Phân lập và xây dựng phương pháp định lượng một số xanthon trong vỏ quả măng cụt bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

60 176 0
  • Loading ...
1/60 trang

Thông tin tài liệu

Ngày đăng: 02/05/2017, 10:30

Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung MỞ ĐẦU Việt Nam quốc gia nằm vùng nhiệt đới, có nhiều điều kiện cho sinh vật phát triển tạo phong phú nhiều loài động thực vật nhiều hệ sinh thái khác Cùng với đa dạng sinh học vốn có, từ xa xưa, người Việt biết tận dụng nguồn tài nguyên thực vật để ứng dụng nhiều lĩnh vực sống sản xuất nông nghiệp, sử dụng dược liệu để chữa bệnh, khai thác vật liệu xây dựng, chế tác công cụ, đồ mỹ nghệ Trong đó, việc sử dụng nguồn dược liệu có nguồn gốc thực vật hình thành từ sớm, có tảng vững kế thừa, phát triển Ngày nay, gắn liền với phát triển khoa học công nghệ, hợp chất có hoạt tính sinh học quý từ thực vật ngày phát hiện, phân lập ứng dụng vào ngành công nghệ dược phẩm, mỹ phẩm Việc nghiên cứu hợp chất có nguồn gốc tự nhiên trở thành xu hướng công nghệ y dược nhờ thể nhiều đặc tính ưu việt khả tác dụng tốt, tính kinh tế gây tác dụng không mong muốn lên người bệnh Cây măng cụt (Garcinia mangostana L.) giống nhiệt đới có nguồn gốc từ đảo Sunda Moluccas Indonesia, du nhập đến Việt Nam khoảng kỷ 18 trồng phổ biến tỉnh phía Nam Tây Nam Bộ Măng cụt từ lâu mệnh danh “nữ hoàng trái” với giá trị kinh tế cao, nhiều người dân du khách ưa thích Trong kinh nghiệm dân gian, măng cụt sử dụng làm nhiều phương thuốc chữa bệnh như: tiêu chảy, lỵ vàng da… Luận văn tập trung vào nghiên cứu chiết tách, nâng cao hàm lượng xây dựng phương pháp định lượng số hợp chất xanthone dịch chiết vỏ măng cụt, nhằm tạo chế phẩm cao chiết măng cụt với hàm lượng xanthone khác nhau, làm sở cho nghiên cứu ứng dụng lớp hợp chất Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung Mục tiêu luận văn: Nghiên cứu chiết tách nâng cao hàm lượng xanthone mẫu dịch chiết vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L.) Xây dựng phương pháp định lượng số xanthone dịch chiết vỏ măng cụt phương pháp sắc lỏng hiệu cao 10 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung PHẦN 1: TỔNG QUAN VỀ CÂY MĂNG CỤT 1.1 Đă ̣c điể m thực ̣t măng cụt Tên khoa học: Garcinia mangostana Linn Họ thực vật: Chi bứa (Garcinia), Họ bứa (Clussiaceae) Tên thông dụng: Măng cụt (tên tiếng Anh: Mangosteen) Tên khác: Sơn trúc tử, giáng châu, mangoustanier, brindonia tallow tree, kokambutter tree, mangoustan cultive, mangoustanier, garcinie mangoustan, mangu Hı̀nh 1.1 Minh họa đặc điểm thực vật hoa , măng cụt (Garcinia mangostana L.) Mô tả hình thái thực vật Cây to, thân gỗ, có nhựa vàng Lá dày cứng, dài 15-25 cm, mọc đối, không lông, mặt có màu nhạt mặt Hoa đa tính, thường có hoa hoa lưỡng tính Hoa lưỡng tính có cuống có đốt, lá đài, cánh hoa màu trắng, 16-17 nhị bầu 5- 11 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung ô Quả tròn mang đài có vỏ dai, xốp, màu đỏ rượu vang, chứa 5-8 hạt, quanh hạt có lớp áo hạt trắng, ngon Hı̀nh 1.2 Hı̀nh ảnh măng cụt Cây hoa tháng đế n tháng có từ tháng đế n tháng Trong điều kiện thuận lợi, măng cụt đạt chiều cao trung bın ̀ h 9,5 mét và có thể cho đế n 2000 mô ̣t mùa 1.2 Phân bố và thu hoa ̣ch: Cây có có nguồn gốc từ đảo Sunda Moluccas Indonesia, phân bố nhiề u khắ p Đông Nam Á, miề n tây nam Ấn Đô ̣ và mô ̣t số quố c gia nhiê ̣t đới khác Puerto Rico, Guatemala, Honduras và Florida [28, 57] Ta ̣i Viê ̣t Nam, măng cu ̣t trồng phổ biến các cù lao ở tỉnh phía Nam Tây Nam Bộ, nhiề u nhấ t là ở Tây Ninh Quả đươ ̣c thu hoa ̣ch lúc có màu hồng, hái cầ n cẩn thận tránh va chạm mạnh nhằm giảm đến mức thấp xây xát Nên dùng dụng cụ có túi vải để hái quả, tránh để rơi tự mặt đất làm dâ ̣p nát vỏ Bảo quản dưới 13°C túi plastic có đục lỗ giữ quả đươ ̣c tươi 28 ngày [21] 12 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung Phầ n thiṭ quả đươ ̣c sử du ̣ng làm thực phẩ m, phầ n vỏ quả đươ ̣c sử du ̣ng làm dươ ̣c liê ̣u 1.3 Tính vị, tác dụng: Vị chát, làm săn da; có tác dụng trừ ỉa chảy lỵ Bộ phận dùng: Vỏ vỏ - Pericarpium et Cortex Garciniae Mangostanae Công dụng, định phối hợp: Vỏ dùng trị ỉa chảy kiết lỵ Nước sắc vỏ thụt vào âm đạo phụ nữ để rửa trường hợp bị bệnh bạch đới, khí hư Vỏ thường dùng trị bệnh ỉa chảy [10, 39, 41, 49, 53] Tri ̣ı̉a chảy và kiế t lỵ Lấy khoảng mười vỏ cho vào nồi đất, đậy thật kín tàu chuối Sau đun sôi nước có màu thật sẫm, uống ngày – chén Ở vùng nóng người ta phối hợp với vị thuốc khác: vỏ Măng cụt khô 60g, hạt Mùi 5g hạt Thìa 5g đem sắc 1200mL nước Ðun sôi kỹ, lại 600mL chiết để uống, ngày hai lần, lần 120mL Có thể gia thêm rượu thuốc phiện Khử mùi hôi miệng Trong vỏ trái măng cụt chứa nhiều xanthones Hợp chất có tác dụng kháng khuẩn, chống viêm Vì ăn súc miệng nước làm từ vỏ măng cụt làm giảm mùi hôi miệng Cách dùng: Lấy phần thịt vỏ măng cụt xay nhuyễn với mật ong 200 mL nước, lọc bớt xác uống Để tăng vị thơm ngon, cho thêm đường đá vỏ măng cụt chứa nhiều tannin, vị đắng chát Trị nám tàn nhang 13 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung Vỏ măng cụt, chanh mật ong có khả chống nám tàn nhang hữu hiệu Những vết thâm sẹo để lại mờ dần sau mô ̣t thời gian Cách dùng: Rửa vỏ măng cụt, lấy thìa cạo phần thịt vỏ bỏ vào máy xay nhuyễn, thêm thìa nước chanh, thìa mật ong vào trộn thành hỗn hợp dạng sệt Sau thoa hỗn hợp lên mặt khoảng 15 đến 20 phút rửa Trị mụn Phơi khô phần vỏ măng cụt nạo được, nghiền nhỏ Khi sử dụng, trộn với thìa cafe dầu ô liu thoa hỗn hợp lên mặt khoảng 30 phút, rửa Hình 1.3 Hình ảnh sản phẩm thực phẩm chức chế tạo từ vỏ măng cụt 1.4 Thành phầ n hóa ho ̣c có các bô ̣ phâ ̣n của măng cu ̣t Theo báo cáo công bố vào năm 1958, α-mangostin lần phân lập từ vỏ măng cụt khô vào năm 1855 nhà khoa học người Đức W Schmid Sau đó, nỗ lực để xác định cấu trúc α-mangostin thực số nhà hóa học, bao gồm Dragendorff, Murakami, Yamashiro, họ không thống cấu trúc cuối Cho tới tận năm 1958, cấu trúc xác α-mangostin đề xuất Yates Stout qua nghiên cứu sâu cấu trúc tái tổng hợp [60] Đây tinh 14 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung thể hình phiến nhỏ, màu vàng tươi, tan nước, tan rượu, ether kiềm Nhiệt độ nóng chảy 175°C [28] Tıń h đế n năm 2015, đã có 85 hơ ̣p chấ t thứ sinh đươ ̣c phân lâ ̣p từ các phân của Măng cu ̣t Trong số đó có 68 hơ ̣p chấ t thuô ̣c nhóm xanthone (Bảng 1.1), phổ biế n nhấ t là các hơ ̣p chấ t α-mangostin (1), β-mangostin (2) và γ-mangostin (3) Ngoài ra, thành phần khác măng cụt công bố là: flavonoid (72-76), triterpenoid (77-83), benzophenone (69-71), hợp chất biphenyl (84), hợp chất pyrrole (85), benzofuran (86) [7] Lớp thịt ăn thường chiếm 1/3 khối lượng Theo các kế t quả phân tıć h, 100g thịt phầ n ăn có chứa 79,2g nước, 0,5g chất đạm, chất béo, 19,8g carbohydrate, 0,3g chất xơ, 11mg Ca, 17mg P, 0,9mg Fe, 4,2µg Vitamin A, 66mg Vitamin C Năng lượng trung bình 340kJ/100g Ngoài ra, vỏ giàu pectin, catechin, tanin, colophan chất nhuộm màu đen Vỏ chứa nhiều tanin, mangostin amiliasine [21] Trong trình nghiên cứu khả chiết tách hợp chất phenolic dung môi từ vỏ măng cụt, nhà khoa học Trương Văn Châu, Trần Hồng Quang, Đỗ Ngọc Liên [51] đưa đến kết luận dung môi tốt cho việc chiết rút hợp chất thứ sinh thuộc dạng phenolic từ vỏ măng cụt methanol ethanol dịch chiết methanol ethanol từ nguyên liệu vỏ măng cụt không chứa hợp chất flavonoid mà có alkaloid, curmarin, tanin Trong vỏ quả măng cu ̣t có chứa từ 7-13% tanin, nhiên không sử du ̣ng để thuộc da Nguyên nhân do: theo yêu cầu nhà thuộc da, nguyên liệu để thuộc không chứa các thành phầ n không phải tanin chiế m quá 50% hàm lươ ̣ng tanin có chấ t tan Trong đó, vỏ măng cụt chứa phần tan nước khoảng 13,61% tanin 15,49% tanin Ngoài ra, vỏ quả măng cu ̣t còn chứa các chấ t nhựa, tinh dầ u, chấ t béo và mô ̣t số hơ ̣p phầ n khác [10] 15 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung Dưới là những hơ ̣p chấ t đã đươ ̣c phân lâ ̣p từ măng cu ̣t (xem bảng 1.1) [7, 60] Bảng 1.1: Những dẫn xuất xanthones phân lập từ măng cụt R4 O O OH R3 OH R3 R2 R2 O O R1 OMe R1 STT R1 R2 R3 Tên chất STT R1 R2 R3 R4 OH OH OCH3 α-Mangostin H H OH H Tên chất OCH3 OH OCH3 β-Mangostin H OCH3 OCH3 H Assiguxanthone-B trimethyl ether OH OH OH γ-Mangostin H OH OCH3 H Cowagarcinone B OCH3 OCH3 OCH3 Fuscaxanthone C OH H H H 10 OH H H OH 11 H OH H H OH H OH 16 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung OH R2 O O OH OH H3CO R1O HO O OH R2O OH OR1 O STT R1 R2 Tên chất STT R1 R2 Tên chất 12 CH3 H Garcinone D 15 H H Mangostenol 13 H H Garcinone C 16 CH3 H 17 CH3 CH3 14 CH3 OH Mangostenone E 18 H CH3 O OH OH O OCH3 O OH O OH OCH3 OH 31 Cudraxanthone G 32 8-Hydroxycudraxanthone G OH OH OH OH O O OMe OMe MeO O MeO OH O 34 33 17 OCH3 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung O O OH OH O O OMe OMe H3CO O HO OH O OH 35 36 Mangostingone O O O OH O H3CO H3CO HO O HO OH OH 38 11-Hydroxy-1-isomangostin 37 1-Isomangostin O O OH O OH H3CO H3CO HO O OH HO O O O 40 3-Isomangostin 39 Mangostanol OH O O OH O O HO OH O O OH OH OH 41 Mangostenone D 42 Garcimangosone C 18 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung Một khay 96 giếng khác chất thử có TBUT (190l) sử dụng làm đối chứng âm Thêm 20l dung dịch chất MTS Ủ 37oC 1-4 Sau đưa lên máy lắc đĩa lắc nhẹ 10 phút sử dụng máy ELISA Plate Reader (Bio-Rad) để đọc kết hàm lượng màu qua phổ hấp phụ bước sóng 490nm Khả sống sót tế bào có mặt chất thử xác định thông qua công thức sau: % ố ó = %ứ ấ đố ứ ô â ế = 100% 54 ườ ắ ô % ố ườ ó × 100 ắ Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung PHẦN IV: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 4.1 Chiết tách nâng cao hàm lượng hợp chất xanthone 4.1.1 Lựa chọn dung môi điều kiện ngâm chiết Độ phân cực dung môi ngâm chiết có tác động đáng kể việc chiết tách hợp chất xanthone từ mẫu thực vật Bảng 4.1: Kết khảo sát lựa chọn dung môi điều kiện ngâm chiết Dung môi Methanol Ethanol Nước Methanol (có siêu âm, gia nhiệt) Ethanol (có siêu âm, gia nhiệt) Nước (có siêu âm, gia nhiệt) Khối lượng mẫu (g) 50 50 50 50 50 50 Thể tích dung môi (mL) 500 500 500 500 500 500 Thời gian ngâm chiết 8h×3 lần 8h×3 lần 8h×3 lần 8h×3 lần 8h×3 lần 8h×3 lần Khối lượng cặn chiết (g) 3,01 2,65 1,15 3,75 3,34 1,16 Hiệu chiết (%) 6,02 5,30 2,30 7,50 6,68 2,32 Kết khảo sát dung môi ngâm chiết cho thấy, dung môi phân cực hòa tan tốt methanol ethanol đạt hiệu cao việc hòa tan lôi kéo xanthone khỏi mẫu bột khô (7,5% 6,68%) Dung môi nước cho hiệu chiết không cao (2,32%) Điều cho rằng: độ phân cực để hòa tan khả phá vỡ thành tế bào bị gỗ hóa mẫu thực vật dung môi không đủ đáp ứng 55 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung Mặt khác, dung môi ethanol có giá thành rẻ, độc hại so với dung môi methanol Với yêu cầu chế tạo cao chiết cho nghiên cứu phục vụ mục đích dược dụng, dung môi ethanol lựa chọn Sự có mặt sóng siêu âm nhiệt độ thúc đẩy đáng kể hiệu chiết tách trình Điều kiện siêu âm với cường độ 75% gia nhiệt 40°C lựa chọn để tăng khả hòa tan giảm thời gian ngâm chiết Dung môi ethanol sau tiếp tục khảo sát để lựa chọn nồng độ ngâm chiết tối ưu Kết hiệu chiết với nồng độ ethanol đưa bảng 4.2 Bảng 4.2 Kết khảo sát lựa chọn nồng độ dung môi ngâm chiết Ethanol 50% Ethanol 60% Ethanol 70% Ethanol 80% Ethanol 95% Khối lượng mẫu (g) 50 50 50 50 50 500×3 500×3 500×3 500×3 500×3 8×3 8×3 8×3 8×3 8×3 2,55 2,79 3,03 3,32 3,34 5,10 5,58 6,06 6,64 6,68 Thể tích dung môi (mL) Thời gian ngâm (h) Khối lượng cặn chiết (g) Hiệu chiết (%) 56 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung 6,64 6,68 Ethanol 80% Ethanol 95% Hiệu chiết (%) 6,06 5,58 5,1 Ethanol 50% Ethanol 60% Ethanol 70% Nồng độ dung môi Ethanol Hình 4.1: Biểu đồ tương quan nồng độ dung môi ethanol hiệu chiết Sử dụng dung dịch chứa 80% ethanol đạt hiệu chiết cao: 6,64% khối lượng cặn chiết so với tổng khối lượng mẫu thực vật Tương tự với dung dịch ethanol 95% (hiệu chiết đạt 6,68%) Tuy nhiên, dung dịch ethanol 80% có ưu điểm bay dung môi ethanol 95% trình ngâm chiết với thời gian dài có gia nhiệt mà đạt hiệu tương tự Mặt khác với giá thành rẻ, pha chế từ dung môi thương phẩm ethanol 95% dùng cho thực phẩm, dung môi ethanol 80% lựa chọn dung môi chiết cho trình 4.1.2 Nâng cao hàm lượng xanthone cặn chiết Dịch chiết ethanol tổng có dạng lỏng, đặc sánh, màu nâu đậm, chứa nhiều dầu béo tạp chất khác nhóm chất xanthone Để làm tăng hàm lượng xanthone, dịch chiết tổng chiết n-hexane để loại chất béo, sau chiết với nước để loại tạp chất hòa tan nước, cuối chiết lại ethylacetate để thu phần lớn xanthone Quá trình chiết tiến hành nhiều lần, 57 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung sử dụng dung môi thu hồi, tổng hàm lượng xanthone sau trình chiết cặn chiết ethylacetate đạt 47,5% Để nâng cao hàm lượng xanthone, cặn chiết ethylacetate đưa hấp thụ cột silicagel rửa giải với hệ dung môi với độ phân cực khác chia thành phân đoạn (xem hình 3.3) Các dung dịch rửa giải sau rời cột cất loại dung môi thu cặn khô định lượng máy sắc lỏng khối phổ HPLC/MS Kết hàm lượng xanthone cặn chiết phân đoạn giới thiệu biểu đồ hình 4.2 95,2 100 88,1 90 80 72,2 % khối lượng 70 60 50 49,6 51,0 S2 S3 40 30 20 10 S4 S5 S6 Phân đoạn Hình 4.2: Biểu đồ tương quan hàm lượng xanthone tổng phân đoạn sắc Như vậy, với phương pháp sắc cột nhồi sử dụng chất liệu silicagel rửa giải hệ dung môi gradient trên, thu cặn chiết riêng biệt phân đoạn Điều thích hợp cho việc chế tạo chế phẩm cao chiết với hàm lượng xanthone khác phục vụ nghiên cứu 58 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung Căn theo kết phân tích HPLC/MS, ta nhận thấy, phân đoạn S2 S3 (ứng với hệ dung môi nHexane:Acetone 40:1 30:1) cặn chiết chứa nhiều hợp chất tinh dầu béo có độ phân cực thấp, hàm lượng xanthone tổng thu đạt tỷ lệ thấp (khoảng 50%) Ở phân đoạn S4, S5 S6, loại bỏ hầu hết thành phần phân cực sử dụng dung môi với độ phân cực trung bình, phần lớn lượng xanthone rửa giải khỏi hệ thống, hàm lượng xanthone tổng đạt mức cao Đặc biệt phân đoạn S5, hầu hết xanthone rửa giải phân đoạn này, hàm lượng xanthone tổng đạt mức cao: 95,2% Phân đoạn có khối lượng cao 52,3g (chiếm 18,78% tổng khối lượng cặn chiết ethylacetate), phân đoạn thích hợp để phân lập tinh chế xanthone 4.2 Định lượng hàm lượng xanthone mẫu cặn chiết vỏ măng cụt Kết sắc đồ LC/MS chất chuẩn mẫu cặn khô giới thiệu hình 4.2: 59 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung Hình 4.3 Sắc kí đồ HPLC (UV 290 nm) chất chuẩn (1), (2), (3), (4) (A); mẫu cặn chiết ethylacetate từ vỏ măng cụt (B), (C) Tín hiệu 8-deoxygartanin (1), gartanin (2), α-mangostin (3) 9hydroxycabalaxanthone (4) phát dựa trùng lặp thời gian lưu Rt hệ thống LC hệ thống MS Đối với bước sóng UV 260 nm UV 245 nm, tín hiệu (1), (2), (3) (4) phát ổn định bước sóng 290 nm Độ phân giải hai tin hiệu tốt, không xảy trùng lấp peak tín hiệu Việc sử dụng dụng môi pha động gồm hệ gradient methanol – nước với tỷ lệ tăng dần methanol giúp cho việc rửa giải chất phân tích khỏi cột dễ dàng hơn, tiết kiệm thời gian phân tích Các hợp chất (1), (2) (3) rời cột thời gian lưu từ 20,8 đến 25,6 phút Đặc biệt hợp chất 9-hydroxycabalaxanthone (4) có lực với cột 60 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung mạnh, cần hệ dung môi pha động methanol 100% để rửa giải hoàn toàn khỏi cột thời gian lưu 39,5 phút Các peak tín hiệu sau so sánh với phổ khối lượng phun mù điện tử ESI-MS để xác nhận tính đặc hiệu phương pháp chất phân tích Hình 4.4: Phổ ESI - MS peak ion phân tử hợp chất 1-4 Đường chuẩn định lượng Đường chuẩn định lượng có dạng y = ax + b xây dựng dựa mối quan hệ diện tích peak UV chọn (y) nồng độ tương ứng chất chuẩn (x) 61 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung Đường chuẩn định lượng thu đạt độ tuyến tính cao với hệ số tương quan R2 ≥ 0,9999 Hình 4.5: Đường chuẩn định lượng hợp chất 1-4 Phương trình đường chuẩn định lượng hàm lượng Xanthone đưa bảng 4.3 Bảng 4.3: Phương trình đường chuẩn định lượng hợp chất (1-4) Chất chuẩn Phương trình đường chuẩn Hệ số tương quan Bước sóng phân tích 8-Deoxy Gartamin (1) y = 14171,08467x + 8,29450 0,99997 245nm Gartamin (2) y = 11466,95572x – 14,52253 0,99994 260nm α-Mangostin (3) y = 14546,67734x + 3,76239 0,99995 245nm 9-Hydroxy cabolaxathone (4) y = 19121,55722x – 7,66753 0,99998 290nm 62 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung Qua nghiên cứu, điều kiện phân tích xanthone: 8-deoxygartanin (1), gartanin (2), α-mangostin (3) 9-hydroxycabalaxanthone (4) phương pháp sắc lỏng khối phổ LC-MS thiết lập Qua đó, việc phân tích hàm lượng xanthone cao chiết ethylacetate từ vỏ măng cụt thực Dựa hình ảnh sắc đồ HPLC bước sóng 290nm chất chuẩn tham khảo (1), (2), (3), (4) sắc đồ mẫu cặn chiết vỏ măng cụt, peak tín hiệu hoạt chất nhận dạng nhờ trùng lặp thời gian lưu Rt detector UV detector MS Không xảy tượng “trôi peak” ảnh hưởng matrix mẫu, trình tinh chế, làm giàu mẫu xử lý hầu hết chất ảnh hưởng ảnh hưởng đến trình sắc Quá trình đo khối phổ thực với chế độ ion hóa âm (negative mode) chế độ lựa chọn ion peak 379, 395, 409, 407 (SIM mode) kết hợp quét toàn dải phổ từ m/z=50 đến 650, độ chọn lọc phương pháp cao, peak tín hiệu thu có độ phân giải rõ rệt Với mức giới hạn phát 1µg/mL, khoảng tuyến tính từ 1-250µg/mL, hệ số tương quan đường chuẩn R2 ≥ 0,9999, phương pháp xác, phù hợp để phân tích hàm lượng xanthone dịch chiết vỏ măng cụt chế phẩm Kết phân tích hàm lượng xanthone phân đoạn khác dịch chiết vỏ măng cụt giới thiệu bảng 4.4 63 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung Bảng 4.4: Kết phân tích hàm lượng xanthone phân đoạn khác mẫu dịch chiết vỏ măng cụt Phân Phân Phân Phân Phân đoạn đoạn đoạn đoạn đoạn S2 S3 S4 S5 S6 (mg/g) (mg/g) (mg/g) (mg/g) (mg/g) 8-Deoxy Gartamin (1) 10,8 66,8 8,6 14,4 4,1 Gartamin (2) 11,7 91,2 3,6 1,8 5,1 α-Mangostin (3) 462,3 304,7 706,3 932,5 865,9 10,8 47,7 3,2 3,7 6,1 49,6 51,0 72,2 95,2 88,1 Chất chuẩn 9-Hydroxy cabolaxathone (4) % Tổng Xanthone Kết phân tích cho thấy hàm lượng cao α-mangostin nhóm xanthone, điều phù hợp với nghiên cứu trước công bố: αMangostin hợp chất chiếm tỷ lệ chủ yếu tiêu biểu cho lớp hợp chất xanthone phân lập từ vỏ măng cụt 4.3 Xác định hoạt tính gây độc tế bào mẫu cao chiết với số dòng tế bào ung thư Các phép thử lặp lại lần để đảm bảo tính xác Ellipticine (Sigma) sử dụng chất đối chứng dương thử nghiệm nồng độ 10g/mL; 2g/mL; 0,4g/mL; 0,08g/mL 64 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung DMSO10% sử dụng đối chứng âm Giá trị IC50 (nồng độ ức chế 50% phát triển) xác định nhờ vào phần mềm máy tính Table Curve 2Dv4 Hình ảnh tác động mẫu cao chiết măng cụt lên dòng tế bào MCF7 SK-LU-1 thể hình 4.6 Tế bào MCF7 tác Tế bào MCF7 tác Tế bào MCF7 giếng đối động mẫu Cao đặc động mẫu Cao đặc chứng âm DMSO Măng Cụt (CPM) nồng độ Măng Cụt (CPM) nồng độ 100 µg/ml 20 µg/ml Tế bào LU-1 tác động Tế bào LU-1 tác động Tế bào LU-1 giếng đối mẫu Cao đặc Măng mẫu Cao đặc Măng chứng âm DMSO Cụt (CPM) nồng độ 100 Cụt (CPM) nồng độ 20 µg/ml µg/ml Hình 4.6 Hình ảnh tác dụng ức chế dòng tế bào ung thư MCF7 SK-LU-1 mẫu cao chiết măng cụt so với đối chứng âm 65 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung Kết tác dụng ức chế tế bào ung thư chế phẩm cao chiết măng cụt đưa bảng 4.5 Bảng 4.5: Kết thực nghiệm Xác định hoạt tính độc tế bào dòng tế bào ung thư SKLU-1 (ung thư phổi), MCF7 (ung thư vú) Jurkat (ung thư bạch cầu) mẫu cao chiết vỏ măng cụt % Ức chế Nồng độ (µg/ml) CPM SK-LU-1 MCF-7 Jurkat 100 84,.39 78,38 68,47 20 34,71 21,68 32,58 12,00 17,33 18,63 0,8 0,85 3,95 10,94 IC50 37,67 ± 0,83 57,02 ± 4,79 51,19 ± 1,74 Ellipticine Nồng độ (µg/ml) SK-LU-1 MCF-7 Jurkat 10 98,01 101,82 95,17 68,89 79,23 70,01 0,4 51,82 48,65 49,40 0,08 21,77 22,30 25,37 IC50 0,47 ± 0,02 0,42 ± 0,07 0,46 ± 0,02 Theo tiêu chuẩn Viện ung thư quốc gia Hoa Kỳ (NCI), cặn chiết coi có hoạt tính tốt IC50  20μg/mL [Theera (2013); Michael R Boyd (1985-1995)] Chất tinh khiết coi có hoạt tính tốt (hit compound) IC50  5μM [Hughes JP, (2011)] Với kết nói trên, mẫu nghiên cứu có mức hoạt tính trung bình thử nghiệm dòng tế bào ung thư với giá trị IC50 = 37,67 – 57,02µg/ml Chất đối 66 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung chứng dương Ellipticine hoạt động ổn định thí nghiệm Các số liệu có độ xác tương đồng cao với r2 ≥ 0,99 67 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thành Trung PHẦN V: KẾT LUẬN Sau thời gian thực nghiên cứu, luận văn thu kết quả: Đã Thu thập mẫu vỏ măng cụt xác định tên khoa học Garcinia mangostana L Bằng phương pháp chiết kết hợp sắc cột nhồi, chiết tách nâng cao hàm lượng xanthone tổng đến hàm lượng 95,2% cặn chiết Bằng phương pháp sắc lỏng cao áp sử dụng đầu dò DAD kết hợp phổ khối phun mù điện tử ESI-MS, xây dựng phương pháp xác định hàm lượng xanthone: 8-Deoxy Gartamin (1), Gartamin (2), α-Mangostin (3), 9-Hydroxy cabolaxathone (4) mẫu cặn chiết ethylacetate chế phẩm cao chiết vỏ măng cụt Với điều kiện sau: Thiết bị sắc lỏng khối phổ Agilent 1260 Series Single Quadrupole LC/MS Systems, sử dụng cột sắc tiêu chuẩn C18, pha động sử dụng hệ dung môi: Methanol (0,1% acid acetic) / Nước (0,1% acid acetic) với chế độ gradient tăng dần nồng độ methanol, tốc độ dòng 0,6mL/min, định lượng đầu dò DAD bước sóng 245nm, 260nm, 290nm, kết hợp đầu dò khối phổ peak ion phân tử 379, 395, 407, 409 [M-H]- Đã thực phép thử hoạt tính gây độc tế bào chế phẩm cao chiết với nồng độ 20µg/mL 100µg/mL nhóm tế bào ung thư SK-LU-1 (ung thư phổi), MCF7 (ung thư vú) Jurkat (ung thư bạch cầu) Kết cao chiết có mức hoạt tính trung bình thử nghiệm dòng tế bào ung thư với giá trị IC50 = 37,67 – 57,02µg/mL 68 ... tách nâng cao hàm lượng xanthone mẫu dịch chiết vỏ măng cụt (Garcinia mangostana L.) Xây dựng phương pháp định lượng số xanthone dịch chiết vỏ măng cụt phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 10 Luận... nay, để tăng số đĩa lý thuyết giảm thời gian sắc ký, người ta thường sử dụng sắc ký cột điều kiện áp suất cao đầu cột, thông qua thiết bị sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) sắc ký lỏng siêu hiệu (UPLC)... trị bệnh hôi miệng [40] 1.5.6 Hoạt tính chống sốt rét: Một số xanthone phân lập từ vỏ măng cụt cho thấy tác dụng chống sốt rét thể người chống lại ký sinh trùng Plasmodium falciparum ßmangostin
- Xem thêm -

Xem thêm: Phân lập và xây dựng phương pháp định lượng một số xanthon trong vỏ quả măng cụt bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao , Phân lập và xây dựng phương pháp định lượng một số xanthon trong vỏ quả măng cụt bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao , Phân lập và xây dựng phương pháp định lượng một số xanthon trong vỏ quả măng cụt bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

Từ khóa liên quan

Gợi ý tài liệu liên quan cho bạn

Nhận lời giải ngay chưa đến 10 phút Đăng bài tập ngay