Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Công trình ñược hoàn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG LÊ THỊ ĐỒNG NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HOÁ HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS.TS ĐÀO HÙNG CƯỜNG Phản biện 1: PGS.TS LÊ THỊ LIÊN THANH TRONG MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA DẦU RÁI Ở ĐẠI LỘC - QUẢNG NAM Chuyên ngành: Hóa Hữu Mã số: 60 44 27 Phản biện 2: PGS.TS TRẦN THỊ XÔ Luận văn ñược bảo vệ trước Hội ñồng chấm Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 30 tháng 11 năm 2012 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thông tin- Học liệu, Đại học Đà Nẵng Đà Nẵng - Năm 2012 Footer Page of 126 - Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng Header Page of 126 MỞ ĐẦU cứu thành phần, tính chất hóa học chưa ñược quan tâm Do ñó, với Lí chọn ñề tài mong muốn tìm hiểu thành phần dầu rái ñể góp phần tìm Nước ta nằm vùng khí hậu nhiệt ñới, ñược ưu ñãi công dụng xin chọn ñề tài “Nghiên cứu xác ñịnh thành thiên nhiên nên thuận lợi cho phát triển nhiều loài thực phần hoá học số dịch chiết dầu rái Đại Lộc-Quảng vật Trong loài thực vật ñó, có nhiều loại mang lại cho Nam” người giá trị to lớn kinh tế, y học, công nghiệp,… Một Mục ñích nghiên cứu số ñó thuộc họ dầu (Dipterocapaceae) trà beng Xác ñịnh thành phần hoá học số dịch chiết cắn (Dipterocarpus obtusifolius), dầu rái (Dipterocarpus alatus), song thu ñược dầu rái nhằm làm sáng tỏ công dụng nàng (Dipterocarpus dyeri)… lấy dầu có nhiều giá trị sống Khảo sát yếu tố ảnh hưởng ñến trình chiết ñiều kiện ngành công nghiệp ñời sống Đặc biệt dầu rái loại chiết tối ưu cho giá trị kinh tế lớn [1] Đối tượng phạm vi nghiên cứu + Đối tượng nghiên cứu: Dầu rái lấy từ dầu rái huyện Đại Lộc Dầu rái loại nhựa bền mặt hoá học, chịu nước, có khả dùng ñể làm chất chống thấm [4] người dân vùng - tỉnh Quảng Nam Đông Nam Châu Á ñã dùng loại dầu ñể làm sơn trám thuyền, sơn + Phạm vi nghiên cứu: Nghiên cứu chiết tách dung môi quét vật dụng mây, tre, gỗ, nứa… Nó có hoạt tính sinh học hữu phân cực, không phân cực cao chữa số bệnh viêm da, lở loét, mụn nhọt, nước ăn Phương pháp nghiên cứu chân, bệnh vảy nến, eczema… Ngoài ra, dầu rái nguồn Nghiên cứu lý thuyết nguyên liệu thiên nhiên quí giá ñể từ ñó chuyển hoá, chế tạo thành Phương pháp thực nghiệm sơn, chất chống thấm, chất biến tính polymer, chất phụ gia cho cao su Ý nghĩa thực tiễn ñề tài - Nhằm giúp cho việc ứng dụng dầu rái phạm vi rộng cách …, thay dầu trẩu, dầu thông cần thiết [3] khoa học sản phẩm công nghiệp quan trọng như: thuốc chữa bệnh, phụ gia Cho ñến vấn ñề nghiên cứu dầu rái giới - Giải thích cách khoa học số kinh nghiệm dân gian ứng nước giới hạn mức ñộ mô tả số ñặc dụng dầu rái ñiểm Việc nghiên cứu vấn ñề khai thác ứng dụng Cấu trúc luận văn dầu rái kinh nghiệm dân gian việc nghiên Luận văn gồm 70 trang ñó có bảng, 28 hình phụ lục Footer Page of 126 Header Page of 126 Phần mở ñầu (3 trang), kết luận kiến nghị (2 trang), tài liệu tham + Dầu song nàng (Dipterocarpus dyeri) (hình 1.4) khảo (2 trang với 23 tài liệu) Nội dung luận văn gồm chương: + Chò nâu (Dipterocarpus retusus) (hình 1.5) Chương 1: Tổng quan, 13 trang + Dầu ñọt tím (Dipterocarpus grandiflorus) (hình 1.6) Chương 2: Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu,15 trang + Chò lông (Dipterocarpus pilosus) (hình 1.7) Chương 3: Kết thảo luận,31 trang + Dầu bao (Dipterocarpus baudii) (hình 1.8) 1.3 GIỚI THIỆU VỀ DẦU RÁI CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 SƠ LƯỢC VỀ HỌ DẦU Họ Dầu, số tài liệu tiếng Việt gọi họ Hai cánh, có danh 1.3.1 Đặc tính sinh thái 1.3.1.1 Tên gọi 1.3.1.2 Phân loại khoa học pháp khoa học Dipterocapaceae, gồm 17 chi khoảng 580-680 1.3.1.3 Phân bố loài, thân gỗ phân bố chủ yếu rừng mưa nhiệt ñới, vùng ñất 1.3.2 Đặc tính thực vật thấp với có hai cánh Tên gọi khoa học họ xuất phát từ chi 1.3.3 Tình hình nghiên cứu thành phần hóa học dầu ñiển hình Dipterocarpus, có nguồn gốc từ tiếng Hy Lạp (di = hai, pteron = cánh karpos = quả, nghĩa có hai cánh) [15] 1.2 SƠ LƯỢC VỀ CHI DẦU (DIPTEROCARPUS) Chi Dầu, danh pháp khoa học Dipterocarpus, chi thực vật có hoa chi ñiển hình họ Dầu Chi có khoảng 70 loài, có mặt khu vực Đông Nam Á Chúng thành phần quan trọng rái nước 1.3.4 Khai thác dầu rái 1.3.5 Một số ứng dụng dầu rái CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU rừng dầu Tên khoa học phát sinh từ tiếng Hy Lạp có nghĩa "quả hai cánh" Chi chứa số loài lấy gỗ quan trọng [12], [13], [17],[18] Một số loài ñiển hình như: 2.1 NGUYÊN LIỆU, DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT 2.1.1 Thu gom nguyên liệu Nguyên liệu ñược dùng ñể nghiên cứu + Dầu trà beng (Dipterocarpus obtusifolius) (hình 1.1) dầu rái ñã ñược xử lý lấy từ Đại Lộc – + Dầu chai (Dipterocarpus intricatus) (hình 1.2) Quảng Nam (hình 2.2) + Dầu rái (Dipterocarpus alatus) (hình 1.3) Footer Page of 126 Hình 2.2 Dầu rái ñã xử lý Header Page of 126 2.1.2 Thiết bị dụng cụ hóa chất 2.1.2.1 Thiết bị, dụng cụ 2.3 SƠ ĐỒ QUY TRÌNH THỰC NGHIỆM Xác ñịnh thông số hoá lí Nguyên liệu dầu rái 2.1.2.2 Hóa chất 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Hàm lượng Độ ẩm Hàm lượng kim loại Chiết với EtOAc tro 2.2.1 Phương pháp trọng lượng Áp dụng phương pháp trọng lượng ñể xác ñịnh yếu tố sau: Bã A 2.2.1.1 Xác ñịnh ñộ ẩm Dịch chiết EtOAc Chiết với toluen 2.2.1.2 Xác ñịnh hàm lượng tro phương pháp tro hóa mẫu Cô ñuổi dung môi Ly tâm 2.2.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) Dịch chiết toluen Bã B 2.2.3 Phương pháp chiết Chiết mẫu với dung môi etyl axetat, toluen, Cô ñuổi dung môi Ly tâm Chiết với MeOH Dịch chiết EtOAc Cặn methanol Các dịch chiết thu ñược cất loại bớt dung môi, sau ñó ly lâm lấy dịch chạy GC-MS lại hỗn hợp chất rắn Bã C Dịch chiết MeOH Cặn (cắn) chiết tương ứng ñem ñi kết tinh lại 2.2.3.1 Khảo sát ảnh hưởng thời gian Dịch chiết toluen Cô ñuổi dung môi Ly tâm 2.2.3.2 Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ rắn lỏng 2.2.4 Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS) 2.2.4.1 Phương pháp sắc ký khí (GC) Cặn 2.2.4.2 Phương pháp khối phổ (MS) Kết tinh nhiều lần với etyl axetat 2.2.4.3 Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC – MS) 2.2.5 Phương pháp kết tinh lại 2.2.5.1 Định nghĩa 2.2.5.2 Chọn dung môi 2.2.5.3 Các thao tác kết tinh Footer Page of 126 Dịch chiết MeOH Tinh thể kết tinh Khảo sát yếu tố ảnh hưởng Đo GC-MS ñể xác ñịnh thành phần hoá học Lựa chọn dung môi có thành phần, hàm lượng cao Header Page of 126 10 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH CÁC THÔNG SỐ HOÁ LÝ Bảng 3.2 Kết khảo sát hàm lượng tro dầu rái Cắn STT m4 (g) m2 (g) m5(g) X (%) 3.1.1 Độ ẩm (W%) 32,282 10,021 32,680 3,972 Kết xác ñịnh ñộ ẩm dầu rái ñược trình bày bảng 3.1 32,598 10,054 32,975 3,750 30,252 10,023 30,642 3,891 31,456 10,018 31,853 3,963 30,782 10,071 31,123 3,386 CỦA DẦU RÁI Bảng 3.1 Kết khảo sát ñộ ẩm dầu rái STT m1 (g) m2 (g) m3 (g) W (%) 81,309 10,021 87,798 35,246 84,112 10,054 90,605 35,419 86,650 10,023 93,235 34,301 92,294 10,018 98,968 33,380 97,056 10,071 103,560 35,419 Wtb (%) 34,753 3,792% tương ñối thấp nên hàm lượng hợp chất hữu cao hàm lượng kim loại nhỏ 3.1.3 Hàm lượng số kim loại nặng Kết ñược thống kê bảng 3.3 (phụ lục I) Bảng 3.3 Hàm lượng số kim loại nặng dầu rái Hàm 34,753% Kết khác khảo sát dầu rái thu hoạch vào thời ñiểm khác năm Mùa khô, ñiều kiện khô hạn STT làm tăng trưởng chậm lại, ñồng thời lượng tinh dầu nhựa Kim Phương pháp Kết Kết lượng loại thử (AAS) (mg/l) (mg/kg) chuẩn (mg/kg) dầu khai thác bốc nhanh so với mùa mưa nên góp phần làm giảm ñộ ẩm.Vì ñộ ẩm mẫu có tính tương ñối Cu Lấy mẫu dầu rái ñã xác ñịnh ñộ ẩm trên, nung lò Pb 0,1128 0,5628 30 TCVN 0,0118 0,0589 0,0076 0,0379 6193:1996 nung nhiệt ñộ khoảng 600oC ñể xác ñịnh hàm lượng tro Hàm Footer Page of 126 TCVN 6193:1996 3.1.2 Hàm lượng tro Kết ñược trình bày bảng 3.2 3,792 Từ bảng 3.2 ta thấy hàm lượng tro trung bình dầu rái Từ bảng 3.1 cho thấy ñộ ẩm trung bình dầu rái lượng tro ñược lấy trung bình từ mẫu Xtb (%) As TCVN 6826:2000 Header Page of 126 11 12 Từ bảng 3.3 thấy hàm lượng kim loại nặng có dầu rái nhỏ so với tiêu chuẩn hàm lượng kim loại nặng cho phép loại rau qui ñịnh QĐ số 867/1998/QĐBYT Bộ Y Tế ngày tháng năm 1998 ban hành tiêu chuẩn vệ sinh ñối với lương thực, thực phẩm hàm lượng kim loại nặng nằm khoảng cho phép Dựa vào tiêu chuẩn ta nói Kết xác ñịnh thành phần hóa học GC - MS dịch chiết dầu rái ñược thể sau: 3.2.1 Dịch chiết etyl axetat Kết ñịnh danh cấu tử dịch chiết etyl axetat GC-MS ñược thể phổ ñồ hình 3.3 với kết ño ñược dầu rái cho thấy việc sử dụng dầu rái làm dược liệu an toàn, không ảnh hưởng ñến sức khoẻ người 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT Cân 50g dầu rái cho vào chiết soxhlet, chiết với 160ml etyl axetat nhiệt ñộ 85oC cho ñến dung môi phía có màu nhạt thu ñược dịch chiết dầu rái Tiếp tục lấy cắn ñã chiết với etyl axetat ñem chiết với toluen nhiệt ñộ 110oC Tương tự ta lấy cắn chiết tiếp tục với methanol nhiệt ñộ 80oC Các dịch chiết thu ñược ñem cô quay chân không ñể ñuổi dung môi Sau ñó ñem ly tâm ñể thu ñược dịch chiết ban ñầu Hình 3.3 Sắc ký ñồ GC-MS dịch chiết etyl axetat TPHH dịch chiết dung môi etyl axetat ñược trình bày bảng 3.4 (phụ lục II) Nhận xét: Từ kết sắc ký ñồ hình 3.3 bảng 3.4 cho thấy phổ GC-MS ñã ñịnh danh ñược 21 cấu tử dịch chiết etyl axetat từ dầu rái cấu tử chưa ñược ñịnh danh Thành phần chủ yếu dịch chiết hợp chất sesquiterpen, ñó cấu tử Hình 3.2 Các dịch chiết ety laxetat, toluen, methanol sau cô quay chân không Footer Page of 126 có hàm lượng cao 1H-Cycloprop[e]azulene, decahydro-1,1,7trimethyl-4-tetramethyl (alloaromadendrene) chiếm ñến 74,94% với Header Page of 126 13 14 thời gian lưu 712, Ngoài có số cấu tử khác 1H- ñến 76,87% với thời gian lưu 714 Ngoài có số cấu tử Cyclopenta[1,3] khácnhư1H-Cyclopenta[1,3]cyclopropa[1,2]benzene,2,3,3aà, Cyclopropa[1,2]benzene,2,3,3aà,3bà,4,5,6,7 3bà, octahydro-7-methyl-3- chiếm 4,08%, Isocaryophyllene chiếm 3,82% 4,5,6,7octahydro-7-methyl-3- chiếm 2,63%, Isocaryophyllene chiếm số cấu tử khác có hàm lượng phần trăm thấp 4,39% số cấu tử khác có hàm lượng phần trăm thấp 3.2.2 Dịch chiết toluen 3.2.3 Dịch chiết methanol Kết ñịnh danh cấu tử dịch chiết toluen GC-MS ñược thể phổ ñồ hình 3.4 Hình 3.4 Sắc ký ñồ GC-MS dịch chiết toluen Kết ñịnh danh cấu tử dịch chiết methanol GC-MS ñược thể phổ ñồ hình 3.5 Hình 3.5 Sắc ký ñồ GC-MS dịch chiết methanol TPHH dịch chiết dung môi toluen ñược trình bày TPHH dịch chiết dung môi methanol ñược trình bày bảng 3.5 (phụ lục III) bảng 3.6 (phụ lục IV) Nhận xét: Từ sắc ký ñồ hình 3.4 bảng 3.5 ta thấy: Trong Nhận xét: Từ sắc ký ñồ hình 3.5 bảng 3.6 ta thấy: Trong dịch chiết dầu rái với dung môi toluen có 20 cấu tử, ñó có cấu dịch chiết dầu rái với dung môi methanol có 24 cấu tử cấu tử tử chưa ñịnh danh ñược Cấu tử có hàm lượng cao 1H- chưa ñược ñịnh danh, ñó cấu tử có hàm lượng cao 1H- Cycloprop[e]azulene,decahydro-1,1,7-trimethyl-4-tetramethyl chiếm Cycloprop[e]azulene,decahydro-1,1,7-trimethyl-4-tetramethyl chiếm Footer Page of 126 Header Page of 126 15 16 ñến 75,08% với thời gian lưu 715 Ngoài có số cấu tử hàm lượng cao Kết xác ñịnh có chất alloaromadendrene khác 1H-Cyclopenta[1,3]cyclopropa [1,2] benzene,2,3,3aà,3bà, dịch chiết từ dầu rái hoàn toàn trùng hợp với nghiên cứu ñã 4,5,6,7octahydro-7-methyl-3-chiếm 3,06%, Isocaryophyllen công bố trước ñây tác giả Hoàng Việt cộng (2003) chiếm 4,78% số cấu tử khác có hàm lượng phần trăm thấp 3.3 KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN QUI Từ hình 3.3, 3.4, 3.5 bảng 3.4, 3.5, 3.6 ta nhận thấy: TRÌNH CHIẾT TÁCH HÀM LƯỢNG HỮU CƠ TRONG - Bằng phương pháp GC-MS, TPHH dịch chiết với dung môi etyl axetat, toluen, methanol từ dầu rái ñã ñược ñịnh danh, với thành phần chủ yếu hợp chất sesquiterpen Trong ñó, dịch DUNG MÔI METHANOL 3.3.1 Khảo sát ảnh hưởng thời gian (dung môi chiết methanol, nhiệt ñộ 80oC) chiết methanol ñịnh danh ñược nhiều cấu tử với 24 cấu tử nên chọn dung môi methanol ñể khảo sát yếu tố ảnh hưởng ñến qui trình chiết tách hàm lượng hữu từ dầu rái vải, thêm vào 160ml dung môi methanol nhiệt ñộ 80oC Tiến hành chiết soxhlet thời gian khác (4, 6, 8, 10,12 giờ) Các - Trong dịch chiết có chung cấu tử giống là: Germacrene B; Copaene; Cyclohexane,2,4-diisopropenyl-1-methyl1-vinyl-,(1S,2R,4R)-; Các mẫu dầu rái cân khối lượng khoảng 50g cho vào túi dịch chiết ñem cất quay chân không sau ñó cân khối lượng cắn thu ñược Tính hàm lượng cắn thu ñược 2H-2,4a-Methanonaphthalence,1,3,4,5,6,7- Kết thực nghiệm ñược trình bày bảng 3.7 hình 3.7 Hexahydro-1,1,5,5-tetramethyl-; Isocaryophyllene, 3a,7-Methano- Bảng 3.7 Sự phụ thuộc hàm lượng dầu rái vào 3aH-cyclopentacyclooctene,1,4,5,6,7,8,9,9a-Octahydro-1,1,7átrimethyl-; thời gian chiết 1H-Cycloprop[e]azulene,decahydro-1,1,7-trimethyl-4- tetramethyl; 1H-Cyclopenta[1,3]cyclopropa [1,2]benzene,2,3,3aà, 3bà,4,5,6,7octahydro-7-methyl-3-; isopropenyl-1-vinyl-(1S,2R)-(-)-; Ledene; p-Menth-3-ene,2- Cadina-3,9-diene, STT Thời gian chiết (h) Khối lượng dầu rái (g) Patchulane; Khối Hàm lượng cặn lượng cặn (g) (%) 50,031 3,235 6,466 Theo nhiều nghiên cứu ñã có hoạt tính chống viêm, chống 49,973 3,880 7,764 oxi hóa, kháng sinh, chống ung thư [21],[22] 50,082 4,855 9,694 - Trong dịch chiết ñều có cấu tử 1H-Cycloprop[e]azulene, 10 49,981 5,421 10,846 decahydro-1,1,7-trimethyl-4-tetramethyl (alloaromadendrene) với 12 50,028 5,419 10,832 Spathulenol Trong ñó, cấu tử ñáng quan tâm Isocaryophyllene Footer Page of 126 Header Page of 126 17 18 thời gian ñầu khác chứng tỏ yếu tố thời gian có ảnh hưởng Hàm lượng (%) tới ñiều kiện chiết dầu rái 3.3.2 Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ rắn lỏng (dung môi chiết 12,000 methanol, nhiệt ñộ 80oC) 10,000 Các mẫu dầu rái cân khối lượng khoảng 50g chiết 8,000 soxhlet với methanol nhiệt ñộ 80oC 140ml, 160ml, 6,000 180ml, 200ml, 220ml 10 Các dịch chiết ñem cất quay chân 4,000 không sau ñó cân khối lượng cắn thu ñược Tính hàm lượng cắn thu 2,000 ñược Kết thực nghiệm ñược trình bày bảng 3.8 hình 3.8 10 12 Bảng 3.8 Sự phụ thuộc hàm lượng dầu rái vào tỉ lệ rắn lỏng Thời gian (h) Hình 3.7 Sự phụ thuộc hàm lượng % dầu rái vào thời gian chiết o nhiệt ñộ 80 C cho thấy: + Khi thời gian tăng lượng cắn tách lớn ñến 10h ñạt giá trị ổn ñịnh + Nếu tiếp tục tăng thời gian chiết lượng dầu rái giảm ñi chiết nóng thời gian dài làm cho thành phần tinh dầu bay nguyên liệu ngâm dung môi thời gian dài trương nở làm bít lổ thông màng tế bào gây cản trở khả thấm dung môi, giảm hiệu suất chiết Vậy, thời gian chiết tốt 10 chênh lệch hàm lượng phần trăm dầu rái thu ñược theo thời gian khoảng Footer Page of 126 Hàm lượng cặn lượng Khối lượng methanol (ml) dầu rái (g) 140 49,978 5,325 10,655 160 50,056 5,415 10,818 180 49,982 5,570 11,144 200 50,015 5,545 11,087 220 49,967 5,538 11,083 STT Từ kết thu ñược bảng 3.7 hình 3.7 phụ thuộc hàm lượng dầu rái vào thời gian chiết dung môi methanol Khối Thể tích (g) cặn (%) Header Page 10 of 126 19 20 khoảng thời gian ñầu khác chứng tỏ yếu tố tỉ lệ rắn lỏng Hàm lượng (%) có ảnh hưởng tới ñiều kiện chiết dầu rái 11,200 11,100 3.4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC 11,000 10,900 10,800 10,700 PHẦN KẾT TINH CỦA CẶN DẦU RÁI ĐƯỢC CHIẾT TỪ METHANOL 3.4.1 Qui trình chiết nguyên liệu 10,600 10,500 10,400 Cân lượng khoảng 60 gam mẫu dầu rái vào túi vải, sau ñó cho 180ml dung môi 140 160 180 200 220 V(ml)Methanol Hình 3.8 Sự phụ thuộc hàm lượng % dầu rái vào tỉ lệ rắn lỏng Từ kết thu ñược bảng 3.8 hình 3.8 phụ thuộc hàm lượng dầu rái vào lượng dung môi methanol nhiệt ñộ 80oC thời gian 10 ta thấy ñược: + Cùng khối lượng nguyên liệu tăng thể tích dung môi hàm lượng dầu rái ngày tăng Vì thể tích nhỏ dung môi nhanh bão hòa; thể tích lớn làm tăng ñộ thẩm thấu, ñộ hòa tan dung môi, tăng khả tiếp xúc với nguyên liệu dẫn ñến tăng hiệu suất chiết + Đến thể tích ñịnh, lượng hoạt chất ñược tách gần hoàn toàn chiết thêm ñược tăng thêm thể tích dung môi Vậy lượng dung môi tối ưu 180ml chênh lệch hàm lượng phần trăm dầu rái thu ñược theo lượng methanol Footer Page 10 of 126 methanol tiến hành chiết soxhlet nhiệt ñộ 80oC 10h Dịch chiết thu ñược ñể nguội ñem cất quay chân không ñến 1/3, sau ñó ly tâm thu ñược hỗn hợp chất rắn dạng sánh ñem sấy tủ sấy nhiệt ñộ 60oC 15 ngày khô, sau ñó ñem nghiền ta ñược hỗn hợp chất rắn nhỏ màu vàng nâu (cắn) cân ñược 6,47gam (hình3.9) Lấy gam hỗn hợp rắn thu ñược ñi lựa chọn dung môi kết tinh Hình 3.9.Hỗn hợp chất rắn 3.4.2 Chọn dung môi Tiến hành: Cho tinh thể vào ống nghiệm, sau ñó nhỏ lượng vừa ñủ dung môi thử nghiệm, lắc ống nghiệm Quan sát hoà tan mẫu dầu rái ñiều kiện thường sau ñun nóng ống nghiệm Kết quả: Header Page 11 of 126 21 22 + Dung môi butanol, etanol, clorofom, ñietyl ete, hỗn hợp chất rắn tan nhanh ñiều kiện thường dung môi dung môi ñể kết tinh dung môi dung môi ñể kết tinh + sấy nhiệt ñộ 50-600C sau 19 ngày khô ta cạo ñược tinh thể kết tinh có màu vàng nâu + Dung môi n-hexan, hỗn hợp chất rắn không tan ñiều kiện thường ñun nóng Sau khoảng ngày dịch cắn ñã kết tinh, lấy khỏi tủ lạnh Đem cân lượng tinh thể vừa kết tinh ñược khối lượng 2,267 gam, ñem xác ñịnh nhiệt ñộ nóng chảy chấm sắc khí mỏng ñể kiểm tra ñộ tinh khiết tinh thể kết tinh Kiểm tra ñộ tinh khiết mẫu tinh thể dầu rái vừa kết tinh: Dung môi etyl axetat: Ở ñiều kiện thường tinh thể không Kiểm tra sắc kí mỏng tan, ta tiếp tục nhỏ thêm vài giọt dung môi nửa lắc không tan, ñem ñun cách thuỷ nhiệt ñộ sôi dung môi thấy tinh thể tan ñể nguội làm lạnh tinh thể kết tinh lại ñây dung môi tốt dùng ñể kết tinh 3.4.3 Kết tinh etyl axetat Tiến hành: Cho 3,47 gam hỗn hợp chất rắn vào cốc thủy tinh 100ml, cho 34,7 ml dung môi etyl axetat (ta lấy lượng dung môi ñó tỉ lệ hoà tan tốt nhất) vào cốc ñựng hỗn hợp rắn lắc ñều, sau ñó ñun cách thủy với nhiệt ñộ sôi dung môi lắc ñều ñể hỗn hợp rắn dầu rái tan hết etyl axetat Lọc nóng dung dịch phễu chiết ñể loại bỏ chất bẩn, chất phụ khỏi dung thu ñược hỗn hợp dung dịch (kết tinh lần 1), ta lấy hỗn hợp dung dịch thu ñược ñã kết tinh lần ta lại tiếp tục làm qui trình ta ñược kết tinh lần 2, ta tiếp tục lấy hỗn hợp dung dịch thu ñược kết tinh lần làm qui trình ta ñược cắn thu ñược kết tinh lần Sau ñó lấy hỗn hợp dung dịch thu ñược ñã kết tinh lần cho vào tủ lạnh nhiệt ñộ 2-70C theo dõi Footer Page 11 of 126 Hòa tan khoảng 1mg mẫu lượng vừa ñủ 1ml CHCl3 Dùng ống mao quản chấm mẫu lên mỏng (2x8cm) Triển khai sắc kí mỏng với hệ dung môi n-hexan - Cloroform = 7:3, phun thuốc thử Vanilin 1%/H2SO4 ñặc, sấy mỏng khoảng 1100C, vệt dài màu vàng nâu Kết luận mẫu chưa sạch, lẫn tạp chất Kiểm tra nhiệt ñộ nóng chảy Khi kiểm tra nhiệt ñộ nóng chảy mẫu tinh thể ñã kết tinh ta thấy ñiểm bắt ñầu nóng chảy 90,3 ñiểm cuối 95,4 có nghĩa nhiệt ñộ nóng chảy sai lệch 5,1oC xem mẫu chưa sạch, lẫn tạp chất Tinh thể kết tinh thu ñược gửi ñi phân tích máy sắc ký khí ghép khối phổ GC-MS Trung tâm Dịch vụ phân tích thí nghiệm số Nguyễn Văn Thủ, Quận 1, Thành phố Hồ Chí Minh Kết ñịnh danh cấu tử tinh thể kết tinh GC-MS ñược thể phổ ñồ hình 3.10 Header Page 12 of 126 23 24 thường Lupeol chiếm hàm lượng nhỏ thành phần khác [23] Vậy nghĩ ñây phát từ kết nghiên cứu ñề tài Hình 3.10 Sắc ký ñồ GC-MS tinh thể kết tinh Nhận xét: Từ sắc ký ñồ hình 3.10 bảng 3.9 ta thấy: Trong tinh thể kết tinh có 49 cấu tử 17 cấu tử chưa ñược ñịnh danh, ñó cấu tử có hàm lượng cao Lupeol chiếm ñến 12,67 % với thời gian lưu 1818 Ngoài có số cấu tử khác 1á,1áH,10áH-Guaia-5,11-diene chiếm 8,61%, Taraxasterol chiếm 5,92 % số cấu tử khác có hàm lượng phần trăm thấp.Trong ñó hoạt tính Lupeol ñược nhà khoa học Việt Nam giới nghiên cứu ñánh giá cao vai trò ñược xem nguồn dược liệu quí dùng ñể ñiều trị bệnh ung thư Lupeol ñược ñánh giá tác nhân có tiềm ñiều trị bệnh ung thư tuyến tụy, với phương pháp kết tinh chưa thu ñược hợp chất tinh khiết ñã thu ñược chất Lupeol có hàm lượng cao 12,67%, bình Footer Page 12 of 126 Header Page 13 of 126 25 26 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ nó, ñược xem nguồn dược liệu quí dùng ñể ñiều trị bệnh ung thư KẾT LUẬN Trong trình thực ñề tài nghiên cứu dầu rái, ñã ñạt ñược số kết sau: KIẾN NGHỊ Phân lập cấu tử có hàm lượng cao cắn dầu rái ñược - Xác ñịnh ñược số thông số hóa lý nguyên liệu: ñộ ẩm 34,753%; hàm lượng tro 3,792%; hàm lượng kim loại nặng không ñáng kể chiết từ dung môi methanol Thử hoạt tính sinh học dịch chiết tinh thể kết tinh ñể có nhìn tổng thể hoá thực vật hoạt tính sinh học - Bằng phương pháp GC-MS ñã ñịnh danh ñược dịch chiết etyl axetat có 21 cấu tử, dịch chiết toluen có 20 cấu tử dịch dầu rái, góp phần làm tăng giá trị sử dụng chữa bệnh dầu rái thuốc dân gian chiết methanol có 24 cấu tử Thành phần chủ yếu dịch chiết Nghiên cứu thêm dầu rái vùng miền khác ñể có từ dầu rái hợp chất secquitecpen Và dịch chiết có sở khoa học so sánh ảnh hưởng khí hậu, thổ nhưỡng ñến chung cấu tử 1H-Cycloprop[e]azulene,decahydro-1,1,7- thành phần hoá học cuả dịch chiết trimethyl-4-tetramethyl chiếm hàm lượng cao nhất; 1H- Cyclopenta[1,3]cyclopropa[1,2]benzene,2,3,3aà,3bà, 4,5,6,7 octahydro-7-methyl-3-; Isocaryophyllene - Đã khảo sát ñược yếu tố ảnh hưởng ñến hàm lượng chiết tách cấu tử từ dung môi methanol thời gian tỉ lệ rắn/lỏng: Thời gian chiết tối ưu: 10h Tỉ lệ rắn/lỏng tối ưu: khối lượng dầu rái/thể tích methanol = 50/180 (g/ml) - Đã ñịnh danh ñược tinh thể kết tinh có 49 cấu tử, ñó cấu tử có hàm lượng cao Lupeol Lupeol ñược nhà khoa học Việt Nam giới nghiên cứu ñánh giá cao vai trò Footer Page 13 of 126  ... [1,2]benzene,2,3,3aà, 3bà,4,5,6,7octahydro-7-methyl- 3-; isopropenyl-1-vinyl-(1S,2R )-( - )-; Ledene; p-Menth-3-ene, 2- Cadina-3,9-diene, STT Thời gian chiết (h) Khối lượng dầu rái (g) Patchulane; Khối Hàm lượng... việc sử dụng dầu rái làm dược liệu an toàn, không ảnh hưởng ñến sức khoẻ người 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT Cân 50g dầu rái cho vào chiết soxhlet, chiết với 160ml... tài Nghiên cứu xác ñịnh thành thiên nhiên nên thuận lợi cho phát triển nhiều loài thực phần hoá học số dịch chiết dầu rái Đại Lộc- Quảng vật Trong loài thực vật ñó, có nhiều loại mang lại cho Nam