CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH LƯỢNG DƯ THUỐC KHÁNG SINH TRONG TÔM DH11HH SINH VIÊN THỰC HIỆN: Huỳnh Thị Kim Chi Lê Thị Nguyên Nhung Phạm Thị Minh Thư Lý Thị Huyền Trang Trần Xuân Quyền 11139001 11139011 11139017 11139143 11139166 Nội dung báo cáo tiểu luận I ĐẶT VẤN ĐỀ II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 1.Đối tượng nghiên cứu 2.Các phương pháp phân tích 3.Giới thiệu Chloramphenicol III HÀM LƯỢNG CHLORAMPHENICOL TRONG TÔM PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH BẰNG KÍT ELISA VÀ PHÂN TÍCH SẮC KÝ LCMS/MS 4.Nguyên tắc 5.Dụng cụ thiết bị 6.Hoá chất 7.Dụng cụ chuẩn 8.Chuẩn bị mẫu thử I ĐẶT VẤN ĐỀ Dư lượng kháng sinh thực phẩm vấn đề quan ngại hầu hết quan kiểm soát thực phẩm giới Một số loại kháng sinh thân (chloramphenicol, malachite green ) gây tác động có hại cho sức khoẻ người tiêu dùng, số loại khác kháng sinh nhóm nitrofurans qua trình trao đổi chất thể động vật sinh hợp chất có độc tính cao thể sống Chính kháng sinh bị cấm sử dụng hoàn toàn nuôi trồng bảo quản thực phẩm.Vì phương pháp phân tích kháng sinh có thực phẩm trọng nghiên cứu hoàn thiện II ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Phân tích Chloramphenicol có tôm Các phương pháp phân tích chloramphenicol  Phân tích sắc kí lỏng hiệu cao + Pha tĩnh sử dụng pha tĩnh không phân cực C8 C18 + Dung môi động có tính phân cực cao như:Hỗn hợp H2O/Acetonitril (75/25,v/v) hay hỗn hợp axit axetic 1% methanol/H2O (55/45,v/v) Tốc độ pha động 1ml/phút + Detectơ thường sử dụng UVVIS buớc sóng 278nm hay detectơ MS Ngoài sử dụng thêm: + cột chiết pha rắn với ống cacbon đa vách làm chất hấp phụ trước mẫu chạy qua cột sắc ký lỏng kết hợp detectơ khối phổ + dụng hệ sắc ký lỏng hiệu cao để tách chloramphenicol nhóm dẫn xuất sử dụng detectơ điện hóa thay detectơ UV thông thường Ngoài sử dụng: +cột chiết pha rắn với ống cacbon đa vách làm chất hấp phụ trước mẫu chạy qua cột sắc ký lỏng kết hợp detectơ khối phổ + hệ sắc ký lỏng hiệu cao để tách chloramphenicol nhóm dẫn xuất sử dụng detectơ điện hóa thay detectơ UV thông thường Hệ thống sắc kí lỏng hiệu cao  Phân tích sắc ký khí + Pha tĩnh polysiloxan có độ phân cực từ thấp đến trung bình với tỷ lệ phenyl từ 5-50% (metyl 95-50%) + Pha động khí N2, Tốc độ pha động: 1mL/phút + Detectơ thường sử dụng ECD hay MS Máy sắc kí khí Khi phân tích sắc ký khí, để tăng độ nhạy cho phép phân tích, chloramphenicol thường dẫn xuất hóa thành trimetylsilyl-cloramphenicol (TMS-CAP) GC/MS, với kỹ thuật NICI, mũi m/z đặc trưng cho TMS-CAP 466, 468, 470,376, 378 GC/MS/MS, với kỹ thuật NICI cho mũi đặc trưng 304, 322, 358, 394, 430 Các loại enzyme thường dùng Alkaline phosphatase Peroxydase Glucoxydase β-galactosidase Hệ thống LC-MS/MS Tóm tắt qui trình thử nghiệm LC-MS/MS sử dụng thực nghiệm Các mẫu phát dương tính ELISA phân tích tiếp tục LC-MS/MS theo qui trình tóm tắt sau: Thiết bị: Hệ thống LC-MS/MS: Waters Quattromicro API (tripple quadrupole, ESI(-)) Qui trình chuẩn bị mẫu: Dư lượng CAP 3g mẫu đuợc ly trích 6ml ethyl acetate Dịch chiết đuợc cô đến khô 50oC dòng nitơ Cặn khô hoà tan 1ml NaCl 4%, làm sơ 1ml hexan sau làm tinh cột C18 Hàm luợng CAP dịch giải hấp đuợc phân tích LC-MS/MS Phân tích LC-MS/MS: Các thông số chính: LC: Pha động: ACN: H20 (80:20) Tốc độ dòng: 0,3ml Thể tích tiêm:10ul MS/MS: ESI (-) MRM : 321->152 321->194 321->256 326->157 Mỗi loạt thử nghiệm có kèm theo mẫu chứng âm chứng dương để kiểm soát chất lượng kết thử nghiệm Nội chuẩn CAP-d5 sử dụng để hạn chế tối đa ảnh hưởng mẫu (biological maxtrices) kết phân tích Ngoài ra, hàng năm phòng kiểm nghiệm tham gia chương trình thử nghiệm thành thạo FAPAS tổ chức (thuộc Phòng Thí nghiệm Trung tâm Vương quốc Anh - Central Science Laboratory, UK) đạt kết tốt (Z score < 2) Phương pháp kiểm tra nhanh Chloramphenicol Dụng cụ phát nhanh dư lượng Chloramphenicol Ống nhỏ giọt sử dụng lần Đối tượng: thủy hải sản, mật ong,… Thiết bị: Ngoài ra, ta dùng + Chất hút ẩm (một miếng cho gói) + Chất đệm PBST (một lọ cho bộ) Xử lí mẫu 5g Mẫu 10 ml ethyl acetate Ống li tâm 50 ml Lắc vòng 5-10 phút Lấy ml lớp ethyl acetate phía Bình cô quay, bay ethyl 650C, Bình cô quay chân acetate không Cặn 0,3 ml dung dịch n– hexane 0,3 ml dung dịch PBST Trộn phút Ống nghiệm 100 μl lớp dung dịch đem xét nghiệm Ly tâm: phút / 4000 rpm / nhiệt độ phòng (20 – 25°C / 68 – 77°F) phòng kiểm nghiệm, giấy lọc kiểm cảng thu mua Tiến hành Đọc kết Âm tính: Hai vạch Dương tính: Hai vạch Vạch thử (T) đậm vạch chuẩn (C), vạch tham chiếu (R) Kết cho biết hàm lượng Chloramphenicol mẫu thử 0,1 ppb Vạch thử (T) nhạt vạch chuẩn (C), không thấy vạch thử Kết cho biết hàm lượng Chloramphenicol mẫu thử 0,1 ppb Kết lượng mẫu thử không đủ quy trình kỹ thuật thực sai Xem lại quy trình làm lại xét nghiệm với dụng cụ Kết sai: vạch chuẩn không xuất Hiệu suất Độ nhạy: Tối thiểu 0,1 ppb Độ xác: 94.7% (Kiểm tra địa phương*) Độ tiện dụng: Thuận tiện so với phương pháp ELISA Khuyết điểm: Chưa đo xác nồng độ Chloramphenicol (*)Một thử nghiệm đa trung tâm thực Bình Thuận để so sánh kết xét nghiệm thực Dụng cụ phát nhanh dư lượng Chloramphenicol với kết xét nghiệm thực phương pháp tương đối thông dụng thị trường ELISA The end xin cảm ơn thầy cô bạn lắng nghe ... kháng sinh kìm khuẩn phân lập từ Streptomyces venezuelae vào năm 1947 tổng hợp vào năm 1949 Nó coi nguyên mẫu kháng sinh phổ rộng , với tetracycline , hai giá rẻ dễ dàng để sản xuất loại kháng sinh. .. loại kháng sinh thân (chloramphenicol, malachite green ) gây tác động có hại cho sức khoẻ người tiêu dùng, số loại khác kháng sinh nhóm nitrofurans qua trình trao đổi chất thể động vật sinh hợp... sinh hợp chất có độc tính cao thể sống Chính kháng sinh bị cấm sử dụng hoàn toàn nuôi trồng bảo quản thực phẩm.Vì phương pháp phân tích kháng sinh có thực phẩm trọng nghiên cứu hoàn thiện II