Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Công trình ñược hoàn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG LÊ THỊ TUYẾT NGÂN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CÓ TRONG MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA HẠT QUẢ BƠ Ở ĐĂK LĂK Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ TỰ HẢI Phản biện 1: TS NGUYỄN THỊ BÍCH TUYẾT Phản biện 2: TS BÙI XUÂN VỮNG Chuyên ngành: Hóa Hữu Mã số: 60 44 27 Luận văn ñược bảo vệ trước Hội ñồng chấm Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 30 tháng 11 năm 2012 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thông tin- Học liệu, Đại học Đà Nẵng Đà Nẵng - Năm 2012 Footer Page of 126 - Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng Header Page of 126 MỞ ĐẦU Lý chọn ñề tài Nhiều công trình khoa học giới ñã nghiên cứu thành phần hóa học hạt số ñể làm thuốc Cây bơ Cây bơ loại thực vật thân gỗ ñược trồng khắp nơi, tên khoa ñã có nhiều công trình nghiên cứu lá, vỏ hạt bơ với học Persea americana, nhóm thực vật có hoa, hai mầm, nhiều tác dụng chữa bệnh Tuy nhiên, công trình nghiên cứu họ Lauraceae Trồng nhiều nước có khí hậu nhiệt ñới Ấn Việt Nam trình chiết, tách hay xác ñịnh thành phần hoá học, Độ, Malaysia, Đài Loan, Việt Nam nước Châu Á khác Giá cấu trúc hợp chất hạt bơ chưa hệ thống trị kinh tế ñáng kể bơ có ñược từ việc thu hoạch Hạt bơ vị thuốc ñược sử dụng Việt Nam Trên giới, hạt bơ có vị trí quan trọng y học cổ truyền Ấn Độ, Mỹ sử dụng hạt bơ làm thuốc chữa bệnh tiêu chảy kiết lỵ, y học dân tộc Mexico châu Phi sử dụng hạt bơ phương thuốc mạnh chống lại bệnh khác rối loạn kinh nguyệt bệnh tiểu ñường…Ngày nay, chất có hạt bơ ñã Với mong muốn tìm hiểu hạt bơ nhằm làm sáng tỏ công dụng nó, ñã chọn ñề tài “Nghiên cứu xác ñịnh thành phần hoá học có số dịch chiết hạt bơ Đăk Lăk” Mục ñích nghiên cứu - Nghiên cứu xác ñịnh thành phần hoá học có số dịch chiết hạt bơ - Thăm dò hoạt tính sinh học dịch chiết nhằm làm sáng tỏ ñược kết hợp số nguyên liệu thiên nhiên khác tạo nguồn chất công dụng sống xơ hoà tan tự nhiên quan trọng việc chữa bệnh tim mạch Phạm vi ñối tượng nghiên cứu hoà tan cholesterol 3.1 Phạm vi nghiên cứu Y học phương Đông ñóng góp lớn vào y học ñại việc phòng ngừa ñiều trị chứng bệnh ngày nâng - Xác ñịnh thành phần hóa học hạt bơ - Thử nghiệm hoạt tính sinh học số chất hạt bơ ñể cao vai trò vị Người ta có xu hướng quay tìm công dụng chúng với tự nhiên ñể nghiên cứu tìm hoạt chất quý giúp cho 3.2 Đối tượng nghiên cứu trình ñiều trị bệnh có hiệu Trong vô số loài thực vật Việt Nam, bơ loại trái có giá trị Cây bơ có tên khoa học Persea americana thuộc họ Lauraceae Hạt bơ nghiên cứu ñược thu hái từ bơ Đăk sử dụng cao, ñược dùng ñể bào chế thuốc chữa nhiều bệnh Tuy Lăk nhiên, việc nghiên cứu thành phần hoá học hoạt tính sinh học Phương pháp nghiên cứu hạt bơ Việt Nam chưa ñầy ñủ 4.1 Nghiên cứu lí thuyết Footer Page of 126 Header Page of 126 4.2 Phương pháp thực nghiệm 4.2.1 Phương pháp lấy mẫu: Thu hái xử lí mẫu 4.2.2 Phương pháp phân tích trọng lượng - Giải thích cách khoa học số kinh nghiệm dân gian ứng dụng hạt bơ - Tổng hợp kiến thức hợp chất thiên nhiên ñể giảng dạy - Xác ñịnh ñộ ẩm hạt bơ: phương pháp sấy khô môn hóa học nhà trường phổ thông ñược tốt - Xác ñịnh hàm lượng hữu hạt bơ: phương pháp tro hóa Bố cục luận văn 4.2.3 Phương pháp tách chất Chiết dung môi có ñộ phân cực khác nhau: nhexan, etyl axetat, metanol phương pháp chưng ninh chiết Luận văn gồm 70 trang ñó có 21 bảng 26 hình Phần mở ñầu trang, kết luận kiến nghị trang, tài liệu tham khảo trang Nội dung luận văn chia làm chương: soxhlet Chương – Tổng quan (24 trang) 4.2.4 Các phương pháp vật lý Chương – Phương pháp nội dung nghiên cứu (10 trang) - Dùng phương pháp AAS xác ñịnh hàm lượng kim loại nặng Chương – Kết thảo luận (27 trang) - Dùng phương pháp sắc ký khí - phổ khối liên hợp (GC-MS) Chương nhằm phân tích xác ñịnh thành phần, ñịnh danh hoạt chất dịch chiết - Phương pháp thử hoạt tính sinh học Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài 5.1 Ý nghĩa khoa học - Cung cấp thông tin khoa học quy trình chiết tách, xác ñịnh thành phần hóa học hạt bơ Đăk Lăk - Cung cấp thông tin, tư liệu làm sở cho việc nghiên cứu sau 5.2 Ý nghĩa thực tiễn - Nhằm giúp cho việc ứng dụng hạt bơ phạm vi rộng cách khoa học TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu bơ 1.1.1 Nguồn gốc, phân bố Bơ có nguồn gốc từ Mexico Trung Mỹ, ñược trồng từ Rio Grande trung tâm Peru trước người châu Âu Sau ñó, ñược ñưa vào Jamaica Tây Ban Nha vào kỷ XVII ñến Califonia vào kỷ XIX, sau ñó bơ trồng không Tây Ấn mà lan rộng sang khu vực nhiệt ñới cận nhiệt ñới với ñiều kiện môi trường thích hợp Tại Việt Nam bơ xuất ñầu tiên tỉnh Lâm Đồng người Pháp ñưa vào từ năm 1940 [15] 1.1.2 Phân loại Bơ thực vật thuộc giới Plantae, Laurales, họ Lauraceae, chi Persea loài ñó là: Persea americana mill Persea drymyfolia Footer Page of 126 Header Page of 126 1.1.2.1 Đặc ñiểm chủng bơ giúp hoạt hóa số protein xương ñể xương phát triển 1.1.2.2 Đặc ñiểm phân biệt chủng bơ khỏe mạnh 1.1.3 Đặc tính sinh thái bơ 1.1.3.1 Nhiệt ñộ 1.1.3.2 Độ ẩm Trái bơ giàu chất xơ nên mang lại lợi ích tốt việc ñiều trị ngăn ngừa chứng táo bón, bệnh trĩ Vtamin B6 chứa bơ, ñây loại vitamin cần thiết, tham 1.1.3.3 Gió gia vào việc thực phản ứng hóa học diễn thể, bên 1.1.3.4 Đất trồng cạnh ñó tăng cường hệ miễn dịch sức ñề kháng 1.1.4 Giá trị dinh dưỡng [19] 1.2.1.2 Tình hình sản xuất bơ [19] Bơ trái bao gồm thành phần sau: protein, chất Những vùng sản xuất bơ Việt Nam cao nguyên béo, vitamin, chất khoáng, muối, ñường carbohydrates nước thuộc tỉnh miền Nam như: Đồng Nai, Bà Rịa- Vũng Tàu, Lâm 1.1.5 Giới thiệu bơ Đăk Lăk [17] Đồng, Đăk Lăk tỉnh Phú Thọ Sản lượng bơ lớn Đăk Lăk Cây bơ cỡ trung bình ñạt ñến chiều cao lên ñến 10 – 15 m Cây to ñược xếp vào loại xanh quanh năm Bơ du nhập vào Đăk Lăk năm 1940 người Pháp mang tới Sau giống khác từ Philippines Mỹ du nhập vào Bơ không ñược ñưa vào Đăk Lăk theo cấu trúc ñịnh nên tên giống xác ñịnh xác ñược Chủng bơ sống tốt Đăk Lăk chủng bơ Tây Ấn Độ sau ñó ñến Đồng Nai tỉnh Lâm Đồng 1.2.1.3 Tình hình nghiên cứu khoa học bơ Tình hình nghiên cứu khoa học hạt bơ nước ñề tài mới, chưa ñược khai thác nhiều Chỉ nghiên cứu theo hướng sử dụng hạt bơ ñể chữa bệnh theo kinh nghiệm dân gian chưa có hệ thống Không có công trình nghiên cứu khoa học hạt bơ ñược 1.2 Tình hình nghiên cứu nước giới công bố 1.2.1 Tình hình nghiên cứu nước 1.2.2 Tình hình nghiên cứu giới 1.2.1.1 Nghiên cứu lợi ích bơ [18], [20] 1.2.2.1 Nghiên cứu lợi ích bơ [18], [20] Kali giúp chống lại bệnh tuần hoàn máu bao gồm: tăng huyết áp, bệnh tim, ñột quỵ Loại trái chứa lượng lớn vitamin E, chất chống ôxy hóa giúp làm trẻ, giúp bảo vệ thể, chống lại bệnh tim mạch, ung thư Chống co giật Hạ huyết áp Kháng u, diệt côn trùng Độc tính, kháng nấm 1.2.2.2 Tình hình sản xuất bơ [19] Trong loại chứa nhiều vitamin K, loại vitamin Sản xuất bơ giới năm 2003 triệu tấn, ñó ñóng vai trò quan trọng vào trình làm ñông máu Mexico sản xuất nhiều (34%) Các nước khác ñóng góp từ 3-7% Footer Page of 126 Header Page of 126 10 tổng sản lượng giới Chín nước có sản lượng bơ cao lần 1.3 Các phương pháp phân tích lượt là: Mexico, Mỹ, Indonesia, Colombia, Domincan, Chile, Tây 1.3.1 Phương pháp ño quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS Ban Nha, Peru, Braxin sản xuất ñược 73% tổng sản lượng bơ 1.3.2 Phương pháp sắc kí khí GC-MS giới Sản lượng bơ giới tăng 46% giai ñoạn 1994 – 2003, Chương ñặc biệt Tây Ban Nha (296%) Chile (133%) tăng nhanh chóng 1.2.2.3 Tình hình nghiên cứu khoa học bơ Năm 2011, công trình nghiên cứu “The effect of aqueous seed NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu extract of persea americana on serum lipid and cholesterol levels in 2.1.1 Thu hái nguyên liệu Rabbits” Nwaoguikpe R N and Braide W” 2.1.2 Xử lý nguyên liệu Năm 2010, công trình nghiên cứu “Effects of Aqueous Seed Extract of Persea americana Mill avocado on Blood Pressure and Lipid Profile in Hypertensive Rats” K.E Imafidon and F.C Amaechina” Năm 2009, công trình nghiên cứu “Chemical composition, toxicity and larvicidal and antifungal activities of Persea americana 2.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 2.2.1 Hóa chất 2.2.2 Thiết bị nghiên cứu 2.3 Sơ ñồ nghiên cứu Hạt bơ Xác ñịnh ñại lượng vật lý avocado seed extracts” João Jaime Giffoni Leite, Erika Helena Salles Brito, Rossana Aguiar Cordeiro, Raimunda Samia Nogueira Brilhante, José Júlio Costa Sidrim, Luciana Medeiros Bertini, Selene Độ ẩm Maia de Morais Marcos Fábio Gadelha Rocha1” Năm 2009, công trình nghiên cứu “Effect of Aqueous Extract of Các dịch chiết Persea Americana Seeds on the Glycemia of Diabetic Rabbits” Hàm Hàm lượng lượng tro kim N'guessan Koffi, Amoikon Kouakou Ernest, Soro Dodiomon” Năm 2008, công trình nghiên cứu “Chiết xuất phân loại lipid GC – MS từ hạt Persea americana Miller Chrysophyllum albidum G Nghiên cứu phương pháp tách chất Don” Sam, S M., Akonye, L A., Mensah, S I., Esenowo, G J” Năm 2007, công trình nghiên cứu “Blood glucose lowering Khảo sát ñiều kiện tách chất: activities of seed of Persea americana on alloxan induced diabetic Thăm dò rats” Matthew Okonta, Lillian Okonta Cletus Nze Aguwa” hoạt tính sinh học Footer Page of 126 Thời gian tỉ lệ R/L Header Page of 126 11 12 2.4 Phương pháp nghiên cứu 2.4.5.1 Thử hoạt tính kháng sinh 2.4.1 Các phương pháp xác 2.4.5.2 Thử hoạt tính chống oxi hóa DPPH 2.4.1.1 Xác ñịnh ñộ ẩm Chương 2.4.1.2 Xác ñịnh hàm lượng tro KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 2.4.1.3 Xác ñịnh hàm lượng số kim loại hạt bơ phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS 2.4.2 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng ñến trình tách chất 3.1 Kết xác ñịnh tiêu vật lý hạt bơ 3.1.1 Độ ẩm Kết khảo sát ñộ ẩm hạt bơ thu ñược trình bày bảng 3.1 2.4.2.1 Khảo sát ảnh hưởng loại dung môi 2.4.2.2 Khảo sát thời gian 2.4.2.3 Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ khối lượng chất chiết với thể tích dung môi Cho lượng hạt bơ 10 gam ñược gói kĩ giấy lọc, sau ñó cho thể tích khác loại dung môi vào (V1, V2, V3,…ml) Tiến hành tách chất khoảng thời gian tối ưu ñã chọn Cô quay dung môi dịch chiết thu ñược cắn tỉ lệ khối lượng chất chiết với thể tích dung môi khác Xác ñịnh tỉ lệ khối lượng chất chiết với thể tích dung môi tối 2.4.3 Phương pháp tách chất Chén Chén Chén * Nhận xét: Hàm lượng nước hạt bơ chiếm tỉ lệ cao, ñộ ẩm trung bình hạt bơ tương ñối cao 76,80% 3.1.2 Hàm lượng tro Kết khảo sát hàm lượng tro hạt bơ thu ñược trình bày bảng 3.2 Bảng 3.2 Hàm lượng tro hạt bơ 2.4.3.1 Phương pháp chưng ninh 2.4.3.2 Phương pháp chiết soxhlet 2.4.4 Phương pháp xác ñịnh thành phần hóa học dịch chiết hạt bơ Thành phần hóa học dịch chiết hạt bơ dung môi hexan, etyl axetat, metanol ñược xác ñịnh phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ GC – MS 2.4.5 Phương pháp thăm dò hoạt tính sinh học Footer Page of 126 Bảng 3.1 Độ ẩm hạt bơ m0 m1 m2 Độ ẩm hạt bơ 105,278g 5,001g 106,412g 77,32% 104,032 4,999g 105,192g 76,79% 108,803 5,003 109,989g 76,29% Kết trung bình (%) 76,80% m1 m2 m3 Hàm lượng tro Chén 5,001g 106,412g 105,397g 20,30% Chén 4,999g 105,192g 104,182g 20,20% Chén 5,003g 109,989g 108,939g 20,99% Kết trung bình (%) 20,50% * Nhận xét: Vậy hàm lượng tro trung bình hạt bơ 20,50% 3.1.3 Hàm lượng kim loại Header Page of 126 13 14 Kết hàm lượng kim loại hạt bơ thu ñược trình bày Bảng 3.5 Kết khảo sát thời gian chiết soxhlet dung môi MeOH bảng 3.3 Bảng 3.3 Hàm lượng kim loại hạt bơ STT Kim loại STT Thời gian Khối lượng Khối lượng chiết (h) mẫu (gam) cắn (gam) Phần trăm khối lượng Hàm lượng TCVN hàm lượng cắn (%) (mg/kg) kim loại (mg/kg) 10,008g 1,098g 10,97% Cu 3,777 20 9,998g 1,276g 12,76% Pb 1,276 10,003g 1,552g 15,52% Zn 5,114 20 10,005g 1,551g 15,51% As 00,041 10 10,008g 1,554g 15,54% * Nhận xét: Căn vào ñịnh số 505/ BYT-QĐ ngày 13 tháng * Nhận xét: Vậy thời gian chiết tối ưu 6h tương ứng với khối năm 1992 tiểu chuẩn kim loại nặng Cu, Pb Zn QCVN 8- lượng cắn thu ñược 1,552g ñối với dung môi metanol 1:2011/BYT tiêu chuẩn kim loại nặng As Bộ y tế, ta nhận thấy 3.3.1.2 Trong dung môi etyl axetat thành phần kim loại nặng hạt bơ nghiên cứu không phát hàm lượng cho phép Kết thu ñược trình bày bảng 3.6 Bảng 3.6 Kết khảo sát thời gian chiết soxlet dung môi EtOAc 3.2 Kết ảnh hưởng loại dung môi Kết thu ñược trình bày bảng 3.4 Bảng 3.4 Kết khảo sát dung môi Khối lượng Phần trăm cắn (gam) khối lượng cắn (%) Cắn metanol 0,476g 2,38% Cắn etyl axetat 0,206g 1,03% 0,050g 0,25% Cắn hexan * Nhận xét: Từ hình 3.1 bảng 3.4, khả hòa tan hạt bơ dung môi giảm dần theo thứ tự sau: Metanol, etyl axetat, hexan 3.3 Kết khảo sát thời gian chiết tách 3.3.1 Bằng phương pháp chiết soxhlet 3.3.1.1 Trong dung môi metanol Kết thu ñược trình bày bảng 3.5 Footer Page of 126 STT Thời gian Khối lượng Khối lượng Phần trăm khối lượng chiết (h) mẫu (gam) cắn (gam) 10,007g 0,498g 4,98% 10,005g 0,568g 5,68% 9,997g 0,575g 5,75% 10,009g 0,666g 6,65% 10 9,998g 0,663g 6,63% cắn (%) * Nhận xét: Vậy thời gian chiết tối ưu 8h tương ứng với khối lượng cắn thu ñược 0,666g ñối với dung môi etyl axetat 3.3.1.3 Trong dung môi hexan Kết thu ñược trình bày bảng 3.7 Header Page of 126 15 16 Bảng 3.7 Kết khảo sát thời gian chiết soxlet dung môi hexan Bảng 3.9 Kết khảo sát thời gian chưng ninh dung môi EtOAc Phần trăm Thời gian Khối lượng Khối lượng chiết (h) mẫu (gam) cắn (gam) 9,999g 0,119g 1,19% 10,009g 0,187g 10,003g 10 STT Phần trăm Thời gian Khối lượng Khối lượng chiết (h) mẫu (gam) cắn (gam) 10,001g 0,264g 2,64% 1,87% 10,006g 0,425g 4,25% 0,205g 2,05% 10,005g 0,527g 5,27% 10,005g 0,216g 2,16% 10,005g 0,529g 5,29% 9,997g 0,213g 1,95% 10 9,998g 0,525g 5,25% khối lượng STT cắn (%) khối lượng cắn (%) * Nhận xét: Vậy thời gian chiết tối ưu 8h tương ứng với khối * Nhận xét: Vậy thời gian chưng ninh tối ưu 6h tương ứng với lượng cắn thu ñược 0,216g ñối với dung môi hexan khối lượng cắn thu ñược 0,527g ñối với dung môi etyl axetat 3.3.2 Bằng phương pháp chưng ninh 3.3.2.3 Trong dung môi hexan Kết thu ñược trình bày bảng 3.10 3.3.2.1 Trong dung môi metanol Kết thu ñược trình bày bảng 3.8 Bảng 3.10 Kết khảo sát thời gian chưng ninh dung môi hexan Bảng 3.8 Kết khảo sát thời gian chưng ninh dung môi MeOH Thời gian Khối lượng Khối lượng chiết (h) mẫu (gam) cắn (gam) 9,998g STT Phần trăm STT khối lượng Thời gian Khối lượng Khối lượng chiết (h) mẫu (gam) cắn (gam) Phần trăm khối lượng cắn (%) cắn (%) 10,003g 0,142g 1,42% 0,732g 7,32% 10,009g 0,154g 1,54% 10,002g 0,844g 8,84% 9,998g 0,196g 1,96% 10,007g 0,899g 8,99% 10,003g 0,198g 1,98% 9,999g 0,895g 8,95% 10 9,999g 0,195g 1,95% 10 9,997g 0,897g 8,97% * Nhận xét: Vậy thời gian chưng ninh tối ưu 6h tương ứng với * Nhận xét: Vậy thời gian chưng ninh tối ưu 6h tương ứng với khối lượng cắn thu ñược 0,196g ñối với dung môi hexan khối lượng cắn thu ñược 0,899g ñối với dung môi metanol 3.3.3 Kết so sánh phương pháp tách chất 3.3.2.2 Trong dung môi etyl axetat Kết thu ñược trình bày bảng 3.9 Footer Page of 126 Từ số liệu bảng 3.5 ñến bảng 3.10, ta có kết thu ñược thể hình 3.2, hình 3.3 hình 3.4 Header Page of 126 17 18 Khối lượng cắn (m g) Chiết soxhlet Chưng ninh Kết thu ñược trình bày bảng 3.11 2000 Bảng 3.11 Kết khảo sát tỉ lệ khối lượng chất chiết với thể tích 1500 1000 dung môi MeOH 500 Thể tích Khối Khối Phần trăm dung môi lượng mẫu lượng cắn khối lượng (ml) (gam) (gam) cắn (%) 100 10,003g 1,552g 15,52% 120 10,007g 1,645g 16,45% 140 9,997g 1,786g 17,86% 160 10,004g 1,787g 17,87% 180 9,998g 1,785g 17,85% 10 STT Thời gian (h) Hình 3.2 Biểu ñồ so sánh hai phương pháp tách chất dung môi MeOH Khối lượng cắn (mg) Chiết soxhlet Chưng ninh 700 600 500 400 300 200 100 10 Thời gian (h) * Nhận xét: Vậy tỉ lệ thích hợp 1/1,4 3.4.2 Trong dung môi etyl axetat Hình 3.3 Biểu ñồ so sánh hai phương pháp tách chất dung môi EtOAc Khối lượng cắn (mg) Chiết soxhlet Kết thu ñược trình bày bảng 3.12 Bảng 3.12 Kết khảo sát tỉ lệ khối lượng chất chiết với thể tích Chưng ninh dung môi EtOAc 250 Thể tích Khối Khối Phần trăm lượng mẫu lượng cắn khối lượng (ml) (gam) (gam) cắn (%) 100 10,009g 0,666g 6,66% 120 10,007g 0,734g 7,34% 140 9,997g 0,735g 7,35% 160 10,004g 0,736g 7,36% 180 9,998g 0,736g 7,33% 200 150 STT dung môi 100 50 10 Thời gian (h) Hình 3.4 Biểu ñồ so sánh hai phương pháp tách chất dung môi hexan * Nhận xét: Qua hình 3.2, hình 3.3 hình 3.4 ta thấy, nghiên cứu phương pháp tách chất ñạt hiệu suất cao ñó phương pháp chiết soxhlet 3.4 Kết khảo sát tỉ lệ khối lượng chất chiết với thể tích dung môi 3.4.1 Trong dung môi metanol Footer Page of 126 * Nhận xét: Vậy tỉ lệ thích hợp 1/1,2 3.4.3 Trong dung môi hexan Kết thu ñược trình bày bảng 3.13 Header Page 10 of 126 19 20 Bảng 3.13 Kết khảo sát tỉ lệ khối lượng chất chiết với thể tích dung môi hexan Thể tích Phần trăm Khối lượng Khối lượng khối lượng STT dung môi mẫu (gam) cắn (gam) (ml) cắn (%) 100 10,003g 0,205g 2,05% 120 10,007g 0,212g 2,12% 140 160 9,997g 10,004g 0,214g 0,216g 2,14% 2,16% 180 9,998g 0,216g 2,16% 10 11 12 13 14 15 16 17 * Nhận xét: Vậy tỉ lệ thích hợp 1/1,4 3.5 Kết nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết 18 hạt bơ 3.5.1 Kết nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết 19 metanol hạt bơ Kết thành phần hóa học dịch chiết metanol hạt bơ ñược trình bày bảng 3.14 Bảng 3.14 TPHH dịch chiết metanol hạt bơ STT Tên chất CTPT 3-Pyrroline, 1-nitrosoC4H6ON2 1,4-Butanediol C4H10O2 Phenylethyl alcolhol C8H10O 1,2-Propanediol, 3-methoxyC4H10O3 Isocaryophyllene C15H24 1H6 Cyclopenta[1,3]cyclopropa[1,2]benze C15H24 ne… (Z)6-Pantadecen-1-ol C15H30O (Z)6,(Z)9-Pentadecadien-1-ol C18H34O Footer Page 10 of 126 % 0.93 0.14 0.37 0.37 0.1 0.09 20 21 22 23 24 25 26 Lauraldehyde, dimethyl acetal 1,2,3,5-Cyclohexanetetrol Longifolenaldehyde 17-Octadecen-14-yn-1-ol Beta-Santalol Pentadecanoic acid, 14-methyl-, methyl ester n-Hexandecanoic acid 17-Octadecen-14-ynoic acid, methy ester 3,7,11,15-Tetramethyl-2-hexadecen1-ol 6,9-Octadecadienoic acid, methyl ester 17-Octadecene-9,11-diynoic acid, 8Hydroxy… Glaucyl alcohol 9,12- Octadecadienoic acid (Z,Z) 8,11,14-Eicosatrienoic acid, (Z,Z,Z) 11,14- Eicosadienoic acid, methyl ester 1,3-Dicyclopentyl-2-ndodecylcyclopentane Squalene Thành phần chưa ñịnh danh C14H30O2 C6H12O4 C15H24O C12H20 C15H24O 0.23 8.08 9.69 3.81 0.47 C17H34O2 0.25 C16H32O2 3.91 C18H32O 2.25 C20H40O 2.42 C19H34O2 0.67 C19H28O3 3.36 C15H24O 0.28 C18H34O 6.23 C20H34O2 6.13 C21H38O2 1.31 C27H50 25.58 C30H50 12.14 10,87 3.5.2 Kết nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết etyl axetat hạt bơ 0.2 0.12 Kết thành phần hóa học dịch chiết etyl axetat hạt bơ thu ñược trình bày bảng 3.15 Header Page 11 of 126 21 22 Bảng 3.15 TPHH dịch chiết EtOAc hạt bơ STT Tên chất Toluene Isovaleric acid α-Pinene 1,2,3-propanetriol, mono acetate 1,2,3-propanetriol, diacetate Benzeneacetic acid Pyrogallol Germacrene D 2,5-O-Mthylene-D-manitol Z,Z-4,15-Octadecadien-1-ol acetate Methyl (Z)-5,11,14,17eicosatetraenoate E-11-methyl-12-tetradecen-1-ol acetate Thành phần chưa ñịnh danh 10 11 12 13 CTPT C7H8 C5H10O2 C10H16 C5H10O4 C7H12O5 C8H8O2 % 0.17 0.14 0.12 0.51 0.45 0.19 C15H24 C7H14O6 0.47 0.35 0.53 C20H36O2 8.07 C21H34O2 2.96 16 C17H32O2 36.40 17 49,64 18 3.5.3 Kết nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết hexan hạt bơ Kết thành phần hóa học dịch chiết hexan hạt bơ thu ñược trình bày bảng 3.16 Tên chất Toluene Ethylbenzene m-Xylene Styrene Footer Page 11 of 126 10 11 12 13 14 15 19 20 21 α-Pinene p-mentha-1(7),3-dien 4,8,13-Cyclotetradecatriene-1,3diol… α-Phellandrene β-Ocimene Benzeneethanol 1,3,3-trimethyl-2oxabicyclo[2.2.2]octan-6-ol 4-isopropyl-1-methyl-1,2,3cyclohexanediol Z,Z-10,12-Hexadecadienal Germacrene D Cadina-3,9-diene (4Z,15Z)-4,15-Octadecadienyl acetate Methyl(5Z,11Z,14Z,17Z)5,11,14,17-eicosatetraenoate E-11-methyl-12-tetradecen-1ol acetate Stigmast-5-en-3-ol 1,30-triacontanediol Thành phần chưa ñịnh danh C10H16 C10H16 0.07 0.07 C20H34O2 2.76 C10H16 C10H16 C8H10O 0.05 0.02 0.05 C10H18O2 0.05 C10H20O3 0.06 C16H28O C15H24 C15H24 1.33 0.29 0.05 C20H36O2 3.82 C21H34O2 1.39 C17H32O2 12.00 C29H50O C30H62O2 69.93 3.88 1,33 3.6 Kết thử hoạt tính sinh học Bảng 3.16 TPHH dịch chiết hexan hạt bơ STT CTPT % C7H8 C8H10 C8H10 C8H8 2.73 0.02 0.06 0.04 3.6.1 Kết hoạt tính sinh học Kết hoạt tính chống oxy hóa DPHH hạt bơ thu ñược trình bày bảng 3.17 Bảng 3.17 Kết hoạt tính chống oxy hóa DPHH hạt bơ STT Cắn hạt bơ EC50 (µg/ml) Cắn hexan > 128 Header Page 12 of 126 23 24 Cắn metanol Cắn etyl axetat > 128 > 128 * Nhận xét: Bảng 3.17 cho thấy, khả chống oxy hóa DPHH hạt bơ dịch chiết khả trung hòa gốc tự 3.6.2 Kết hoạt tính kháng sinh Kết hoạt tính kháng sinh hạt bơ nồng ñộ ức chế phát triển vi sinh vật nấm kiểm ñịnh - IC50 (µg/ml) thu ñược trình bày bảng 3.18, bảng 3.19 bảng 3.20 Bảng 3.18 Kết hoạt tính kháng vi sinh vật Gram (+) hạt bơ IC50 (µg/ml) STT Tên mẫu cắn Gram (+) hạt bơ Lactobacillus Bacillus Staphylococc fermentum subtilis us aureus 74,67 > 128 29,43 Cắn hexan Cắn metanol 128 > 128 117,17 Cắn EtOAC 58,67 > 128 100,57 Bảng 3.19 Kết hoạt tính kháng vi sinh vật Gram (-) STT Tên mẫu cắn hạt bơ Cắn hexan Cắn metanol Cắn EtOAc Footer Page 12 of 126 hạt bơ IC50 (µg/ml) Gram (-) Salmonella Escherichia Pseudomonnas enterica coli aeruginosa > 128 > 128 > 128 > 128 > 128 > 128 > 128 > 128 > 128 Bảng 3.20 Kết thử hoạt tính kháng nấm hạt bơ IC50 (µg/ml) Tên mẫu cắn STT Nấm hạt bơ Candica albican Cắn hexan > 128 Cắn metanol > 128 Cắn etyl axetat > 128 * Nhận xét: Từ bảng 3.18, 3.19 3.20 ta thấy, mẫu thử cắn hexan, cắn metanol, cắn etyl axetat hạt bơ có hoạt tính kháng chủng Lactobacillus fermentum với giá trị IC50 tương ứng 74,67; 128; 58,67 µg/ml kháng chủng Staphylococcus aureus với giá trị IC50 tương ứng 29,43; 117,17; 100,57 µg/ml Header Page 13 of 126 25 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 26 - Dịch chiết etyl axetat hạt bơ có thành phần hóa học gồm cấu tử chính: E-11-Methyl-12-tetradecen-1-ol acetat Z,Z- * KẾT LUẬN Qua trình nghiên cứu, thu ñược số kết sau: 4,15-Octadecandien-1-ol acetat - Dịch chiết hexan hạt bơ có thành phần hóa học gồm cấu tử chính: E-11-Methyl-12-tetradecen-1-ol- acetat Bằng phương pháp sấy khô, phương pháp tro hóa mẫu phương pháp hấp thụ nguyên tử AAS ñã xác ñịnh ñược ñộ ẩm, hàm lượng tro hàm lượng kim loại hạt bơ thu hái từ bơ Đăk Lăk cho thấy: - Độ ẩm trung bình hạt bơ 76,8% Hàm lượng tro hạt bơ 20,50% - Hàm lượng kim loại Cu, Zn, Pb, As hạt bơ nằm giới hạn cho phép sử dụng y tế Tìm ñược ñiều kiện tối ưu cho trình chiết tách số hợp chất từ hạt bơ với loại dung môi sau: - Dung môi metanol: Chiết soxhlet với tỉ lệ khối lượng hạt bơ thể tích dung môi metanol 1/1,4 thời gian 6h - Dung môi etyl axetat: Chiết soxhlet với tỉ lệ khối lượng hạt bơ thể tích dung môi etyl axetat 1/1,2 thời gian 8h - Dung môi hexan: Chiết soxhlet Chiết soxhlet với tỉ lệ khối lượng hạt bơ thể tích dung môi hexan 1/1,4 thời gian Stigmast-5-en-3-ol Squalene Stigmast-5-en-3-ol hợp chất có nhiều ứng dụng y học thực phẩm Kết thử hoạt tính sinh học - Khả chống oxy hóa DPHH hạt bơ dịch chiết khả trung hòa gốc tự - Các mẫu thử cắn hexan, cắn metanol, cắn etyl axetat hạt bơ có hoạt tính kháng chủng Lactobacillus fermentum với giá trị IC50 tương ứng 74,67; 128; 58,67 µg/ml kháng chủng Staphylococcus aureus với giá trị IC50 tương ứng 29,43; 117,17; 100,57 µg/ml * KIẾN NGHỊ Trong trình nghiên cứu, có kiến nghị sau: - Tiếp tục nghiên cứu phương pháp tách chất xác ñịnh cấu trúc số cấu tử dịch chiết hạt bơ - Nghiên cứu phương pháp tách cấu tử có tính chất quí y học thực phẩm Squalene Stigmast-5-en-3-ol 8h Thành phần hóa học dịch chiết hạt bơ dung môi khác nhau: - Dịch chiết metanol hạt bơ có thành phần hóa học gồm cấu tử chính: 1,3-Dicyclopentyl-2-n-dodecylcyclopentane Squalene Footer Page 13 of 126  ... Nghiên cứu xác ñịnh thành phần hoá học có số dịch chiết hạt bơ Đăk Lăk Mục ñích nghiên cứu - Nghiên cứu xác ñịnh thành phần hoá học có số dịch chiết hạt bơ - Thăm dò hoạt tính sinh học dịch chiết. .. 1/1,4 3.5 Kết nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết 18 hạt bơ 3.5.1 Kết nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết 19 metanol hạt bơ Kết thành phần hóa học dịch chiết metanol hạt bơ ñược trình... 2.4.3.2 Phương pháp chiết soxhlet 2.4.4 Phương pháp xác ñịnh thành phần hóa học dịch chiết hạt bơ Thành phần hóa học dịch chiết hạt bơ dung môi hexan, etyl axetat, metanol ñược xác ñịnh phương pháp