ñặc ñiểm hình thái, ñặc ñiểm nuôi cấy khóa phân loại Bergey [36], Gause cộng [37], ñã thu ñược 59 chủng VSV có hoạt tính xenlulaza, bao gồm: + 24 chủng VK, kí hiệu: VX-1 VX-24 + 21 chủng NM, kí hiệu: NX-1 NX-21 + 14 chủng XK, kí hiệu: XX-1 XX-21 Trong 59 chủng có hoạt tính phân giải xenluloza ñã sơ tuyển ñược, tiếp tục tuyển chọn chủng có hoạt tính xenlulaza Header Page 10 of 126 19 20 mạnh phương pháp ñục lỗ Kết ñược trình bày bảng 3.4 biểu ñồ 3.4 Bảng 3.4: Tỉ lệ % số chủng VSV có hoạt tính xenlulaza hoạt tính xenlulaza mạnh 3.2.2 Phân lập tuyển chọn chủng VSV có khả phân giải protein Từ mẫu ñất phân lập ñược thôn 2- RNM – xã Cẩm Thanh - Hội An – QN, ñã tiến hành sơ tuyển chủng có khả hình thành enzim ngoại bào proteaza MT thạch sữa theo phương pháp cấy ñiểm Dựa vào ñặc ñiểm nuôi cấy, ñặc ñiểm hình thái chủng VSV khóa phân loại Bergey[36], Gause cộng 1983 [37], ñã thu ñược 18 chủng VK 26 chủng NM có hoạt tính proteaza Chúng tạm kí hiệu chủng vi khuẩn là: VP-1 VP-18, chủng nấm mốc là: NP-1 NP-20 Từ chủng có hoạt tính phân giải protein, tiếp tục tuyển chọn ñược chủng có hoạt tính proteaza mạnh phương pháp ñục lỗ môi trường Czapek- gelatin Kết ñược trình bày bảng 3.6 biểu ñồ 3.5 Bảng 3.6: Tỉ lệ % số chủng VK, NM có hoạt tính proteaza hoạt tính proteaza mạnh Tên Số chủng có Tỉ lệ % Số chủng có Tỉ lệ % STT nhóm hoạt tính so với hoạt tính so với TS VSV proteaza TS mạnh VK 18 47,37 15 55,55 NM 20 52,63 12 44,45 Tổng cộng 38 100 27 100 STT Tên nhóm VSV Số chủng có hoạt tính xenlulaza Tỉ lệ % so với TS Số chủng có hoạt tính mạnh Tỉ lệ % so với TS 24 21 14 59 40,68 35.59 23,73 100 15 11 33 45,46 33,33 21,21 100 VK NM XK Tổng cộng 21.21 33.33 45.46 Tỉ lệ % VK hoạt tính mạnh Tỉ lệ % NM hoạt tính mạnh Tỉ lệ % XK hoạt tính mạnh Biểu ñồ 3.4 Tỉ lệ % chủng VSV có khả phân giải xenluloza mạnh - Từ kết bảng 3.4 biểu ñồ 3.1 cho thấy: + Trong 59 chủng VSV có khả phân giải xenluloza có 24 chủng VK chiếm 40,68%, 21 chủng NM chiếm 35,59 % 14 chủng XK chiếm 23,75% + Có 33 chủng mạnh chiếm tỉ lệ 55,93% Trong ñó: 15 chủng VK chiếm tỉ lệ 45,46%; 11 chủng NM chiếm tỉ lệ 33,33% chủng XK chiếm tỉ lệ 21,21% Từ chủng có hoạt tính mạnh, chọn chủng VK, chủng NM chủng XK có hoạt tính mạnh ñể tiến hành nghiên cứu Đó chủng: - Chủng VX-2 (D - d = 19.50 ± 0.11mm) - Chủng NX-9 (D - d = 23.00 ± 0.01mm) - Chủng XX-14 (D - d = 23.95 ± 0.01mm) Footer Page 10 of 126 45.45% 55.55% Tỉ lệ % VK hoạt tính mạnh Tỉ lệ % NM hoạt tính mạnh Biểu ñồ 3.5: Tỉ lệ % chủng VSV có khả phân giải protein mạnh Từ kết bảng 3.6, biểu ñồ 3.5 cho thấy: + Trong 38 chủng có khả phân giải protein có 18 chủng VK chiếm 47,37% 20 chủng NM chiếm 52,63% Header Page 11 of 126 21 22 + Có 27 chủng mạnh chiếm tỉ lệ tỉ lệ 71,01%, ñó: 15 chủng VK chiếm tỉ lệ 55,55%; 12 chủng NM chiếm tỉ lệ 44,45% Từ chúng có hoạt tính mạnh, chọn chủng VK chủng NM có hoạt tính mạnh ñể tiến hành nghiên cứu Đó chủng: - Chủng VP-16 (D - d = 25.50 ±0.20mm) - Chủng NP-14 (D - d = (18.35 ± 0.15mm) 3.2.3 Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn có khả sinh kháng sinh Để phân lập tuyển chọn chủng VSV sinh kháng sinh, tiến hành tuyển chọn ñối tượng xạ khuẩn, VSV kiểm ñịnh nấm Aspegillus niger vi khuẩn Escherichia coli ATCC1283, Bac.subtilis ATCC6633 Từ chủng VSV phân lập, dựa vào ñặc ñiểm hình thái, ñặc ñiểm nuôi cấy khóa phân loại Bergey [36], Gause cộng [37], thu ñược 14 chủng xạ khuẩn Sau ñó, tiến hành nuôi cấy 14 chủng XK môi trường Gause I thời gian – ngày nhiệt ñộ 28 – 300C, cho HSKS phát triển tốt Chất kháng sinh hình thành tiến hành thử hoạt tính kháng sinh phương pháp khối thạch, ñã có chủng có hoạt tính sinh kháng sinh với với VSV kiểm ñịnh Chúng tạm kí hiệu chủng từ XK-1 XK- Kết ñược trình bày bảng 3.8, hình 3.9 3.10 Bảng 3.8: Hoạt tính kháng sinh chủng XK với VSVKĐ STT Các chủng xạ khuẩn Hoạt tính kháng VSVKĐ (Kích thước vòng vô khuẩn (D – d, mm)) 01 XK-1 B.subtilis 15,00 ± 0,20 02 XK-2 5,25 ± 0,10 14.85 ± 0,25 03 XK-3 14,05 ± 0,05 8,15 ± 0,05 17,65 ± 0, 20 04 XK-4 13.00 ± 0,01 9,33 ± 0,05 05 XK-5 21.20 ± 0,01 8,65 ± 0,20 7,86 ± 0,22 Footer Page 11 of 126 E.coli 12,25 ± 0,25 A.niger 20,00 ± 0,00 06 XK-6 19,50 ± 0,10 16,40 ± 0,15 22,00 ± 0,05 07 XK-7 10,50 ± 0,05 9,00 ± 0,05 8,00 ± 0, 80 Qua bảng 3.8 ta thấy: Có 7/14 chủng XK có hoạt tính sinh kháng sinh, bao gồm: chủng kháng vi khuẩn B.subtilis, chủng kháng vi khuẩn E.coli chủng kháng nấm A.niger Từ chủng XK có hoạt tính kháng VSVKĐ mạnh, tuyển chọn chủng có hoạt tính mạnh XK-6 (Bac.subtilis: 19,50 ± 0,10mm; E.coli: D- d = 16,40± 0,15 mm; A.niger: D- d = 22,00± 0,05mm) 3.3 ĐẶC ĐIỂM NUÔI CẤY VÀ HÌNH THÁI CỦA CÁC CHỦNG VSV TUYỂN CHỌN Các chủng tuyển chọn chủng có hoạt tính mạnh trình nghiên cứu bao gồm: VX-2; NX-9; XX-14; VP-16; NP-14; XK-6 Tiến hành nuôi cấy chủng tuyển chọn MT nuôi cấy khác nhau, quan sát hình dạng khuẩn lạc tế bào, theo dõi khả sinh trưởng Kết cho thấy: - Các chủng vi khuẩn VX-2 VP-16 ñều sinh trưởng mạnh MT Nước mắm – pepton, trung bình MT Colin Bề mặt ñều ướt nhẵn, nhuộm màu Gram âm Khuẩn lạc VX-2 có màu vàng, bào tử hình que Còn chủng VP-16 có khuẩn lạc màu trắng sữa, bào tử hình cầu - Hai chủng nấm mốc NX-19 NP-14 ñều sinh trưởng mạnh MT Czapek nguyên gốc, Czapek – Dox Waskman Trong ñó, NX-19 có màu xanh ñốm trắng, NP-14 có màu trắng xám - Hai chủng xạ khuẩn XX-14 XK-6 có ñặc ñiểm nuôi cấy hình thái khác hệ sợi Chúng ñều sinh trưởng mạnh sinh trưởng môi trường Gause I Gause II Còn môi trường ISP4, chủng XK sinh trưởng trung bình Ngoài ra, hình dạng cuống sinh bào tử chủng khác nhau: XX-14 có dạng RARF thẳng ngắn ñến lượn sóng, XK-6 có dạng RF thẳng dài Header Page 12 of 126 23 24 3.4 TÌM HIỂU KHẢ NĂNG SỬ DỤNG CÁC CHỦNG VSV TUYỂN CHỌN TRONG VIỆC PHÂN HỦY THẢM MỤC CHỨA XENLULOZA Để nghiên cứu khả sử dụng dịch nuôi cấy chủng VK, NM, XK có khả phân hủy thảm mục chứa xenluloza (lá dừa nước ñang mục), ñã tiến hành sử dụng chủng có khả phân giải xenluloza mạnh VX-2, NX-9 XX-14 Thí nghiệm tiến hành với công thức: CT 1: Môi trường không bổ sung dịch chứa VSV (ñối chứng) CT 2: Môi trường có bổ sung dịch EM CT 3: Môi trường có bổ sung dịch nuôi cấy chủng VX-2, NX-9, XX-14 Phương pháp tiến hành thí nghiệm bố trí thí nghiệm ñược trình bày mục 2.3.9 Kết ñược thể qua bảng 3.10 biểu ñồ 3.6 hình 3.17 Bảng 3.10: Ảnh hưởng dịch nuôi cấy ñến hàm lượng chất xơ phân hủy Qua kết bảng 3.10 cho thấy: - Sau thời gian 15 ngày: Sau 15 ngày ñầu, phân hủy xenluloza cao CT (13,08 %), tiếp ñến CT (11,50%) cuối CT (6,16%) Sau tháng: Sau tháng, hàm lượng chất xơ ñược phân hủy CT ñã có thay ñổi: cao CT (22,04 %), CT (18,85%) cuối CT (13,77%) - Sau 1,5 tháng: Hàm lượng chất xơ ñã ñược phân hủy cao CT 31,66 %, CT 2: 29,50% thấp CT 1: 17,23% * Ngoài việc nghiên cứu ảnh hưởng dịch nuôi cấy chủng VX-2, NX-9 XX-14 ñến trình phân hủy thảm mục chứa xenluloza sọt rác, tiến hành thí nghiệm ñống rác (mỗi ñống rác gồm 15kg lá, thân dừa nước ñang mục) với CT tiến hành thí nghiệm theo tỉ lệ dịch bổ sung dịch nuôi cấy Sau thời gian tháng 1,5 tháng; ño hàm lượng chất xơ Kết ñược thể qua bảng 3.11 Bảng 3.11: Ảnh hưởng dịch nuôi cấy ñến hàm lượng chất xơ phân hủy ñống rác ủ Hàm lượng chất xơ lại ñã ñược xử lý (%) STT Sau 15 ngày Mẫu Trước TN xử Còn lý lại Được phân hủy Sau tháng Còn lại Được phân hủy Sau 1,5 tháng Còn lại Được Hàm lượng chất xơ lại ñã ñược xử lý (%) phân hủy 01 CT 100 93.84 6,16 86,23 13,77 82.77 17,23 02 CT 100 86,92 13,08 81,15 18,85 70,50 29,50 03 CT 100 88,50 11,5 77,96 22,04 68,34 31,66 STT Mẫu Trước TN xử Còn Được Còn Được lý lại phân hủy lại phân hủy Sau tháng Sau 1,5 tháng 01 CT 100 85,10 14,90 80,42 19,58 02 CT 100 75,05 24.95 67,30 32,70 03 CT 100 74,00 26,00 62,98 37,02 Qua bảng 3.11, thấy: Hàm lượng chất xơ ñược phân hủy cao CT 3, tiếp ñến CT cuối CT Điều lần khẳng ñịnh tác dụng thúc ñẩy trình phân hủy thảm mục chứa xenluloza dịch nuôi cấy chủng VSV tuyển chọn Footer Page 12 of 126 Header Page 13 of 126 25 26 Như vậy, dịch nuôi cấy chứa hỗn hợp chủng VX-2, NX-9, XX14 có khả thúc ñẩy trình phân giải thảm mục chứa xenluloza cao so với chế phẩm EM Mặt khác, ñối với việc ứng dụng xử lí thảm mục RNM dịch nuôi cấy chủng tuyển chọn cho kết cao so với chế phẩm khác thích nghi với ñộ mặn cao, pH kiềm chủng tuyển chọn - NM XK có số lượng tế bào trung bình cao pH 7,1 – 7,5 với VSVTS: (10,3 – 15,1) x 105 CFU/g; thấp khoảng pH 7,6 – 8,7: VSVTS TB (0,02 – 0,03) x 105 CFU/g Phân lập tuyển chọn chủng có hoạt tính sinh học bao gồm: + 33 chủng hoạt tính xenlulaza mạnh, gồm 15 chủng VK chiếm 45,46%; 11 chủng NM chiếm 33,33% chủng XK chiếm 21,21% + 27 chủng có hoạt tính proteaza mạnh: 15 chủng VK chiếm 55,55%; 12 chủng NM chiếm 44,45% + chủng XK có hoạt tính sinh chất kháng sinh Trong ñó, chủng có hoạt tính mạnh với VK NM kiểm ñịnh Đã nghiên cứu thử nghiệm vai trò chủng VSV tuyển chọn trình phân hủy thảm mục chứa xenluloza thôn RNM - xã Cẩm Thanh - Hội An Sau 1,5 tháng thí nghiệm; dịch nuôi cấy chủng VX-2; NX-9; XX-14 phân hủy ñược 31,66- 37,02% hàm lượng chất xơ; thúc ñẩy nhanh trình phân hủy thảm mục chứa xenluloza Đây sở ñể nghiên cứu ứng dụng thực tiễn KIẾN NGHỊ - Tiếp tục nghiên cứu phân bố vai trò hệ VSV thôn khác RNM xã Cẩm Thanh nói riêng Hội An, Quảng Nam nói chung ñể thấy ñược vị trí vai trò hệ VSV hệ sinh thái RNM Quảng Nam - Nghiên cứu ảnh hưởng dịch nuôi cấy ñối với trình xử lý rác thải, nước thải dịch nuôi cấy VSV tuyển chọn - Nghiên cứu việc thu enzim tinh tìm chất mang thích hợp, tạo chế phẩm xử lý rác, nước thải ñể dễ dàng sử dụng Đặc biệt, tìm hiểu vai trò chủng VSV có khả sinh kháng sinh việc chống lại bệnh VSV gây ngập mặn, thủy sản nuôi trồng ñịa phương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ 60 mẫu ñất phân lập thôn RNM – xã Cẩm Thanh – Hội An – Quảng Nam, sau thời gian nghiên cứu, rút số kết luận sau: Sự phân bố VSV loại ñất, ñộ mặn, ñộ pH ñất khác không giống nhau: + Loại ñất: VSV phân bố nhiều ñất cát pha bùn sét: VKHKTS 78,5 x 10 CFU/g; NMTS: 11,6 x 105 CFU/g, XKTS: 2,0 x 105 CFU/g phân bố ñất cát: VKHKTS 12,3 x 105 CFU/g; NMTS: 0,6 x 105 CFU/g XKTS: 0,2 x 105 CFU/g + Độ mặn ñất: - VSV phân bố nhiều ñộ mặn 0,5 - 5,0 ‰: VKHKTS 98,3 x 10 CFU/g; NMTS: 12,5 x 105 CFU/g XKTS: 9,6 x 105 CFU/g - Ở ñộ mặn 15,1- 19,2 ‰; VSV phân bố nhất: VKHKTS 18,3 x 10 CFU/g; NMTS TB: 0,08 x 105 CFU/g XKTS TB: 0,01 x 105 CFU/g + Độ pH ñất: - VK phân bố nhiều khoảng ñộ pH từ 7,1 – 8,4: VKHKTS (72,4 – 78,7) x 105 CFU/g; phân bố khoảng ñộ pH 8,5 – 8,7: 25,6 x 105 CFU/g Footer Page 13 of 126  ... chọn ñề tài: Nghiên cứu phân bố vai trò hệ vi sinh vật ñất thôn - rừng ngập mặn xã Cẩm Thanh – Hội An Quảng Nam Mục ñích nghiên cứu Nghiên cứu phân bố vai trò ứng dụng số chủng vi khuẩn, xạ... sông, bờ biển, ñất than bùn, san hô [16], [28 ] 1 .2 GIỚI THIỆU VỀ RỪNG NGẬP MẶN XÃ CẨM THANH HỘI AN - QUẢNG NAM 1 .2. 1 Giới thiệu sơ lược xã Cẩm Thanh - Hội An - Quảng Nam Cẩm Thanh xã nông nghiệp nằm... rừng ngập mặn xã Cẩm Thanh - Hội An - Quảng Nam Hệ sinh thái RNM xã Cẩm Thanh - Hội An có hệ ñộng thực vật phong phú ña dạng Dừa nước (Nyppa fructicans) loài ngập mặn phân bố chủ yếu nơi ñây Hệ